simplexa™ hsv 1 & 2 direct - focus diagnostics · los resultados negativos no descartan la...

Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct

REF MOL2150 Rev. E

Ensayo de PCR en tiempo real para la detección cualitativa y la diferenciación in vitro del ADN viral del

VHS-1 y el VHS-2.

Para uso diagnóstico in vitro

INDICACIONES DE USO El ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct de Focus Diagnostics está destinado a usarse en el equipo 3M Integrated Cycler para la detección cualitativa y la diferenciación del VHS-1 y el VHS-2 presentes en el líquido cefalorraquídeo (LCR) o en torundas genitales de pacientes con signos y síntomas de infección del sistema nervioso central (SNC) o los genitales por el VHS-1 o el VHS-2. La prueba es una ayuda para el diagnóstico diferencial de las infecciones del SNC y de los genitales por el VHS-1 y el VHS-2. Los resultados negativos no descartan la infección por el virus VHS-1 y/o el VHS-2, y no deben utilizarse como único fundamento para indicar un tratamiento o tomar otras decisiones sobre la atención médica de los pacientes. El ensayo no está diseñado para detectar la presencia del VHS-1 y el VHS-2 en la sangre o en hemoderivados. El ensayo es para uso profesional solamente.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN El VHS-1 y el VHS-2 son miembros de la subfamilia Alfaherpesviridae. El VHS es un virus con envoltura y con una cápside que contiene el ADN vírico. Aunque el VHS-1 y el VHS-2 están estrechamente emparentados, los dos virus son serológica y genéticamente distintos.1,2 El herpes genital causado por el VHS es una de las enfermedades de transmisión sexual más comunes. La infección primaria por HSV o la reactivación de la enfermedad latente puede producir lesiones cutáneas o mucosas.1,3 Estas lesiones suelen ser autolimitantes, pero los pacientes inmunodeprimidos, las embarazadas y los lactantes pueden presentar una forma grave de la enfermedad. El diagnóstico de las lesiones por herpes se basa predominantemente en métodos de cultivo o de inmunofluorescencia directa (DFA)3,4. Sin embargo, estos métodos conllevan gran cantidad de trabajo y tiempo, y son subjetivos.1,5 Las pruebas rápidas y exactas que utilizan la detección molecular de la infección por VHS pueden ser críticas tanto para la toma de decisiones terapéuticas como para el control de la infección.4,5 La encefalitis es una inflamación del cerebro que se asocia a pruebas clínicas de disfunción neurológica. La mayoría de los patógenos causantes de encefalitis que se han descrito son virus6. En general, las etiologías identificadas con más frecuencia en Estados Unidos son el virus del herpes simple, el virus del Nilo occidental y los enterovirus, seguidos por otros herpesvirus.6 El VHS ocasiona aproximadamente un 5%-10 % de todos los casos de encefalitis y es una de las causas más frecuentes de encefalitis esporádica identificada en todo el mundo.6 La encefalitis por VHS se produce a todas las edades y en todas las estaciones. La encefalitis por VHS-1 es más frecuente en adultos, mientras que la encefalitis por VHS-2 es más frecuente en neonatos.6 Un estudio informó de una incidencia del herpes neonatal de 1 caso por cada 3.200 reciénnacidos vivos en los EE. UU.7 Algunas de las características clínicas de la encefalitis por VHS son fiebre, cefalea hemicraneal, anomalías del lenguaje y de la conducta, pérdida de memoria y convulsiones.6 El uso de métodos de amplificación de ácidos nucleicos (p. ej., la PCR) en muestras de LCR ha mejorado considerablemente la capacidad para diagnosticar infecciones del SNC, especialmente las infecciones víricas causadas por herpesvirus.6 Los cultivos de LCR, en general, tienen un valor limitado en la determinación de las causas víricas de la encefalitis, pero son muy importantes en el diagnóstico de las infecciones bacterianas y micóticas.6 La Infectious Diseases Society of America (IDSA) recomienda analizar mediante PCR la presencia de VHS en todas las muestras de LCR de pacientes con encefalitis. En el caso de los pacientes con encefalitis con un resultado negativo en la PCR para el virus del herpes simple, debe considerarse la repetición de la prueba entre 3 y 7 días después en aquellos pacientes que presenten un síndrome clínico compatible o neuroimágenes que muestren una localización en el lóbulo temporal.6 El American Congress of Obstetricians and Gynecologists (ACOG) ha reconocido que la PCR para detectar el VHS es de 1,5 a 4 veces más sensible que el cultivo vírico, que las muestras para PCR son más fáciles de conservar y que la PCR es la prueba de elección para el diagnóstico de infecciones del sistema nervioso central (encefalitis y meningitis).8

Kit Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Página 2

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El sistema de ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct es una PCR en tiempo real que permite la amplificación, detección y diferenciación del ADN del VHS-1 y el VHS-2 directamente a partir de muestras de LCR y de torundas genitales sin procesar y sin extracción de ácidos nucleicos. El sistema se compone del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, el equipo 3M Integrated Cycler (con el 3M Integrated Cycler Studio Software), el Direct Amplification Disc y los accesorios asociados. En el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, se utilizan cebadores-sonda fluorescentes bifuncionales junto con los cebadores inversos correspondientes para amplificar las dianas del VHS-1, el VHS-2 y el control interno. Para identificar el ADN del VHS-1 y del VHS-2 en la muestra, se amplifican las regiones bien conservadas de los genes que codifican las respectivas ADN polimerasas. Se utiliza un control interno para detectar los fallos y/o la inhibición de la PCR. MATERIALESSUMINISTRADOS El ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct de Focus Diagnostics contiene reactivos suficientes para 24 reacciones. Una vez recibido, conservar a una temperatura comprendida entre –10 ºC y –30 ºC (no usar un congelador de tipo «no-frost»). Cada vial contiene material suficiente para una sola reacción. Utilizar durante los 30 minutos posteriores a la descongelación.

Descripción del Kit

Nombre del compuesto REF

SÍMBOLO CE EN ETIQUETA

Nombre abreviado

Color del tapón

Número de viales

Reacciones por vial/kit

Volumen por vial

Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Reaction Mix

MOL2151 REAG A RM Marrón 24 1/24 50 µl

Descripción del componente

Componente del kit Contenido

Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Reaction Mix (RM) (Mezcla de reacción)

ADN polimerasa, tampón, dNTP, cebadores-sondas de ADN molde (control interno) marcados con un colorante fluorescente y específicos para la detección del VHS-1 y el VHS-2, y para el control interno de ADN.

Diana Fluoróforo de la sonda (colorante)

Excitación (nm) Emisión (nm) Gen diana

VHS-1 CFR610 590 610 ADN polimerasa del VHS-1

VHS-2 FAM 495 520 ADN polimerasa del VHS-2

Control interno de ADN Q670 644 670 ND

Simplexa™ HSV 1 & 2 Kit tarjeta con código de barras

Parámetros específicos de la prueba.

MATERIALES SUMINISTRADOS POR SEPARADO 1. Kit del disco de amplificación directa (Direct Amplification Disc) (REF MOL1455)

a) Direct Amplification Discs para el equipo 3M Integrated Cycler MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1. Equipo 3M Integrated Cycler con 3M Integrated Cycler Studio Software versión 6.0 o posterior 2. Simplexa™ HSV 1 & 2 Positive Control Pack (REF MOL2160) 3. Pipeta de volumen fijo de 50 µl (VWR Signature™ Fixed Volume Ergonomic High-Performance Pipette Model VWR FE50 o

equivalente) 4. Puntas de pipeta desechables estériles sin nucleasas con filtros (se recomiendan las puntas extra largas ≥ 91 mm para

pipetear directamente de los tubos de recogida primaria) 5. Congelador (eliminación de escarcha manual) de –10 ºC a –30 ºC (para guardar los componentes del kit y las muestras

congelados) 6. Frigorífico de 2 ºC a 8 ºC (para las muestras) 7. Guantes sin polvo desechables


MATERIALES RECOMENDADOS 1. LCR sintético (Golden West Biologicals número de catálogo OH1030-S, SeraCare número de catálogo HSP-515 o

equivalente) para su uso como control sin molde (No Template Control, NTC) al analizar muestras de LCR. 2. Medio de transporte universal (Universal Transport Media, UTM) para su uso como control sin molde (No Template Control,

NTC) al analizar muestras de torundas genitales. MANIPULACIÓN Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO 1. Conserve los reactivos a una temperatura entre -10 ºC y -30 ºC (no use un congelador de tipo «no-frost»). 2. Deje que los reactivos se descongelen a temperatura ambiente antes de usarlos (aproximadamente entre 18 ºC y 25 ºC). 3. No use los kits ni los reactivos después de la fecha de caducidad. 4. Inicie la prueba antes de que pasen 30 minutos tras sacar la mezcla de reacción del congelador. 5. No utilice el vórtex para la mezcla de reacción. 6. No vuelva a congelar la mezcla de reacción. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1. Cuando manipule los reactivos del kit, use equipos de protección personal, como guantes y batas de laboratorio, entre otros.

