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DOCUMENTO MARCO PARA LA EVALUACIÓN DE SEVERIDAD

DIRECTIVA 2010/63/EUPROTECCIÓN DE LOS ANIMALES UTILIZADOS PARA FINES CIENTÍFICOS

Preocupándonos de los animales hacia una ciencia mejor

medio ambiente

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Índice

Documento de trabajo sobre un marco para la evaluación de la severidad p. 2 - 24

Ejemplos para ilustrar el proceso de clasificación de la severidad,

la evaluación diaria y la evaluación de la severidad real p. 25 - 96

1

Autoridades nacionales competentes en materia de aplicación de la

Directiva 2010/63/UE, relativa a la protección de los animales utilizados

para fines científicos

Documento de trabajo sobre un marco para la evaluación de la severidad

Bruselas, 11 y 12 de julio de 2012

La Comisión creó un grupo de trabajo de expertos (GTE) a fin de evaluar la severidad de los

procedimientos para facilitar la aplicación de la Directiva 2010/63/UE, relativa a la

protección de los animales utilizados para fines científicos. Se invitó a todos los Estados

miembros y a las principales organizaciones de partes interesadas a que designaran expertos

para participar en el grupo de trabajo.

El GTE para la evaluación de la severidad se reunió en dos ocasiones, a saber: en diciembre

de 2011, para abordar el tema de los animales modificados genéticamente, y en mayo de

2012, para deliberar sobre un marco general relativo a la evaluación de la severidad real que

experimentan los animales durante los procedimientos.

Este documento es el resultado del trabajo de las dos reuniones del GTE, de las

deliberaciones con los Estados miembros, así como de las aportaciones jurídicas de la

Comisión a la idea de un marco relativo a la evaluación de la severidad, sus elementos,

participantes y herramientas y métodos de trabajo. Fue apoyado por las autoridades

nacionales competentes en materia de aplicación de la Directiva 2010/63/UE en su reunión de

los días 11 y 12 de julio de 2012.

Exención de responsabilidad:

El siguiente texto tiene por finalidad servir de orientación para ayudar a los Estados

miembros y otros afectados por esta Directiva a llegar a un acuerdo común sobre las

disposiciones que se recogen en ella. Todas las observaciones deben considerarse en el

contexto de la Directiva 2010/63/UE, relativa a la protección de los animales utilizados

para fines científicos.

Únicamente el Tribunal de Justicia de la Unión Europea está facultado para interpretar

el Derecho de la UE con autoridad jurídicamente vinculante.

2

Índice

Artículos relacionados de la Directiva 2010/63/UE ................................................................................ 4

Contexto general ..................................................................................................................................... 4

Consideraciones de carácter general para la evaluación de severidad .................................................. 5

Consideraciones previas al estudio ......................................................................................................... 7

Indicadores de severidad ........................................................................................................................ 9

Categorías principales ......................................................................................................................... 9

Factores que deben tenerse en cuenta en la evaluación de la severidad real .................................. 10

Cómo garantizar la coherencia entre la evaluación y la determinación de la severidad real .............. 13

Elaboración de una hoja de evaluación para cada procedimiento ................................................... 13

Coherencia en la evaluación de la severidad real ............................................................................. 14

¿Quién debe hacer aportaciones para la evaluación de la severidad real? ......................................... 15

Herramientas de seguimiento, medios y otras consideraciones .......................................................... 15

Apéndice I - Glosario de observaciones clínicas ................................................................................... 17

Apéndice II – Textos de referencia, directrices y recursos en línea sobre la evaluación del bienestar

de animales involucrados en procedimientos científicos ..................................................................... 21

3

Artículos relacionados de la Directiva 2010/63/UE

Artículo 4, apartado 3: «Los Estados miembros velarán por el refinamiento de la

cría, el alojamiento y los cuidados, así como de los métodos utilizados en

procedimientos, eliminando o reduciendo al mínimo cualquier posible dolor,

sufrimiento, angustia o daño duradero a los animales».

Artículo 15, apartado 1: «Los Estados miembros velarán por que todos los

procedimientos se clasifiquen como "sin recuperación", "leves", "moderados" o

"severos", caso por caso, en función de los criterios de clasificación establecidos en

el anexo VIII».

Artículo 16, apartado 1, letra d): «[su reutilización] se ajusta al dictamen

veterinario teniendo en cuenta la experiencia durante la vida del animal».

Artículo 54, apartado 2: «Los Estados miembros recopilarán y publicarán cada año

información estadística sobre la utilización de animales en procedimientos, incluidos

datos sobre la severidad real de los procedimientos y sobre el origen y especie de los

primates no humanos utilizados. [...]».

Contexto general

La Directiva 2010/63/UE, relativa a la protección de los animales utilizados para fines

científicos, exige que se realice una evaluación prospectiva de la severidad de cada

procedimiento de un proyecto (artículo 15) y se asigne una clasificación de la severidad de

los procedimientos, que podrán ser «sin recuperación», «leves», «moderados» o «severos».

En el anexo VIII se recogen orientaciones sobre los factores que deben tenerse en cuenta al

examinar la severidad prospectiva y se presentan algunos ejemplos de cada categoría de

severidad.

El artículo 54, relativo a la comunicación de información, establece que debe transmitirse

información estadística sobre la severidad real del dolor, sufrimiento, angustia o daño

duradero experimentado por el animal (por oposición a la evaluación prospectiva o

predicción de la severidad realizada en el momento de evaluar el proyecto). Por otra parte, la

severidad real de los procedimientos anteriores será una consideración clave para determinar

si un animal puede volver a utilizarse en otros procedimientos (artículo 16).

Estas medidas permitirán mejorar la calidad de la ciencia y el bienestar mediante el examen

prospectivo de las propuestas de proyectos y, con la inclusión del sufrimiento real

experimentado por el animal, deberían ofrecer mayor transparencia y mejor conocimiento de

los efectos que tienen los procedimientos científicos en el bienestar animal. Entre los

principales beneficios de la evaluación prospectiva, el seguimiento, la evaluación y el

registro de la severidad real cabe citar los siguientes:

Ofrecer oportunidades para, en particular, aplicar el refinamiento y reducir el

sufrimiento, aunque las discusiones prospectivas generalmente permitirán considerar

si es necesario o no utilizar animales (reemplazo) y si el diseño del estudio es

adecuado para reducir al mínimo el uso de animales (reducción).

4

Una mejora del bienestar animal, por ejemplo, si el sufrimiento se reconoce y se alivia

antes.

Una mayor transparencia, ya que las estadísticas reflejarían mejor el impacto real en

el bienestar de los animales.

Una mejor comunicación entre las personas encargadas del uso, el cuidado y el

seguimiento de los animales.

Información para la evaluación retrospectiva del proyecto cuando ésta se realiza

(artículo 39).

Una mejor calidad de los datos científicos gracias a un mayor bienestar de los

animales.

Mayor conocimiento para evaluar la severidad y los signos clínicos, que favorecerá

una mayor coherencia en las evaluaciones siempre que se difundan las estrategias

utilizadas y los resultados, por ejemplo, en publicaciones especializadas, grupos de

debate y reuniones.

