CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓ GICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS. N.128 Practica 2.Técnicas básicas para el cultivo de microorganismos: siembra

y estudio de bacterias Sub-módulo 3. Ejecuta técnicas de identificación de Microorganismos con

base a las normas. Integrantes. Barrón Arredondo Evelin, Batres Arias Viviana, Bernal Loera Alejandro, Cabral Román Brandon Said, Cardona Adriana Fernanda, Cervantes de la Cruz Ángel, Chávez Castorena Edna Paola, Chávez Ortega Miriam Vanessa, Chavira Teresa. Facilitadora: Ing. Acosta Bezada Jessica Alicia.

Microbiología.

Se puede definir, sobre la base de su etimología, como la ciencia que trata de los seres vivos muy

pequeños, concretamente de aquellos cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo

del ojo humano.

Introducción:

El medio de cultivo, es la forma por la cual, a

base de un estilo de gel, en este caso, el

agar, que cuenta con nutrientes ya

establecido y necesario que permiten, en

condiciones favorables de pH y temperatura;

el crecimiento de Virus, Microorganismos,

células, tejidos vegetales e inclusive

pequeñas plantas.

Dependiendo de lo que se necesita, el medio

debe de contener y favorecer ciertas

condiciones específicas para cada tipo que

se espera cultivar. Generalmente los agares

se presentan de forma sólida y en ocasiones

líquidos, sólidos y semisólidos.

El material alimenticio en el que crecen los

microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el

Cultivo. Se han preparado más de 10.000

medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan

adecuadamente en un medio de cultivo

artificial debe reunir una serie de condiciones

como son: temperatura, grado de humedad y

presión de oxígeno adecuado, así como un

grado correcto de acidez o alcalinidad. Un

medio de cultivo debe contener los nutrientes

y factores de crecimiento necesarios y debe

estar exento de todo microorganismo

contaminante.

Antes de la observación de los medios de

cultivo, es necesaria la práctica de las

diferentes Tinciones para que sea

identificado.

Tinción de Gram; La tinción de este tipo más

extensamente utilizada es la tinción de Gram,

denominada así por el bacteriólogo danés

Hans Christian Gram, quien la desarrollo.

Sobre la base de su reacción a la tinción de

Gram, las bacterias pueden dividirse en dos

grupos, Gram positivas y gramnegativos.

Deben destacarse dos aspectos cruciales de

la tinción de Gram:

1) El tratamiento con cristal violeta debe

preceder al tratamiento de yodo. El

Yodo por sí solo tiene poca afinidad con las

células.

2) La decoloración debe realizarse con poco

agua para evitar que pierdan la

Tinción las células Gram positivas. El

proceso de decoloración debe ser corto y

Es esencial un cálculo preciso del tiempo

para obtener resultados

Satisfactorios.

Finalmente, el carácter de Gram positivo no

es siempre un fenómeno del todo o

Nada. Algunos organismos son más Gram

positivos que otros y algunos son

Gram variables, es decir, unas veces Gram

positivos y otras gramnegativos. La

Tinción de Gram es uno de los métodos de

tinción más importantes en el laboratorio

Bacteriológico.

Debido a su importancia en taxonomía

bacteriana y a que indica diferencias

fundamentales de la pared celular de las

distintas bacterias, describiremos aquí con

cierto detalle la tinción de Gram. Las células

fijadas al calor sobre un portaobjetos se

tiñen primero con una solución de cristal

violeta (otros colorantes básicos no son tan

efectivos) y son lavadas después para quitar

el exceso de colorante. En este estado todas

las células, tanto las gramnegativos como las

Gram positivas, están teñidas de azul. El

portaobjetos se cubre entonces con una

solución de yodo (I2) – yoduro potásico (KI).

El ingrediente activo es aquí el yodo, el

yoduro potásico simplemente hace soluble el

yodo en agua. El yodo entra en las células y

forma un complejo insoluble en agua con el

cristal violeta. De nuevo tanto las células

Gram positivas como las gramnegativos se

encuentran en la misma situación. Se lleva a

cabo después de la decoloración, usando

bien alcohol o bien acetona, sustancias en

las que es soluble el complejo yodo – cristal

violeta. Algunos organismos (Gram

positivos) no se decoloran mientras que otros

(gramnegativos) lo hacen. La diferencia

esencial entre esos dos tipos de células está,

por lo tanto, en la resistencia a la

decoloración. Después de la decoloración las

células Gram positivas son todavía azules,

pero las gramnegativos son incoloras. Para

poner de manifiesto las células

gramnegativos se utiliza una coloración de

contraste. Habitualmente es un colorante de

color rojo, como la safranina o la fucsina

básica. Después de la coloración de

contraste las células gramnegativos son rojas

mientras que las

Gram positivas permanecen azules.

