presentazione standard di powerpoint · amebiasi(s) le amebiasi ittiche sono infezioni parassitarie...
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Sanità in troticoltura
Malattie parassitarie
Parasitic diseases
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Malattie parassitarie dei salmonidi in Italia - 2
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Amebiasi(s)
Le amebiasi ittiche sono infezioni parassitarie sostenute da amebe appartenenti a diversigeneri (es. Paramoeba spp., Acanthamoeba spp, Cochliopodium spp., Naegleria sp.) che, inpresenza di determinate condizioni predisponenti, possono divenire da organismi a vitalibera veri e propri agenti patogeni (= amebe anfizoiche).
Fish amebiases are due to different species of amoebas changing their tropism from free-stages in the water to amphizoic (pathogenic) organisms
L’importanza dell’amebiasi quale malattia parassitaria dei pesci d’allevamento è statariferita in passato soprattutto al salmone allevato in mare (Amoebic Gill Disease - AGD).
The most well known in marine Aquaculture is the Amoebic Gill Disease (AGD) in salmon
Episodi di Nodular Gill Disease (NGD) sostenuti da diverse specie di amebe sono statiperò descritti recentemente in trota iridea e sono di crescente rilievo sanitario edeconomico nella troticoltura nazionale.
Outbreaks of Nodular Gill Disease (NGD) by different species of amoebas are reportedin farmed rainbow trout leading to consider NGS as an emerging disease in Europe
Agente eziologico: Paramoeba spp., Acanthamoeba spp., Naegleria spp., Rogostoma sp.
Phylum Amoebozoa
(Supergruppi Amoebozoa e Excavata)
Morfologia - Morphology
Organismi caratterizzati da piccole dimensioni (10-20 m) e movimenti
ameboidi con pseudopodi più o meno evidenti
Small dimension (10-20 m) and ameboid movements by pseudopods
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AAmebiasi(s)
Tassonomia - Taxonomy
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Amebiasi(s)
Ospiti – Host range
Specie ittiche dulciacquicole, marine ed eurialine
Fish species from marine, brackish and freshwater enviornment
Distribuzione geografica:
Cosmopolitan
Localizzazione:
Branchie (AGD e NGD) Gills
+ sistemica - systemic
Ciclo biologico – Life cycle
Diretto (per colonizzazione dell’epitelio branchiale o di lesioni cutanee)
Direct
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Amebiasi(s)
La malattia proliferativa branchiale da amebe (Amoebic Gill Disease) risulta uno deimaggiori problemi sanitari degli allevamenti di salmonidi marini in Tasmania edAustralia e, negli ultimi anni, anche in diversi paesi dell’Europa settentrionale. Èsegnalata in impianti marini in:
1. Australia (1980)2. Stati Uniti (1985)3. Canada (1982)4. Francia e Spagna (1995)5. Irlanda (1995)6. Cile (2007)7. Norvegia e Scozia (2006)8. Nuova Zelanda (2010)
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Amebiasi(s)
Amoebic Gill Disease
Gravi episodi di mortalità in trote iridee (Oncorhynchus mykiss) e trote fario (Salmotrutta fario) allevate in acqua dolce, conseguenti ad infezione branchiale da ameba(Nodular Gill Disease)
Severe mortality oubreaks in rainbowand brown trout
Stati Uniti e Canada (1985)
Danimarca (2003)
Polonia (2007)
Germania (2010)
ITALIA (QUAGLIO ET AL., 2014)
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Amebiasi(s)
Nodular Gill Disease
Negli anni recenti prima segnalazione in alcune troticolture del Trentino
Colpiti esemplari giovanili ed adulti di trota iridea, con elevati tassi di mortalità durante tutto
l’anno e con particolare incidenza nel periodo invernale.
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Amebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
First reports in recent years in trout farms of Trento Province
Both Juveniles and adults susceptible, with high mortality rates throughout the year with higher
occurrence during winter
Conclusione dell’analisi parametri ambientali
Non è stata evidenziata alcuna correlazione diretta fra i parametri
ambientali (O2, NH3, Nitriti, pH, T) e le lesioni branchiali.
.
I soggetti con segni clinici (gravi difficoltà respiratorie)all’esame necroscopico mostrano branchie caratterizzate daaspetto proliferativo con ipermucosità, alternanza di areeanemiche e congeste, presenza di lesioni nodularibiancastre spt. nelle porzioni distali dei filamenti.
