r.Çehreli, h. koçdor , f. soyarat , p.kemanlı h. ateş, h. Özsan , y.saygıdeğer, İ. Öztop...

DOSETAKSEL, GLUTAMİN VE SELENYUM KOMBİNASYONUNUN

KHDAK HÜCRE HATLARINDA ANTİKANSER ETKİNLİK VE TOKSİSİTE

ÜZERİNE ETKİSİ

R.Çehreli, H.Koçdor, F. Soyarat, P.KemanlıH. Ateş, H.Özsan, Y.Saygıdeğer, İ.Öztop,M.A. Koçdor

Türk Toraks Derneği 15. Yıllık Kongresi-2012

• Sinyal moleküllerinin aktivitelerini• Mitokondriya ilişkili faktörleri• Transkripsiyonel faktörleri• Tumor supresor genlerin ekspresyonlarını • Hücresel azalan glutatyonu değiştirirler.

Selenyum Bileşikleri


Çalışmanın Amacı

Akciğer Kanserli hastalarda kemoterapinin uygulanması süresince oluşan glutamin ve selenyum yetersizliği ve kemoterapi toksisitesinin azaltılması amacıyla verilen bu nutrientlerin kemoterapi ile olan etkileşiminin akciğer kanseri hücre hatları üzerinde değerlendirilmesidir.


MATERYAL VE METOD

Hücre Kültürü A549 (p53 wild tip) H1299 (p53 null tip)


A549 ve H1299 hücre hatları Fetal Bovine Serum

(FBS), Penisilin/Streptomisin, L-Glutamin, Amfoterisin

B içeren DMEM/Ham’s F12K ve RPMI 1640

ortamlarında 37˚C’de %5 CO2 içeren inkübatörde

kültüre edildi.

Hücre Canlılık Testi

Küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hatları

kültüre edilip çoğaltıldıktan sonra 96-well plate’lere

(10000 hücre/kuyucuk) ekildi.

Yarı Maximal İnhibitör konsantrasyon olan IC50

dozun belirlenmesi amacıyla Dosetaksel, Selenyum

(Se) ve Glutamin’in farklı konsantrasyonları

hücrelere uygulandı.


24 ve 48. saatlerin sonunda hücre

canlılıkları CCK-8 (Cell Counting

Kit-8) aracılığıyla 450nm (Referans

dalga boyu-650nm) dalga boyunda

mikroplate okuyucuda ölçüldü ve

kanser hücrelerinin canlılığının

yarısını inhibe eden IC50 dozlar

belirlendi.


Hücre Canlılık Testi-Sonuçlar

H1299 hücre hattında Selenyum için yapılan cell-

viability testinde ise hiçbir etki gözlenemediğinden

(P53 null-type hücre hattında selenyum p53’ü

fosforilasyonu mekanizması ile apoptozisi

uyaramadığından bu hücre hattında hücre canlılığı

üzerinde etkisi literatürle uyumlu olarak

gözlemlenmemiştir.) IC50 dozu belirlenememiştir.


Flow sitometrik analizler

Apoptoz analizi Cell cycle analizi


76,6 78,75

67,75

80,85

2,2 4,457,35

3,455,7011,05 8,55 11,15

15,40

5,75

10,50

4,50

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Kontrol Dosetaksel Glutamin Dosetaksel + Glutamin

H1299 Hücre Hattı Apoptoz Analizi Sonuçları

Canlı Hücre

Erken Apoptoz

Geç Apoptoz

Nekrotik7,9 15,50 15,90 14,60


H1299 Apoptoz Sonuçları

50,51

41,43 43,07

32,62

25,1

34,29

29,66

37,00

15,3319,06

10,14

15,52

9,055,22

17,1614,84

0

10

20

30

40

50

60

Kontrol Dosetaksel Glutamin Dosetaksel + Glutamin

H1299 Hücre Hattı Cell Cycle Analizi Sonuçları

G0/G1 Fazı

S Fazı

G2+ M Fazı

Apoptotic Cells


H1299 Cell Cycle Sonuçları


A549 Apoptoz Sonuçları

Kontrol Dosetaksel Selenyum Glutamin Dosetaksel+Selenyum

Selenyum+ Glutamin

Dosetaksel+Glutamin

Doc. + Se + Gln

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

84.91

67.76

85.02

91.29

73.07

76.9973.63

79.37

0.82 0.85 0.82 0.79 0.24 1.10 0.52 0.19

6.38

21.35

8.39

3.47

11.699.12

10.75

6.397.88

10.04

5.77 4.45

15.0012.79

15.10 14.05

A549 Hücre Hattı Apoptoz Analizi Sonuçları

Canlı HücreErken ApoptozGeç ApoptozNekrotik22,2

9,21 4,26 11,93 10,2211,27

6,587,12


A549 Cell Cycle Sonuçları


A549 Cell Cycle Sonuçları

Kontrol Dosetaksel Selenyum Glutamin Dosetaksel + Selenyum

Selenyum + Glutamin

Dosetaksel + Glutamin

Doc + Se + Gln

0

10

20

30

40

50

60

70

8074.93

62.70

66.78

60.58

68.87

65.57

58.83

70.40

15.90

22.50

13.6812.46

18.23

12.19

22.50

18.71

6.70

13.3114.78

8.54

11.27 11.89

17.17

8.79

2.371.47

3.96

6.93

0.65

9.29

0.69 1.26

A549 Hücre Hattı Cell Cycle Analizi Sonuçları

G0/G1 FazıS FazıG2+MApoptotic Cells

Sonuç:

Dosetaksel kemoterapisi altında Glutamin,ve Selenyumun (3’lü kombinasyonun) birlikte verilmesinin antikanser etkinliğe katkısı saptanmamıştır.

Dosetaksel ve selenyumun birlikte ikili kombinasyonu antikanser etkinliği artırırken,

Kemoterapi uygulanmadığı dönemde p53 (-) KHDAK hücre hatlarında Glutamin,

p53(+) İnsan akciğer epitelyal adenokarsinomunda ise glutamin ve selenyum uygulaması anti-kanser potansiyele sahiptir.

Glutamin ve selenyumun, dosetakselin hücredeki etkinliğini artırmanın dışında engelleyici bir rolü görülmemiştir.


Pınar Kemanlı , Fırat Soyarat, Halil Ateş, Hilal Koçdor, İlhan Öztop, Mehmet Ali Koçdor ,R Çehreli .


A549 Apoptoz Sonuçları

% CanlıErken Ap. Geç Ap. Nekroz

KONTROL 84,91 0,82 6,38 7,88Doc 67,76 0,85 21,35 10,04Se 85,02 0,82 8,39 5,77Gln 91,29 0,79 3,47 4,45

Se+Doc. 73,07 0,24 11,69 15

Se+Gln 76,99 1,1 9,12 12,79

Doc+Gln 73,63 0,52 10,75 15,1

Doc+Gln+Se 79,37 0,19 6,39 14,05

Türk Toraks Derneği 15. Yıllık Kongresi

r.Çehreli, h. koçdor , f. soyarat , p.kemanlı h. ateş, h. Özsan , y.saygıdeğer, İ. Öztop...

Documents