preparación de muestras en matrices alimenticias: spe y ... · alimenticias: spe y quechers ....

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-- Agilent Sample Preparation Tour 2011

Preparación de muestras en matrices

alimenticias: SPE y QuEChERS

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Sección de aplicaciones

Análisis de Seguridad Alimentaria

QuEChERS:

Quick, Easy, Cheap, Effective, Robust and Safe , QuEChERS (Rápido, Fácil,Barato,Efectivo, Robusto y Seguro, RaFaBERS)

• Método AOAC 2007.01

• Método EN 15662 (2008)

• PAHs y tensioactivos en pescados

• Pesticidas en Te Verde

Extracción Líquido/Líquido en Soporte Sólido (Chem Elut)

• Método Lutz-Alder

• Pesticidads Acidos

• Método de Multi-residue de pesticidas en mieles

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Sección de aplicaciones II

Análisis de Seguridad Alimentaria

SPE: Extracción en Fase Sólida

Lista de positivos Japonesa

Plaguicidas en productos agrícolas

Extracción de Micotoxinas

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¿Qué es QuEChERS (pronunciado “Catchers”)

• Quick, Easy, Cheap, Effective, Robust and Safe , QuEChERS

(Rápido, Fácil,Barato,Efectivo, Robusto y Seguro, RaFaBERS)

• Desarrollado conjuntamente por la USDA (2003) y por las Agencias Reguladoras de

Alimentos Europeas (método prEn 15662: 2007)

• Metodología para una extracción simplificada de un gran número de residuos de

pesticidas multiclase y multiresiduo en frutas y vegetales

• QuEChERS es un método de preparación de muestra rápido para hacer screening de

analitos de interés, no para concentrar muestra.

• QuEChERS está todavía en los comienzos, y se está adoptando en todo el mundo.

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Catalogo QuEChERS : Publicación #5990-3562EN

Método Luke o SPE tradicional QuEChERS Beneficio

Tiempo estimado para

procesar 6 muestras (min)

120 30 4x más rápido

Solvente usado (mL) 90 mL 10mL 9 x menos solvente

Desechos clorados (mL) 30 mL Ninguno Más seguro, más

ecológico, menos costo

Equipo especializado, material

de vidrio

Embudo, baño de agua,

contenedores de 200mL ,

evaporador, etc.

Ninguno No se necesitan

consumibles adicionales

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Primer Paso- Extracción

Representación Gráfica de los pasos QuEchERS 1) Pesar la muestra

2) Añadir

homogeneizadores

cerámicos

2) Añadir estandares

3) Vortex

4) Añadir ACN (1% AA)

5) Vortex

6) Añadir sales

7) Agitar 1 min

8) Centrifugar

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Segundo Paso – SPE Dispersiva

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1) Elegir d-SPE

2) Transferir

alícuota

3) Vortex 1 min

4) Centrifugar

5) Analizar

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Qué hace únicos los kit Agilent SampliQ para

QuEChERS

Fácil selección de Producto: Kits de QuEChERS

Identificados por método y matriz

Apoyo técnico: más de 23 notas de aplicación de

QuEChERS:

• Todo disponible en la página web:

www.agilent.com/sampliQ

• Compendio de Aplicaciones QuEChERS

para alimentos: 5990-4977EN

• Seminarios y demostraciones en todo el

mundo.

Agilent Restricted

Page 7

http://www.agilent.com/sampliQ

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Selección del Método: AOAC y EN

15 g de muestra homogeneizada 10 g de muestra homogeneizada

Añadir 15 mL ACN (1% AA), vortex Añadir 10 mL ACN, vortex

Añadir Sales AOAC de Extracción, agitar Añadir Sales EN de Extracción, agitar

Centrifugar

Transferir 1 u 8 mL a tubo d-

SPE AOAC Transferir 1 u 6 mL a tubo d-

SPE EN

Transferir a Vial de

Análisis

Analizar por GC/MS o LC/MS/MS* * Require dilución antes del análisis

AOAC 2007.01 EN 15662

Vortex

Centrifugar

Centrifugar

Transferir a Vial de Análisis

Vortex

Centrifugar

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Calidad del empaquetamiento= Reproducibilidad

Page 9

Empaquetar las sales separadamente permite a

los usuarios añadir la muestra antes de añadir

las sales para:

- Prevenir reacciones exotérmicas

- Impedir la degradación de la muestra

-Asegurar las máximas recuperaciones

Empaquetamiento de 3 capas resistente

al agua y UV

Sales empaquetadas bajo corriente de

nitrógeno ( no vacío)

Reduce la aglutinación de las sales,

aumentando la capacidad de vertido

Todos los ingredientes escritos en el

paquete

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0

10

20

30

40

50

60

0 10 20 30 40 50 60

Te

mp

era

tu

re

ºC

Time (seconds)

AOAC Add Buffered Salts to Sample

AOAC Sample Added to Buffered Salt

0

10

20

30

40

50

60

0 10 20 30 40 50 60

Te

mp

era

ture

ºC

Time (seconds)

EN Add Buffer Salts to Sample

EN Sample Added to Bufferd Salt

Se observa un incremento sustancial de temperatura (aumento de aprox 25 ºC

para el método AOAC y approx 10 ºC para el método EN ) cuando se añade la

muestra a la sal de extracción en el tubo de 50 mL PP frente a cuando se

añade la sal de extracción de una bolsa anhidra a la muestra.

AOAC EN

Truco: Minimizar Reacciones Exotérmicas en la adición de las sales

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Mejoras Agilent en la Extracción de Muestras

Añadir Sales de Extracción a las frutas/vegetales triturados

• Consistencia en la agitación, cada uno agita de manera diferente

• Variabilidad en las aplicaciones QuEChERS,en las recuperaciones

y RSDs

• Homogeneizadores Cerámicos SampliQ

• Reducen el tiempo de agitación de 1 minute a <20

segundos!

• Extracción Consistente de la muestra con las sales

• Rompe los aglomerados de sales.

• Facilita la homogeinización con los angulos de corte

• Incrementa la recuperación de pesticidas de la muestra

• 3 tamaños diferentes: uno para el tubo de extracción de 50 mL y

dos para los tubos de dispersión de de 15 y 2 mL

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0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

240

0 10 20 30 40 50 60 70

Pe

rce

nt

Re

co

ve

ry

Time in Seconds of Shaking Extract with Ceramic Homogenizers

Ahorre tiempo con homogeneizadores cerámicos: 20 segundos de agitación es suficiente

Organophosphates Carbamates Benzimidazoles Anilinopyrimidines

Neonicotinoids Triazoles Strobilurins

TRUCO: Mejorar la eficacia de la agitación

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Consejo: Fuerza Iónica- Tamponamiento de la Sal

• Método Tamponado AOAC

Condiciones de tamponamiento relativamente fuertes por

el acetato (pH 4.8)*

• Método tamponado EN

Condiciones de tamponamiento más débiles por el citrato

(pH 5-5.5)**

• Tamponando a pH 5 durante la extración se obtienen

recuperaciones óptimas (> 70%) para ciertos plaguicidas

dependientes del pH ( e.g. pimetrozina, imazalil, tiabendazol)

*S.J. Lehotay, K. Mastovska, A.R. Lightfield, J. AOAC Int. 88 (2005), 615-629 & 60A

** M. Anastassiades, E. Scherbaum, B. Tasdelen, D. Stajnbaher, in: H. Ohkawa, H. Miyagawa, P. W. Lee

(Eds.), Crop Protection, Public Health, Environmental Safety, Wiley-VCH, 2007, p.439.

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• 50 mg PSA, 50 mg C18, 7.5 mg GCB, 150 mg MgSO4 (2 mL)*

• 400 mg PSA, 400 mg C18, 60 mg GCB, 1200 mg MgSO4 (15 mL)*

• El extracto más limpio , para todas las matrices sin afectar inaceptablemente las

recuperaciones, incluso para pesticidas planares.