Fish with clinical symptoms (severe anoxia) show at thenecropsy gill with hyperproduction of mucus, anemia andcongestion, nodular lesions mainly at the tip of thefilaments
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Quaglio et al., 2014
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Grado 0:
- Assenza di lesioni.
- Branchia di colore rosso.
- No lesions
- Red Gills
SANO - HEALTHY
Grado 1:
- Singola lesione biancastra.
- Leggere striature necrotiche poco
definite.
- Single whitish patch
- Slight necrotic «lines»
MOLTO LIEVE - SLIGHTQuaglio et al., 2014
Metodo di valutazione macroscopica delle branchie
(adattata da Taylor 2009)Gill scoring
Grado 2:
- Due o tre aree con lesioni e
ipermucosità.
- 2-3 Lesioned areas with mucus
hypersecretion
LIEVE - LIGHT
Grado 3:
- Lesioni con ipermucosità fino al 20%
della branchia.
- Coinvolti più gruppi di filamenti.
- 20% of gill surface lesioned
- Cluster of filaments involved
MODERATO - MODERATEQuaglio et al., 2014
Amebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Grado 4:• Le lesioni interessano più del 50% della
branchia.
• Vaste aree con ipermucosità che interessano
ampi gruppi di filamenti.
• More than 50% of gill surface involved
• Vaste clusters of filaments involved
AVANZATO – ADVANCED NGD
Grado 5:• Le lesioni interessano la totalità, o quasi, della
branchia.
• Totale scomparsa della struttura filamentosa.
• Almost the whole gill affected
• Filament no more visible
GRAVE - SEVEREQuaglio et al., 2014
Amebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Progressiva iperplasia branchiale conformazione di lesioni nodularibiancastre visibili macroscopicamente
Progressive gill hyperplasia withmacroscopical whitish nodular lesions
Difficoltà respiratorie e frequentiinfezioni intercorrenti (es.Flavobatteri).
Hypoxia, breath distress and co-occurrence of bacterial infections(Flavobacteria)
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
L’esame microscopico a fresco evidenzia la presenza di elementi rotondeggianti
riferibili ad amebe di dimensioni intorno a 20 µm sia adesi ai filamenti che raggruppati
negli spazi interlamellari.
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Fresh mount show roundish elements referrable to amoebas of 20 µm on the surface
of filaments or clustered in the intralamellar spaces
All’esame istologico le branchie
mostrano marcata proliferazione
dell’epitelio di tutto o parte del
filamento, maggiormente nella
porzione distale.
At histology gill show heavy
epithelial hyperplasia of part or
the whole filament mainly at the
distal end
Microrganismi riferibili ad amebe sono osservati
adesi alla superficie dell’epitelio branchiale, più
frequentemente nella porzione apicale.
Microrganisms referrable to amoebas are visible
on the surface of gill epithelium
Quaglio et al., 2014
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
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Amebiasi(s)
Diagnosi:
Esame microscopico di raschiati cutanei/branchiali o di raschiati intestinalio di preparati a fresco per schiacciamento di organi interni
Microscopical exam of fresh mounts of skin/gill or intestinal scraping and«squashed» on visceral organs
Esame colturale su terreni agarizzati + Esame istologico + PCR
Coltural exam on agar + Histology + PCR
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Amebiasi(s)
Schuster, 2002*
Profilassi:
Migliorare la qualità dell’acqua
Pulizia del fondo/rete
Aumento ricambio idrico
Disinfezioni frequenti
Terapia:
Bagni d’acqua dolce per AGD in pesci marini
Prodotti perossigenati per NGD
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AAmebiasi(s)
Nodular Gill Disease in Italy
Prevention:
Water Quality improvement
Net/bottom Hygiene
Increase of water exchange
Disinfection
Therapy:
Freshwater baths for AGD
Peroxygenate for NGD
Jensen et al., 2020
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Ictiobodosi o Costiasi(s)
L’ictiobodosi, nella pratica ancora denominata “costiasi”, è un’importante malattia parassitariadei pesci d’acqua dolce sostenuta da protozoi flagellati Euglenozoa.
Important fish disease called Costiasis in the past, is due to a protozoan flagellate
Colpisce soprattutto gli avannotti e gli stadi giovanili (in Italia descritta in passato spt. negliavannotti di salmonidi), mentre gli adulti sono spesso portatori asintomatici.
