regulation of gene expression 遺伝子発現の調節muraka-h/class/2015/biochem-14.pdffrancois...
TRANSCRIPT
-
Regulation of gene expression 遺伝子発現の調節 DNA (genetic information 遺伝情報)
mRNA
タンパク質 しばしば酵素として働き生化学反応を担う。(機能を発揮する)
transcription
translation
体内(細胞)では、常にすべての遺伝子から、タンパク質が作られている訳ではない。
必要なタンパク質を、必要な時だけ、必要な量だけ、合成している。誘導 (induce) ⇒ 必要な時、mRNA を合成 (transcription 転写の ON-OFF で調節)
transcription initiation (転写開始)の調節
lactose operon の転写開始調節
operon 1つのpromoterから連続した1つのmRNAとして転写される、関連した遺伝子群
Z Y A1つのmRNA
promoteroperon
Shine-Dalgarno 配列
Stryer生化学31章
-
glucose
pyruvate
acetyl-CoA
citrate
TCA cycle
ATP
解糖系
NADH
CO2
ブドウ糖
ピルビン酸
クエン酸
生物のエネルギー代謝ご飯、パン(炭水化物)
NAD
電子 e-H+ 濃度勾配
H2O
O2
ATPエネルギー
酸化的リン酸化
タンパク質
20種類のアミノ酸
脂質
加水分解
lactose (乳糖)
-
LactoseH2O
解糖系、TCA 回路で分解され、ATPを合成
大腸菌
Lactose を分解、利用する酵素は、必要な時だけ遺伝子が発現し合成される。
Glucose ブドウ糖がある時は、Glucoseの方が利用しやすいので、Lactoseも存在しても、Lactoseを分解利用する必要はない。 -> lactose operon は発現しない Catabolite repression (Glucose の分解物が lactose operon の発現を抑制する)
Glucose ブドウ糖がない時、Lactoseが存在する場合、ATPを作るため、Lactoseを分解利用する必要がある。 -> lactose operon は発現 Lactose inductionLactose も存在しない場合には、lactose operon遺伝子を発現しても無駄 -> 発現しない。
★
★
Galactose Glucose
-
H+
LactoseLactose
lactose permease
Galactose + Glucose
!-galactosidase
thiogalactoside transacetylase機能不明?
lacZlacY
lacA
大腸菌でのlactose分解利用
大腸菌の遺伝子
12分近傍
100/012
promoter mRNA
タンパク質(酵素)
Shine-Dalgarno 配列
加水分解
細胞内への取込み
LacZ LacY LacA
hiroessential 細胞生物学 p277 図8-9
hiro
-
Francois Jacob & Jacques Monod
CH3S-CH CH3
O
ClBr
Galactose GlucoseLactose
IPTG : Lactose 類似体酵素がLactoseと間違えて反応加水分解されない。(濃度が変化しない)inducer (誘導物質)
X-gal ClBrHO
Galactose+!-galactosidase
LacZ タンパク質
H2O
加水分解されると 青 に変色lac operonの遺伝子が発現し、酵素が合成されたか否かを識別
Lactose
galactose 部分
hiroStryer生化学31章p882-884
hiro
hiro
-
X-gal, IPTG を含む寒天培地 lactoseが存在している事を実験上模倣している。
野生型大腸菌 4ヒキ をまく
37℃ 約12時間
4ヶの 青い colony が観られる。
野性型大腸菌では、正常な、lacZ, lacY 遺伝子から、!-galactosidase, lactose permease が合成されるため、培地から吸収された X-gal が加水分解されて、大腸菌が、青色を呈した。
colony : 細胞が分裂増殖してできた細胞のかたまり。
大腸菌の細胞1ヶは肉眼では見えない
青色: lacZ, lacY 遺伝子が発現しそれぞれから正常な酵素ができている。無色: lacZ, または、lacY 遺伝子から、正常な酵素ができない。X-galを分解できない。(白色)
-
X-gal, IPTG(またはlactose) を含む寒天培地
野生型大腸菌
37℃ 約12時間
青い colony が観られる。
X-gal, glucose を含む寒天培地あるいは、X-gal, glycerol(グリセリン)
白い colony が観られる。
野生型大腸菌
glucose 存在下では lacZ, lacY 遺伝子が発現せず、それぞれの酵素が作られないので、X-galが加水分解されず、colonyは白色
lactose (またはIPTG)存在下、かつglucose 非存在下では lacZ, lacY 遺伝子が発現し、それぞれの酵素が作られるので、X-galが加水分解され、colonyは青色
37℃ 約12時間
lactose(またはIPTG) を含まない培地