(S. Lehotay: J. Chromatography A 1217 (2010), 2548-2560)

*Disponible en Agilent * PSA = Primary Secondary Amines GCB = Graphitized Carbon Black

CONSEJO: Elija el kit dispersivo Correcto (d-SPE)

►d-SPEUniversal (SPE-dispersiva-)◄

• MgSO4 se encuentra en todos los kits dispersivos, retira el agua

restante

• PSA* para retirar acidos orgánicos

• C18 para retirar grasas y lípidos

• GCB* para retirar pigmentos y clorofilas

Los fundamentos

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Agilent Restricted

Page 15

Aplicaciones QuEChERS en 2010: más alla de

los Pesticidas en Frutas y Vegetales

Aprenda hoy más en www.agilent.com/chem/SampliQ

Aplicación Literatura Kit QuEChERS

usados

Fármacos Veterinarios(antibioticos)

en tejidos animales

5990-5085EN

5990-5086EN, 5990-5395EN

5982-5650

5982-4921

PAHs en Pescado 5990-5441EN, 5990-6668EN

5982-5755

5982-5158

Pesticidas en Aceite de Oliva 5990-5553EN 5982-5550

5982-5122

PAH‟s en Suelos (sedimentos) 5990-5452EN , 5990-6324EN

5982-5755

5982-5156

Acrilamidas en Frituras 5990-5988EN , 5990-5940EN 5982-5850

5982-5022

Pesticidas en Alimentos Infantiles 5990-5028EN 5982-5755

5982-5158

PCBs en Pescados y Aceite de

Pescado

5990-6236EN 5982-5755

5982-5158

Hormonas en camarones y gambas 5990-6589EN 5982-5650

5982-4956

http://www.agilent.com/chem/SampliQ

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Agilent Restricted

Page 16

Aprenda hoy más en www.agilent.com/chem/SampliQ

Aplicación Literatura Kit QuEChERS

usados

Pesticidas en Te verde 5990-6400EN

5982-5650

5982-5356

Pesticidas en residuos de manzana 5990-3938EN , 5990-4468EN,

5990-3937EN, 5990-4068EN,

5990-4073EN

5982-5650

5982-5021 y 5982-5056

Universal d-SPE. Pesticidas en

lechuga y manzana

5990-6558EN

5982-5755

5982-0028

Pesticidas en Aceites Esenciales 5990-6432EN

Pesticidas planares en espinacas 5990-4247EN 5990-4248EN

5990-4305EN 5990-4395EN

5982-5755

5982-5222

5982-5258

Fármacos en compuestos biológicos Próxima Publicación

Aplicaciones QuEChERS en 2010: más alla de

los Pesticidas en Frutas y Vegetales

http://www.agilent.com/chem/SampliQ

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25 ng/mL 250 ng/mL 500 ng/mL

Analitos %Recuperación RSD (n=6) %Recuperación RSD (n=6) %Recuperación RSD (n=6)

Naftaleno 80.35 3.29 96.77 4.23 98.64 1.88

Acenaftileno 95.28 2.30 103.36 2.80 101.02 2.27

Acenaftaleno 92.28 2.51 101.18 2.87 100.69 2.34

Fluoreno 95.98 2.99 105.94 2.82 105.00 1.28

Fenantreno 100.51 3.46 104.93 2.71 103.25 1.70

Antraceno 107.38 3.51 105.95 3.45 105.38 1.74

Fluoranteno 113.27 3.87 105.76 3.33 103.64 1.81

Pirene 113.55 3.51 103.99 3.24 102.29 1.94

Benzo[a]antraceno 129.79 3.41 101.45 3.91 100.61 3.24

Criseno 116.75 4.01 98.55 4.17 95.95 5.61

Benzo[b]fluoranteno 131.20 3.70 98.77 4.08 98.08 3.24

Benzo[k]fluoranteno 139.45 2.52 99.13 3.98 95.31 4.54

Benzo[a]pireno 125.30 3.68 95.33 3.89 96.82 1.80

Indeno[1,2,3-cd]pireno 119.51 3.47 94.57 3.23 93.71 2.55

Dibenzo[a,h]antraceno 126.35 3.54 98.55 3.50 98.85 2.24

Benzo[g,h,i]perileno 114.91 4.93 97.30 3.37 95.63 1.83

PAHs en Pescado Pargo Rojo fortificado

Lutjanus campechanus

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Plaguicidas en Te Verde fortificado con QuEChERS

10 ng/g 50 ng/g 250 ng/g

Analitos %Recuperación RSD (n=6) %Recuperación % RSD (n=6) %Recuperación

% RSD

(n=6)