Lávese las manos minuciosamente cuando termine de realizar la prueba. 2. No fume, beba, coma, manipule lentes de contacto ni se aplique maquillaje en las zonas en las que se usan los reactivos del

kit o muestras de origen humano. 3. Elimine los reactivos del kit que no se hayan usado y las muestras humanas según las normas locales, estatales y federales. 4. Trate todos las muestras y discos como si pudiesen transmitir los agentes infecciosos. La contaminación de las muestras de

pacientes o de reactivos puede dar lugar a resultados erróneos. Utilice buenas prácticas de laboratorio y controle el procedimiento de trabajo.

5. Use únicamente el protocolo descrito en este prospecto. Las desviaciones del protocolo, o el uso de tiempos o temperaturas diferentes de los especificados pueden producir resultados erróneos.

6. La preparación de la prueba debe realizarse a temperatura ambiente (aproximadamente en el rango de 18 ºC a 25 ºC). 7. Utilice pipetas de volumen fijo o equivalentes para la muestra y la mezcla de reacción. 8. Evite tocar el lado inferior del recubrimiento que estará en contacto con los pocillos y la superficie del disco. 9. Para evitar posibles resultados erróneos, asegúrese de que pone la muestra en el pocillo de entrada para la muestra

[Sample]. 10. Acabe de cargar y colocar el recubrimiento de aluminio adhesivo a un conjunto de pocillos de muestra y de reacción antes de

retirar el recubrimiento de otros conjuntos de pocillos de muestra y de reacción adyacentes. 11. Inicie el proceso antes de que pasen 30 minutos tras retirar el vial de mezcla de reacción del congelador. 12. No intente retirar el recubrimiento de aluminio adhesivo de las cuñas que ya se han usado, ni reutilice los espacios para las

muestras y la reacción que ya se han usado en procesos anteriores. 13. Los discos pueden reutilizarse hasta haber empleado las 8 cuñas. Deseche los discos usados sin separar el recubrimiento

de aluminio en un recipiente para residuos biopeligrosos. 14. Después de cada uso, guarde los discos DAD en posición horizontal con el sello laminado numerado hacia arriba. 15. La mezcla de reacción contiene más de un 1 % de glicerol, que puede causar irritación si se inhala o entra en contacto con la

piel. En caso de inhalación o contacto con la piel, deben tomarse medidas de primeros auxilios. 16. Si el envase del kit o su contenido tienen aspecto de estar rotos o deteriorados, no los use y póngase en contacto con Focus

Diagnostics. La información de contacto aparece en la última página de este documento. 17. La matriz espectral debe instalarse en todos los equipos 3M Integrated Cycler y no debe cambiarse a menos que Focus

Diagnostics le facilite un código QR actualizado para el equipo. La matriz espectral es exclusiva de cada equipo 3M Integrated Cycler. La matriz espectral se suministra con el equipo 3M Integrated Cycler y se encuentra en la portada del manual del hardware del Integrated Cycler. Si la etiqueta de la matriz no pudiera escanearse o no la encontrara, póngase en contacto con Focus Diagnostics. La información de contacto aparece en la última página de este documento.

18. No instalar o cambiar la matriz espectral puede generar resultados falsos. INSTRUCCIONES DE USO

A RECOGIDA DE MUESTRAS

Tipo de muestra LCR El tipo de muestra aceptable es LCR. Las muestras se deben transportar en hielo y conservarse entre 2 y 8 °C durante no más de 7 días después de su recogida. Si entre la recogida y el procesado de la muestra pueden transcurrir más de 7 días, conserve la muestra a -70 °C. Tipo de muestra torunda genital El tipo de muestra aceptable son torundas genitales conservadas en medio BD UVT, Remel M4, Remel M4RT, Remel M5, Remel M6 o medio de transporte UTM. Siga las instrucciones de uso del fabricante referentes a los medios de recogida y a los tipos de torundas aceptables. No utilice torundas con alginato de calcio, ya que pueden contener sustancias que inhiban


las pruebas de PCR. Las muestras se deben transportar en hielo y conservarse entre 2 y 8 °C durante no más de 7 días después de su recogida. Si entre la recogida y el procesado de la muestra pueden transcurrir más de 7 días, conserve la muestra a -70 °C.

B CONFIGURACIÓN DEL EQUIPO DE PCR EN TIEMPO REAL 1. Consulte el manual del operador del equipo 3M Integrated Cycler para configurar el 3M Integrated Cycler Studio

Software para introducir una definición de ensayo y analizar los procesos en el equipo 3M Integrated Cycler.

C CARGA DEL DISCO DE AMPLIFICACIÓN DIRECTA Y AMPLIFICACIÓN DE PCR EN TIEMPO REAL

NOTA: No se necesita la extracción de muestras antes del paso de amplificación de la PCR.

1. Seleccione las muestras que deben examinarse. 2. Descongele los viales de mezcla de reacción a temperatura ambiente (aproximadamente entre 18 y 25 °C). Descongele

un vial de mezcla de reacción para cada muestra o control que deba examinarse. 3. Lea el código de barras del vial de Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Reaction Mix o de la tarjeta del código de barras. 4. Lea el código de barras del Direct Amplification Disc (DAD). 5. Lea o introduzca el identificador de cada muestra. 6. Para utilizar una cuña cada vez, retire el recubrimiento de aluminio adhesivo para mostrar los pocillos de muestra

(SAMPLE) y reacción (R) sin retirar completamente el recubrimiento (Figuras 1 y 2). Evite tocar el lado inferior del recubrimiento que estará en contacto con los pocillos y la superficie del disco.

7. Asegúrese de que la mezcla de reacción está completamente descongelada. Centrifugue los tubos brevemente. (No utilice el vórtex para la mezcla de reacción).

8. Utilice la pipeta de volumen fijo para transferir 50 µl de la mezcla de reacción al pocillo de reacción (R). 9. Utilice la pipeta de volumen fijo para transferir 50 µl de la muestra o del control. Pipetee la muestra o el control en el

pocillo de muestra (SAMPLE). 10. Cubra los pocillos con el recubrimiento de aluminio adhesivo retirado y presione firmemente el borde del disco. Si se

rompe el recubrimiento original, no cargue los pocillos en la cuña. En lugar de ello, cargue otra cuña. 11. Retire la parte de la pestaña de la perforación de la cubierta. 12. Repita los pasos 6 a 11 para las siguientes muestras. 13. Cargue el DAD sellado en el equipo 3M Integrated Cycler e inicie el proceso.

Figura 1 – Disco con el recubrimiento alzado de los pocillos de muestran [Sample] y reacción [R] de la cuña n.º 3

Figura 2 – Pocillos de muestra [Sample] y reacción [R]

NOTAS (con fines informativos, no se requiere acción ni interpretación del usuario): 1. Los kits de Focus Diagnostics pueden contener números de versión para las definiciones del ensayo. Si existe un

número de versión, éste se agregará a la definición del ensayo; es decir, ‘Sample IVD Assay.2’. Cuando existan múltiples versiones, el software automáticamente utilizará la definición del ensayo asociada al número de lote leído.

CONTROL DE CALIDAD El SimplexaTM HSV 1 & 2 Positive Control Pack (MOL2160) puede utilizarse como control externo en pruebas de control de calidad, formación o pruebas de competencia. Se recomienda utilizar LCR sintético como control sin molde (No Template Control, NTC)para analizar muestras de LCR, y UTM como NTC para analizar muestras de torundas genitales. Los rangos de control de calidad se han establecido como se indica en la siguiente tabla. Si los controles no se encuentran comprendidos entre estos parámetros, los resultados de los pacientes deben considerarse «no válidos» y el ensayo debe repetirse. Focus recomienda analizar controles una vez al día. Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de control de calidad y la frecuencia de las pruebas de control de calidad basándose en las leyes y normas locales aplicables, y las buenas prácticas de


laboratorio. Consulte el prospecto del SimplexaTM HSV 1 & 2 Positive Control (PI.MOL2660) para obtener las instrucciones para analizar el control positivo.

Resultados esperados del control

Tipo de control VHS-1 VHS-2 Control interno de ADN (DNA

Internal Control, DNA IC) Simplexa™ HSV 1 & 2

Positive Control1 Detectado Detectado No corresponde2

Control sin molde (NTC)

No detectado No detectado Válido 1 Valores de Ct habituales para el rango de control positivo de 25 a ≤40. 2.No se requiere la detección del Simplexa™ DNA Internal Control (DNA IC) para obtener un resultado válido cuando se detecta el VHS.

RESULTADOS Después de completar el proceso, el software calcula y muestra los resultados automáticamente.

1. Por cada adquisición de identificación (Sample ID) introducida, el software muestra un resultado («Detected» (detectado), «Not Detected» (no detectado), «Invalid» (no válido) o «EC500») para el VHS-1 y el VHS-2.

a. El resultado «Detected» (detectado) señala la presencia de ADN del VHS-1 y/o del VHS-2 en la muestra del paciente.

b. El resultado «Not Detected» (no detectado) señala la ausencia de ADN del VHS-1 y/o del VHS-2 en la muestra del paciente.

c. El resultado «Invalid» (no válido) indica la incapacidad de determinar la presencia o ausencia de ADN del VHS-1 y/o del VHS-2 en la muestra del paciente. Este resultado puede deberse a 1) un fallo del control interno de ADN (CI de ADN) o a 2) un fallo por no detectar muestra suficiente. La muestra debe volver a examinarse. Ver la sección «Resultados no válidos» más adelante.

d. El resultado«EC500»señala un error de calidad de los datos para los analitos víricos concretos. El software ha sido incapaz de determinar una amplificación válida para los analitos. La muestra debe analizarse nuevamente.

e. El resultado«EC505»indica un error de calidad de los datos para el analito vírico. El software ha sido incapaz de determinar una amplificación válida para el analito. Póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de Focus Diagnostics; la información de contacto aparece en la última página de este documento.