Aportaciones a los cursos de formación para investigadores, técnicos y veterinarios de

animales de laboratorio, si los resultados se utilizan para ofrecer ejemplos.

Información basada en la evidencia que pueda utilizarse en evaluaciones prospectivas

de los daños y beneficios que pueda emplearse en un futuro para proyectos similares.

Consideraciones de carácter general para las evaluaciones de severidad

El examen de la severidad de un procedimiento debe ser un proceso continuo, desde el

diseño inicial del estudio, pasando por el seguimiento específico diario de los animales del

estudio durante el proyecto, hasta la evaluación de la severidad «real» al finalizar el estudio,

lo que ofrece la oportunidad de identificar nuevos refinamientos para futuros estudios.

5

Este enfoque es una forma de velar por que se tengan en cuenta y apliquen las tres erres a lo

largo de todo el proceso, de que mejore la comunicación entre todos los participantes y de

que se garantice la coherencia.

EVALUACIÓN DE LA SEVERIDAD – UN PROCESO CONTINUO

Apéndice II Material de referencia

para la evaluación y la puntuación

PLANIFICACIÓN DEL PROYECTO

Apéndice I Categorías principales para elaboración de h ojas específicas de

puntuación de procedimientos y

proyecto s

Evaluación y puntuación de la severidad real

DURANTE EL PROYECTO

Información estadística

Evaluación retrospectiva del proyecto

Apéndice II Material de referencia para elaborar hojas

específicas de puntuación de

procedimientos y proyectos

Se deben desarrollar varios ejemplos del proceso de evaluación de la severidad de proyectos o procedimientos concretos, incluidas hojas de evaluación diaria, herramientas de puntuación, elección de los métodos de seguimiento y evaluación final.

Buena comunicación entre todos los

participantes

Coherencia de las observaciones,

personal formado

Acordar medidas si se observan signos

de dolor, angustia y sufrimiento

Elaborar una evaluación de la severidad

específica para el proyecto,

la especie y la cepa

DESPUÉS DEL PROYECTO

análisis y retroalimentación

Retroalimentació

n para futuros estudios

Asegurar que se incluyan en el proceso personas con todos las competencias necesarias

Elegir las herramientas de seguimiento , la

frecuencia , el tipo de puntuación

Seguimiento diario eficaz

Aportaciones a publicaciones temáticas

Revisión continua del protocolo de

evaluación en caso necesario

Reflejar posibles nuevas aplicaciones de las tres erres

6

La evaluación real de la severidad requiere:

• un enfoque de «equipo», con aportaciones de personas que cuenten con

diferentes conocimientos técnicos, experiencia y prioridades, por ejemplo,

investigadores, técnicos y personal encargado de cuidar a los animales, el

veterinario, etc.;

• una buena planificación;

• una formación inicial y continua adecuadas para todo el personal participante;

• sistemas para evaluar la severidad día a día, adaptados a la especie, la cepa y el

proyecto, que incluyan observaciones fundamentadas y estructuradas de los

animales a intervalos adecuados (por ejemplo, una mayor frecuencia durante y

después de los procedimientos);

• protocolos eficaces y bien fundamentados para evaluar el comportamiento y los

signos clínicos;

• un análisis de las observaciones para emitir un juicio fundamentado sobre la

naturaleza y el nivel de sufrimiento;

• un conocimiento de la severidad de cada procedimiento y de las medidas que

deben tomarse si se alcanza o supera dicha severidad;

• un enfoque coherente de las evaluaciones generales sobre el sufrimiento real

(leve, moderado, severo) en los informes estadísticos;

• una reflexión sobre la efectividad con la que se aplicaron las tres erres, y sobre

si podrían hacerse mejoras en estudios futuros.

Consideraciones previas al estudio

El proceso para asegurar que se reduce al mínimo la severidad durante los procedimientos

científicos comienza en la fase de diseño, al examinar si es o no necesario, y si está o no

justificado utilizar animales para alcanzar los objetivos científicos.

Cuando es necesario y está justificado el uso de animales, es importante asegurarse de

que se elige un modelo apropiado y que el diseño del estudio sea robusto.

Deberían identificarse todos los aspectos del estudio que puedan causar dolor,

sufrimiento, angustia o daño duradero, y se debería plantear cómo pueden reducirse al

mínimo sus efectos, por ejemplo, consultando bibliografía, a otros investigadores, a

técnicos, al veterinario y, en su caso, al órgano encargado del bienestar de los

animales..

Se recomienda que la asignación en la clasificación prospectiva de la severidad de los

procedimientos esté basada en la severidad más alta prevista para cualquier animal del

estudio.

Debería elaborarse un plan para observar a los animales que sea adecuado para el

estudio y adaptado a este. El empleo de una terminología estandarizada que puedan

7

entender todos los que participan en el estudio mejorará la coherencia de los informes

y la interpretación.

Es importante contar con personal suficientemente capacitado y competente para

realizar el estudio y para encargarse del seguimiento y cuidado de los animales.

8

Indicadores de severidad

Algunos comportamientos y signos clínicos pueden utilizarse para evaluar la severidad de los

procedimientos «en el propio alojamiento del animal» (o tanque, corral, etc.). La terminología

utilizada para describirlos debe ser comprensible para todas las personas que intervienen en el

uso, seguimiento y cuidado de los animales. En todo sistema de evaluación de la severidad es

esencial conocer la salud, el comportamiento y el estado de bienestar normales de la especie

(o cepa, en su caso) que se observa.

El objetivo debe ser:

lograr la mejor calidad de vida posible para el animal;

asegurar que se reconozca cualquier sufrimiento causado por los procedimientos

científicos,

y que este se reduzca al mínimo,

manteniendo la coherencia con los objetivos científicos.

Todos los sistemas de evaluación deben detectar de forma eficaz las desviaciones respecto al

estado de salud y bienestar normales y permitir al observador registrar y realizar una

evaluación clara y coherente de cada animal.

Para definir un protocolo de evaluación de la severidad sencillo y jerarquizado que se adapte

correctamente a la especie, cepa, individuo y procedimiento. El proceso para definir un

protocolo de evaluación en el propio alojamiento del animal debería identificar todos los

efectos negativos que puedan producirse durante la vida del animal, incluyendo el

alojamiento, el sistema de cría y alojamiento, el cuidado y la manipulación, así como los

efectos negativos causados por los procedimientos científicos y sus consecuencias. El examen

de todos estos efectos negativos debería establecer indicadores que puedan utilizarse para

evaluar realmente el bienestar del animal en el propio alojamiento del animal . Estos

indicadores deberían adaptarse a la especie, la cepa y los procedimientos experimentales que

se apliquen. Asimismo deberían ser fáciles de entender, identificar y registrar de forma

coherente. No obstante, es importante asegurar que se puedan reconocer y registrar todos los

efectos negativos imprevistos, por ejemplo, en texto libre.

