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Mousumi Paul2017年11月
微生物快速检验法
RAPID MICRO METHODS
提 纲
• 引言 –为什么要使用微生物快速检验法(RMM)?
• 方法概述– 操作的基本原理– RMM实例/创新技术
• 默沙东公司对RMM的愿景与策略
• RMM实施策略– 注册与验证的考虑– 全球实施策略
• 有关RMM的法规和指南
• 总结
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QC实验室自动化和效率
自动化(条码监测, 自
动读取)
效率 –转换成FTE
现场检测
缩短前置时间
缩短产品放行的
检验周期
快速解决问题
的工具/协助调查
质量: 有风险时,
可选择不生产
快速确保低或无生物
负荷
提高过程控制
(频繁或实时监测)
RMM可对微生物进
行客观分析(排除人为
因素)
快速方法能缩短获得结果的时间(前置时间较短),使微生物实验室检验自动化(节省成本)和在发生污染事件时进行设施保护,增加早期介入的可能性(质量更高)。3
RMM是实现最高质量、最短前置时间和最低成本的手段
常规方法
• 100 %基于微生物生长
• 目视检查生长
• 这意味着你必须耐心等待结果
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微生物检测项目 培养时间
常规 RMM
需氧菌总数 5-7天 3天
无菌检查(放行) 14-28天 7天
有/无污染(IPC) 14-28天 7天
内毒素检查 1小时 15分钟
微生物鉴定 7天 基于使用的方法,每次运行45个样本
需3-26小时。
支原体检查 28天 7天
报告时间 = 样本运送到实验室的时间 管理时间 样本准备时间 样本培养时间 分析时间 核查时间 批准时间 报告结果时间
产品放行周期是上述所有依次活动的时间之和。这表明要改变总的前置时间必须加速所有活动。
快速方法
采用RMM法缩短检验周期(培养时间)
常规微生物检验法 vs. 微生物快速检验法 (RMM)
1. 基于微生物生长的检验技术
BacT/ALERT:二氧化碳比色法
直接增长:自发荧光
Milliflex Quantum:荧光染色
2. 活微生物直接检验技术
流式细胞计量术:荧光
MuScan:荧光扫描和图像分析
3. 微生物细胞特定组分的分析技术
Q-PCR:核酸检测
MicroSEQ:基因型鉴定
4. 1 & 2,3之间的混合检验技术
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微生物检验法基本原理
• 取代常规无菌检查– 适于流体( ≤10ml ),也适于含细胞流体检测– 常用于医院血液无菌检查
• 原理– 检测CO2
– 有CO2存在时指示剂显黄色– 用于原液污染控制
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CO2比色法用于污染检测
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富集步骤(7天) DNA分离(45分钟) qPCR (3小时)
Day 3 Day 7 Day 14
14天 14天 14天
0.2 mL
10 mL
14天常规方法:
28天
快速方法:
1-7 天
+在第0天进行检测以最
小化生产过程中的风险:
检测低水平的支原体
mAb和疫苗的支原体检查
+指示剂细胞培养法
液体培养基和琼脂培养法
微生物快速检验技术生物负荷检查
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• 基于微生物生长
• 结果获得时间: 2.5 – 3天; 染色提高方法灵敏度
• 无破坏性, 可鉴定微生物
• 可视为改进的药典方法
• 基于微生物生长
• 高通量,负载可变
• 获得结果的时间: 2.5 – 3天
• 条码和使用LIMS界面
• 无破坏性,可鉴定微生物
• 可进行早期检测和干预,系统实时报警
• 不基于微生物生长, 直接检测法
• 结果获得时间 :1小时无需培养
• 灵敏度高:该方可检测活的不可培养的微生物
• 适于解决紧急问题
• 无法进行批处理
Milliflex Quantum Growth Direct MuScan
微生物快速检验技术无菌检查
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• 适用于混悬液产品/无法过滤的低容量样品
• 因可现场培养,是工艺分析技术的理想方法
• 系统采用药典培养基和温度
• 如生物制品生产所用培养基中含有抗生素,
能够克服该干扰
• 结果可自动读出,包括阳性结果通知
• 可使用LIMS界面
• 检测周期缩短50%
• 高通量,负载可变
• 便于采纳类似于目前无菌检查的过滤方法
• 本法是一种过滤方法,故不适用于混悬液
• 可进行早期检测和干预,系统实时报警
• 采用非药典培养基,在22.5°C和32.5°C
下进行的需氧培养有3种培养条件,在32.5°C
下进行的厌氧培养有1种培养条件
• 条码和使用LIMS界面
• 检测周期缩短~50%,培养时间从14天缩短至7天
• 高通量,负载可变
BacT/Alert Growth Direct
