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Diego Piedrahita MVZ – MSc - PhD
Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolascomo fuente potencial de enfermedades Zoonóticas
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Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolascomo fuente potencias de enfermedades Zoonóticas
JUSTIFICACIÓN2
AGENTES DE INTERÉS 3
MATERIALES Y MÉTODOS4
RESULTADOS PARCIALES5
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA1
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Planteamiento del problema
¿Estatus de algunas enfermedades en Colombia?
Es necesario determinar la presencia de enfermedades
zoonóticas presentes en roedores de granjas porcinas
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Justificación
Backhans et al., 2012
Patógeno
estudiado
Especie de
roedorPaís Localización Método
Leptospira spp Rattus norvegicus UK Rural Ziehl-Nielsen
Cryptosporidium
parvum
Rattus norvegicus UK Granjas Porcinas IFAT
Listeria spp Rattus norvegicus UK Rural Cultivo
Trichinella spiralis Rattus rattus Croacia Granjas porcinas Digestión enzimática
Toxoplasma gondii Rattus rattus Holanda Granjas porcinas PCR TaqMan
Toxoplasma gondii Mus musculus, Rattus
norvegicus
EE.UU Granjas porcinas MAT
Hantavirus Rattus norvegicus Ucrania Rural ELISA
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Trichinellaspp.
• ETA
• Reemergente
Toxoplasma gondii
• Protozoario
• Intracelular
Leptospiraspp
• Espiroqueta
• Patógena
Reservorio y
transmisor de
enfermedades. Backans et al, 2012
Justificación
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Trichinella spp.
ETA
Salud Pública
33% en animales silvestres
27% en Humanos y 21% en
cerdos
Presentación en 26,8% de
los países
Suramérica: Chile,
Argentina, Uruguay, Islas
Bahamas
(Pozio, 2007)López et al., 2014
¿Colombia libre deTrichinella?
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Toxoplasma gondii
• Protozoo Intracelular
obligado.
• Animales de sangre
caliente.
• Graves pérdidas
económicas.
• 40% de prevalencia a nivel
mundial (Dubey, 2004)
• Colombia 47% (1982)
• 2008: entre 3,7 y el 89.2 %
• 2015: 43% por PCR. En
carne.
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Leptospira spp
• Bacteria que se caracteriza por
su flexibilidad, motilidad y forma.
• Especies:
• L. interrogans: cepas patógenas
• L. biflexa: cepas saprófitas,
aisladas del medio ambiente.
• Existen más de 225 serovares
http://muyensalud.com/2015/11
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Justificación
Programa nacional integral e integrado de
zoonosis.
Incremento consumo de la carne de cerdo
en Colombia y el mundo.
Calidad e inocuidad mercado interno y
externos.
TLC con diferentes países.
Evaluación de Factores de riesgo para
entidades zoonóticas
PROPUESTA PARA EL MEJORAMIENTO DEL ESTATUS SANITARIO Y ASEGURAMIENTO DE LA INOCUIDAD DE LA PRODUCCIÓN PORCINA EN COLOMBIA
https://www.google.com.co/search?q
CONPES 3458 de 2007
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Pregunta de investigación
¿La población de roedores que conviven en zonas
aledañas a sistemas de producción porcina de
Colombia están infectadas con Trichinella spp,
Toxoplasma gondii y Leptospira spp ?
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Objetivo generalDeterminar la presencia y caracterización molecular para
Trichinella spp, Toxoplasma gondii y Leptospira en
roedores capturados en zonas aledañas a granjas de
producción porcina en Colombia
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Presupuesto
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MetodologíaLaboratorio de parasitología especial
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Materiales y métodos
Donde:
N = Total de la población.
Zα = 1.96 al cuadrado (si la seguridad es del 95%)
p = Proporción esperada
q = 1 – p
d = Precisión
(Thrusfield, 2005)
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Materiales y métodos
Departamento Número de granjas Número de roedores
Antioquia 38 333
Cundinamarca 13 142
Valle del Cauca 7 34
Eje Cafetero 6 31
Meta 2 15
Total 66 555
Captura de roedores en zonas aledañas a granjas de producción porcina en
Colombia por departamento junio - diciembre de 2015.
Materiales y métodos
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Materiales y métodos
Captura de Roedores y Toma de Muestras
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555 roedores
Trichinellaspp.
Digestión enzimática
PCR Múltiplex
Toxoplasma gondii
ELISA
Extendido cerebral
PCR cerebros
Leptospiraspp.