Acefato 80.5 5.4 91.7 2.9 88.9 8.2

Pimetrozina 43.1 3.0 42.2 3.4 43.4 9.8

Carbendazima 114.6 11.6 97.6 2.0 105.0 6.2

Tiabendazol 98.1 6.9 90.4 2.4 81.7 5.8

Imidacloprid 104.3 11.7 108.6 2.5 93.9 7.9

Imazalil 97.5 4.4 87.8 5.6 92.4 4.6

Propoxur 98.1 2.4 110.2 1.7 107.8 3.9

Carbaril 89.7 11.2.14 104.9 3.3 108.1 5.2

Ciprodinil 84.9 2.1 92.5 3.7 93.9 5.5

Etoprofos 103.4 3.1 111.2 3.2 104.9 5.7

Penconazol 108.7 2.9 94.3 4.5 89.8 3.3

Kresim-metil 105.7 12.4 96.4 2.5 99.2 5.5

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Cromatogramas MRM de muestra fortificada con 50 ng/g extraida con el método EN . Identificación de

picos: 1. Acefato 2. Pimetrozina, 3. Carbendazim, 4. Tiabendazol, 5. Imidacloprid, 6. Imazalil, 7. Propoxur, 8.

Carbaril, 9. Ciprodinil, 10. Etoprofos, 11. Penconazol, 12. Kresoxim-metil, Est. Interno: TPP

Plaguicidas en Te Verde: LC/MS/MS

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Extracción Líquido/Líquido en Soporte Sólido (SLE)

Ventajas en el flujo de trabajo

• Método simple y general.

• Sin emulsiones

• Menos cristalería (especialmente con muestras grandes)

• Amplio rango de analitos extraidos

• Posibilidad de automatización

• Altas tasas de recuperación y eluyentes más limpios

Productos disponibles

ChemElut: Cartuchos empaquetados con sorbente

„hydromatrix „ , tierra de diatomeas.

Hydromatrix: Sorbente a granel suelto para usar en

aplicaciones dispersivas o personalizadas.

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Page 22 -- Agilent Sample Preparation Tour 2011

Aplicaciones de alimentación (Lutz Alder)

Matrices típicas: pepino, limòn, harina de trigo, avellanas y pasas.

Flujo de trabajo

Añadir agua a 10g

de muestra. Total

presente más

añadida:10mL

Homogeneizar

con 20mL metanol

(+centrifugación)

Añadir solución NaCl a

una alicuota y empapar

en tierra de diatomeas.

Eluir con CH2Cl2

Evaporar a sequedad

y reconstituir en

metanol.

LC-ESI-MS/MS

Pesticidas ácidos

Pesticidas neutros

Método “antíguo”: tierra de diatomeas no

tamponada en cartucho de 5mL

Método Modificado: tierra de diatomeas

tamponada (pH 4.5) en cartucho de 3mL

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>100 analitos: 23 clases de sustancias

Carbamates (incl. metabolites) Sulfonyl ureas Organophosphates Other (14 substance classes)