Fingelings and juveniles more susceptible (typical in the hatchery in the past). Adults asasymptomatic reservoirs
Negli ultimi anni sono state descritte gravi infezioni anche in avannotti di pesci marini.
Recently severe mortality outbreaks also in marine fish species
L’attacco agli epiteli branchiali e cutanei causa gravi lesioni, con rapido dimagrimento eproblemi respiratori fino a morte dell’ospite.
Severe lesions on gill and skin epithelia, loss of appetite, growth decrease, difficult breath upto the death
Agente eziologico: Ichthyobodo (Costia) necator
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• Phylum: Euglenozoa
• Localizzazione: cute e branchie
• Diretto con alternanza di fasi parassitarie e fasi a vita
libera
• Temperature ottimali per lo sviluppo/riproduzione: 2-28°C
Ictiobodosi o Costiasi(s)
• Localization: skin and gills
• Direct life cycle with free and parasitic phases
alternated
• Optimal range of water temperature: 2-28°C
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Ictiobodosi o Costiasi(s)
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Stadio liberoFree stage
Stadio parassitarioParasitic stage
Ichthyobodo necator: alternanza di fasi e trasmissione
Ictiobodosi o Costiasi(s)
Stadio liberoFree stage Stadio parassitario
Parasitic stage
Patogenesi:
Il parassita si attacca alle cellule epiteliali mediante un discoadesivo, utilizzando un tubo citostomale per alimentarsi,provocando microlesioni che possono divenire seded’impianto per batteri e funghi d’irruzione secondaria. Sihanno reazioni iperplastiche ed ipersecretive, degenerazionee necrosi.
The parasite attaches on epithelial cells by an adhesive discand feeds on cells by a cytostome, causing microlesions andpotential secondary infections, with hyperplasia and mucushypersecretion, degeneration and necrosis
Sintomi:
Peggioramento rapido dello stato di nutrizione, difficoltàrespiratorie, ipermelanosi (spesso con un leggero colorebluastro opaco della livrea), sfregamento, ipersecrezione dimuco, letargia, mortalità elevata negli avannotti.
Fast worsening of nutritional status, difficult breath,melanosis, mucus hypersecretion, lethargy, high mortalityrate, vertical swimming
Ictiobodosi o Costiasi(s)
Ictiobodosi o Costiasi(s)M
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Diagnosi(s):Esame microscopico di raschiati cutanei e branchiali a forte ingrandimento subito dopo la mortedel pesce (il parassita tende a distaccarsi ed a riassumere la forma libera)Fresh mounts of skin and gill scraping and microscopical exam just after death of the host
Profilassi - PreventionMiglioramento dell’igiene, disinfezione delle attrezzature, separazione strutturale tra gli ambientidi avannotteria e quelli d’ingrasso (gli adulti sono frequentemente portatori asintomatici),diminuzione della densità di biomassa in vascaHygiene improvement, disinfection of instruments, hatheries and onfowing sectors keptseparated, lowering Biomass
Terapia – Therapy NOT AUTHORIZEDBagni con formalina (100-150 ppm per 30-60 min.) Prodotto non autorizzato.Bronopol: efficace per immersione a 20 ppm ma autorizzato in Italia solo per la disinfezionedelle uova di salmonidi. Prodotti perossigenati piuttosto efficaci spt. con due somministrazioniripetute.Formalin baths (100-150 ppm per 30-60 min.) BANNED IN ITALYBronopol: effective but AUTHORIZED ONLY for eggs disinfection: too expensive – abandonedPeroxygenate effective but NOT AUTHORIZED
Ictiobodosi o Costiasi(s)
ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
WHITE SPOT DISEASE
L’ictioftiriasi rappresenta una delle più importanti malattie parassitarie dei pesci d’acqua dolce.
One of the most important disease in freshwater fish
Penetrando ed incistandosi nei tessuti epiteliali di cute e branchie, il parassita è in grado dicausare lesioni branchiali e cutanee gravissime con conseguenti alterazionidell’osmoregolazione e della respirazione, fino alla morte dell’ospite.
It penetrates and encysts under the skin and gill epithelium, causing severe and heaviestlesions with osmoregulatory alteration and breathing leading to death of the host
In acquacoltura i problemi più gravi vengono registrati in allevamenti intensivi d’acqua dolcecalda, ma possono verificarsi gravi episodi anche in troticoltura.