Categorías principales

A continuación se enumera un conjunto de categorías principales aplicables a todas las

especies como punto de partida para elaborar una lista exhaustiva de los indicadores

específicos para cada procedimiento o programa de cuidado de animales. El propósito es

elaborar una lista con los indicadores suficientes para el estudio de que se trate, con el fin de

reducir al mínimo el riesgo de pasar por alto signos de sufrimiento, sin que el sistema sea

excesivamente complejo y requiera trámites burocráticos innecesarios y mucho tiempo.

Las categorías principales son:

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aspecto;

funciones corporales;

entorno;

comportamientos;

indicadores específicos del procedimiento;

observaciones libres (otras observaciones pertinentes).

Los indicadores de cada una de estas categorías pueden adaptarse a cualquier especie.

Deberían utilizarse para elaborar una lista de características observables que puedan ser

evaluadas por una persona con la formación adecuada para emitir un juicio sobre el estado

general de salud y bienestar del animal.

Estos indicadores deberían ser discutidos y seleccionados junto con la persona o personas

encargadas de supervisar el bienestar de los animales y, en su caso, el órgano de encargado

del bienestar animal. Por lo tanto deberían utilizarse para desarrollar sistemas de recogida de

datos específicos para el estudio, a fin de registrar las observaciones, el seguimiento y la

evaluación diarios realizados en el propio alojamiento del animal .En el apéndice I se

presenta un ejemplo de cómo estas categorías principales pueden subdividirse y utilizase para

elaborar criterios adecuados de observación empleando una terminología descriptiva común.

En el apéndice II se presenta información sobre las directrices y recursos en línea que pueden

ayudar a elaborar evaluaciones adecuadas del bienestar de los animales sometidos a

procedimientos científicos.

Factores que deben tenerse en cuenta en la evaluación de la severidad real

Es importante señalar que, dependiendo de la situación concreta, varios elementos pueden

tener un efecto positivo o negativo en la severidad, y es necesario considerar las diferencias

entre especies.

La evaluación de la severidad real debería llevarse a cabo de forma individualizada, caso por

caso, utilizando para ello las observaciones del seguimiento diario de los animales.

Asimismo, pueden utilizarse otros parámetros necesarios para los fines del estudio cuando

sean pertinentes y estén disponibles. Por ejemplo, para el estudio pueden resultar necesarios

indicadores no visibles (como la temperatura y el peso corporal, parámetros bioquímicos o

datos biotelemétricos, como la frecuencia cardiaca), que deberían tenerse en cuenta en la

evaluación de la severidad si pueden brindar información adicional relevante.

La severidad real de la que debe informarse para cada animal debería ser el nivel de severidad

más alto experimentado durante el procedimiento y no debería determinarse por la severidad

al final de este. La evaluación tampoco debería considerarse un simple proceso sumatorio

(por ejemplo, varios procedimientos leves equivalen a una severidad moderada). Esta debería

basarse en la evaluación global de lo experimentado por el animal desde el inicio hasta el

final del procedimiento.

10

En la siguiente lista figuran algunos ejemplos del tipo de elementos que deben tomarse en

consideración y ponderarse al evaluar la severidad real.

Procedimiento, técnica:

Quirúrgico, no quirúrgico.

Nivel y duración del confinamiento.

La no administración de analgésicos o anestésicos cuando uno de ellos o ambos en

otra situación, serían necesarios.

Modelo o procedimiento nuevo.

Elementos del entorno (como el alojamiento o restricciones de alimento o agua).

Estrés o angustia.

Procedimientos repetidos e intervalos entre éstos (también deben tenerse en cuenta la

frecuencia y la combinación de intervenciones «por debajo del umbral»).

Reutilización o uso continuado.

Especie, cepa, fase de desarrollo, experiencias anteriores:

Esta debería ser una consideración importante, pues es necesario comprender la

biología y comportamiento de la especie y la cepa (y, en ocasiones, del individuo)

para poder predecir y evaluar la severidad de forma eficaz.

Especie y cepa.

Origen del animal, por ejemplo, criado para experimentación, asilvestrado o salvaje.

Proveedor (incluidas las condiciones de alojamiento anteriores) y transporte.

Genotipo, fenotipo, sexo, edad, estado inmunitario.

Comportamiento normal y biología (por ejemplo, la importancia relativa de los

distintos sentidos, como la vista para los primates y el olfato para los roedores, y la

forma en que estos pueden verse afectados en el entorno de un laboratorio).

Alojamiento individual o en grupo: justificación para aislar animales sociales, o para

separarlos de grupos establecidos, a corto o largo plazo.

Ritmos diurnos, por ejemplo, el impacto de la realización de procedimientos

científicos o técnicos en animales nocturnos durante el día.

Separación de la madre en todas las especies, incluidos los roedores.

Capacidad cognitiva, consciencia, memoria, percepción de los efectos causados por

los procedimientos.

Frecuencia, intensidad:

No existe un vínculo directo entre la frecuencia y la severidad, es decir, el aumento de

la frecuencia no resulta necesariamente en una mayor severidad. Ello se debe a que el

efecto que tiene la repetición de los procedimientos o las técnicas en la severidad

depende de varios factores, como la intensidad de cada intervención, su duración, la

especie y la experiencia del individuo.

11

Si se repiten las intervenciones, puede producirse una aclimatación, lo que puede

reducir la severidad, por ejemplo, en un primate sometido a procedimientos leves. En

cambio, la repetición puede aumentar la severidad, por ejemplo, debido a la

anticipación ante un procedimiento estresante o el desarrollo de hiperalgesia si se

realiza cirugía.

Se puede llevar a cabo un entrenamiento con refuerzo positivo o «recompensas» tras

los procedimientos.

Debería registrarse el nivel más alto de severidad y no el «nivel de recuperación».

Duración del efecto:

La duración está vinculada a la intensidad (y por consiguiente a la severidad).

Si es posible, utilizar puntos finales humanitarios o científicos tempranos

Eficacia del refinamiento:

Analgesia, anestesia y cuidados postoperatorios apropiados.

Enriquecimiento: tanto enriquecimiento del entorno como alojamiento en grupo para

animales sociales.

Alojamiento, cría y cuidados-tanto si es posible refinarlos de acuerdo con las mejores

prácticas actuales, como si el procedimiento requiere restricciones, como

confinamiento en recintos de menor tamaño (por ejemplo, jaulas metabólicas), suelos

de rejilla o exposición a condiciones medioambientales que puedan causar estrés.

Entrenamiento del animal para que coopere o facilitar la habituación a los

procedimientos.

Eficacia de los protocolos de evaluación en el propio alojamiento del animal..

Severidad acumulativa:

En los procedimientos que impliquen varios pasos o intervenciones, deberían tenerse

en cuenta lo que experimenta cada animal a lo largo de toda su vida, ya que las

limitaciones impuestas a la posibilidad para refinar las condiciones de su alojamiento

o la necesidad de capturarlo, manipularlo o confinarlo con frecuencia, etc., pueden

influir en la severidad.

En caso de reutilización, los procedimientos anteriores.