MAT
8 serotipos
PCR
Patógenas
Saprófitas
Identificación
Polop et al, 2011
Secuenciación
Materiales y métodos
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Detección de Trichinella spp
Diagnóstico de Trichinella
Digestión enzimática demúsculo
Istituto superiore di sanitá
Universidad de Antioquia
PCR
(Controles: T. murrelli, T. 6, T. pseudospiralis, T. spiralis, T. nativa,
T. patagoniensis, )
Gen ITSI, ITSII, ESV
Chaparro, 2013
ISS Roma, Italia & Unidad de Diagnóstico UdeA, 2014
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Técnicas - Toxoplasma gondii
Serología
ELISARat ELISA Kit - LS-F10245, Bioscience, empleando entre
50 -100 μL de suero de roedor dilución 1:10
Extendido cerebrales
Técnica de tinción con
Giemsa
Prueba molecular
PCR Amplificación del gen B1
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Técnicas para Leptospira
World organization for animal health, 2014
L. in
terr
oga
ns
MAT suero de roedor
Icterohaemorrhagiae
Pomona
Tarasovi
Autumnalis
Ballum
Canícola
Grippotyphosa
Bratislava
PCR Tejido Renal
Amplificación del gen 16S rRNA
Amplificación del gen Lipl32
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• Las muestras positivas para Trichinella spp,
Toxoplasma gondii y Leptospira spp se enviarán
a secuenciar a MACROGEN - korea.
• Método de Sanger modificado
• Análisis filogenético: DNA star®, Mega 6.0
Secuenciación
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RESULTADOS
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Resultados
Trichinella spp.
100% Negativo
Toxoplasma gondii
Positivo:
69.4% (385/555)
Leptospira spp
Positivo: 29,4% (163/555)
4.5% (25/163) Patógenas
24.9% (138/163) Saprófitas
555 roedores
Edad
Adulto 434 (78.2%)
Juvenil 121 (21.8%)
Especie
R. norvegicus410 (73.9%)
R. Rattus
145 (26.1%)
Género
Hembra 324 (58,4%)
Macho 231 (41.6%)
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DEPARTAMENTO NÚMERO DE MUESTRAS RESULTADO DIGESTIÓN
ENZIMÁTICA
Antioquía 559 Negativo
Cundinamarca 181 Negativo
Valle del Cauca 176 Negativo
Atlántico 32 Negativo
Risaralda 16 Negativo
Caldas 16 Negativo
Eje Cafetero 16 Negativo
Santander 8 Negativo
Meta 30 Negativo
Nariño 16 Negativo
Chocó 16 Negativo
Huila 8 Negativo
Tolima 10 Negativo
TOTAL MUESTRAS 1084 100% NEGATIVAS
Resultados - Trichinella
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21%
79%
RESULTADO DE SEROPOSITIVIDAD A LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT
Positivo
Negativo
Resultados - Leptospira
Serología
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Resultados - Leptospira
15314 28 122 21
681 5 13 1
Meta Antioquia Valle del Cauca Cundinamarca Eje Cafetero
MUESTRAS POSITIVAS A SEROVARES PATÓGENOS DE LEPTOSPIRA POR LA TÉCNICA DE MAT
Total Muestras Muestras Positivas
Serología
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27%
16%
12%
11%
10%
9%
8%
7%
PORCENTAJE DE ANIMALES POSITIVOS A SEROVARES DE LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT
L. Icterohaemorrhagiae
L. Canícola
L. Trassovi
L. Pomona
L. Grippotyphosa
L. Bratislava
L. Ballum
L. Autumnalis
Resultados - Leptospira
Serología
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Resultados - Leptospira
PCR
4%
27%
69%
RESULTADO DE LEPTOSPIRA POR PCR
Positivo L. Patógena
Positivo L. Saprófita
Negativo
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Resultados - Leptospira
7,16,7
4,8
3,3
0,00,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
Valle del Cauca Meta Antioquia Cundinamarca Eje Cafetero
PORCENTAJE DE POSITIVIDAD POR PCR A LEPTOSPIRA PATÓGENA POR ZONA MUESTREADA
PCR
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Análisis de secuencias de Leptospira.
PCR Toxoplasma gondii.
Secuenciación T. gondii
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Agradecimientos
• Ministerio de Agricultura y desarrollo Rural
• Asociación Colombiana de Porcicultores-FNP
• Dra. Jenny Chaparro
• Dra. Diana Corina Zambrano
• Estudiante de Maestría – Anderson López
• Universidad de Antioquia: Unidad de diagnóstico; Laboratorio de Parasitología
Especial
• Laboratorio de Referencia de Parásitos de Europa
• Granjas Porcícolas
• Rotantes, auxiliares y contratistas del laboratorio de parasitología y
microbiología de la Escuela de veterinaria Universidad de Antioquia
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