已上市产品由常规检验法向
微生物快速检验法过渡
新产品/新工艺建立早期整合的指导文件
和策略部署
开发工作案例
向生产厂/业务部门推荐
与生产厂/业务部门协同工作
让默沙东实验室,工艺研发组和外部生产单位共同参与
根据产品类型和采取的策略选择相应技术方法
将RMM移交给默沙东内部和外部生产厂/QC实验室
默沙东公司RMM愿景与策略
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注册
对于新产品
- RMM采用备案方法
- 基本原则: 快速检验方法需进行验证
-与默沙东实验室协作(与分析负责人,产品研发
组和临床前研发组进行早期沟通和洽谈)
对于现有产品
- 开发全球推广时间线
- 需开展前期研发工作
- 希望证明传统方法和替代方法的可比性
验证
- 证明参数相等
- 与统计学小组密切协作进行试验设计
- 将药典方法作为方法性能的参考标准(如
将USP, EP, JP等视为金标准)
- 在选择微生物时 – 理解审评机构希望看
到低水平回收率
定量方法
准确度,LOD&LOQ,线性,精密度
和耐用性
定性方法
特异性, 准确度, LOD, 耐用性
验证的主要考虑: • 微生物检验的变异性非常大• 不能准确掺入预先规定数量的微生物• 发生假阳性结果可掩盖缺乏灵敏度
注册与验证的考虑
商业流程的考虑: • 评估变更对RMM的影响,并决定是否继续执
行• 包含监管机构的反馈意见,可完善后续申报
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在多个生产厂取代常规检验方法
在多个生产厂实施微生物快速检验取得高效益
方法建立
和验证
技术评估和
工作案例开发
方法转移/
适用性试验
方法转移/
适用性试验
方法转移/
适用性试验
可行性研究实施
A 生产厂
第1阶段
第2阶段
RMM的全球实施策略
B 生产厂 C 生产厂
• FDA鼓励采用RMM:
2012年6月4日颁布的美国联邦法规21章600, 610和680款修正案, 要求对生
物制品进行无菌检查:
“食品药品管理局( FDA )正在修订生物制品无菌检查要求。
该规定修改了对联邦法规( CFR )21章F分章600 - 680款规定下的大部分生
物制品的无菌性要求,旨在促进无菌检查方法的改进和创新 ,给予产生商在对
某些上市新产品进行无菌检查时的灵活性,加强对目前已批准产品的无菌检查,
鼓励生产商在无菌检查方法中采用先进的科学技术。”
FDA鼓励采创新
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《中国药典》2015年版四部通则9201
药品微生物检验替代方法验证指导原则
• 一般要求
• 方法验证的概括性指南
• 对验证参数信息的要求取决于方法类型
• 微生物定性检验方法验证
• 微生物定量检验方法验证
来自《中国药典》2015年版正文 :
“ 这些方法与传统检查方法比较,或简便快速,或具有实时或近实时监控的潜力,使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能,同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。
在控制药品微生物质量中,微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法(即替代方法)时,应进行替代方法的验证,确认其应用效果优于或等同于药典的方法。”
RMM相关法规及指南《中国药典》2015年版
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USP通则<1223> 微生物检验替代方法验证
• 验证用作药典微生物检验方法的替代方法的指南• 讨论微生物检验方法变异性和与药典方法可比性
方面所面临的挑战
EP通则5.1.6 微生物质量控制替代方法
• 微生物检验替代方法指南• 如果微生物检验替代方法能节约微生物检验的成
本,同时提高对药品质量的保证,应推动该方法的实施和使用
PDA TR 33, 微生物快速检验法和替代方法的评价,验证和实施
• 讨论微生物检验方法所面临的挑战——获得结果的时间长,可能无法恢复微生物生长,尤其在不利环境中和休眠状态下
• 将微生物学与QbD和质量风险管理原则联系起来• 指导文件,政策和法规变化,验证预期等• RMM的价值, 不断改进和风险
ICH Q2(R1)分析方法验证 • 方法验证概括性指南• 对验证参数信息的要求取决于方法类型
RMM相关法规及指南
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RMM的驱动因素显著降低获得结果的时间和缩短产品放行时间。解决数据完整性问题,同时提高自动化和效率。提高工艺控制,通过早期检验和介入进行设施保护。可用作快速解决问题的工具。
可获得RMM 技术的完整资料。
重点关注生产过程,以选出正确的方法进行应用。
这些RMM需进行验证。替代方法将获得等同于药典方法的结果。
RMM的广泛接受度。
默沙东 在微生物学实验室,统计组与生产厂之间建立了紧密协作,以进行方法建立,验证和实施。
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总结
THANK YOU