2. Imprima el informe. a. Exporte los resultados.

RESULTADOS NO VÁLIDOS En caso de un resultado «Invalid» (no válido), vuelva a examinar la muestra con un nuevo vial de mezcla de reacción del mismo kit o de un kit nuevo. Si no consigue resolver el problema, póngase en contacto con el departamento de Servicio Técnico de Focus Diagnostics. LIMITACIONES 1. Para utilización en el diagnóstico in vitro. 2. Solo para exportación. 3. Los resultados de esta prueba deben correlacionarse con los antecedentes clínicos, los datos epidemiológicos y otras

pruebas de laboratorio disponibles para el médico a cargo de la evaluación del paciente. 4. La detección del ácido nucleico vírico depende de la correcta obtención, transporte, manipulación y conservación de las

muestras. Si no se cumplen los procedimientos correspondientes en alguno de estos pasos pueden producirse resultados incorrectos.

5. La prevalencia de las infecciones víricas influirá en el valor diagnóstico de la prueba. 6. Los resultados negativos no descartan la infección del SNC por el VHS, y no deben utilizarse como único fundamento para

tratar o tomar otras decisiones sobre el tratamiento de los pacientes. 7. Pueden aparecer resultados falsos negativos si la concentración de virus es inferior a la sensibilidad analítica del ensayo, o

si el virus contiene mutaciones, inserciones, deleciones o reorganizaciones del genoma o las pruebas se realizan en una fase muy temprana de la enfermedad.

8. En el caso de los pacientes con encefalitis con un resultado negativo en la PCR para el virus del herpes simple, debe considerarse la repetición de la prueba entre 3 y 7 días después en aquellos pacientes que presenten un síndrome clínico compatible o neuroimágenes que muestren una localización en el lóbulo temporal.3

9. Al igual que con cualquier otra prueba, pueden producirse resultados falso positivos. En algunas circunstancias, podría estar indicada la repetición de la prueba o la realización de una prueba con un dispositivo diferente.

10. Un resultado positivo de esta prueba no permite descartar enfermedades causadas por otros agentes patógenos bacterianos o víricos. Los ácidos nucleicos víricos pueden persistir in vivo independientemente de la viabilidad del virus. La detección de los analitos diana no implica que los virus correspondientes sean infecciosos o que sean el agente causal de los síntomas clínicos.


11. Cuando la concentración de VHS-1 es muy alta y la de VHS-2 es muy baja, la señal de la reacción correspondiente al VHS-2 podría no ser la adecuada para su detección, debido a una interferencia competitiva.

12. La prevalencia de las infecciones víricas influirá en el valor diagnóstico de la prueba. 13. Esta prueba es de tipo cualitativo y no informa sobre el valor cuantitativo del virus detectado. 14. No se ha determinado el rendimiento de esta prueba en programas de cribado de sangre o de hemoderivados para la

detección del VHS, o en otro tipo de muestras que no sean de LCR o de torundas genitales. 15. No se ha determinado el rendimiento de esta prueba en personas inmunodeprimidas. 16. No se ha determinado el rendimiento de esta prueba en la monitorización del tratamiento de pacientes con infección del SNC

por el VHS. 17. La información del vial de Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct Reaction Mix solo se puede transferir al software 3M Integrated

Cycler Studio con un lector de código de barras. Si el lector no funciona o si, por cualquier razón, no puede transferir la información, póngase en contacto con el Servicio Técnico de Focus Diagnostics.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO VALORES ESPERADOS – Tipo de muestra LCR Los valores esperados de VHS-1 y VHS-2 observados en la población prospectiva del estudio clínico del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct variaron en función del centro y se muestran en la tabla siguiente.

Población muestreada

Centro de recogida de la

muestra

N.º de muestra

s

Valores esperados basándose en el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct

VHS-1 VHS-2 No

detectado

Prospectiva

1 31 0,0 % (0/31) 6,5 % (2/31) 93,5 % (29/31)

7 24 4,2 % (1/24) 0,0 % (0/24) 95,8 % (23/24)

8 94 4,3 % (4/94) 5,3 % (5/94) 90,4 % (85/94)

9 15 0,0 % (0/15) 0,0 % (0/15) 100,0 % (15/15)

Todos 164 3,0 % (5/164) 4,3 % (7/164) 92,7 %

(152/164)

Franja de edad

Prospectiva - Número de muestras analizadas con el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct

Combinadas Femeninas Masculinas

VHS-1 VHS-2 No

detectado Todos VHS-1 VHS-2

No detectado

Todos VHS-1 VHS-2 No

detectado Todos

De nonato a 1 mes - 1 9 10 - - 6 6 - 1 3 4

De 1 mes a 2 años - 1 25 26 - - 8 8 - 1 17 18

De 2 años a 12 años

- - 9 9 - - 6 6 - - 3 3


- 1 11 12 - 1 4 5 - - 7 7


4 4 65 73 3 1 35 39 1 3 30 34

Más de 60 años 1 - 33 34 1 - 20 21 - - 13 13

Todos 5 7 152 164 4 2 79 85 1 5 73 79


VALORES ESPERADOS – Tipo de muestra torunda genital Los valores esperados de VHS-1 y VHS-2 observados en la población prospectiva del estudio clínico del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct variaron en función del centro y se muestran en la tabla siguiente.

ID del centro de recogida

de la muestra

Todos

Resultado del cultivo ELVIS (prevalencia) Resultado de Simplexa (valores esperados) Resultado de la secuenciación (valores

esperados)

VHS 1y2 No

detectado

VHS-1 Detectado,

VHS-2 No

detectado

VHS-1 No analizado y VHS-2

Detectado

No evaluable

VHS 1 y 2Detectado

VHS 1 y 2 No

detectado

VHS-1 Detectado y VHS-2

No detectado

VHS-1 No detectado y

VHS-2 Detectado

No evaluable

VHS-1 Detectado

VHS 1 y 2 No

detectado

VHS-2 Detectado

No evaluable

1 256 64,5 %

(165/256) 14,1 %

(36/256) 20,3 %

(52/256) 1,2 %

(3/256) 0,4 %

(1/256) 53,9 %

(138/256) 16,0 %

(41/256) 28,5 %

(73/256) 1,2 %

(3/256) 16,0 %

(41/256) 54,3 %

(139/256) 27,3 %

(70/256) 2,3 %

(6/256)

2 74 78,4 % (58/74)

6,8 % (5/74)

6,8 % (5/74)

8,1 % (6/74)

1,4 % (1/74)

73,0 % (54/74)

9,5 % (7/74)

12,2 % (9/74)

4,1 % (3/74)

6,8 % (5/74)

74,3 % (55/74)

9,5 % (7/74)

9,5 % (7/74)

3 78 59,0 % (46/78)

6,4 % (5/78)

32,1 % (25/78)

2,6 % (2/78)

1,3 % (1/78)

51,3 % (40/78)

19,2 % (15/78)

26,9 % (21/78)

1,3 % (1/78)

16,7 % (13/78)

51,3 % (40/78)

28,2 % (22/78)

3,8 % (3/78)

5 140 51,4 %

(72/140) 12,1 %

(17/140) 24,3 %

(34/140) 12,1 %

(17/140) 1,4 %

(2/140) 47,1 %

(66/140) 20,0 %

(28/140) 27,1 %

(38/140) 4,3 %

(6/140) 18,6 %

(26/140) 47,1 %

(66/140) 28,6 %

(40/140) 5,7 %

(8/140)

9 89 58,4 % (52/89)

11,2 % (10/89)

29,2 % (26/89)

1,1 % (1/89)

0,0 % (0/89)

51,7 % (46/89)

21,3 % (19/89)

25,8 % (23/89)

1,1 % (1/89)

22,5 % (20/89)

49,4 % (44/89)

25,8 % (23/89)

2,2 % (2/89)

10 81 64,2 % (52/81)

6,2 % (5/81)

23,5 % (19/81)

6,2 % (5/81)

0,0 % (0/81)

56,8 % (46/81)

16,0 % (13/81)

23,5 % (19/81)

3,7 % (3/81)

17,3 % (14/81)

48,1 % (39/81)

22,2 % (18/81)

12,3 % (10/81)

Todos 718 62,0 %

(445/718) 10,9 %

(78/718) 22,4 %

(161/718) 4,7 %

(34/718) 0,7 %

(5/718) 54,3 %

(390/718) 17,1 %

(123/718) 25,5 %

(183/718) 2,4 %

(17/718) 16,6 %

(119/718) 53,3 %

(383/718) 25,1 %

(180/718) 5,0 %

(36/718)

Demografía de las muestras con el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct

Sexo Grupo de edad Todos

Resultado de Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct

VHS 1y2 Detectado

VHS 1y2 No detectado

VHS-1 Detectado y

VHS-2 No detectado

VHS-1 No detectado y

VHS-2 Detectado

No evaluable

Femeninas

De 1 mes a 2 años 2 0,0 % (0/2) 50,0 % (1/2) 50,0 % (1/2) 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2)