3,4,5-Trimethacarb (Landrin) Amidosulfuron Acephate Atrazin

3-Hydroxycarbofuran Bensulfuron-methyl Demeton-S-methyl Azoxystrobin

Bendiocarb Chlorsulfuron Demeton-S-methyl-sulfon Bromoxynil

Carbaryl Cinosulfuron Dimethoat Clethodim

Carbofuran Flazasulfuron Fosthiazate Clethodim-imin-sulfon

Desmethylformamido-pirimicarb Iodosulfuron Methamidophos Clethodim-imin-sulfoxid

Desmethyl-pirimicarb Metsulfuron-methyl Monocrotophos Clethodim-sulfon

Ethiofencarb Nicosulfuron Omethoat 5-Hydroxy-clethodim-sulfon

Ethiofencarbsulfon Primisulfuron-methyl Oxydemeton-methyl Clethodim-sulfoxid

Ethiofencarbsulfoxid Prosulfuron Vamidothion Cyprodinil

Fenoxycarb Rimsulfuron Daminozid

Furathiocarb Thifensulfuron-methyl Benzimidazoles Desmedipham

Methiocarb (Mercaptodimethur) Triasulfuron 5-Hydroxythiabendazol Fenhexamid

Pirimicarb Tribenuron-methyl Carbendazim Fenpropiomorph

Promecarb Triflusulfuron-methyl Thiabendazol Florasulam

Propamocarb Thiophanat-methyl Fludioxonil

Propoxur Benzoyl ureas Imazalil

Flufenoxuron Urea herbicides Ioxynil

Oxim-carbamates (incl. metabolites) Diflubenzuron Diuron Iprovalicarb

Aldicarb Teflubenzuron Isoproturon Isoxaflutole

Aldicarb-sulfoxid Hexaflumuron Linuron Metalaxyl

Aldoxycarb (Aldicarb-sulfon) Triflumuron Metamitron

Butocarboxim Neonicotinoids Metolachlor

Butocarboxim-sulfoxid Oxyalkanoic acids Imidacloprid Phenmedipham

Butoxycarboxim 2,4-D Thiacloprid Pymetrozin

Methomyl MCPA Pyridat

Oxamyl Mecoprop-P Pyridat Metabolit

Thiodicarb Fluazifop-P-butyl Pyrimethanil

Thiofanox Haloxyfop-ethoxyethyl Quinmerac

Thiofanox-sulfon Haloxyfop-methyl Spiroxamine

Thiofanox-sulfoxid Quizalofop-ethyl Tebuconazol

Tebufenozid

Trabajo realizado por Lutz Alder y Jeannette Klein, BgVV Berlin

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Datos de recuperación

Recoveries of 109 pesticides

Lemon without cleanup at 0.01mg/kg

33

0 1

9

15

33

16

2 0 0 0 00

10

20

30

40

n.m

.

0-2

0%

20

-40

%

40

-60

%

60

-80

%

80

-10

0%

10

0-1

20

%

12

0-1

40

%

14

0-1

60

%

16

0-1

80

%

18

0-2

00

%

>2

00

%

nu

mb

er

of

pesti

cid

es

Recoveries of 109 pesticides Lemon with

ChemElut at 0.01 mg/kg

12

48 10

2116

2 1 2 0 1

40

0

10

20

30

40

n.m

.

0-2

0%

20-4

0%

40-6

0%

60-8

0%

80-1

00%

100-1

20%

120-1

40%

140-1

60%

160-1

80%

180-2

00%

>200%

nu

mb

er

of

pesti

cid

es

Trabajo desarrollado por Lutz Alder y Jeannette Klein, BgVV Berlin

Excelentes recuperaciones y bajos RSDs

Solamente dos analitos altamente ácidos no se recuperan

Recuperaciones de 109 pesticidas

Limón sin cleanup a 0.01 mg/kg

Recuperaciones de 109 pesticidas

Limón con ChemElut a 0.01 mg/kg

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La aplicación muestra el desarrollo y validación de 17 plaguicidas

y metabolitos de diferentes clases químicas.

Insecticidas: Carbofurano (Ca), Metiocarb (Mh), Pirimicarb (Pi), Dimetoato (Dm), Fipronil (Fi),

Imidacloprid (Im)

Herbicidas: Amidosulfuron (Am), Rimsulfuron (Ri), Atrazine (At), Simazine (Si), Cloroturon

(Ch), Linuron (Li), Isoxaflutol (Is), Metosulam (Mo)

Fungicidas: Dietofencarb (De)

Metabolitos: Metiocarb sulfoxido (Mhs), 2-Hidroxitertbutilazina (TOH)

Analisis Multiresiduos de Plaguicidas en Mieles

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Nota de AplicaciónSI-01002

Comparación de recuperaciones

de plaguicidas entre Extracción

Líquido/Líquido en Soporte Solido

(SLE) en Chem Elut y Extracción

Clásica liquido-liquido (LLE).

14 de17 compuestos

exhibieron mayores

recuperaciones con

SLE.

3 compuestos

indetectables fueron

detectados con SLE

SLE mejora la LLE

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Bond Elut Plexa

Un nueva clase de Material Polimérico SPE

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La Familia Bond Elut Plexa

Bond Elut Plexa

Polímero No-polar con una superficie hidroxilada es la mejor opción para un amplio rango de analitos básicos, neutros y ácidos.