Es necesario tener en cuenta la experiencia a lo largo de toda la vida, que incluye

elementos como el origen (por ejemplo, «destete» anticipado) y el transporte, cuando

se considera la reutilización.

12

Cómo garantizar la coherencia entre la evaluación y la asignación de la

severidad real

Generalmente es necesario que científicos, técnicos, veterinarios y el personal encargado de

cuidar a los animales realicen aportaciones desde la fase de diseño del estudio para contar con

datos que permitan tomar una decisión fundamentada sobre la severidad real al final del

procedimiento. La asignación final de una categoría de severidad real será resultado de un

análisis de los registros de las observaciones del comportamiento, los signos clínicos y otros

parámetros pertinentes realizadas en el propio alojamiento del animal.

Entre los elementos que contribuyen a la coherencia se encuentran:

- la incorporación de diferentes conocimientos técnicos, experiencias y prioridades, es

decir, un «enfoque de equipo»;

- la formación en el uso del protocolo de evaluación diaria (incluida la terminología

común empleada para describir las observaciones);

- los conocimientos técnicos sobre la salud, el bienestar y el comportamiento de los

animales;

- un examen periódico de los resultados;

- la comunicación entre todos los encargados de realizar el estudio y el seguimiento de

los animales (descendente, ascendente, entre personas de diferente nivel y personas

del mismo nivel);

- la supervisión, a nivel local (por ejemplo, el órgano encargado del bienestar animal),

regional, nacional y de la UE.

Los siguientes aspectos clave deberían tenerse en cuenta para garantizar la coherencia de la

evaluación de la severidad real:

Elaboración de una hoja de evaluación para cada procedimiento

Deberían elaborarse hojas de evaluación adaptadas a la especie, cepa y

estudio, las cuales deben consensuarse antes del inicio del proyecto.

Toda la información pertinente disponible debería utilizarse de forma eficaz

para elaborar estas hojas de evaluación, por ejemplo, experiencias anteriores,

resultados de estudios in vitro o in silico, búsqueda en la bibliografía,

información de estudios piloto y signos clínicos observados en personas u

otros animales.

La información sobre los parámetros que deben observarse y la forma en que

debería realizarse el seguimiento deberá estar disponible en el propio

alojamiento del animal.

La clasificación del nivel de severidad prospectiva «dictará» hasta cierto

punto, el grado de participación necesario a nivel operativo, si se necesita un

enfoque de equipo durante el seguimiento, y qué personas deberían participar

en las observaciones y el proceso de registro. Las personas que hayan

13

elaborado el protocolo de evaluación para el estudio deberían realizar la

asignación final de la severidad real o confirmarla.

Dependiendo de la complejidad del estudio, puede resultar conveniente utilizar

hojas de evaluación para cada parte del estudio, por ejemplo, una hoja para

cirugía o cuidados postoperatorios, en combinación con una evaluación del

protocolo adaptado al estudio.

En algunos casos, las hojas de evaluación para el estudio deberían incluir

también información pertinente para la gestión de colonia, por ejemplo, datos

reproductivos y de crecimiento.

Coherencia de la evaluación de la severidad real

La evaluación de la severidad real se lleva a cabo al final del procedimiento y para ello es

necesario emitir un juicio sobre la severidad global que realmente ha experimentado el

animal, basado en las evaluaciones diarias y teniendo en cuenta los procedimientos

realizados.

Un sistema que se usa habitualmente consiste en definir los niveles «leve»,

«moderado» y «severo» de cada uno de los indicadores utilizados en las

evaluaciones diarias, y luego emitir un juicio acerca de su severidad caso por

caso.

Al igual que ocurre con el seguimiento diario, es esencial que los criterios

de evaluación se adapten al procedimiento, la especie y la cepa; por

ejemplo, una pérdida de peso corporal del 10 % tendrá distintas implicaciones

para la salud y el bienestar de una rata joven en crecimiento, de un ratón

adulto con un tumor de rápido crecimiento o de un perro adulto.

Otro factor esencial es tener en cuenta el período en que se producen algunos

de estos indicadores, en particular en lo que se refiere a la pérdida de peso y el

consumo de alimentos y agua.

La evaluación se efectuará utilizando los registros de las evaluaciones diarias, teniendo en

cuenta el procedimiento realizado en el animal, la duración de los efectos adversos y si el

animal fue reutilizado. Aunque todo ello implica un cierto grado de subjetividad, la

formación de los observadores debería permitir reducirla.

Atribución de la severidad real cuando se encuentra a los animales muertos:

Si se encuentra a un animal muerto, es decir, si no ha sido eutanasiado, puede ser

consecuencia de un procedimiento experimental o de otras causas no relacionadas con

este1.

1 A efectos de los informes estadísticos, la severidad real debería hacer referencia ante todo a la severidad de los

procedimientos experimentales y no a incidentes no relacionados, como brotes de enfermedades o inundación de

las jaulas. Estos tipos de incidentes están relacionados con problemas de salud o prácticas de cría y

14

La severidad real de los animales encontrados muertos debe consignarse como

«severa», a menos que pueda tomarse una decisión fundamentada de que el animal no

experimentó un sufrimiento severo antes de morir.

Si es poco probable que la muerte haya estado precedida por un sufrimiento severo, la

clasificación de la severidad real debería reflejar aquella observada antes de la muerte.

Es necesario tomar debidamente en consideración factores como la frecuencia del

seguimiento, el uso de analgésicos, etc.

Únicamente los animales vivos pueden experimentar «daño (duradero)».

Deberían elaborarse ejemplos para ilustrar el proceso de clasificación de la severidad, la

evaluación diaria y la evaluación de la severidad real final, y ponerlos a disposición de la

comunidad científica.

¿Quién debe dar información para la evaluación de la severidad real?

La observación y el registro de los efectos a menudo son procesos separados

de la asignación de la severidad real.

Deberían establecerse responsabilidades claramente definidas para garantizar

el seguimiento diario de los animales, con el apoyo y supervisión adecuados.

Debería establecerse un proceso de verificación para promover la coherencia,

por ejemplo, mediante la comparación de las puntuaciones de evaluaciones

hechas por diferentes personas.

Las funciones de observación y seguimiento de los animales y de elaboración

de las evaluaciones de la severidad real deberían ser flexibles y ajustables de

acuerdo con la complejidad y la severidad del estudio de que se trate, aunque

la responsabilidad legal de detectar y reducir al mínimo el sufrimiento

corresponde a la persona designada en la autorización del proyecto.

Los órganos encargados del bienestar animal también deben desempeñar un

papel, en del establecimiento, para garantizar la coherencia.

Los comités nacionales y las autoridades competentes también pueden

contribuir a promover la coherencia.

Herramientas de seguimiento, formas de comunicación y otras

consideraciones

En la fase de planificación del proyecto debería considerarse la posibilidad de

utilizar hojas de puntuación.