Resumen.

Lo que se realizó en la práctica fue; preparar

los Medios de cultivo con una serie de

indicaciones muy precisas ya que de esto

dependían todas las técnicas y procesos que

conlleva el medio de cultivo. Después de

realizar el Medio, se vacío en 9 cajas Petri,

que posteriormente se metieron a incubar.

Luego se inoculo con heces fecales de perro

y ayuda de un asa de platino. Se regresaron

a la incubadora para después hacer la

morfología de las colonias (contar). Por

último se realizó la tinción de Gram en las

bacterias esto sirvió para clasificarlas debido

al color que mostraron en la tinción. Es de

suma importancia destacar que los medios

de cultivo permiten el crecimiento de los

microorganismos y por lo que un control en

su fabricación, preparación, conservación y

uso, asegura la exactitud, confiabilidad de los

resultados obtenidos.

Abstract.

What was done was in practice; preparation

of culture media with a series of very precise

indications as this depended on all the

techniques and processes involved in the

culture medium. After making the Middle

East, was empty on 9 Petri dishes, which

were subsequently put to incubate. Then I

was inoculated with fecal eses dog and help

of a platinum loop. They were returned to the

incubator and then make the colony

morphology (count). Finally Gram staining

bacteria that served to classify because of the

color showed staining was performed. It is

important to emphasize that the culture media

allow the growth of microorganisms and thus

control in their manufacture, preparation,

storage and use, as to the accuracy,

reliability, and reliability of the result.

Materiales y Métodos

9 Cajas Petri

Portaobjetos

Microscopio

Cubreobjetos

Gotero

Asa

3 Mecheros

3 Mangueras

1 Bascula

1 Agitador

1 asa de platino

Papel canela

1 Matraz de 500 ml

Guante de asbesto

Espátula

Crisol

Reactivos y muestras.

H2O

Heces fecales.

Agar nutritivo.

Cristal violeta.

Iodo-lugol.

Alcohol-cetona.

Zafranina.

Aceite de inmersión.

Procedimiento:

o Se pesa la capsula de porcelana

para sumarle los correspondientes

9.2 gramos de Agar nutritivo que se

tiene que agregar a la preparación

del agar.

o Una vez que se tiene la cantidad de

agar deseada en la capsula, se vacía

en un matraz que contiene 400 ml de

agua.

o Se conecta una manguera a la llave

del gas y al mechero, se prende y se

calienta el matraz que contiene el

agar y el agua, agitándolo

consecutivamente.

o Una vez disuelto el agar se asegura

que el agar quede tornado de un

amarillo cristalino, cuando es así se

espera a que se enfrié un poco.

o Se arma un gorrito para el matraz de

papel para esterilizar.

o Dos días después los agares se

cuajaron, se conectan los mecheros

de Fitcher a las llaves de gas para

montar la olla de presión.

o Se incorpora en la olla

aproximadamente un litro y medio de

agua y se metieron los agares de

todos los equipos a baño María.

o Se cerró la olla adecuadamente, se

puso en la base y se prendieron los

mecheros para comenzar el proceso

de esterilización, a una temperatura

de 127ºC y a una presión de 12-15.

o Se sacaron las cajas Petri y los

agares ya esterilizados.

o Se prendieron 3 mecheros en forma

de triángulo, a aproximadamente 18

cm de distancia cada uno, en ese

espacio se vacío el agar en las cajas

Petri, y se cerró la caja igual dentro

del espacio.

o Al día siguiente se colocaron los

mecheros de igual manera, se

prendieron y se empezaron a estriar

los agares de EMB y nutritivo

preparados por todo el grupo.

o Se estrió cuatro veces dando cuatro

giros a la caja tomando una muestra

de hece fecal diluida con agua, con

el asa ya esterilizada.

o Una vez estriado el agar se cerró la

caja rápidamente y se apartó.

o Días después se armó de nuevo el

triángulo de los mecheros y se

prendieron para contar las colonias

que se formaron en los agares e

identificarlas de acuerdo a su

morfología.

o Luego se hizo el procedimiento para

teñir las bacterias utilizando la

técnica tinción de Gram y se observó

su forma y color a 100x en el

microscopio para identificar el tipo de

bacteria que se obtuvo después del

largo proceso.

Resultados.

Pudimos observar y diferenciar colonias y

bacterias. (ANEXOS 1 y 2)

Conclusiones.

Barrón Arredondo Evelin.