Bond Elut Plexa PCX

Basado en Plexa, conun intercamiador catiónico fuerte, específicamente diseñado para proporcionar resultados más efectivos para compuestos básicos con un amplio rango de pKa y logP

Bond Elut Plexa PAX

basado en Plexa, con un intercambiador aniónico fuerte, específicamente diseñado para proporcionar resultados más efectivos en compuestos ácidos con un amplio rango de pKa y logP

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Como funciona Bond Elut Plexa

Aplicación de Muestra Lavado

Largas Proteínas

endógenas no pueden

acceder a los poros

Los analitos permanecen

enlazados fuertemente

con el núcleo

hidrofóbico del polímero

La estructura del poro

está diseñada especialmente

para permitir un elución excelente

El analito es

transferido

dentro

del polímero

con una

cinética

excelente

Componente hidrofílico

del polímero

permitiendo una

excelente transferencia

de fase Las Proteínas

endógenas

son eliminadas

Se obtiene

un extracto limpio

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•Plexa – Una nueva clase de Polímero

Las drogas

polares y no

polares enlazan

con la parte

hidrofóbica del

final del poro en

la estructura de

SDVB

Hay un ligando hidroxilado en la superficie de y en

las zonas superficiales de los poros. En el interior

de los poros hay material hidrofóbico. A diferencia

de otros materiales poliméricos del mercado, no hay

grupos amida derivados de la n-vinyl pyrrolidona que

contribuyen al mantenimiento en la superficie de

interferencias de la matriz.

Proteínas excluidas La frecuencia de los

grupos OH se reduce

Grupos OH Hidrofílicos

DVB Hidrofóbico

Cambio en polaridad

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Como funciona

Bond Elut Plexa PCX

CARGA Superficie hidrofílica permite una

excelente transferencia de fase

de los analitos básicos a los

lugares de intercambio catiónico

del polímero

LAVADO Los analitos se mantienen

fuertemente enlazados al

polímero mediante

interacciones iónicas fuertes

ELUCIÓN El cambio de pH permite la

elución de los analitos de

los sitios de intercambio catiónico

Las largas Proteínas

endógenas no pueden

acceder a los poros

Interferencias como lípidos

se pueden lavar sin perder

analitos básicos

Analitos limpios con una

recuperación elevada

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Recuperaciones con Plexa frente a Otro Polímero

Analyte Plexa

Other

Polymer pKa LogP

Albuterol 97.9 115.4 5.9 1.3

Atenolol 97.0 94.0 4.2 4.2

Loratadine 71.0 49.0 5.7 1.5

Metoprolol 92.0 74.0 5.7 1.5

Naltrexone 85.7 13.0 4.9 5.2

Pravastatin 85.0 59.0 4.9 5.2

Propranolol 55.0 35.0 4.9 5.2

Zolpidem 93.0 96.8 9.9 3.4

Plexa proporciona unas recuperaciones absolutas iguales o mejores

que otros polímeros para compuestos con un amplio rango de pKa y

logP

•Condiciones: Recuperación Absoluta a partir de plasma humano (vs. patrón postextracción.)

•Condiciones básicas de carga, n=6, 200 ng/ml

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Recuperación Absoluta vs. Recuperación Relativa

Recuperación Absoluta (AR)

1 - Plasma + ISTD + fármaco

2 - Extracción

3 - Inyección

Comparado con:

Fase Móvil+ ISTD + fármaco

– No extracción, no hay

pérdidas en las

recuperaciones

– No plasma, no hay efectos

de matriz

Recuperación Relativa (RR)

1 - Plasma + ISTD + fármaco

2 - Extracción

3 – Inyección

Comparado con:

Un gráfico de farmacos de control

extraidos (recta de calibración)

– Los fármacos son los mismos y se

deberían extraer con las mismas

eficiencias

– Si las curvas de calibración se hacen

con datos de recuperación del 80%, y los

desconocidos se recuperan al 80%, las

recuperaciones relativas mostrarán un

100%!!

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•Recuperación Absoluta vs. Recuperación Relativa

• Recuperaciones relativas

– Se añaden concentraciones conocidas de patrón en la matriz, extraen(SPE), y luego se crea una recta de calibración

– Se usa la recta de calibración para calcular las concentraciones del compuesto desconocido

– Se puede enmascarar los efectos de la supresión iónica

• SI el patrón se extrae al 80% de recuperción, y el desconocido también, se mostrarán resultados de recuperación del 100%.