Las hojas de puntuación deberían ser lo más sencillas posible, pero tan

detalladas como resulte necesario, y adaptadas al tipo de estudio.

mantenimiento y de cuidado de los animales, y no con daños causados por los procedimientos; no obstante,

deben registrarse, investigarse y ser objeto de seguimiento para evitar que se repitan.

15

Pueden utilizarse hojas de evaluación de proyectos anteriores si son adecuadas

para el estudio, la especie y la cepa.

El registro electrónico de datos puede ayudar a garantizar la coherencia y a

facilitar el acceso a toda la información pertinente.

Se recomienda usar un lenguaje y una terminología normalizados.

Los datos registrados deben ser lo más objetivos posible.

Las ventajas y desventajas de i) la puntuación numérica y ii) los sistemas de

observación «binarios» (en los que se señala si los indicadores están

«presentes» o «ausentes) deberían considerarse caso por caso.

Cualquier tipo de registro de observaciones deberían permitir añadir texto

libre, así como indicadores predeterminados, a fin de poder consignar

observaciones imprevistas.

Es esencial una formación eficaz de todo el personal involucrado, que incluya

específicamente la evaluación de la severidad y del bienestar, así como

técnicas de seguimiento.

Debería elaborarse un plan de comunicación que incluya a todo el personal

involucrado. Este plan debería incluir un mecanismo para comunicar

rápidamente resultados imprevistos a todas las personas adecuadas y, en su

caso, a la autoridad competente.

El seguimiento debería ser proporcional a los efectos previstos, ya que los

procedimientos que pueden causar un sufrimiento «severo» requieren un

seguimiento más frecuente y pormenorizado.

Deberían adoptarse criterios de intervención claros, por ejemplo, si se

observan determinados parámetros o si se aprecia un nivel predeterminado de

sufrimiento. Todo el personal involucrado debería conocer estos criterios,

saber qué hacer y a quién dirigirse en caso de que se produzcan.

Si el proceso de evaluación de la severidad se realiza correctamente, los animales y todo

el personal encargado de su cuidado y uso se beneficiarán de las mejoras del bienestar

de los animales, así como de una mayor validez y transparencia científicas.

Una buena comunicación interna y externa sobre el proceso de evaluación de la

severidad y sobre la aplicación de las tres erres permitirá obtener beneficios aún

mayores.

16

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ale

s

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ecto

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ica

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er o

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17

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iel

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falt

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iento

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sado

Pér

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o

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ción –

man

chas

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ña,

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, le

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o h

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reci

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lar,

nas

al,

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gen

ital

, m

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a en

al

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es

pec

ies,

por

ejem

plo

, en

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as

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cesi

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pir

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orz

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nea

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inuci

ón

Tem

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tura

corp

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Aum

ento

o d

ism

inuci

ón

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nte

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cto o

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no c

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cto),

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l oíd

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el e

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ibri

o

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lem

ento

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e en

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imie

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ial

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ión

soci

al

Cam

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con r

espec

to a

l te

mper

amen

to n

orm

al;

inte

racc

iones

ap

rensi

vas

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sivas

con o

tros

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ales

, an

sied

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por

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plo

, re

spues

tas

mar

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as

de

huid

a, o

cult

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nto

)

Ais

lam

iento

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epar

ació

n r

espec

to d

e otr

os

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ales

que

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l gru

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Co

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ort

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ien

tos

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dos

Com

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nto

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o

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pel

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(roed

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icoti

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hac

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erso

nas

u o

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Post

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ovil

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Post

ura

anorm

al

Dea

mbula

ción

an

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al,

coje

ra,

falt

a de

movim

iento

/let

argia

/ren

uen

cia

a

mover

se s

i se

le

esti

mula

Movim

iento

s ca

rente

s de

coord

inac

ión

Abdom

en e

nco

rvad

o, ca

bez

a ca

ída

Otr

os

Tem

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Ata

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iones

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Voca

liza

ción:

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nea

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rovoca

da.

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unas

espec

ies,

com

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s, s

uel

en v

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nte

ult

raso

nid

os,

de

modo q

ue

las

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liza

ciones

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les

son d

e es

pec

ial

inte

rés.

Las

voca

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ciones

de

los

conej

os

tam

bié

n s

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orm

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les

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sonas,

a m

enos

que

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nim

al

esté

angust

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Ind

icad

ore

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ecíf

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Se

iden

tifi

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obre

la

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plo

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e en

cefa

liti

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toin

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imen

tal

(EA

E),

19

pro

ced

imie

nto

de

que

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rate

, su

s posi

ble

s ef

ecto

s

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os

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vis

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esto

s

esto

s in

dic

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cual

quie

r obse

rvac

ión d

e ef

ecto

s neg

ativ

os

impre

vis

tos

en e

l bie

nes

tar

20

Apéndice II

Fuentes de referencia, guías y recursos en línea sobre la evaluación del

bienestar de animales sometidos a procedimientos científicos

American College of Laboratory Animal Medicine (ACLAM) (2006), Guidelines for the

Assessment and Management of Pain in Rodents and Rabbits, descargable en

http://www.tinyurl.com/65ez5vh.

Assessing the Health and Welfare of Laboratory Animals (AHWLA), recurso de formación.

Véase http://www.ahwla.org.uk/index.html.

Canadian Council on Animal Care (CCAC), Welfare assessment. Véase http://www.ccac.ca/,

la sección «Three Rs microsite», y, dentro de esta, búsquese «welfare assessment»

(evaluación del bienestar) (en inglés o francés).

Categorising the severity of scientific procedures on animals - Summary and reports from

three round-table discussions, edición a cargo de Jane A. Smith y Maggy Jennings en nombre

de Boyd Group y la RSPCA, julio de 2004.

Publicado por el Departamento de Animales de Laboratorio de la RSPCA.

FELASA Working Group on the Reporting of Clinical Signs in Laboratory Animals (2012) –

(en prensa).

Institute for Laboratory Animal Research (ILAR) (2008), Recognition and Alleviation of

Distress in Laboratory Animals. Washington, DC: National Academies Press.

Institute for Laboratory Animal Research (ILAR) (2009), Recognition and Alleviation of Pain

in Laboratory Animals. Washington, DC: National Academies Press. Véase

http://dels.nas.edu/animal_pain/.

Johansen R, Needham JR, Colquhoun DJ, et al. (2006), Guidelines for health and welfare

monitoring of fish used in research. Laboratory Animals 40: 323-340.

Joint Working Group on Refinement (2011), A guide to defining and implementing protocols

for the welfare assessment of laboratory animals. Laboratory Animals 45: 1-13.

Leach MC et al. (2008), Identification of appropriate measures for the assessment of

laboratory mouse welfare. Animal Welfare 17: 161-170.

National Centre for the Three Rs (NC3Rs), Welfare assessment. Véase

http://www.nc3rs.org.uk/welfareassessment.

21

National Health and Medical Research Council (2008), Guidelines to Promote the Wellbeing

of Animals Used for Scientific Purposes: The Assessment and Alleviation of Pain and

Distress in Research Animals. Canberra: Australian Government. Véase

http://www.nhmrc.gov.au, búsquese «pain and distress» (dolor y angustia).