De 2 a 12 años 10 0,0 % (0/10) 90,0 % (9/10) 0,0 % (0/10) 10,0 % (1/10) 0,0 % (0/10)

De 12 a 18 años 56 0,0 % (0/56) 62,5 % (35/56) 10,7 % (6/56) 25,0 % (14/56) 1,8 % (1/56)

De 18 a 21 años 61 0,0 % (0/61) 29,5 % (18/61) 32,8 % (20/61) 34,4 % (21/61) 3,3 % (2/61)

Mayores de 21 años 503 0,8 % (4/503) 54,3 %

(273/503) 16,9 %

(85/503) 25,8 %

(130/503) 2,2 % (11/503)

Todos 632 0,6% (4/632) 53,2 %

(336/632) 17,7 %

(112/632) 26,3 %

(166/632) 2,2 % (14/632)

Masculinas

De 1 mes a 2 años 1 0,0 % (0/1) 0,0 % (0/1) 100,0 % (1/1) 0,0 % (0/1) 0,0 % (0/1)

De 2 a 12 años 2 0,0 % (0/2) 100,0 % (2/2) 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2)

De 12 a 18 años 3 0,0 % (0/3) 100,0 % (3/3) 0,0 % (0/3) 0,0 % (0/3) 0,0 % (0/3)

De 18 a 21 años 12 0,0 % (0/12) 33,3 % (4/12) 25,0 % (3/12) 41,7 % (5/12) 0,0 % (0/12)

Mayores de 21 años 66 1,5 % (1/66) 68,2 % (45/66) 10,6 % (7/66) 18,2 % (12/66) 1,5 % (1/66)

Todos 84 1,2 % (1/84) 64,3 % (54/84) 13,1 % (11/84) 20,2 % (17/84) 1,2 % (1/84)

Desconocido Desconocido 2 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2) 0,0 % (0/2) 100,0 % (2/2)

Todos 718 0,7 % (5/718) 54,3 %

(390/718) 17,1 %

(123/718) 25,5 %

(183/718) 2,4 % (17/718)


CONCORDANCIA CLÍNICA – Tipo de muestra LCR Se obtuvo, prospectiva o retrospectivamente en ocho centros externos, un total de 219 muestras de LCR de pacientes con signos y síntomas de infección del sistema nervioso central (SNC) por el virus del herpes simple (VHS). Todos los centros enviaron las muestras congeladas a Focus Diagnostics. Se prepararon dos alícuotas de cada muestra y las muestras se codificaron para realizar el análisis a ciegas. Una alícuota se envió a un centro externo para que realizara el análisis y la otra se conservó en Focus Diagnostics para su secuenciación. Cinco centros externos realizaron la prueba con Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, entre los cuales había cuatro de los centros que participaron en la obtención de las muestras. Focus Diagnostics analizó primero las muestras por PCR y después con dos secuenciaciones bidireccionales. Los resultados obtenidos con Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se compararon con los resultados de las dos secuenciaciones bidireccionales (comparador). De todos los pacientes se recogieron los resultados de neuroimágenes o la impresión clínica del médico responsable plasmada en un cuaderno de recogida de datos (CRD), así como otra información clínica, como los análisis bioquímicos, los cultivos bacterianos, imágenes de RM o TC, o los resultados de PCR internas. El diagnóstico final tuvo en cuenta todos los hallazgos de laboratorio y los resultados de la prueba de PCR realizada localmente junto con el cuadro clínico inicial del paciente. No se encontró ninguna muestra que fuera doble positivo (positiva para VHS-1 y VHS-2). La siguiente tabla presenta la distribución de los diferentes parámetros clínicos recogidos de los pacientes cuyo positivo o negativo se confirmó con el comparador.

Parámetro

Pacientes positivos para VHS según el

comparador (número y %)

Pacientes negativos para VHS según el

comparador (número y %)

Imágenes de RM indicativas de infección por VHS 18/65 (27,7 %) 9/154 (5,8 %)

Imágenes de RM no indicativas de infección por VHS 43/65 (66,2 %) 121/154 (78,6 %)

Imágenes de RM no disponibles 4/65 (6,2 %) 24/154 (15,6 %)

Diagnóstico final positivo para infección por VHS 61/65 (93,8 %) 33/154 (21,4 %)

Diagnóstico final negativo para infección por VHS 4/65 (6,2 %) 121/154 (78,6 %)

Cultivo bacteriano positivo 2/65 (3,1 %) 4/154 (2,6 %)

Cultivo bacteriano negativo 63/65 (96,9 %) 145/154 (94,2 %)

Cultivo bacteriano no efectuado 0/65 (0,0 %) 5/154 (3,2 %)

Las tablas siguientes resumen la concordancia entre los resultados del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct y del comparador (resultados de dos secuenciaciones por PCR). Se validaron ensayos de secuenciación con sondas de trescientos (300) pares de bases de ADN didesoxi para dos dianas génicas del VHS. Todas las muestras de ADN extraído del paciente se sometieron a prueba con PCR con SYBR Green. Los amplicones de las muestras positivas se utilizaron para la secuenciación bidireccional. Los requisitos de secuencia tenían un índice de calidad Phred ≥ 20 (para cada base), una longitud de lectura continua ≥ 200 y una cobertura 2x ≥180. Los alineamientos de las secuencias se analizaron contrastándolos con la base de datos GenBank utilizando el programa de búsqueda BLAST para determinar si la muestra del paciente era positiva para VHS-1 o VHS-2.

VHS-1: Muestras prospectivas VHS-2: Muestras prospectivas

Resultados de Simplexa™

Comparador: Dos PCR/SEQ Resultados de Simplexa™

Comparador: Dos PCR/SEQ

Detectado No detectado Total Detectado No detectado Total

Detectado 3 2* 5 Detectado 6 1## 7

No detectado 0 159 159 No detectado 1# 156 157

Total 3 161 164 Total 7 157 164

PPA 100,0 %(3/3) IC 95 %: de 43,8 % a 100,0 % PPA 85,7 %(6/7) IC 95 %: de 48,7 % a 97,4 %

NPA 98,8 %(159/161) IC 95 %: de 95,6 % a 99,7 % NPA 99,4 %(156/157) IC 95 %: de 96,5 % a 99,9 %

*1/2 muestras tuvo un diagnóstico final de meningitis a partir de la historia clínica.

#La muestra era de un paciente al que se le acabó diagnosticando meningitis a partir de la historia clínica. ##La muestra era de un paciente al que se le acabó diagnosticando meningitis a partir de la historia clínica.

Nota: PPA: Positive Percent Agreement (Porcentaje de concordancia positivo); NPA: Negative Percent Agreement (Porcentaje de concordancia negativo)


Entre 2004 y 2013 se recogieron cincuenta y cinco (55) muestras positivas para VHS retrospectivas/preseleccionadas (determinadas como tales por los centros de recogida) en cuatro centros y se confirmó el resultado positivo con el comparador. Estas muestras se utilizaron para complementar el estudio prospectivo y evaluar la sensibilidad del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. Los resultados se muestran en la tabla siguiente.

Muestras positivas retrospectivas/preseleccionadas – Porcentaje de concordancia positivo (PPA)

Resultados de Simplexa™

Comparador: Dos PCR/SEQ

VHS-1 VHS-2

VHS-1 13 0

VHS-2 0 42

No detectado 0 0

Total 13 42

VHS-1 VHS-2

PPA 100,0 %(13/13)

IC 95 %: de 77,2 % a 100,0 %

100,0 %(42/42)

IC 95 %: de 91,6 % a 100,0 %

CONCORDANCIA CLÍNICA – Tipo de muestra torunda genital Se recogió de forma prospectiva un total de 718 muestras de torundas genitales de pacientes con signos y síntomas de infección genital por el virus del herpes simple (VHS) en 6 localizaciones geográficas diferentes. Las muestras de torundas genitales se recogieron y se analizaron en cada centro, y después se enviaron a un laboratorio central para su análisis por cultivo. En el cultivo se analizó primero cada muestra para la detección de VHS-2; las muestras positivas para VHS-2 no se sometieron a ningún análisis adicional. Las muestras negativas para VHS-2 en el cultivo se analizaron para la detección de VHS-1. No se identificaron positivos dobles en el ensayo. Las muestras retenidas se enviaron a Focus Diagnostics, se analizaron mediante un ensayo de secuenciación bidireccional validado y se detectaron positivos dobles. Resultados de la secuenciación bidireccional del VHS-1

Concordancia clínica - (total para el VHS-1)

Resultados de Simplexa™ HSV

1 & 2 Direct

Método de secuenciación validado

Detectado No detectado Total

Detectado 114 11a 125

No detectado 3b 546 549

Total 117 557 674

%PPA 97,4 %(114/117)

IC 95 %: de 92,7 % a 99,1 % %NPA

98,0 %(546/557)

IC 95 %: de 96,5 % a 98,9 %

%VPP 91,2 %(114/125)

IC 95 %: de 84,9 % a 95,0 % %VPN

99,5 %(546/549)

IC 95 %: de 98,4 % a 99,8 %aDe las once (11) muestras discordantes, dos (2) mostraron VHS-1 Detectado, seis (6) mostraron No

detectado tanto para VHS-1 como para VHS-2, y tres (3) mostraron Detectado para VHS-2 y no se analizaron para VHS-1 cuando se utilizó el método de cultivo para el análisis.

bDe las tres (3) muestras discordantes, dos (2) mostraron No detectado tanto para VHS-1 como para VHS-2, y una (1) mostró Detectado para VHS-2 cuando se analizó con el método de cultivo.


