review jurnal steroid

8/18/2019 Review Jurnal Steroid

1/7

Review Jurnal Steroid

Identifikasi senyawa antikanker dari ekstrak kloroform kulit

batang Rhizopora mucronata

Penelitian ini bertujuan untuk melakukan fraksinasi terhadap ekstrak kloroform yang bersifat

sitotoksik terhadap sel kanker Myeloma dengan kromatografi kolom dan mengidentifikasi

senyawa yang berpotensi sebagai antikanker. Fraksi yang menunjukkan sitotoksisitas

tertinggi diidentifikasi senyawa kimianya dengan spektrometer IR dan GCMS. asil

penelitian menunjukkan fraksi !b memiliki sitoksisitas tertinggi terhadap sel Myeloma

dengan IC"# sebesar "$%!! &g'm(. Identifikasi senyawa kimia memperlihatkan bahwa fraksi

!b mengandung ! senyawa steroid yaitu )* metil* kolest*!)*en*+*ol dan )*metil*stigmast*!!*

en*+*ol.

A. Persiapan Sampel1. Bahan

⇒ kulit batang R. mu,ronata$

⇒ kultur sel Myeloma$

⇒ media RPMI$

⇒ fetal bo-in serum F/S0 %#1 -'-0$

⇒ a2uades steril$ 3MS4$ pelat 5(6 silika gel GF !")$

⇒ reagen stopper natrium dodesil sulfat0 %#1 dalam Cl0$ M66 " mg'm( dalam

F/S$ metanol$ etil asetat$ kloroform$ n*heksana$ etanol$ dan silika gel untuk

kromatografi kolom.

/erikut gambar dari Rhizopora mucronata

5lasifikasi Rhizophora mucronata :

• 7ama ilmiahnya adalah Rhizophora mucronata Poir. 8uga disebut dengan nama*

nama lain seperti bakau betul$ bakau hitam dan lain*lain. 5ulit batang hitam$

meme,ah datar.

• /unga berkelompok$ )*9 kuntum. 3aun mahkota putih$ berambut panjang hingga

: mm. /uah bentuk telur$ hijau ke,oklatan$ " ; < ,m. ipokotil besar$ kasar dan

berbintil$ panjang += ;


2/7

• Sering ber,ampur dengan bakau minyak $ namun lebih toleran terhadap substrat yang

lebih keras dan berpasir. (ebih menyukai substrat yang tergenang dalam dan kaya

humus> jarang sekali didapati di tempat yang jauh dari pasang surut. Menyebar luas

mulai dari ?frika timur$ Madagaskar $ Mauritania$ ?sia 6enggara$ kepulauan

7usantara$Melanesia dan Mikronesia.

sumber gambar : https@''honkomangro-e.wordpress.,om'!#%+'#:'!"'propagule*pages*the*

red*mangro-e'0

⇒ Manfaat dari Rhizophora mucronata :

5ayu direbus dengan air$ air rebusan ekstraknya0 dapat digunakan sebagai obat

pelangsing$ anti men,ret dan anti muntah. Ca,ahan kayunya bilamana ditempelkan

pada luka yang baru$ dapat menghentikan pendarahan. (ebih jauh$ daun mudanya

yang masih segar bilamana dikunyah dapat berguna sebagaihomeostasi dan anti

septik.

sumber @http@''kesemat.blogspot.,o.id'!##9'#)'hebatnya*khasiat*obat*di*tubuh*

mangro-e.html0

2. Alat

Meliputi @ alat*alat gelas$ tabung efendorf$ autoklaf$ tabung koni,al steril$ well plate :=

sumuran$ ELISA reader S(6 +)# ?6C$ rotaevaporator /u,hi$ flacon flask $ nera,a

analitik$ sentrifus$ inkubator +< C "1 C4!$ lemari es$ laminar air flow$ tangki

nitrogen ,air$ penangas air$ tissue culture flask $ hemo,ytometer$ mikropipet$ kolom

kromatografi$ spektrometer IR serta GCMS.