Organización de Cooperación y Desarrollo Económicos (OCDE) (2000), Guidance

Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints

for Experimental Animals Used in Safety Evaluation. OECD Environmental Health and

Safety Publications, Series on Testing and Assessment No. 19. París: OCDE.

Wells DJ, Playle LC, Enser WEJ, et al., Assessing the welfare of genetically altered mice.

Versión íntegra disponible en http://www.nc3rs.org.uk/gamice. Resumen en Laboratory

Animals 40: 111-114.

Workman P et al. (2010), Guidelines for the welfare and use of animals in cancer research.

British Journal of Cancer 102: 1555-1577, descargable en

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2883160/?tool=pubmed.

1.2. Otras publicaciones de lectura recomendada

Applied Animal Behaviour Science http://www.applied-

ethology.org/applied_animal_behaviour_scie

nce.html

Animal Technology and Welfare http://www.iat.org.uk/publications/atw.htm

Animal Welfare http://www.ufaw.org.uk/animal.php

Contemporary Topics in

Laboratory Animal Science and

Journal of the American Association

for Laboratory Animal Science

http://www.aalas.org/publications/index.aspx

#ct

Lab Animal y Lab Animal Europe

http://www.labanimal.com/laban/index.html

http://www.labanimaleurope.eu/

Laboratory Animals http://la.rsmjournals.com/

1.3. Palabras clave recomendadas para realizar búsquedas en la bibliografía

Las siguientes palabras clave resultan útiles para buscar información sobre la evaluación de la

severidad:

22

affect (afectar)

harm benefit

assessment

(evaluación de

daños y beneficios)

positive indicators

(indicadores

positivos)

severity scale

(escala de

severidad)

animal welfare

(bienestar de los

animales)

humane endpoints

(puntos finales

humanitarios)

positive welfare

(bienestar positivo)

sickness

behavio(u)r

(comportamiento

de enfermedad)

animal suffering

(sufrimiento

animal)

needs (necesidades)

qualitative

behavio(u)r

assessment

(evaluación

cualitativa del

comportamiento)

stress (estrés)

assessment

(evaluación)

objective

assessment

(evaluación

objetiva)

quality of life

(calidad de vida)

suffering

(sufrimiento)

discomfort

(malestar) pain (dolor)

refinement

(refinamiento)

welfare assessment

(evaluación del

bienestar)

distress (angustia)

pain assessment

(evaluación del

dolor)

score sheets (hojas

de puntuación)

welfare indicator

(indicador de

bienestar)

harm assessment

(evaluación del

daño)

pain measurement

(medición del

dolor)

scoring system

(sistema de

puntuación)

welfare outcomes

(resultados de

bienestar)

Referencias relativas a la clasificación de la severidad real

CCAC (1998), Guidelines on: Choosing an Appropriate Endpoint in Experiments Using

Animals for Research, Teaching and Testing. Canadian Council on Animal Care, disponible

en: http://www.ccac.ca/en_/standards/guidelines (inglés) y

http://www.ccac.ca/fr_/normes/lignes_directrices (francés).

FELASA Working Group on Pain and Distress (1994), Pain and distress in laboratory rodents

and lagomorphs. Laboratory Animals 28: 97-112.

23

Jones HRP, Oates J y Trussell BA (1999), An applied approach to the assessment of severity.

In: Hendriksen CFM. & Morton DB (eds), Humane Endpoints in Animal Experiments for

Biomedical Research. Trabajos de la Conferencia Internacional, 22 a 25 de noviembre de

1998, Zeist, Países Bajos. Royal Society for Medicine Press Ltd., Londres pp. 40-47.

LASA/APC (2008), Final Report of a LASA/APC Working Group to Examine the Feasibility

of Reporting Data on the Severity of Scientific Procedures on Animals. Disponible en:

http://www.lasa.co.uk/publications.html.

Morton, DB y Hau J (2011), Chapter 18: Welfare assessment and humane endpoints. En

Handbook of Laboratory Animal Science, 3rd

Edition, Volume 1 Essential Principles and

Practices. Hau J y Schapiro, SJ (eds.), CRC Press LLC, Estados Unidos, pp. 535-572.

Prescott MJ, Morton DB, Anderson D, Buckwell A, Heath S, Hubrecht R, Jennings M, Robb

D, Ruane B, Swallow J y Thompson P (2004), Refining dog husbandry and care, Eighth

report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement.

Laboratory Animals 38 Suppl 1: S1:1-S1:94.

Wolfensohn S y Lloyd M (2003), Handbook of Laboratory Animal Management and

Welfare, 3rd

Edition. Blackwell Publishing Ltd, Oxford (4ª edición en preparación).

(Todos los enlaces se consultaron por última vez el 24 de mayo de 2012).

24

Eje

mp

los

pa

ra i

lust

rar

el p

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e cl

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s, 1

1 d

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3

El

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Dir

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2010/6

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cie

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n s

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lio d

e 2012,

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men

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plo

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rar

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roce

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e cl

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nal

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com

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ad c

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l

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téc

nic

o d

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imal

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los

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cum

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las

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ridad

es n

acio

nal

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caci

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e la

Dir

ecti

va

2010

/63/U

E e

n s

u r

eunió

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e lo

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s 23 y

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e en

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e 2013.

Al

uti

liza

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plo

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s:

Se

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prá

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s

pro

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a; la

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nci

ón

y

apli

caci

ón

de

la

info

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ctual

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ree

mpla

zo, re

ducc

ión y

ref

inam

iento

; y e

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el e

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25

El

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com

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áti

co.

El

pro

pósi

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mit

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na

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ión,

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el s

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nto

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tiv

o, per

o q

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no r

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pla

cen e

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iter

io p

rofe

sional

.

Cad

a ej

emplo

se

refi

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a un

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tuaci

ón

hip

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tica

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ero

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sta.

No s

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o i

ncl

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los

det

alle

s dis

po

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les

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prá

ctic

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dic

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cien

tes

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s p

ara

exp

lica

r có

mo s

e ap

licó

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pro

ceso

.

Com

o s

e se

ñal

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el

docu

men

to d

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abaj

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ndis

pen

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ceb

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ie,

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y e

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n e

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cim

iento

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ario

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or

ello

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rec

om

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no s

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sen

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cuad

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mas

de

hoja

s de

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n e

n l

os

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s, n

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qu

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mis

mos

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ced

imie

nto

s.

La

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todos

los

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e la

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inar

se p

erió

dic

amen

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rev

isar

se e

n c

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ario

.

Los

ejem

plo

s ta

mb

ién

son

ob

jeto

de

revis

ión

, a

med

ida

que

aum

enta

n l

os

conoci

mie

nto

s so

bre

los

indic

adore

s d

e dolo

r, s

ufr

imie

nto

y a

ngust

ia y

cam

bia

n l

os

enfo

ques

par

a ev

aluar

y c

lasi

fica

r la

sev

erid

ad.