Resultados de la secuenciación bidireccional del VHS-2

Concordancia clínica - (total para el VHS-2)

Resultados de Simplexa

Método de secuenciación validado

Detectado No detectado Total

Detectado 174 11c 185

No detectado 3d 486 489

Total 177 497 674

%PPA 98,3 % (174/177)

IC 95 %: de 95,1 % a 99,4 %

%NPA 97,8 % (486/497)

IC 95 %: de 96,1 % a 98,8 %

%VPP 94,1 % (174/185)

IC 95 %: de 89,7 % a 96,6 %

%VPN 99,4 % (486/489)

IC 95 %: de 98,2 % a 99,8 % cDe las once (11) muestras discordantes, una (1) mostró Detectado para VHS-2 y no se analizó para

VHS-1, y diez (10) mostraron No detectado tanto para VHS-1 como para VHS-2 cuando se analizaron con el método de cultivo.

dDe las tres (3) muestras discordantes, las tres (3) mostraron No detectado tanto para VHS-1 como para VHS-2 cuando se analizaron con el método de cultivo.

REPRODUCIBILIDAD - Tipo de muestra LCR Se evaluó la reproducibilidad del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. Tres centros de investigación evaluaron la reproducibilidad intercentro, la reproducibilidad interdía y la reproducibilidad inter e intraensayo de la prueba. Cada uno de los laboratorios realizó pruebas de controles positivos y de un grupo de cinco mezclas de muestras creadas artificialmente, entre las cuales se encontraban un positivo bajo (aproximadamente igual al límite de detección, LoD) y uno medio (aproximadamente 4 veces el límite de detección, LoD) para cada analito, y un alto negativo. La muestra de alto negativo contenía una pequeña cantidad de VHS-1 y VHS-2, y se diseñó para ser negativa aproximadamente el 95 % de las veces. Los ensayos se realizaron por triplicado en cinco días diferentes. En cada centro hubo dos operadores que efectuaron el ensayo del panel de muestras y del control positivo una vez al día, lo que suma un total de dos conjuntos de datos al día. En las tablas siguientes se presentan los resultados combinados de todos los centros.

Muestra

Centro 1 Centro 2 Centro 3 % de

concordancia total con los resultados esperados

IC 95 % % de

concordancia con los

resultados esperados

Ct promedio

% CV total

% de concordancia

con los resultados esperados

Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

VHS-1 Resultado

VHS-1

Positivo bajo 100,0 % (30/30)

36,9 2,0 100,0 % (30/30)

35,4 2,2 100,0 % (30/30)

36,6 2,7 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-1

Positivo medio 100,0 % (30/30)

34,6 1,6 100,0 % (30/30)

33,2 1,2 100,0 % (30/30)

34,3 1,8 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2

Positivo bajo 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(30/30) a ND ND 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(90/90) a de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2

Positivo medio 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(30/30) a ND ND 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(90/90) a de 95,9 % a 100,0 %

Negativo alto 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(30/30) a ND ND 100,0 % (30/30) a ND ND 100,0 %

(90/90) a de 95,9 % a 100,0 %

Control positivo 100,0 % (30/30)

30,7 1,5 100,0 % (30/30)

30,6 1,2 100,0 % (30/30)

30,2 1,4 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total

100,0 % (180/180) 100,0 % (180/180) 100,0 % (180/180) 100,0 %

(540/540) de 99,3 % a 100,0 %

a) Los resultados esperados de las muestras VHS-2 positivo bajo, VHS-2 positivo medio y alto negativo son «negativos» para VHS-1.


Muestra



IC 95 % % de



Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

VHS-2 Resultado

VHS-1

Positivo bajo 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (90/90) b

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-1

Positivo medio 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (90/90) b

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2


38,1 2,9 90,0 % (27/30)

38,4 3,2 83,3 % (25/30)

38,3 2,4 90,0 % (81/90)

de 82,1 % a 94,6 %

VHS-2


35,0 1,3 100,0 % (30/30)

34,6 1,8 100,0 % (30/30)

35,0 1,4 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Negativo alto 93,3 %

(28/30) b 39,7 0,2

96,7 % (29/30) b

38,4 ND 96,7 %

(29/30) b 39,1 ND

95,6 % (86/90) b

de 89,1 % a 98,3 %


30,1 0,9 100,0 % (30/30)

30,6 1,1 100,0 % (30/30)

30,0 1,2 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total

98,3 % (177/180) 97,8 % (176/180) 96,7 % (174/180) 97,6 %

(527/540) de 95,9 % a 98,6 %

b) Los resultados esperados de las muestras VHS-1 positivo bajo, VHS-1 positivo medio y alto negativo son «negativos» para VHS-2.

Muestra



IC 95 % % de



Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

CI de ADN

Resultado

VHS-1


29,6 0,7 100,0 % (30/30)

30,0 1,7 100,0 % (30/30)

29,1 0,6 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-1


29,6 0,8 100,0 % (30/30)

30,1 1,2 100,0 % (30/30)

29,1 0,6 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2


29,4 0,7 100,0 % (30/30)

30,1 1,0 100,0 % (30/30)

29,1 0,7 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2


29,4 0,9 100,0 % (30/30)

30,0 1,3 100,0 % (30/30)

29,2 1,6 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Negativo alto 100,0 % (30/30)

29,4 0,8 100,0 % (30/30)

30,1 1,3 100,0 % (30/30)

29,2 1,3 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %


29,6 1,0 100,0 % (30/30)

30,0 1,1 100,0 % (30/30)

29,2 0,8 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total

100,0 % (180/180) 100,0 % (180/180) 100,0 % (180/180) 100,0 %

(540/540) de 99,3 % a 100,0 %


REPRODUCIBILIDAD – Tipo de muestra torunda genital Se evaluó la reproducibilidad del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. Tres centros de investigación evaluaron la reproducibilidad intercentro, la reproducibilidad interdía y la reproducibilidad inter e intraensayo de la prueba. Cada uno de los laboratorios realizó pruebas de controles positivos y de un grupo de cinco mezclas de muestras creadas artificialmente, entre las cuales se encontraban un positivo bajo (aproximadamente 1 a 2 veces el límite de detección, LoD) y uno medio (aproximadamente 2 a 4 veces el límite de detección, LoD) para cada analito, y un alto negativo. La muestra de alto negativo contenía una pequeña cantidad de VHS-1 y VHS-2, y se diseñó para ser negativa aproximadamente el 95 % de las veces. Los ensayos se realizaron por triplicado en cinco días diferentes. En cada centro hubo dos operadores que efectuaron el ensayo del panel de muestras y del control positivo una vez al día, lo que suma un total de dos conjuntos de datos al día. En las tablas siguientes se presentan los resultados combinados de todos los centros.

Muestra



IC 95 % % de



Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

VHS-1 Resultado

VHS-1 Positivo bajo

100,0 % (30/30)

36,0 2,2 100,0 % (30/30)

36,1 2,6 100,0 % (30/30)

36,3 2,7 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-1 Positivo medio

100,0 % (30/30)

34,4 1,7 100,0 % (30/30)

34,8 1,2 100,0 % (30/30)

34,6 1,9 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2 Positivo bajo

100,0 % (30/30) c ND ND

100,0 % (30/30)a ND ND

96,7 % (29/30) c ND ND

98,9 % (89/90) c

de 94,0 % a 99,8 %


100,0 % (30/30) c

ND ND 96,7 % (29/30) c

ND ND 100,0 % (30/30) c

ND ND 98,9 % (89/90)a

de 94,0 % a 99,8 %

Negativo alto 96,7 % (29/30)a

38,8 0,0 93,3 %

(28/30) c 38,7 0,5

90,0 % (27/30) c

38,0 4,1 93,3 %

(84/90) c de 86,2 % a 96,9 %


29,9 0,8 100,0 % (30/30)

30,4 1,3 100,0 % (29/29)

29,9 2,8 100,0 % (89/89)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total

99,4 % (179/180) 98,3 % (177/180) 97,8 % (175/179) 98,5 %

(531/539) de 97,1 % a 99,2 %

c) Los resultados esperados de las muestras VHS-2 positivo bajo, VHS-2 positivo medio y alto negativo son «negativos» para VHS-1.

