spectroscopy stp, msc. 30 october 2019

SpectroscopyAnastriyani Yulviatun, STP, MSc.

30 October 2019

Outline

1. Spectroscopy

2. General Principle of UV-VIS Spectro

3. Elements of UV-VIS Spectro

4. Operating Procedure

5. Calibration curve (kurva standar)

Berapa konsentrasi tannin dari kedua teh?Manakah yang lebih tinggi tannin-nya?

Spectroscopy

Spectroscopy→ “Specere” (to look at) & “skopia” (to see)

Ilmu yang mempelajari interaksi antara radiasi gelombang elektromagnetikdengan materi

Gelombang elektromagnetik (EM) (7): gelombang radio, microwave, infrared,cahaya tampak, sinar UV, X-ray, sinar gamma

Spektrometer/Spektrofotometer: instrumen untuk melakukan spektroskopi

Jenis Spektrometer:

1. Mid-Infrared (MIR) Spectro (2500-25000 nm)

2. Near-Infrared (NIR) Spectro (800-2500 nm)

3. UV/VIS Spectro (200-800 nm)

4. Fluorescence Spectro (200-900 nm)

Kegunaan alat: mengukur konsentrasi komponen organik (beta karoten, polifenol,antosianin, dll)

General Principle (UV-VIS)

Gelombang EM

Materi

Absorbansi Transmitansi

Kuantifikasi materi

(konsentrasi)

CbP

PTA o ==−= loglog

𝐴 = 𝑎𝐶 + 𝑏

C

A..

.. ..


Penyerapan Cahaya oleh Larutan Berwarna

Perhatikan warna ini diserap! Yang lainnya diteruskan


Penyerapan Cahaya oleh Larutan Berwarna

Perhatikan warna ini dilewatkan agar diserap larutan! Yang lainnya ditahan oleh SLIT

SLIT

Sinar tidak diteruskankarena diserap larutan

(ada interaksi antara radiasielektromagnetik dengan senyawa

dalam larutan)

Elements of UV-VIS Spectrometer

• Sumber cahaya• Fungsi: memancarkan gelombang elektromagnetik

• Material: • Lampu deuterium (180-350 nm) & Lampu halogen dg filamen tungsten (330-900 nm)

• Xenon arc (175-1000 nm)

• Monokromator• Fungsi: menyaring gelombang

• Material: Prisma dan Filter gelombang EM (Slit)

• Detektor• Fungsi: mendeteksi dan memperkuat transmitansi (IT)

• Material: Dioda silicon atau photomultiplier

• Sample compartment dan cuvette• Fungsi: menampung materi (sampel)

• Material:• Optical glass (SiO2) Quartz,

• Sapphire (crystal Al2O3), dll

cuvette


IT ≈ I0 - IA

CbP

PTA o ==−= loglog


Spectronic 20D


Spectronic 20 GENESYS

Operating Procedure of UV/VIS

1. Nyalakan spektrometer, tunggu 15 menit

2. Pastikan kompartemen sampel kosong

3. Set mode T atau A

4. Pilih panjang gelombang yang sesuai untuk sampel uji

5. Masukkan kuvet berisi blanko (pelarut saja: air / methanol / hexane / dll), tutup kompartemen

6. Set T ke level 100% atau A 0.0

7. Bilas kuvet dengan larutan sampel (sampel dalam pelarut)

8. Pastikan tidak ada gelembung udara di dalam/permukaan sampel

9. Isi kuvet dengan sampel uji, lap permukaan luarnya dg tissue

10. Masukkan kuvet sampel, tutup kompartemen

11. Baca nilai T

12. Ulangi langkah 7-11 untuk sampel berikutnya

13. Setelah selesai, kosongkan kompartemen, bersihkan kuvet, matikan alat


Memilih panjang gelombang

warna larutan

400-435 nm

warna sinaryang diserap

435-480 nm

480-490 nm

580- 595 nm

595-605 nm

605-750 nm

490-500 nm

500-560 nm

560-580 nm

warna komplementer


Persiapan sampel• Dihancurkan hingga halus

• Dilarutkan dg pelarut organik/solvent (ex: air, methanol, hexane, dll)

• Dibuat pengenceran berseri

Kurva Standar

Tujuan: kalibrasi spectrometer, menghitung konsentrasi sampel

Langkah• Buat seri pengenceran larutan standar dari sampel

• Ukur absorbansi (A)

• Temukan persamaan linear antara konsentrasi larutan dengan absorbansi

Konsentrasi larutan standar A (M) Absorbansi

0,0002 0,357

0,0003 0,611

0,0005 1,028

0,0006 1,276

Sampel 1 0,978

y = 2255x - 0,084R² = 0,9986

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 0,0001 0,0002 0,0003 0,0004 0,0005 0,0006 0,0007

Ab

sorb

ansi

(A

)

Konsentrasi (M)

Hub konsentrasi larutan X dengan Absorbansi

Konsentrasi sampel 1 = xAbsorbansi 0,978 = yBerapa nilai x?

Terima Kasih

spectroscopy stp, msc. 30 october 2019

Documents