Major issue in warm freshater fish farm, but also important in trout farm and ornamental fishkept in aquaria
L’ictioftiriasi rappresenta una grave malattia parassitaria anche per i pesci dulciacquicolid’acquario.
Agente eziologico: Ichthyophthirius multifiliis
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Tassonomia:
Phylum Ciliophora
(Supergruppo Chromalveolata)
Morfologia - Morphology
Ciliato di grosse dimensioni (50-1000 m)
Stadio parassita (trofonte): rotondeggiante con caratteristico macronucleo a ferro di cavallo
Parasitic stage (Trophont): round with macronucleuswith typical shape «horse shoe»
Stadio riproduttivo (tomonte): sferica
Reproductive stage (Tomont): spheric
Stadio infettante (teronte): ovalare allungata, 30×50μ, con «perforatorium» apicale
Infective stage (Theront): ovalar, 30×50μ, with perforatorium on the tip
ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
WHITE SPOT DISEASE
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ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
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Ospiti:Tutte le specie ittiche dulciacquicoleAll the freshwater fish species
Localizzazione:Cute e branchie (incistato nel tessuto epiteliale)Localization: Skin and gills
Ciclo biologico:Diretto polifasico con uno stadio parassitario e due stadi ambientali (tomonte e teronte).Life cycle polyphasic with one parasitic stage and two environmental stagesTemperature ottimali di sviluppo: 20-25°C (riproduzione tra 3 e 28°C)Optimal water range 20-25°C (but able to reproduce between 3-28°C)Realizzazione in pochi giorni a 21-24°C, in 10-14 gg a 15°C e fino a 5 settimane a 10°C.Life cycle complete in few days at 21-24°C, in 10-14 days at 15°C, up to 5 weeks at 10°C
ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
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Teronti infettanti Distacco del trofontematuro
Tomonti sul fondo (eliminazione di 500-800 teronti)
Perdità di
infettività
dopo 24 ore
– Stadio
sensibile a
trattamenti
Stadi non
sucettibili a
trattamenti
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Patogenesi:
Il teronte penetra negli epiteli cutanei e branchiali e qui siaccresce (trofonte) anche fino a 1000 m; quando il trofontefuoriesce dalla sede d’incistamento provoca lesioni epiteliali.La presenza del trofonte provoca iperproduzione di muco eproliferazione dell’epitelio respiratorio branchiale, quindisopravvengono fenomeni degenerativi e necrosi.
Gravi alterazioni dell’osmoregolazione e della respirazione.
Si possono avere infezioni secondarie di natura batterica emicotica.
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Pathogenesis:
Theront penetrates the epthelia of skin and gills, growths upto 1mm, excists leaving lesions potential entrance door forsecondary infections.
The trophont rotates into the cyst causing epithelialproliferation, mucus hypersecretion and necrosis.
Sintomi:
Sfregamento (flashing), problemi respiratori, comparsa di punti bianchi sullasuperficie cutanea, mortalità variabile a seconda della taglia dell’ospite edell’intensità d’infezione
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Symptoms
Flashing, difficult breathing white spots on the skin, mortality dependent on thefish size and infection intensity
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• Fattori predisponenti: mancato controllo dei pesci di nuova introduzione,sovraffollamento, scarsa pulizia del fondo delle vasche, scarso ricambio idrico
• Profilassi: controllo dei pesci di nuova introduzione, frequente pulizia del fondodelle vasche, evitare promiscuità tra portatori sani e stadi più recettivi (avannotti)
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• Predisposing factors: not controlled new batches, poor hygiene, low water exchange,
• Prevention: solving of the factors above and separation between larger fish andjuveniles (more susceptible)
Shinn et al. (2009) hanno dimostrato come la combinazione di una pulizia regolare per mezzo di una testina dipulizia e di una pompa a vuoto e l'uso di un polimero a bassa adesione da applicare alle vasche è in grado dirimuovere i tomonti e ridurre i livelli di infezione fino al 99,5% rispetto ai gruppi di controllo. Nonostante la loroapparente efficacia nessuna delle strategie di gestione sopra descritte sono state adottate finora in un contestoaziendale ad eccezione di una troticoltura in centro Italia
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AShinn et al. (2009) showed as effective the association of regular cleaning procedures by a and a vacuum pumpwith a polymer film to be applied on the tanks surfaces, with the aim to remove tomonts and decrease theinfection levels up to the 99.5% compared to controls. TOO EXPENSIVE FOR FARMERS, NOT RELIABLE
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Da anni si sono intraprese ricerche sull’immunologia legata alla presenza di questo parassita per mettere
a punto una strategia vaccinale
Almeno 5 diversi sierotipi sono stati individuati, caratterizzati da differenze negli Antigeni di immobilità
superficiali (Iag) – 5 serotypes with difference in (Iag)
2 tipi di risposta immunitaria:
1aria: Non-specific innate factors, Complement factors, Cellular factors
2aria: anticorpale e cellulo-mediata
Nella trota iridea la risposta immunitaria anticorpale è in grado di conferire resistenza a I. multifiliis con
insorgenza di infezioni sub-letali
Immune antibodies give resistence to trout with sub-lethal infections
I. multifiliis è parassita obbligato, tutti i tentativi di coltivarlo in vitro sono falliti fino alle prove effettuate nel
corso del Progetto europeo ParaFishControl
Vaccini a DNA e a DNA ricombinante si sono dimostrati efficaci sperimentalmente.