Muestra



IC 95 % % de



Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

VHS-2 Resultado

VHS-1 Positivo bajo

100,0 % (30/30)d

ND ND 100,0 % (30/30) d

ND ND 96,7 %

(29/30) b 41,1 0,0

98,9 % (89/90) d

de 94,0 % a 99,8 %


100,0 % (30/30) d

ND ND 100,0 % (30/30) d

ND ND 100,0 % (30/30) b

ND ND 100,0 % (90/90) d

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2 Positivo bajo

100,0 % (30/30)

37,4 2,9 90,0 % (27/30)

37,5 3,5 93,3 % (28/30)

37,1 2,8 94,4 % (85/90)

de 87,6 % a 97,6 %


100,0 % (30/30)

35,5 1,9 100,0 % (30/30)

35,6 2,0 100,0 % (30/30)

35,3 1,6 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Negativo alto 96,7 %

(29/30) d 39,5 0,0

86,7 % (26/30) b

38,6 2,9 100,0 % (30/30) b

NA NA 94,4 %

(85/90) d de 87,6 % a 97,6 %


30,2 1,3 100,0 % (30/30)

30,1 0,6 100,0 % (29/29)

29,9 1,2 100,0 % (89/89)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total 99,4 % (179/180) 96,1 % (173/180) 98,9 % (176/179)

98,0 % (528/539)

de 96,4 % a 98,9 %

d) Los resultados esperados de las muestras VHS-1 positivo bajo, VHS-1 positivo medio y alto negativo son «negativos» para VHS-2.


Muestra



IC 95 % % de



Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

% de concordancia


Ct promedio

% CV total

CI de ADN

Resultado

VHS-1 Positivo bajo

100,0 % (30/30)

29,6 0,7 100,0 % (30/30)

29,8 1,2 100,0 % (30/30)

29,7 1,0 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %


100,0 % (30/30)

29,6 0,8 100,0 % (30/30)

29,8 1,4 100,0 % (30/30)

29,7 0,9 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

VHS-2 Positivo bajo

100,0 % (30/30)

29,6 0,8 100,0 % (30/30)

29,8 1,2 100,0 % (30/30)

29,7 1,0 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %


100,0 % (30/30)

29,5 0,6 100,0 % (30/30)

29,7 1,4 100,0 % (30/30)

29,8 1,4 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %

Negativo alto 100,0 % (30/30)

29,6 0,6 100,0 % (30/30)

29,8 1,2 100,0 % (30/30)

29,7 1,0 100,0 % (90/90)

de 95,9 % a 100,0 %


29,5 0,5 100,0 % (30/30)

29,7 1,4 100,0 % (29/29)

29,7 0,9 100,0 % (89/89)

de 95,9 % a 100,0 %

Concordancia total

100,0 % (180/180) 100,0 % (180/180) 100,0 % (179/179) 100,0 %

(539/539) de 96,4 % a 98,9 %

SENSIBILIDAD ANALÍTICA/LÍMITE DE DETECCIÓN – Tipo de muestra LCR El límite de detección (LoD, Limit of Detection) del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se determinó utilizando stocks cuantificados de VHS-1 y VHS-2 diluidos de manera seriada en matriz de LCR humano negativo. El LoD se determinó de manera que fuera la concentración más baja que pudiera detectarse como positiva ≥95 % de las veces.

Cepa vírica Concentración LoD

(TCID50/ml) Resultados cualitativos (N.º detectado/N.º total)

Media de Ct ± DE (solo a partir de las réplicas

detectadas) VHS-1

McIntyre 5 31/32 37,1 ± 1,17

VHS-1 HF 40 31/32 36,9 ± 0,90

VHS-2 G 1,25 31/32 38,3 ± 0,74

VHS-2 MS 20 32/32 37,2 ± 1,03

SENSIBILIDAD ANALÍTICA/LÍMITE DE DETECCIÓN – Tipo de muestra torunda genital El límite de detección (LoD, Limit of Detection) del ensayo Simplexa™ HSV 1& 2 Direct se determinó utilizando stocks cuantificados de VHS-1 y VHS-2 diluidos de manera seriada en matriz de torundas genitales negativa. El LoD se determinó de manera que fuera la concentración más baja que pudiera detectarse como positiva ≥95 %de las veces.

Cepa vírica Concentración LoD

(TCID50/ml) Resultados cualitativos (N.º detectado/N.º total)

Media de Ct ± DE (solo a partir de las réplicas detectadas)

VHS-1 McIntyre

4 32/32 36,4 ± 1,16

VHS-1 HF 160 32/32 35,2 ± 1,03

VHS-2 G 2 32/32 37,5 ± 1,08

VHS-2 MS 10 31/32 37,9 ± 1,15


REACTIVIDAD ANALÍTICA/REACTIVIDAD CRUZADA Reactividad analítica – Tipo de muestra LCR La reactividad analítica del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó utilizando diferentes cepas del VHS-1 que no se habían usado para calcular el límite de detección (LoD) del ensayo. No había más cepas del VHS-2 disponibles. Se añadió a LCR negativo una única dilución de material vírico cuantificado y se analizó por triplicado. El ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct pudo detectar otras cepas del VHS-1.

Reactividad analítica con cepas víricas adicionales

Cepa de VHS Concentración añadida

[TCID50/ml]

Resultados cualitativos (N.º detectado/N.º total)

VHS-1 VHS-2

VHS-1 KOS 20 3/3 0/3

VHS-1 F

20 2/3 0/3

40 3/3 0/3

80 3/3 0/3

Reactividad analítica – Tipo de muestra torunda genital La reactividad analítica del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó utilizando diferentes cepas del VHS-1 que no se habían usado para calcular el límite de detección (LoD) del ensayo. No había más cepas del VHS-2 disponibles. Se añadió a una matriz de torundas genitales negativa una única dilución de material vírico cuantificado y se analizó por triplicado. El ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct pudo detectar otras cepas del VHS-1.

Reactividad analítica con cepas víricas adicionales

Cepa de VHS Concentración añadida

[TCID50/ml]

Resultado cualitativo (N.º detectado/N.º total)

VHS-1 VHS-2

VHS-1 KOS 16 3/3 0/3

VHS-1 F 32 3/3 0/3


Reactividad cruzada (especificidad analítica) – Tipo de muestra LCR La especificidad analítica del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó analizando la capacidad de identificar exclusivamente al VHS-1 y al VHS-2 sin reactividad cruzada con otros microorganismos con los que están estrechamente emparentados, o que causan síntomas clínicos similares o pueden estar presentes en el LCR. Se añadieron 51 posibles reactantes cruzados en LCR negativo y se analizó por triplicado. No se observó reactividad cruzada.

N.º Reactantes cruzados Concentración probada Resultado cualitativo

(N.º detectado/N.º total) VHS-1 VHS-2

1 Valor basal No corresponde 0/20 0/20

2 Adenovirus (tipo 1) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

3 Adenovirus (tipo 7A) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

4 VBK 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

5 Citrobacter freundii 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

6 Citrobacter koseri 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

7 Cryptococcus neoformans 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

8 Citomegalovirus AD169 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

9 Dengue (tipo 1) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

10 Virus de la encefalomiocarditis 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

11 Enterobacter aerogenes 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

12 Enterovirus 71 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

13 Virus Epstein Barr (B95-8) 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

14 Escherichia coli 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

15 Haemophilus influenzae 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

16 Haemophilus influenzae tipo b (MinnA) 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

17 Hepatitis B 1,00 × 105 UI/ml 0/3 0/3

18 Hepatitis C 1,00 × 105 UI/ml 0/3 0/3

19 VIH1 (tipo IIIB) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

20 VIH2 (tipo NIHZ) No disponible* 0/3 0/3

21 Herpesvirus humano 6 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

22 Herpesvirus humano 7 (tipo SB) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

23 Herpesvirus humano 8 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

24 Gripe A/California/ 7/2009 NYMC x-179-A

1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

25 Gripe B/Florida/02/2006 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

26 Virus JC (Mad-4) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

27 Klebsiella pneumoniae 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

28 Encefalitis de La Crosse 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

29 Listeria monocytogenes 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

30 Sarampión 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

31 Paperas 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

32 Mycobacterium tuberculosis (ADN genómico)

1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

33 Naegleria fowleri 1,00 × 104 cél./ml 0/3 0/3

34 Neisseria meningitides (serogrupo A) 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

35 Virus parainfluenza tipo 1 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3


N.º Reactantes cruzados Concentración probada Resultado cualitativo

(N.º detectado/N.º total) VHS-1 VHS-2



38 Parvovirus B19 1,00 × 105 UI/ml 0/3 0/3

39 Poliovirus (tipo 3) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

40 Proteus mirabilis (Z050) 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

41 Pseudomonas aeruginosa 1,00 × 106 copias/ml 0/3 0/3

42 Rabia 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

43 Rinovirus (tipo 1A) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

44 Rotavirus (tipo Wa) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

45 Rubéola 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

46 Encefalitis de San Luis 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

47 Staphylococcus aureus COL 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

48 Streptococcus agalactiae 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

49 Streptococcus pneumoniae Z022; 19F 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

50 Toxoplasma gondii 1,00 × 106 taquizoítos/ml 0/3 0/3

51 Virus varicela-zóster 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

52 Virus del Nilo Occidental 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

*No se disponía de material cuantificado para la prueba; en su lugar, el proveedor proporcionó un líquido de cultivo con un valor Ct conocido. Al centro se le indicó que diluyera el stock a un valor Ct relevante; factor de dilución 1:200.

Reactividad cruzada (especificidad analítica) – Tipo de muestra torunda genital La especificidad analítica del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó analizando la capacidad de identificar exclusivamente al VHS-1 y al VHS-2 sin reactividad cruzada con otros microorganismos con los que están estrechamente emparentados, o que causan síntomas clínicos similares o pueden estar presentes en torundas de la región genital. Se añadieron treinta y seis (36) posibles reactantes cruzados a una matriz de torundas genitales negativa y se analizó por triplicado. No se observó reactividad cruzada.

