speciÁlnÍ metody pŘi zpracovÁnÍ a barvenÍ tvrdÝch tkÁnÍ
DESCRIPTION
SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ. Nezhybová E. , Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci. Úvod. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/1.jpg)
SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ
TVRDÝCH TKÁNÍ
Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F.
Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci
![Page 2: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/2.jpg)
Úvod
tvrdé tkáně představují pro běžná histologická vyšetření komplikaci s ohledem na nutnost demineralizace tkáně
k tomuto účelu slouží zředěné kyseliny, které přeměňují nerozpustné soli v soli rozpustné ve vodě
k zachování struktury a použitelnosti tkáně je nutné přesně dodržovat správné postupy
![Page 3: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/3.jpg)
Cíle práce
cílem naší práce bylo srovnat některé demineralizační postupy, poskytnout přehled speciálních barvení využitelných pro tvrdé tkáně a stanovit možnosti imunohistochemických vyšetření na tvrdých tkáních, které byly demineralizovány
![Page 4: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/4.jpg)
Materiál a metodika jako materiálu jsme použili dospělých lidských
zubů a kostí k dekalcifikaci jsme používali:
• elektrolytické odvápňování
• chelaton III
• Löwyho roztok jako barvících postupů jsme používali H.E.,
Schmorlovu reakci, azan, zelený trichrom, PAS a Saturnovou červeň
dále jsme prováděli imunohistochemické reakce
![Page 5: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/5.jpg)
Dekalcifikace (1)
doba se řídí velikostí bločku a typem dekalcifikační tekutiny
stupeň odvápnění určujeme vbodnutím jehly nebo chemicky /k 5 ml dekalcifikační tekutiny slité z odvápňované tkáně se přidá 5 ml 5% roztoku hydroxidu amonného a 5 ml 5% roztoku šťavelanu vápenatého/
![Page 6: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/6.jpg)
Základní pravidla demineralizace
tkáň musí být dobře fixována, jinak dochází k poškození tkáně (bobtnání)
důkladné vyprání tkáně po fixaci ve vodě nebo etanolu
odvápnění musí být rychlé /dostatečné množství dekalcifikační tekutiny, pravidelné vyměňování/
po odvápnění nutné dokonale vyprat tkáň od dekalcifikační tekutiny /nikdy nesmí ovšem přijít tkáň z dekalcifikačního roztoku do vody/
![Page 7: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/7.jpg)
Dekalcifikace (2)
elektrolytické odvápnění• kyselina mravenčí, kyselina chlorovodíková,
destilovaná voda
chelaton III• kyselina etylendiamintetraoctová (EDTA)
Löwyho roztok• 40% formaldehyd, chlorid rtuťnatý, ledová kyselina
octová, destilovaná voda
![Page 8: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/8.jpg)
Barvení tkáně
hematoxylin – eosin (HE) Schmorlova reakce Saturnová červeň zelený trichrom azan PAS
![Page 9: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/9.jpg)
substrát (DAB)
I. protilátka
buněčný antigen
II. protilátka SA-P
Nepřímá třístupňová imunohistochemická reakce, při které jsme použili primární protilátky proti kolagenu a Ab-1 (na makrofágy)
Imunohistochemie
![Page 10: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/10.jpg)
Výsledky - dekalcifikace
nejkratší dobu trvání má dekalcifikace v Löwyho roztoku (cca 20 hodin), který je současně fixační tekutinou a výsledná barvení neovlivňuje, současně je vhodný i pro imunohistochemické zpracování tvrdé tkáně
elektrolytické odvápnění je rovněž účinné, trvá několik dní a není k tvrdé tkáni příliš šetrné
EDTA trvá několik měsíců, ale je nejšetrnější, dosáhnout zkrácení doby odvápnění lze přidáním 2% kyseliny mravenčí, poté je nutné tkáň vyprat v 5% roztoku formaldehydu
![Page 11: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/11.jpg)
Zub – hematoxylin/eosin
![Page 12: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/12.jpg)
Zub – Schmorlova reakce
![Page 13: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/13.jpg)
Zub - azan
![Page 14: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/14.jpg)
Zub – Goldnerův zelený trichrom
![Page 15: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/15.jpg)
Zub - PAS
![Page 16: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/16.jpg)
Zub – Saturnová červeň
![Page 17: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/17.jpg)
Zub – ukázka imunohistochemie
![Page 18: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/18.jpg)
Závěry (1)
použití různých typů dekalcifikačních tekutin ovlivňuje délku demineralizace
Löwyho tekutina usnadňuje postup, protože je současně i tekutinou fixační, jde o postup z hlediska odvápnění nejkratší a dostatečně šetrný
chelaton III (EDTA) je postup dlouhý a pro rutinní laboratoř nevhodný
![Page 19: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/19.jpg)
Závěry (2)
při barvení tvrdých tkání lze použít různých speciálních postupů, které poskytují specifické výsledky a umožňují zobrazit potřebné jednotlivé struktury
při šetrné dekalcifikaci lze na odvápněné tkáni úspěšně provádět imunohistochemická vyšetření, je ale třeba zvolit vhodný dekalcifikační prostředek
![Page 20: SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081503/568150c4550346895dbee5e6/html5/thumbnails/20.jpg)
Děkujeme za pozornost