• Las recuperaciones Absolutas no “suprimen” estos efectos

– Se compara un desconocido con el patrón inyectado directamente

• Pequeñas diferencias entre las recuperaciones absolutas vs. relativas es indicativo de la mayor limpieza del extracto o de características de extracción superiores

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Recuperación Absoluta vs. Recuperación Relativa

Recuperación Absoluta

Recuperación Relativa

Pequeñas diferencias entre AR y RR indican mayor eficiencia de extracción y menor

périda de señal debidoa la supresión iónica.

Diferencias mayores indican problemas de sensibilidad debidas a baja eficiencia de

extracción o supresión iónica

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•Efectos de Matriz

Definición de Efectos de Matriz(Matuszewski, 2003)

1. Efecto de Matriz absoluto.

Diferencia entre la respuesta de analitos igualmente

concentrados(patrones)en el disolvente y en extractos de matriz.

Caso 1. Supresión de señal:

Este es el más habitual.

Caso 2.. Aumento de la señal

Se puede observar cuando la muestra patrón contiene un número muy

grande de analitos mientras que el extracto de matriz contiene un único

analito.

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Cómo identificar la Supresión Iónica.

Experimento de Infusión post-columna

37

Bomba Masas

Muestra (matriz) inyectada

Columna

Jeringa de Infusión Señal MS

Tiempo

Muestra (matriz) (SPE)

Gradiente. Solo analito

Isocrático. Solo analito

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Precisión mejorada - Supresión iónica reducida

PCX

Otro Polimero La superioridad del Bond Elut PLexa PCX es

evidente en la eliminación de la supresión iónica

inducida por la matriz.

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Consejo: Evaluación de la Supresión Iónica

Forma Sencilla:

Comparara las recuperaciones

absoluta y relativa (si la diferencia es

>10% después de n = 3 entonces

tenemos un efecto de matriz

significativo.

Comprehensivo:

Hacer un experimento de infusión

post columna isocratico o gradiente

(preferido)

Adicionalmente:

Monitorizar la transición 184184

para lípidos

Recuperación Absoluta

Recuperación Relativa

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Bases/Neutros

Acondicionamiento: 500 μL MeOH 500 μL Agua

Aplicar la muestra: Acuosa c/ 2% NH4OH

Lavado: 500 μL 5% MeOH

Elución: 500 μL MeOH

Acidos

Acondicionamiento: 500 μL MeOH

500 μL Agua

Aplicar la Muestra: Acuosa

c/ 1% HCO2H

Lavado: 500 μL 5% MeOH

Elución: 500 μL MeOH

Metodología Plexa Sencilla

Métodos para 30 mg Plexa en placa de 96 pocillos

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Metodología Plexa PCX

Bases

Acondicionamiento: 500 μL MeOH

500 μL Agua

Aplicar la Muestra: Acuosa

c/ 2% ac. fosfórico

Lavado Ácido: 500 µL 2% ácido fórmico

Lavado Neutro: 500 µL MeOH:ACN (1:1 v/v)

Elución: 500 µL 5% NH3 en

MeOH:ACN (1:1)

Métodos para 30 mg Plexa en placa de 96 pocillos

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Bond Elut Carbon: Analisis de Plaguicidas

Bond Elut Carbon:

Optimizado para el Análisis de Plaguicidas

• Excelente retención para orgánicos

pequeños, incluyendo aquellos demasiado

polares para ser retenidos en C18 o SPE

polimérica.

• La eliminación de la clorofila y otros

pigmentos produce menos interferencias.

• Más amplia retención y más fácil elución de

los analitos en toda la escala de polaridad,

para mejorar el análisis de residuos múltiples.

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Bond Elut Carbon/NH2 y Bond Elut Si

Lista de Positivos Japonesa: Extracción con disolventes a partir de alimentos, seguido por:

Método I

Acondicionar un cartucho silica gel con carbon

grafito/aminopropilsilanizado ( 500mg/500mg) con

10 ml de acetonitrilo/tolueno (3:1) (Bond Elut

Carbon/NH2 , 500mg/500mg, 6ml, Nº Catalogo:

12252202). Aplicar la solución obtenida del paso

de la extracción al cartucho y eluir el cartucho con

20ml de acetonitrilo/tolueno (3:1)

Recoger el volumen total de eluyente. Concentrar el

eluyente a 1 ml o menos a 40ºC o menor. Añadir 10

ml de acetona y concentrar a 1 ml o menos a 40ºC

o menor. Añadir 5 ml de acetona a la solución

concentrada y concentrar a sequedad

Disolver el residuo en metanol para hacer una

solución de 4 ml. Usar esto como solución de test

Método II

Acondicionar un cartucho de silica gel (500mg) con

5ml de metanol, 5 ml de acetona, y 10 ml de n-

hexano en este orden (Bond Elut Si, 500mg, 10 ml,

NºCatalogo: 14113036). Aplicar la solución obtenida

del paso de extracción anterior al cartucho.