N.º Reactantes con potencial de

reactividad cruzada Concentración probada

Resultado cualitativo(N.º detectado/N.º total)

VHS-1 VHS-2

1 Ninguno (valor basal) No corresponde 0/15 0/15

2 Bacteroides fragilis 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

3 Bacteroides ureolyticus** No corresponde No corresponde No corresponde

4 Candida albicans 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

5 Chlamydia trachomatis 1,00 × 106 UI/ml 0/3 0/3

6 Clostridium sordellii 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

7 Corynebacterium genitalium 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

8 Citomegalovirus cepa AD169 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

9 Enterococcus faecalis vanB 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3



12 Escherichia coli O157H7 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

13 Gardnerella vaginalis 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

14 Hepatitis B 1,00 × 105 UI/ml 0/3 0/3


N.º Reactantes con potencial de

reactividad cruzada Concentración probada


VHS-1 VHS-2

15 Hepatitis C 1,00 × 105 UI/ml 0/3 0/3

16 HHV-6 (cepa Z29) 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

17 HHV-7 SB 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

18 HIV-1 IIIB 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

19 HIV-2 NIHZ* No disponible 0/3 0/3

20 HPV18 recombinante 1,00 × 105 ufp/ml 0/3 0/3

21 Lactobacillus acidophilus 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

22 Mobiluncus mulieris 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

23 Mycoplasma genitalium** No corresponde No corresponde No corresponde

24 Mycoplasma hominis 1,00 × 106 CCU/ml 0/3 0/3

25 Neisseria gonorrhoeae 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

26 Proteus vulgaris 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

27 Rubéola 1,00 × 105 TCID50/ml 0/3 0/3

28 Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC 700699

1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

29 Staphylococcusepidermidis (MRSE), ATCC 29887

1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

30 Staphylococcussaprophyticus 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

31 Streptococcusmitis 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3

32 Streptococcuspyogenes, M1 1,00 × 106 ufc/ml 0/3 0/3


34 Treponema pallidum** No corresponde No corresponde No corresponde

35 Trichomonasvaginalis 1,00 × 106 trofozoitos/ml 0/3 0/3

36 Ureaplasmaurealyticum 1,00 × 106 CCU/ml 0/3 0/3

37 VVZ 1,00 × 105 copias/ml 0/3 0/3

*No se disponía de material cuantificado para la prueba; en su lugar, el proveedor proporcionó un líquido de cultivo con un valor Ct conocido. Al centro se le indicó que diluyera el stock a un valor Ct relevante; factor de dilución 1:50. **El microorganismo no estaba disponible para el análisis; por lo tanto, se realizó un análisis NCBI BLAST simulado en ordenador y no se observó reactividad cruzada.

INTERFERENCIA – Tipo de muestra LCR El rendimiento del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó con posibles sustancias interferentes que pueden estar presentes en muestras de LCR en las concentraciones indicadas en la tabla siguiente. Se analizaron siete (7) posibles sustancias interferentes en una muestra positiva baja para VHS-1 y VHS-2 (4 veces el LoD) en una matriz de LCR y por triplicado. No se observó ninguna interferencia.

Interferente potencial Concentración del

interferente Resultado cualitativo (N.º detectado/N.º total)

VHS-1 VHS-2 CI de ADN

Albúmina (proteína) 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Caseína (proteína) 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Hemoglobina 0,625 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Leucocitos 5,5 x 108 leucocitos/ml 3/3 3/3 3/3

Fármaco antivírico (Aciclovir) 2,5 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Antiséptico tópico (Betadine) 5 % (v/v) 3/3 3/3 3/3

Sangre completa 10 % (v/v) 3/3 3/3 3/3


INTERFERENCIA – Tipo de muestra torunda genital El rendimiento del ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct se evaluó con posibles sustancias interferentes que pueden estar presentes en torundas de la región genital en las concentraciones indicadas en la tabla siguiente. Se analizó un total de cinco (5) posibles sustancias interferentes en una muestra positiva baja para VHS-1 y VHS-2 (4 veces el LoD) en una matriz de torundas genitales negativas y por triplicado. No se observó ninguna interferencia.

Interferente potencial Concentración del

interferente N.º detectado/N.º total

VHS-1 VHS-2 IC

Albúmina 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Caseína 10 mg/ml 3/3 3/3 3/3

Sangre completa 10 % v/v 3/3 3/3 3/3

Orina 10 % v/v 3/3 3/3 3/3

KY Jelly 5 % v/v 3/3 3/3 3/3

INTERFERENCIA COMPETITIVA – Tipo de muestra LCR La interferencia competitiva se estudió para evaluar los efectos de coinfecciones clínicamente relevantes con cada uno de los analitos detectados por el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. El estudio evaluó si la presencia de una concentración alta de un virus en la muestra podría afectar al rendimiento de Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct en relación con otra diana presente en una concentración baja. Se creó artificialmente una muestra de concentración baja, con aproximadamente 4 veces el LoD de cada diana (cepas VHS-1 McIntyre y VHS-2 G), y se determinó un Ct basal para cada muestra. A la muestra de concentración baja se le agregó cada uno de los virus infecciosos potencialmente concomitantes y se analizó por triplicado. Se observó interferencia competitiva en muestras con una concentración muy alta de VHS-1 y una concentración baja de VHS-2. Los resultados basales de las muestras también se muestran a continuación.

Valor basal (concentración baja)

Interferente competitivo (concentración alta)

Resultados cualitativos (N.º detectados/N.º total)

Cepa Concentración

[TCID50/ml] Cepa

Concentración [TCID50/ml]

VHS-1 VHS-2

VHS-1 McIntyre 20 - - 5/5 0/5

VHS-1 McIntyre 20 VHS-2 G 10000 3/3 3/3

VHS-2 G 5 - - 0/5 5/5

VHS-2 G 5 VHS-1 McIntyre 20000 8/8 1/8




INTERFERENCIA COMPETITIVA – Tipo de muestra torunda genital La interferencia competitiva se estudió para evaluar los efectos de coinfecciones clínicamente relevantes con cada uno de los analitos detectados por el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct. El estudio evaluó si la presencia de una concentración alta de un virus en la muestra podría afectar al rendimiento de Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct en relación con otra diana presente en una concentración baja. Se creó artificialmente una muestra de concentración baja, con aproximadamente 4 veces el LoD de cada diana (cepas VHS-1 McIntyre y VHS-2 G), y se determinó un Ct basal para cada muestra. A la muestra de concentración baja se le agregó cada uno de los virus infecciosos potencialmente concomitantes y se analizó por triplicado. Los resultados basales de las muestras también se muestran a continuación.

Valor basal (concentración baja) Interferente competitivo

(concentración alta) Resultados cualitativos(N.º detectado/N.º total)

Cepa Concentración

(TCID50/ml) Cepa

Concentración (TCID50/ml)

VHS-1 VHS-2

VHS-1 McIntyre 16 VHS-2 G 0 5/5 0/5

VHS-1 McIntyre 16 VHS-2 G 1,00 × 106 3/3 3/3


VHS-2 G 8 VHS-1 McIntyre 1,71 × 103 3/3 3/3

INHIBICIÓN POR OTROS MICROORGANISMOS – Tipo de muestra LCR Se evaluó el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct probando su capacidad para identificar el VHS-1 y el VHS-2 cuando están presentes otros microorganismos potencialmente inhibidores. Los cincuenta y un (51) microorganismos potencialmente inhibidores se añadieron individualmente a una mezcla con baja concentración (aproximadamente 4 veces el LoD) del VHS-1 y del VHS-2 en LCR. Cada muestra de microorganismo se analizó inicialmente por triplicado. Si alguna de las réplicas daba un resultado «Not Detected» (no detectado) para el VHS-1 o el VHS-2, se analizaban cinco réplicas adicionales para confirmar si la inhibición era causada por el microorganismo. Si la mayoría (>4/8) de réplicas daba un resultado «Not Detected», entonces se consideraba que era un efecto inhibidor. Ninguno de los microorganismos causó que >4/8 de las réplicas dieran un resultado «Not Detected». 1/8 réplicas del virus JC (Mad-4) y de la rabia y 2/8 réplicas de dengue (tipo 1) dieron un resultado «Not Detected» para el VHS-2. No se observó inhibición del VHS-1 ni del VHS-2 por otros microorganismos.