DNA vaccines are effective but not authorizied in EU
Jørgensen (2017) Fish & Shellfish Immunology, 67: 586-595
ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
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Controllo:riduzione della densità in vasca, aumento del ricambio idrico, aumento dell’ossigenodisciolto, pulizia del fondoBiomass reduction, increase of water exchange, increase og pO2, bottom hygiene
Terapia:bagni con formalina (150-250 ppm per 30-60 minuti al giorno fino a scomparsa delparassita). Acqua ossigenata e acido peracetico: efficaci nei confronti dei teronti.Prodotti non autorizzati.Formalin effective but NOT AUTHORIZED
In allevamento gli approcci più comuni prevedono l’utilizzo di trattamenti perimmersione brevi (e.g. 30 min – 4 h in vasca) o prolungati (e.g. 7–15 gg nei ponds)volti a colpire gli stadi acquatici a vita libera del parassita (i.e. protomonti e teronti).Treatments with short immersions (30’-4h in tanks) or prolonged (7-15 days inponds)
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Storicamente, il verde malachite (MG) era comunemente usato per ilcontrollo di I. multifiliis e una serie di altre malattie ittiche per la suacomprovata efficacia, basso costo, pronta disponibilità, elevata stabilitàdurante lo stoccaggio e alta solubilità in acqua.La MG e i suoi derivati (principalmente leucomalachite) mostrano ancheeffetti ecotossicologici ben documentati, tra cui citotossicità, cancerogenicità,mutagenicità, induzione di fratture cromosomiche, teratogenicità erespirazione.Inoltre il verde malachite ei suoi derivati sono altamente persistentinell'ambiente, bioaccumulanti nell'ecosistema e nei tessuti dei pesci
MALACHITE GREEN IS EFFECTIVE BUT BANNED SINCE SEVERAL YEARS -BIOACCUMULATION
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A bacterial biosurfactant isolated from Pseudomonas(strain H6) has a strong in vitro antiparasiticeffect on the fish pathogenic ciliate Ichthyophthirius multifiliis. Three life cycle stages were allsusceptible to the surfactant. Theronts were the most sensitive showing 100% mortality in as lowconcentrations as 10 and 13lg/ml within 30 min. Tomonts were the most resistant but were killedin concentrations of 100lg/ml. Tomocysts, which generally are considered resistant to chemicaland medical treatment, due to the surrounding protective cyst wall, were also sensitive. Thesurfactant, in concentrations of 10 and 13lg/ml, penetrated the cyst wall and killed the enclosedtomites within 60 min. Rainbow trout fingerlings exposed to the biosurfactant showed no adverseimmediate or late signs following several hours incubation in concentrations effective for killingthe parasite.
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Visualization of Pseudomonas H6 surfactant (PS) effects on tomonts and tomocysts withenclosed tomites of Ichthyophthirius multifiliis. (a)Tomonts without PS. (b) Tomocystswithenclosed tomites after 30-s exposure to10lg/ml PS with minor disturbance of peripheraltomites within the cyst wall. (c) Tomont showing membrane disruption (arrow) and releaseof cytoplasm (arrowhead) following 15-min exposure to100lg/ml PS. (d) Tomocyst withenclosed dead tomites in the cyst centre after 15-min exposure to 100lg/ml PS
ICTIOFTIRIASI o “malattia dei punti bianchi”
WHITE SPOT DISEASE