B. Proses Penelitian1. raksinasi ekstrak kulit batang R. Mucronata

Akstrak kloroform hasil partisi ekstrak etanol kulit batang R. mucronata

difraksinasi dengan kromatografi kolom menggunakan gradien pelarut yang ditingkatkan

kepolarannya$ yaitu berturut*turut dengan n*heksana$ kloroform$ etilasetat dan methanol.

asil fraksi dari kromatografi kolom selanjutnya diidentifikasi dengan kromatografi lapis

tipis untuk melihat profil kromatogramnya. Profil kromatogram yang mirip dari setiap

fraksi digabung menjadi satu. Fraksi gabungan tersebut selanjutnya diuji sitotoksisitasnya

terhadap sel Myeloma. Fraksi yang menunjukkan akti-itas paling tinggi terhadap sel

Myeloma selanjutnya diidentifikasi struktur kimianya dengan spektrofotometer IR dan

GCMS.

2. Pembuatan larutan u!i

Fraksi hasil kromatografi kolom yang telah di kering beku freeBe dried0 dibuat

stok %# mg' m( dengan dilarutkan dalam %$!"1 3MS4 dalam a2uades steril. Selanjutnya

larutan uji disaring dengan filter #$! &m. 3imasukkan dalam ,oni,al steril ditutup dengan

parafilm$ dan disimpan dalam lemari es. 5emudian dibuat seri kadar sampel dari larutan

stok dalam medium RPMI %=)#. Pembuatan larutan uji dilakukan di dalam laminar air

flow ,abinet se,ara aseptis.

". #!i sitotoksisitas dengan metode M$$

⇒ Sebanyak %## &( suspensi sel uji dengan kepadatan ! %#)'%## &( didistribusikan

ke dalam sumuran pada :=* well plate$

https://id.wikipedia.org/wiki/Afrikahttps://id.wikipedia.org/wiki/Madagaskarhttps://id.wikipedia.org/wiki/Mauritaniahttps://id.wikipedia.org/wiki/Asia_Tenggarahttps://id.wikipedia.org/wiki/Asia_Tenggarahttps://id.wikipedia.org/wiki/Nusantarahttps://id.wikipedia.org/wiki/Melanesiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Mikronesiahttps://honkomangrove.wordpress.com/2013/09/25/propagule-pages-the-red-mangrove/https://honkomangrove.wordpress.com/2013/09/25/propagule-pages-the-red-mangrove/https://id.wikipedia.org/wiki/Madagaskarhttps://id.wikipedia.org/wiki/Mauritaniahttps://id.wikipedia.org/wiki/Asia_Tenggarahttps://id.wikipedia.org/wiki/Nusantarahttps://id.wikipedia.org/wiki/Melanesiahttps://id.wikipedia.org/wiki/Mikronesiahttps://honkomangrove.wordpress.com/2013/09/25/propagule-pages-the-red-mangrove/https://honkomangrove.wordpress.com/2013/09/25/propagule-pages-the-red-mangrove/https://id.wikipedia.org/wiki/Afrika


3/7

⇒ ditambah sampel uji pada kadar masing*masing %### &g' m($ "## &g'm($ !"#

&g'm($ %!" &g'm( dan =!$" &g' m(.

⇒ Sebagai kontrol digunakan %## ( suspensi sel ditambah medium dan untuk blanko

digunakan %## ( suspensi sel ditambah 3MS4 %$!"1 dalam medium.

⇒ Selanjutnya diinkubasi !) jam. Pada akhir inkubasi kepada sumuran ditambahkan

%# ( M66 " mg'm( dalam RPMI. 5emudian diinkubasi ) jam pada suhu +< DC.

Sel uji yang hidup akan bereaksi dengan M66 membentuk warna ungu.

⇒ 5emudian diikubasi semalam pada suhu kamar$ serapan absorbans0 diba,a dengan

ellisa reader pada E ""# nm. Pengamatan jumlah kematian sel dilakukan pada jam

ke !)$ )9 dan

M66 assay

Uji MTT assay merupakan salah satu metode yang digunakan dalam uji sitotoksik.