N.º Microorganismo Concentración probada Resultado cualitativo

(N.º detectado/N.º total)VHS-1 VHS-2


2 Adenovirus (tipo 1) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

3 Adenovirus (tipo 7A) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

4 VBK 1,00 × 105 copias/ml 3/3 3/3

5 Citrobacter freundii 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

6 Citrobacter koseri 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

7 Cryptococcus neoformans 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

8 Citomegalovirus AD169 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

9 Dengue (tipo 1) 1,00 × 105 TCID50/ml 8/8 **6/8

10 Virus de la encefalomiocarditis 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

11 Enterobacter aerogenes 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3



14 Escherichia coli 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

15 Haemophilus influenzae 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

16 Haemophilus influenzae tipo b (MinnA) 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

17 Hepatitis B 1,00 × 105 UI/ml 3/3 3/3

18 Hepatitis C 1,00 × 105 UI/ml 3/3 3/3


N.º Microorganismo Concentración probada Resultado cualitativo

(N.º detectado/N.º total)VHS-1 VHS-2

19 VIH1 (tipo IIIB) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

20 VIH2 (tipo NIHZ) No disponible* 3/3 3/3

21 Herpesvirus humano 6 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

22 Herpesvirus humano 7 (tipo SB) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

23 Herpesvirus humano 8 1,00 × 105 copias/ml 3/3 3/3

24 Gripe A/California/ 7/2009 NYMC x-179-A

1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

25 Gripe B/Florida/02/2006 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

26 Virus JC (Mad-4) 1,00 × 105 TCID50/ml 8/8 ***7/8

27 Klebsiella pneumoniae 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

28 Encefalitis de La Crosse 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

29 Listeria monocytogenes 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

30 Sarampión 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

31 Paperas 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

32 Mycobacterium tuberculosis (ADN genómico)

1,00 × 106ufc/ml 3/3 3/3

33 Naegleria fowleri 1,00 × 104 cél./ml 3/3 3/3

34 Neisseria meningitides (serogrupo A) 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3




38 Parvovirus B19 1,00 X 105 UI/ml 3/3 3/3

39 Poliovirus (tipo 3) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

40 Proteus mirabilis (Z050) 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

41 Pseudomonas aeruginosa 1,00 × 106 copias/ml 3/3 3/3

42 Rabia 1,00 × 105 TCID50/ml 8/8 ***7/8

43 Rinovirus (tipo 1A) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

44 Rotavirus (tipo Wa) 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

45 Rubéola 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

46 Encefalitis de San Luis 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

47 Staphylococcus aureus COL 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

48 Streptococcus agalactiae 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

49 Streptococcus pneumoniae Z022; 19F 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3


51 Virus varicela-zóster 1,00 × 105 copias/ml 3/3 3/3

52 Virus del Nilo Occidental 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

*No se disponía de material cuantificado para la prueba; en su lugar, el proveedor proporcionó un líquido de cultivo con un valor Ct conocido. Al centro se le indicó que diluyera el stock a un valor Ct relevante; factor de dilución 1:200. **Se obtuvo un resultado «Not Detected» (No detectado) para el VHS-2 en la prueba inicial (1/3 réplicas) y en la de confirmación (1/5 réplicas). ***Se obtuvo un resultado «Not Detected» (No detectado) para el VHS-2 en la prueba inicial (1/3 réplicas).


INHIBICIÓN POR OTROS MICROORGANISMOS – Tipo de muestra torunda genital Se evaluó el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct probando su capacidad para identificar el VHS-1 y el VHS-2 cuando están presentes otros microorganismos potencialmente inhibidores. Los treinta y seis (36) microorganismos potencialmente inhibidores se añadieron individualmente a una mezcla con baja concentración (aproximadamente 4 veces el LoD) del VHS-1 y el VHS-2 en una matriz de torundas genitales. Cada muestra de microorganismo se analizó inicialmente por triplicado. Si alguna de las réplicas daba un resultado «Not Detected» (no detectado) para el VHS-1 o el VHS-2, se analizaban cinco réplicas adicionales para confirmar si la inhibición era causada por el microorganismo. Si la mayoría (>4/8) de réplicas daba un resultado «Not Detected», entonces se consideraba que era un efecto inhibidor. Ninguno de los microorganismos causó que >4/8 de las réplicas dieran un resultado «Not Detected».

N.º Microorganismo Concentración probada


VHS-1 VHS-2


2 Bacteroides fragilis 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

3 Bacteroides ureolyticus** No corresponde No corresponde No corresponde

4 Candida albicans 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

5 Chlamydia trachomatis 1,00 × 106 UI/ml 3/3 3/3

6 Clostridium sordellii 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

7 Corynebacterium genitalium 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

8 Cytomegalovirus 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3

9 Enterococcus faecalis vanB 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

10 Enterovirus 71 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3


12 Escherichia coli O157H7 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

13 Gardnerella vaginalis 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

14 Hepatitis B 1,00 X 105 UI/ml 3/3 3/3

15 Hepatitis C 1,00 X 105 UI/ml 3/3 3/3

16 HHV-6 (cepa Z29 Strain) 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3

17 HHV-7 SB 1,00 X 105 TCID50/ml 3/3 3/3

18 HIV-1 IIIB 1,00 × 105 copias/ml 3/3 3/3

19 HIV-2 NIHZ* No disponible 3/3 3/3

20 HPV18 recombinante 1,00 × 105 ufp/ml 3/3 3/3

21 Lactobacillus acidophilus 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

22 Mobiluncus mulieris 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

23 Mycoplasma genitalium** No corresponde No corresponde No corresponde

24 Mycoplasma hominis 1,00 × 106 CCU/ml 3/3 3/3

25 Neisseria gonorrhoeae 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

26 Proteus vulgaris 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

27 Rubéola 1,00 × 105 TCID50/ml 3/3 3/3

28 Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC 700699

1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

29 Staphylococcus epidermidis (MRSE), ATCC 29887

1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

30 Staphylococcus saprophyticus 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

31 Streptococcus mitis 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3

32 Streptococcus pyogenes, M1 1,00 × 106 ufc/ml 3/3 3/3



N.º Microorganismo Concentración probada


VHS-1 VHS-2

34 Treponema pallidum** No corresponde No corresponde No corresponde

35 Trichomonas vaginalis 1,00 × 106 trofozoitos/ml 3/3 3/3

36 Ureaplasma urealyticum 1,00 × 106 CCU/ml 3/3 3/3

37 VVZ 1,00 × 105 copias/ml 3/3 3/3

*No se disponía de material cuantificado para la prueba; en su lugar, el proveedor proporcionó un líquido de cultivo con un valor Ct conocido. Al centro se le indicó que diluyera el stock a un valor Ct relevante; factor de dilución 1:50. **El microorganismo no estaba disponible para el análisis; por lo tanto, se realizó un análisis NCBI BLAST simulado en ordenador y no se observó reactividad cruzada.

CONTAMINACIÓN POR TRANSFERENCIA La transferencia de material amplificado en los ensayos Simplexa™, incluido el ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, se evaluó usando el ensayo vírico Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413) y puede consultarse en el sitio web de la FDA. El estudio puede aplicarse al ensayo Simplexa™ HSV 1 & 2 Direct, ya que no es un estudio específico para un analito. En el caso de Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413), el estudio de la transferencia de material amplificado buscaba la presencia de contaminación en muestras negativas adyacentes a muestras fuertemente positivas. El diseño del estudio consistió, básicamente, en colocar de manera alterna muestras con resultado negativo alto y positivo alto en cada disco. No se observaron indicios de contaminación por transferencia. MUESTRAS RECIENTES O CONGELADAS Las muestras se deben transportar en hielo y conservarse entre 2 y 8 °C durante no más de 7 días después de su recogida. Si entre la recogida y el procesado de la muestra pueden transcurrir más de 7 días, conserve la muestra a -70 °C. REFERENCIAS 1. Corey Lawrence, (2004) Herpes Simplex virus, In: Madell G.L., Bennett, J.E. and Dolin R., eds., Principles and Practice of

Infectious Diseases, 6th edition, Philadelphia, PA Elsevier, Churchill and Livingstone: pp 1762-80. 2. Szpara, Moriah L., et al. (2010) Sequence Variability in clinical and Laboratory Isolates of Herpes Simplex Virus 1 Reveals

New Mutations. J Virol. 84(10):5303-13. 3. Adelson, Martin E., et al. (2005) Simultaneous detection of herpes simplex virus types 1 and 2 by real-time PCR and

Pyrosequencing. J. Clin. Virol. 33:25-34. 4. Cunningham, A.L., Dwyer D.E.. (2002) Herpes simplex and varicella-zoster virus infections. Med J Aust. 177(2):267-73. 5. Schmutzhard, Julia, et al. (2004) Detection of herpes simplex virus type 1, herpes simplex virus type 2 and varicella-zoster

virus in skin lesions. Comparison of real-time PCR, nested PCR and virus isolation. J. Clin. Virol. 29:120-6. 6. Allan R. Tunkel, Carol A. Glaser, Karen C. Bloch, James J. Sejvar, Christina M. Marra, Karen L. Roos, Barry J. Hartman,

Sheldon L. Kaplan, W. Michael Scheld, and Richard J. Whitley (2008). The Management of Encephalitis: Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases 47:303-327.

7. Brown, Z, Wald, A, Ashley Morrow, R, Selke, S, Zeh, J, Corey, L. (2003) Effect of Serologic Status and Cesarean Delivery on Transmission Rates of Herpes Simplex Virus From Mother to Infant. JAMA 289(2): 203-9

8. ACOG Practice Bulletin – Clinical Management Guidelines for Obstetrician-Gynecologists. No. 57. (2004) 104 (5 pt 1):1111-8 9. US Department of Health and Human Services PHS/CDC/NIH. Biosafety in microbiology and biomedical laboratories,

Washington DC: US Government Printing Office, 2007. 10. CLSI: MM3-A2 Molecular diagnostic methods for infectious disease; approved guideline, 2nd ed. Wayne, PA: Clinical

Laboratory Standards Institute, 2006.


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Fecha de redacción: 28 de agosto de 2015

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