En la práctica pude observar muchas cosas

nuevas, pues nunca había trabajado con

medios de cultivo, con las asas, mucho

menos realizar las tinciones. Como bien

sabemos los medios de cultivo son una

mezcla de nutrientes que, en

concentraciones adecuadas y en condiciones

físicas óptimas, permiten el crecimiento de

los microorganismos. Por medio de esta

práctica al investigar los requisitos y realizar

la preparación de los medios de cultivo

(Nutritivo y EMB), logramos elaboración

satisfactoria de las mismos. Los M.C se usan

mucho en las industrias, tanto agropecuarias

y alimenticias como en la fabricación de

quesos y yogurts.

Al hacer la morfología de la colonia, nos

dimos cuenta que es de suma importancia

contar con precisión y mucha concentración,

pues esto se basa principalmente en contar

cada colonia y describir totalmente su

morfología (como son sus bordes, margen,

forma y color), ya que de esto depende saber

cuántas y de qué tipo de colonias crecieron

en el cultivo.

También realizamos la morfología de la

bacteria ya que es una de sus características

más importantes, estas características se

tienen que identificar mediante el

microscopio, para realizarlo utilizamos la

famosa “tinción de Gram” específicamente,

donde en el resultado teníamos que anotar

de que bacteria se trataba con toda su

descripción.

Por ultimo también pusimos en práctica los

métodos de envoltura de los materiales

utilizados, para esterilizar en la olla a presión

o autoclave, ya que al terminar la práctica

todo lo utilizado se esterilizo para evitar dejar

contaminados los materiales que seguiremos

utilizando en las siguientes prácticas.

En si todo lo que abarca los medios de

cultivo es muy interesantes e importantes de

alguna manera, pues se aprenden muchos

métodos y de eso métodos técnicas, de las

cuales podemos elegir en algunas ocasiones

cual utilizar según sea el caso.

Batres Arias Viviana.

Mi conclusión en general, de todo lo que

vimos en esta práctica es que debemos

saber cómo esterilizar para que nuestros

agares o cultivos no salgan con bacterias no

deseadas y que también al momento de

estriar lo debemos de hacer con mucho

cuidado para no romper nuestro agar pero

también rápido (no debemos hablar al

momento de estriar, debemos de esterilizar

bien la asa, lo debemos de mantener en el

triángulo de seguridad que está formado con

los mecheros y debemos mantener

precaución con ellos). Es importante saber

las formas, bordes y superficie de cada tipo

colonia para poder identificarlas al momento

de identificarlas para así no equivocarnos;

también debemos a ser todo con precaución

para no ocasionar accidentes y que todo

salga bien ya que si no se hace según las

instrucciones y con el cuidado necesario

podríamos ocasionar todo lo que se quiere

evitar y saldría mal la práctica. También es

importante saber acomodar el microscopio ya

que si no sabemos manejarlo no podremos

ver nuestras bacterias

Bernal Loera Alejandro.

Por medio de esta práctica se logró utilizar

las técnicas aprendidas a lo largo de

prácticas pasadas. Se logró aprender a

realizar algunos métodos que existen para

cultivar bacterias desde las técnicas de

vaciado, hasta la tinción de bacterias, de esa

manera pudimos observar sus características

que se ven a simple vista (macroscópicas)

como microscópicas y la interpretación de las

mismas, con lo que se observó de cada

bacteria pudimos conocer la morfología que

distingue de otras bacterias, por lo cual de

esta manera se puede identificar el método

de siembra correcta para análisis posteriores.

Por ultimo fuera de la práctica aprendimos a

respetar la vida microscópica.

Cabral Román Brandon Said.

Gracias a esta práctica podemos saber cómo

cultivar las bacterias sin afectarnos

respetando las normas de seguridad, saber

aplicar las técnicas de vaciado para saber

contar las colonias, borde, margen y color de

cada una de las bacterias, y asi poder llevar

este tipo de prácticas con la atención y la

calidad con las que se deben hacerse.

Cardona Barboza Adriana Fernanda.

Mi conclusión es que gracias a esta práctica

que realizamos en el laboratorio (en mi caso

investigaciones y observación de videos)

donde comenzamos por saber envolver los

materiales para esterilizar correctamente, en

autoclave por medio de baño maría, también

se pudo saber cómo funciona un medio de

cultivo, y cual es una de las maneras

adecuadas de preparar un medio, el cual

debía estar esterilizado, para así poder

inocular correctamente nuestros

microorganismos sin contaminante alguno

por medio de una asa, la cual también debía

esterilizarse, e inocular por medio de un

método de estriado en nuestro agar ya

preparado . así como también es importante

el saber contar las colonias que crecieron en

nuestro medio de cultivo, y así como

también aplicamos la técnica de tinción de

Gram etc. En si todo esto es de suma

importancia para nosotros poder obtener la

muestra deseada y saber identificar que

tipos de bacteria es, su tipo de tinción etc.