%. Penge&atan '(A

Pada akhir inkubasi jam ke !)0 medium diambil$ sel difiksasi denganformaldehida kemudian ditambahkan akridin oranye #$%1. Sel diamati di bawah

mikroskop.

). *asil dan Penelitian

1. raksinasi ekstrak kloroform daun dan kulit batang R. Mucronata

Fraksi*fraksi yang mengandung komponen yang sama berdasarkan hasil 5(6

digabung$ diperoleh < fraksi gabungan$ kemudian dipilih + fraksi utama. 5etiga fraksi

selanjutnya diuji sitotoksisitasnya terhadap sel kanker Meyloma.

2. #!i sitotoksisitas dan antiproliferatif terhadap sel kanker meyloma

6ingkat sitotoksisitas ekstrak uji terhadap sel kanker dinyatakan pula dengan nilai

IC"#. asil uji sitotoksisitas terhadap sel kanker Meyloma menunjukkan ketiga fraksi

yaitu fraksi %b$ fraksi !b$ dan fraksi +b memiliki akti-itas terhadap sel Meyloma dengan

nilai IC"# berturut*turut sebesar +) &g'm($ " &g'm( dan %+! &g'm(.


4/7

asil penge,atan 37? Gambar %0 menunjukkan adanya peristiwa apoptosis yang dialami

oleh sel kanker Myeloma pada perlakuan dengan sampel fraksi %b$ !b dan +b. 3ata di atas

mengindikasikan bahwa fraksi !b kulit batang R. mu,ronata memiliki toksisitas tertinggi

terhadap sel Myeloma dengan IC"# sebesar " &g'm($ dan hasil penge,atan 37?

menunjukkan sel mengalami apoptosis paling akut$ dengan demikian analisis selanjutnya

dilakukan pada fraksi !b. /erikut penjelasan gambarnya @

/erdasarkan grafik pada +ambar 2$ diketahui bahwa pada perlakuan dengan kontrol

tanpa sampel0 dengan waktu inkubasi #$ !)$ )9 dan

diindikasikan dengan semakin meningkatnya absorbans. al ini berarti masih terjadi

pembelahan sel. Sedangkan pada perlakuan dengan sampel fraksi !b$ dengan -ariasi

konsentrasi %##$ "# dan !" &g'm( terjadi penurunan jumlah sel$ yang diindikasikan dengansemakin menurunnya nilai absorbans. al ini berarti sampel fraksi !b mampu menginhibisi

pertumbuhan sel kanker Myeloma.

". Identifikasi senyawa fraksi 2b

Spektrum IR Gambar +0 menunjukkan adanya pita*pita serapan khas gugus

fungsional senyawa$ yaitu gugus ;4 +)%


5/7

asil GC Gas Chromatography0 pada Gambar ) menunjukkan adanya dua pun,ak utama

pada kromatogram Spektrum massa senyawa pun,ak I dengan waktu retensi !"$=) menit

menunjukkan pun,ak ion molekul M0 pada m'e )%). /erdasarkan data GCMS$ spektrum

senyawa pun,ak I merupakan senyawa steroid golongan kolestan yaitu ) metil*kolest*!)*en*+* ol. Pola fragmentasi senyawa I disajikan pada Gambar ".

Spektrum massa senyawa pun,ak II dengan waktu retensi !=$)) menit menunjukkan

pun,ak ion molekul M0 pada m'e )!=. pun,ak II juga merupakan senyawa steroid golongan

stigmastan$ yaitu )*metil*stigmast*!!*en*+*ol. Pola fragmentasi senyawa II disajikan pada


6/7

Gambar = berikut @


7/7

'. ,esimpulan

⇒ asil fraksinasi diperoleh fraksi !b dari kulit batang R. mucronata memiliki

sitoktositas tertinggi dengan IC"# sebesar " &g'm(.

⇒ asil identifikasi se,ara spektrometer fraksi !b mengandung dua senyawa dari

golongan steroid yaitu ) metil* kolest*!)*en*+*ol dan )*metil*stigmast*!!*en*+*ol.

review jurnal steroid

Documents