tecnicas imunologicas- parte 1
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8/2/2019 Tecnicas Imunologicas- Parte 1
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TCNICAS IMUNOLGICAS
Parte 1
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IMUNODIAGNSTICO: Diagnsticolaboratorial por meio de tcnicas
imunolgicas.
Busca: Anticorpo ou Antgeno no organismo do pacientepor meio de ensaios de Precipitao, Aglutinao, Fixaode complemento, Neutralizao ou Imunoensaios queutilizam sinalizadores da interao Ag-Ac com conjugadosligantes, como Imunofluorescncia, Radioimunoensaio,Imunoenzimticos, Imunofluorimtricos e
QuimioluminiscnciaOutros testes: Hipersensibilidade a Antgenos: Reaesintradrmicas e percutneas.
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INTERAESANTGENO-ANTICORPO
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[Ag] + [Ac ] [Ag-Ac]
KA= [Ag-Ac] ([Ag] + [Ac])
KAKA= Constante intrnseca deassociao
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Reatividade Cruzada
Quando os antgenos so estruturalmente
relacionados podendo ocorrer a reatividade de
um anticorpo com outro epitopo antignico.
Anti-A
Ab
Ag A
Anti-A
Ab
Ag B
Epitopocompartilhado
Anti-A
Ab
Ag C
Epitopo similar
Reaes Cruzadas
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FORAS QUE ATUAM NAS INTERAESANTGENO/ANTICORPO
Atua em molculas no polaresfacilitando a aproximao, oschoques moleculares e asligaes.
Molculas que apresentam grupos lateraisinicos de cargas opostas que se atraemfortalecendo a interao Ag-Ac.
Foras fracas que ocorremdevido proximidade fsica entre
as molculas.
A mais fraca das ligaes. Ocorrem entre oncleo de um tomo e a nuvem de eltronsde outro formando dipolos que se atraem.
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Avidez
So as foras totais de interao entre um
antgeno com o anticorpo
Keq = 104
Afinidade
106
Avidez
1010
Avidez
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Metodologias que utilizam reagentes nomarcados:
PrecipitaoAglutinao
Hemlise (Fixao de Complemento)
Metodologias que utilizam reagentes marcadosRadioimunoensaios
ELISA
Imunofluorescncia
Western Blotting
Citometria de Fluxo
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IMUNOPRECIPITAO
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Zona de equivalncia: Ag-Ac se ligam equimolarmenteformando uma rede estvel.
Excesso de antgeno: Oscomplexos podem serdissolvidos quando hexcesso de Ag pois o Ac fica
livre para se ligar a novos Agadicionados diminuindo aformao de complexosinsolveis.
Excesso de Ac: Ocorrereduo de imunocomplexospois todo o Ag estprecipitado e fica Ac livre no
sobrenadante.Pr-Zona
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IMUNODIFUSO
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Imunodifuso radial (Mancini)
Interpretao Dimetro do anel
proporcional concentrao do Ag
Quantitativo Nveis de Ig
Mtodo Anticorpo no gel
Antgeno no poo
Ag Concentrao
Diameter2
AgAgAgAg
Ac no gel
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Imunoeletroforese/Precipitao
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Agglutinao/Hemaglutinao
Definio - testes que possuem como alvo umantgeno de natureza particulada
Aglutinina/hemaglutinina
+
Teste de aglutinao qualitativa
Ag ou Ac
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AGLUTINAO
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Fixao do Complemento
Antgeno misturado com o soro teste Complemento adicionado
Eritrcitos recobertos com anticorpo so adicionados
A quantidade de lise determinada
Ag
Patients
serum
Ag No Ag
Ag
Metodologia
INIBIO DA AGLUTINAO TESTE
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INIBIO DA AGLUTINAO: TESTEDE GRAVIDEZ
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AGLUTINAO EM LTEX:
FATOR REUMATIDEFator Reumatide: Anticorpos que reconhecem eptopospresentes na frao cristalizvel (Fc) da molcula de IgG.A maioria destes Acs so da classe IgM porm pode-se
encontrar tambm Acs IgA e IgG.Teste: Visualizao de aglutinao das partculas de ltexrevestidas pelo antgeno (no caso IgG humana ou decoelho)
Interpretao: Igs com atividade FR esto presentes empequena quantidade e com baixa avidez no soro de amiorparte das pessoas. No caso de artrite reumatide surgeuma alta quantidade de FR de alta afinidade
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Causas virais HBV, HCV, Mononucleose, influenza,AIDS, ps vacinao
Doenas auto-imunes Artrite Reumatide, Lpus
Eritematoseo sistmico, Esclerosesistmica, polimiosite,dermatomiosite, sndrome deSjrgren, cirrose biliar, hepatiteauto-imune, etc
Neoplasias Aps irradiao ou quimioterapia
Infeces bacterianas Tuberculose, sfilis, hansenase,salmonelose, endocardite bacterianasubaguda, brucelose, borreliose
Doenas parasitrias Malria, esquistossomose, filariose,tripanossomase
Enfermidades em que o encontro de Fator Reumatide comum