Cervantes De la Cruz Ángel.

Un medio de cultivo, es la base para dar

paso al crecimiento de microorganismos y

bacterias, cuando se realiza es necesario

conocer los fundamentos antecesores acerca

del manejo e información sobre los riesgos,

que se dan cuando se trata sobre el cuidado

de la vida.

El manejarlos, y desarrollar mediante, las

técnicas de estriado, se vuelve vital para

lograr tener un éxito más práctico sobre lo

que está puesto en cuestión. El triángulo de

seguridad que provee la protección con el

mechero, y guantes y cubre bocas, para

evitar el contacto con las bacterias con las

que se estaba tratando, (En este caso, la “E.

Coli”).

La morfología bacteriana y de colonia, es un

trabajo que aunque lo bastante laborioso,

toma una práctica que nos desarrolla

habilidades especiales, fuera de las

microbiológicas, entre ellas la paciencia, y un

desarrollo más amplio de la vista y el análisis.

En esta práctica nuevamente se tomó la

esterilización como un medio de prevención

para los objetos de cristal, y también para

acabar con las bacterias ya establecidas:

Correcta envoltura, y preciso manejo de la

olla de presión/auto clave.

Chávez Castorena Edna Paola

Mi conclusión es que aprendimos a cómo

hacer agares y que es trabajar con seres

vivos y tener cuidado con ellos, aprendimos a

como trabajar con medidas de seguridad y

técnicas de estriado trabajamos con heces

fecales de perro para poder hacer nuestro

estriado supimos esterilizar y saber

identificar nuestras bacterias si son Gram

positivas o gramnegativos

Chávez Ortega Miriam Vanessa

Por conclusión tengo que los agares son una

parte muy importante y fundamental en

microbiología ya que al momento del cultivo

de agar nutritivo teníamos como objetivo la

identificación de Gram positiva o ya sea

Gram negativa comenzamos con la

preparación para luego vaciar y colocar en la

incubadora, y esperar un tiempo

determinado, comenzar a estriar con heces

fecales de un animal dentro de tres mecheros

bunsen en forma de triángulo con una

distancia aproximada de 18 cm terminando

este proceso para concluir empezar a teñir y

así la determinación las bacterias de Gram,

aprendimos a trabajar con vida y las normas

estrictas que se necesitaban para su

supervivencia y las medidas de seguridad.

Chavira Teresa Edith

NO PRESENTO CONCLUSION.

Discusión.

Por medio de esta práctica aprendimos a

utilizar los distintos medios de cultivo y sus

diferentes nutrimentos y funciones ya que en

algunos crecen determinadas bacterias

impidiendo el crecimiento y desarrollo de

otras, también utilizamos la incubadora para

acelerar el crecimiento de bacterias

deseadas las cuales las obtuvimos de heces

fecales.

Se llevaron a cabo anotaciones en cuadernos

y bitácoras que fueron de la mano con la

práctica conforme avanzábamos en ella.

Por ultimo logramos cumplir el objetivo que

fue detectar la morfología de colonias y

bacterias al igual que aprender técnicas y

métodos básicos para la preparación de

medios de cultivo en los cuales se

desarrollaron nuestras bacterias.

Bibliografía APA: Villegas, Elci (2014) “Introducción a

los Medios de Cultivo. Microbiología” (http://www.webdelprofesor.ula.ve/nucleotrujillo/elciv/clases_microbiologia/unidad_1.pdf)

Anexos.

ANEXO 1

Forma Bacteria

Portaobjetos 1

E. coli (bacilos rosa)

y S.,aureus (cocos violeta)

Portaobjetos 2

estreptococos

Portaobjetos 3

estreptococos

Portaobjetos 4

Diplococos

Portaobjetos 5

estreptococos

COLONIA FORMA COLOR SUPERFICIE BORDE No

nutritivo *1 irregular Amarillo,

blanco plana ondulado 442

nutritivo *2 Irregular Amarillo

pálido convexa rizado 39

Nutritivo *3 Umbilicada

Amarillo

Plana umbilicada

Entero 290

EMB *1 Filamento Violeta naranja

Elevada Entero 150

EMB *2 Irregular Morado Umbeliforme Rizado

EMB *3 Filamentosa Rosa violeta Umbeliforme Entero 250

ANEXO 2