tecnicas bacteriologicas basicas
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TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS BÁSICAS
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
SEMINARIOMicrobiología General
2010Bioq. María Viviana Bojanich
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Para llegar al correcto diagnóstico de laboratorio hay que conocer:
Técnicas o métodos a utilizar (TBB)RAZONAR
1- muestras2- precauciones para recuperar y diagnosticar m.o. asociados a
la patología y no FN3- conservación de la muestra4- técnica diagnóstica a utilizar en cada caso5- interpretación de los resultados6- utilidad en el contexto del cuadro del paciente.
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Ciclo o etapas del diagnóstico microbiológico
Recolección adecuadade la
muestra
Consulta al médico
Orden de análisis
Envío al laboratorioTransporte y conservación
Ingreso de los datos
Procesamiento de la muestra
Interpretación de cultivos
Interpretación del resultadoInforme final
Interpretación del informe e instauración de la terapia
Identificaciónbacteriana
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RECOLECCIÓN DE MUESTRAS CONCEPTOS BÁSICOS
La muestra debe ser material del verdadero sitio de infección.Debe recogerse con un mínimo de contaminación (ej. saliva, piel, orina)Momento o período óptimo para tener la oportunidad de aislar los m.o.Obtener suficiente cantidad de muestra.Uso de dispositivos de recolección de muestras y medios de cultivo adecuados.
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Obtener las muestras antes de la administración de ATB.Rotular correctamente el envase que contiene la muestra
NombreNº de IDMaterial de ………..MédicoDía/HoraDiagnóstico presuntivo
CUANDO LA MUESTRA NO ES BUENA POCO PUEDE HACER EL LABORATORISTA PARA LLEGAR A UN BUEN RESULTADO.
TENER CLARO SI EL AISLAMIENTO ESTÁ ASOCIADO AL CUADRO CLÍNICO
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Transporte de muestrasTiempo límite de dos horas entre la recolección y su procesamiento.Medios de transporte ( Stuart, Amies, Carey-Blair).Función: preservar la viabilidad sin permitir multiplicación significativa de m.o.Transporte externo embalar y rotular .
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OMS 2005- Manual de bioseguridad en el laboratorio
Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categoría A
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OMS 2005- Manual de Biseguridad en el laboratorio
Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categoría B
Ejemplos de sistemas de embalaje/envasado triple (Ilustraciones amablemente cedidas por la IATA, Montreal (Canadá))
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Algunas consideraciones…Inoculación: proceso de introducción de bacterias viables en un medio de cultivo líquido o sobre la superficie de un medio sólido.Cultivo puro: población bacteriana homogénea.Colonia: masa visibles de bacterias que se replicaron luego de ser diseminadas en la superficie de un medio de cultivo sólido.Clon: las bacterias que se encuentran en una colonia y derivan de una única célula.UFC (unidad formadora de colonias)
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Identificación: permite encuadrar un organismo en un grupo taxonómico específico, dentro de una “clasificación” previamente establecida.Nomenclatura: forma en que se puede definir y comunicar las características taxonómicas de un grupo de bacterias, denominadas especies.Especie: bacterias agrupadas y estudiadas según sus aspectos genéticos, morfológicos, fisiológicos y culturales. (Sistema binomial de Ligneo, Género y especie, más variedades, biovares, tipos, etc) Ejemplo: Staphylococcus aureus, Escherichia coli
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Procesamiento de muestras
MUESTRA
EXAMEN MICROSCÓPICO EXAMEN MACROSCÓPICO
CULTIVO para aislamiento primario
e IDENTIFICACIÓN
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Examen microscópico directo
Examen Microscópico
DIRECTO
FrescoObservación directa entre porta y cubre Gram Ziehl-Neelsen
Kinyoun
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Examen en FrescoPermite ver:
Calidad de la muestraGrado de inflamación
(neutrófilos, piocitos, hematíes)Elementos levaduriformes y
micelialesEstructuras parasitariasMovilidad bacteriana
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ColoracionesGramZielhl-NeelsenGiemsaAzul de metileno
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Coloración de GRAM
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Cultivo para aislamiento primario
Medios de cultivosólidos
Medios generaleso enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales
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Técnicas de siembraEstríaAgotamientoRecuento semi-cuantitativo de colonias
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Condiciones de cultivo1) Seleccionar temperatura y atmósfera de incubación- Temperatura 35-37ºC- Atmósfera :(de acuerdo a las exigencias de O2 y CO2)- Aerobiosis o aire: 21% O2- Lata con vela: 12 a 17% O2 y 3 a 5 % CO2- Microaerofilia: porcentaje constante de 10% CO2 y 5% O2- Anaerobiosis: sistemas que provean 5% CO2, 85% N2, 10% H2 y NADA
de O2 de manera constante.- Humedad
2) Tiempo necesario para visualizar el desarrolloEn general: 24-48 hsMycobacterium tuberculosis más de 30 días
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Estudio de colonias
Características macroscópicas de las coloniasObservar: bordes o margen, color, hemólisis, textura,
forma, elevaciónColoración de gram o gram de colonia
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Identificación preliminar basada en características metabólicas
Pruebas rápidas de identificaciónTrabajar siempre con una colonia aislada y previa coloración de gramSon pruebas que se realizan en poco tiempo (de 2 min a 30 min)Permite “entrar” en los algoritmos de identificación.Ejemplos: catalasa, oxidasa, PyR, coagulasa en portaobjeto o ligada.
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Catalasa Oxidasa PyR
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Pruebas de identificación bioquímicaConsiste en el estudio de sistemas enzimáticos que son únicos para cada especie y sirven como marcadores de identificación.Ejemplos: utilización y/o fermentación de azúcares (lactosa, glucosa, manitol), movilidad, actividad de Dnasa, coagulasa libre, reducción de nitratos, solubilidad en bilis, crecimiento en NaCl, etc.
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Existen sistemas comerciales.
Ejemplos: galerías API
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Siembra en tubo pico de flauta
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Pruebas de susceptibilidad a antibióticosSe realiza con la bacteria identificadaNo se aplica a todos los aislamientos
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