Eluir el cartucho con 10 mL de

acetona/trietilamina/n-hexano (20:0.5:80), y

deshechar el eluyente.

Eluir el cartucho con 20 mL de

acetona/metanol (1:1). Recoger el volumen total

de eluyente.

Concentrar el eluyente a sequedad a 40ºC o

menos. Disolver el resíduo en metanol hasta 4 mL.

Usar esto como solución de test.

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Positivos Japoneses: Alimentos Sólidos

Para vegetales y alimentos

Extracción

Tamaño de muestra 10.0 g

Para granos, cereales y judias

Tamaño de muestra 20.0 g

Extracción

Bond Elut C18 (1 g)

1. Acondicionar con 10 mL de ACN

2. Aplicar 20mL extracto

3. Extraer con 2 mL de ACN

Eliminar agua con Na2SO4

Filtrar, concentrar

Bond Elut Carbon/NH2 6mL (500mg/500mg), P/N 12262202

1. Acondicionar con 10 mL de tolueno:ACN (1:3)

2. Aplicar 20mL extracto

3. Extraer con 10 mL de tolueno:ACN (1:3)

Concentrar

Análisis GC/MS(MS) (DB-35ms UI)

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Micotoxinas

Son metabolitos secundarios producidos por hongos microscópicos y que

contaminan una gran varidad de plantas de cultivo y sus frutos antes o

después de la cosecha, y que son capaces de causar enfermedad y

muerte en humanos y otros animales.

Clases principales de Micotoxinas:

Aflatoxinas B1,B2, G1 y G2 (Aspergillus)

Ocratoxina A (Penicillium verrucosum)

Patulina (otro Penicillium)

Fumonisinas

Tricotecenos: (e.g. Deoxinivalenol, HT-2)

Zearalenona y sus metabolitos Fusarium

Micotoxinas

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Bond Elut Mycotoxin

Técnicas Tradicionales

Columnas de Immunoafinidad (IAC)

Extracciones altamente selectivas con altas

recuperaciones, pero se necesitan columnas IAC

diferentes para cada toxina.

Cartuchos Carbon Vegetal-Alumina

Las recuperaciones de los analitos más polares se

ven a menudo comprometidas con este

procedimiento.

Una variedad de hongos Fusarium producen diferentes toxinas de la clase de

los tricotecenos. Los tricotecenos difieren mucho en polaridad y solubilidad.

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Bond Elut Mycotoxin

Una aproximación con SPE?

• Sorbente SPE para el clean-up cereales y alimentos

basados en cereales contaminados por toxinas de

Fusarium.

• Extracción en Fase Solida basada en un mecanismo

de intercambio ióncio.

• Unica columna y método para 12 Tricotecenos más

Zearalenona tipo A y B

• Excelente purificación : Las micotoxinas pasan el

cartucho, mientras que las impurezas se retienen en

el sorbente.

• Se pueden usar estandar interno para los cálculos de

recuperaciones.

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Cereales: Extraer 25 g de muestra finamente molida con una solución de 100 mL

acetonitrilo/agua (80/20; v/v) mediante mezclado a alta velocidad durante 3

minutos. Luego Filtrar.

Vino y Cerveza: Desgasificar y Filtrar

• Pasar 4 mL del filtrado a través del cartucho Bond Elut Mycotoxin.

• Evaporar 2 mL del eluato a 50 C con una ligera corriente de nitrógeno.

• Reconstituir en 0.5 mL acetonitrilo/agua (20/80; v/v). Inyectar 10 µL en el

LC/MS/MS para analizar.

Notas de Aplicación 000295 y SI-01075

Metodologías Simples

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Recuperaciones: Cerveza de trigo y Vino de arroz

preparación de muestras en matrices alimenticias: spe y ... · alimenticias: spe y quechers ....

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