Cad

a ej

emplo

lle

va

una

fech

a; c

onsu

lte

el s

itio

web

de

la

Com

isió

n E

uro

pea

en h

ttp

://e

c.eu

rop

a.eu

/en

viro

nm

ent/

chem

ical

s/la

b_a

nim

als/

inte

rpre

tati

on

_en

.htm

par

a busc

ar a

ctual

izac

iones

.

Agra

dec

ere

mos

la

rec

epci

ón

d

e co

men

tari

os

sobre

la

uti

lidad

de

los

ejem

plo

s y

suger

enci

as

par

a la

in

clusi

ón

de

otr

os

pro

cedim

iento

s; e

nvíe

su

s obse

rvac

ion

es a

en

v-la

bo

rato

ry-a

nim

als@

ec.e

uro

pa.

eu.

26

Índ

ice

Model

o 1

– E

studio

s onco

lógic

os.

...…

...…

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

…..…

28

Model

o 1

a –

Mante

nim

iento

de

línea

s de

célu

las

de

tum

ore

s hum

anos

en r

ato

nes

des

nudos

inm

un

oló

gic

am

ente

dep

rim

idos.

....

..29

Model

o 1

b –

Efi

caci

a d

e nuev

os

fárm

aco

s en

el

crec

imie

nto

de

tum

ore

s……

……

…...…

..........................................

.....................3

5

Model

o 2

– E

nce

fali

tis

auto

inm

une

exper

imen

tal

(EA

E)

en r

atones

……

……

……

……

……

……

……

……

…......…

……

……

……

.……

...4

2

Model

o 3

– A

rtri

tis

……

……

...…

……

……

……

……

……

……

……

……

..............

……

……

……

……

……

……

......…

……

……

….…

..…

52

Model

o 4

– I

ctus

……

……

...…

……

……

……

……

……

……

……

…..................

……

……

……

……

……

……

……

.....…

……

……

.…..…

63

Model

o 5

– P

roducc

ión d

e an

ticu

erpos

poli

clon

ales

en c

onej

os.

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

....…

……

…..…

..…

77

Model

o 6

– P

roducc

ión y

man

tenim

iento

de

anim

ales

modif

icad

os

gen

étic

amen

te …

……

……

……

……

……

……

……

....…

……

…..…

.…84

Model

o –

Gen

Atm

1a

(Fund

ing

)La

b…

……

……

……

.……

……

……

….…

……

……

……

……

……

……

……

……

……

.....…

……

.....…

86

Model

o –

Tg(G

enB

)Labco

de…

……

……

……

……

…...…

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

.....…

……

....92

Model

o –

Gen

Ctm

1a

(Fun

din

g)L

ab…

……

……

.……

……

..…

….…

……

.……

……

……

……

……

……

……

……

……

……

….......…

….9

4

27

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 1

– E

stu

dio

s o

nco

lógi

cos

(1a

y 1

b)

Últ

ima

actu

aliz

ació

n: 2

oct

ub

re 2

01

4

1.

Mo

del

os

anim

ale

s en

los

estu

dio

s o

nco

lógi

cos

(1a

y 1

b)

Co

nte

xto

gen

eral

: eva

luac

ión

de

nu

evo

s ag

en

tes

anti

can

cerí

gen

os

in v

ivo

El c

ánce

r es

un

a im

po

rtan

te c

ausa

de

mu

erte

en

el

mu

nd

o d

esar

rolla

do

, y

el e

nve

jeci

mie

nto

de

la p

ob

laci

ón

hu

man

a d

ará

luga

r in

evit

able

men

te a

un

aum

ento

de

esta

en

ferm

edad

. En

20

10,

las

pro

bab

ilid

ades

de

mo

rir

po

r ca

usa

s re

laci

on

adas

co

n e

l cá

nce

r en

la

Un

ión

Eu

rop

ea (

UE)

an

tes

de

cum

plir

70

añ

os

eran

de

1:7

. Po

r el

lo e

s n

eces

ario

des

arro

llar

nu

evo

s fá

rmac

os

más

efi

cace

s p

ara

el t

rata

mie

nto

del

cán

cer,

qu

e re

du

nd

arán

en

un

a re

du

cció

n d

e la

mo

rtal

idad

po

r cá

nce

r y

un

a m

ejo

r ca

lidad

de

vid

a d

e la

s p

erso

nas

qu

e d

esar

rolle

n c

ánce

r en

el f

utu

ro.

Act

ual

men

te s

e u

tiliz

an m

od

elo

s co

n a

nim

ales

par

a d

esar

rolla

r n

uev

os

fárm

aco

s p

ara

el t

rata

mie

nto

del

cán

cer,

así

co

mo

mo

del

os

info

rmát

ico

s y

met

od

olo

gías

in

vit

ro,

com

o e

nsa

yos

con

cu

ltiv

os

de

célu

las.

Un

a ve

z q

ue

se h

a co

nfi

rmad

o l

a se

lect

ivid

ad y

la

act

ivid

ad d

e lo

s co

mp

ues

tos

in v

itro

,

ún

icam

ente

aq

uel

los

com

pu

esto

s q

ue

mu

estr

an c

arac

terí

stic

as f

avo

rab

les

se p

rueb

an e

n a

nim

ales

. Se

real

izan

est

ud

ios

de

tole

ran

cia

con

peq

ueñ

os

gru

po

s

de

anim

ales

par

a d

eter

min

ar la

do

sis

máx

ima

tole

rad

a y

la a

dec

uac

ión

de

la p

auta

po

soló

gica

an

tes

de

pas

ar a

est

ud

ios

de

efi

caci

a m

ás a

mp

lios.

La s

ever

idad

de

los

efec

tos

en l

os

anim

ales

dep

end

erá

de

los

mo

del

os

y d

el p

rop

ósi

to d

el e

stu

dio

. P

or

ejem

plo

, el

man

ten

imie

nto

de

línea

s d

e cé

lula

s

tum

ora

les

no

deb

e te

ner

un

efe

cto

sig

nif

icat

ivo

en

el

bie

nes

tar,

sie

mp

re q

ue

se o

bse

rven

bu

enas

prá

ctic

as d

ura

nte

to

do

el

pro

ced

imie

nto

, co

mo

un

segu

imie

nto

ad

ecu

ado

de

los

anim

ales

y l

a ad

op

ció

n d

e p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

tem

pra

no

s. S

in e

mb

argo

, lo

s es

tud

ios

real

izad

os

par

a ev

alu

ar n

uev

os

trat

amie

nto

s en

mo

del

os

met

astá

sico

s p

rob

able

men

te p

rese

nta

n m

ayo

res

pro

ble

mas

par

a el

bie

nes

tar

deb

ido

al

des

arro

llo d

e m

últ

iple

s tu

mo

res

y lo

s

po

sib

les

efec

tos

adve

rso

s d

e lo

s fá

rmac

os

cito

tóxi

cos.

Se h

an p

ub

licad

o v

aria

s d

irec

tric

es p

ara

el u

so y

el

bie

nes

tar

de

los

anim

ales

en

la

inve

stig

ació

n d

el c

ánce

r, p

or

ejem

plo

, en

la

revi

sta

Bri

tish

Jo

urn

al

of

Ca

nce

r (W

ork

man

et

al.

201

0).

Est

as d

irec

tric

es p

rese

nta

n u

na

visi

ón

de

con

jun

to d

e lo

s d

iver

sos

mo

del

os

de

tum

ore

s en

an

imal

es e

xist

ente

s, l

a fo

rma

en

qu

e af

ecta

n a

los

anim

ales

y c

óm

o s

e p

ued

e m

inim

izar

su

su

frim

ien

to.

28

En e

ste

do

cum

ento

se

pre

sen

tan

do

s e

jem

plo

s q

ue

ilust

ran

mo

del

os

on

coló

gico

s co

n a

nim

ales

qu

e at

ien

den

a d

isti

nta

s cl

asif

icac

ion

es d

e se

veri

dad

.

Re

fere

nci

a

Wo

rkm

an e

t a

l. (2

010

), G

uid

elin

es f

or

the

wel

fare

an

d u

se o

f an

imal

s in

can

cer

rese

arc»

. B

riti

sh J

ou

rna

l of

Ca

nce

r (2

01

0)

10

2(1

1),

15

55

-15

77

; d

esca

rgab

le

grat

uit

amen

te e

n:

htt

p:/

/ww

w.n

cbi.n

lm.n

ih.g

ov/

pm

c/ar

ticl

es/P

MC

28

83

16

0/p

df/

66

05

64

2a.

pd

f.

1a –

Man

ten

imie

nto

de

línea

s d

e cé

lula

s d

e tu

mo

res

hu

man

os

en

rat

on

es

des

nu

do

s in

mu

no

lógi

cam

en

te d

epri

mid

os

Alg

un

as l

ínea

s d

e cé

lula

s tu

mo

rale

s h

um

anas

no

se

rep

rod

uce

n d

e fo

rma

fiab

le e

n c

ult

ivo

s, y

en

oca

sio

nes

es

nec

esar

io c

arac

teri

zar

y m

ante

ner

lín

eas

de

célu

las

hu

man

as e

n u

n m

od

elo

xen

ogé

nic

o in

viv

o.

Estu

dio

A 3

0 r

ato

nes

des

nu

do

s m

ach

os

BA

LB/c

se

les

adm

inis

trar

á u

na

inye

cció

n s

ub

cutá

nea

en

el c

ost

ado

izq

uie

rdo

de

un

a su

spen

sió

n d

e 1

03 c

elu

las

HC

T en

0, 1

ml d

e so

luci

ón

sal

ina

. Lo

s an

imal

es s

erán

alo

jad

os

en g

rup

o

en c

ub

etas

ven

tila

das

ind

ivid

ual

me

nte

(C

VI)

co

n l

ech

o y

mat

eria

l par

a an

idar

. El

bie

nes

tar

de

los

anim

ales

se

eval

uar

á d

iari

ame

nte

y l

os

anim

ales

se

pes

arán

cad

a 4

día

s. S

e p

alp

ará

a lo

s an

imal

es e

n b

usc

a d

e tu

mo

res

cad

a 2

día

s y

los

tum

ore

s

det

ecta

ble

s se

med

irán

co

n p

ie d

e re

y co

n la

mis

ma

frec

uen

cia.

Lo

s an

imal

es s

e sa

crif

icar

án a

los

15

día

s p

ara

reti

rar

los

tum

ore

s.

Eval

uac

ión

inic

ial p

rosp

ecti

va y

co

nsi

der

ació

n d

e re

fin

amie

nto

s e

spec

ífic

os

y p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

¿Qu

é ac

cio

nes

lle

va

a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n l

os

anim

ale

s?

¿Qu

é ex

per

ime

nta

rán

lo

s an

imal

es?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Q

ué

po

drí

a e

mp

eora

rlo

?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

en

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Man

ten

imie

nto

d

e

rato

nes

inm

un

oló

gica

me

nte

Los

anim

ales

pu

eden

su

frir

infe

ccio

nes

. A

loja

mie

nto

en

CV

I y m

anej

o a

dap

tad

o

par

a m

inim

izar

el

ri

esgo

d

e

Se s

acri

fica

rá a

cu

alq

uie

r an

imal

qu

e

mu

estr

e si

gno

s d

e en

ferm

edad

.

29

An

ális

is

Se p

revé

qu

e lo

s an

imal

es e

xper

imen

ten

ún

icam

ente

un

mal

esta

r LE

VE,

y s

e sa

crif

icar

án s

i su

rgen

pro

ble

mas

de

salu

d o

bie

nes

tar

po

r en

cim

a d

e es

te n

ive

l.

dep

rim

ido

s co

nta

min

ació

n.

Alo

jam

ien

to e

n g

rup

o d

e an

imal

es y

en

riq

uec

imie

nto

d

el

ento

rno

p

ara

red

uci

r el

est

rés.

Se r

evis

arán

el

alo

jam

ien

to y

cu

idad

o

si

se

ob

serv

an

sign

os

de

angu

stia

,

agre

sió

n o

co

mp

ort

amie

nto

an

orm

al.

Inye

cció

n

sub

cutá

nea

d

e

célu

las

tum

ora

les

Mal

esta

r tr

ansi

tori

o t

ras

la in

yecc

ión

U

na

sola

inye

cció

n.

Se

inye

ctar

á el

vo

lum

en

adec

uad

o

(máx

imo

: 0,2

ml)

Los

anim

ales

se

rán

o

bje

to

de

un

estr

ech

o

segu

imie

nto

d

ura

nte

el

per

íod

o i

nm

edia

tam

ente

po

ster

ior

a la

inye

cció

n.

Los

anim

ales

se

sa

crif

icar

án

po

r

mét

od

os

incr

uen

tos

si s

e o

bse

rva

un

a

angu

stia

o m

ales

tar

sup

erio

r a

leve

sin

recu

per

ació

n

ráp

ida

des

pu

és

de

la

inye

cció

n (

mu

y p

oco

s ca

sos)

.

Cre

cim

ien

to d

el t

um

or

Pu

ede

cau

sar

mal

esta

r o

af

ecta

r al

com

po

rtam

ien

to o

loco

mo

ció

n n

orm

ales

El

tum

or

pu

ede

infe

ctar

se

o

ulc

erar

se

(per

o n

o d

ebe

dar

luga

r a

met

ásta

sis)

.

El

crec

imie

nto

d

e lo

s tu

mo

res

se

med

irá

cad

a d

os

día

s.

El s

iste

ma

de

segu

imie

nto

in

clu

irá

un

a

ob

serv

ació

n

det

alla

da

de

la

po

stu

ra,

loco

mo

ció

n

y ta

mañ

o

y es

tad

o

del

tum

or.

Los

anim

ales

se

sac

rifi

cará

n s

i el t

um

or

se

ulc

era

o

si

inte

rfie

re

con

el

com

po

rtam

ien

to,

la

po

stu

ra

o

la

loco

mo

ció

n

no

rmal

es,

o

si

sup

era

1,2

cm

de

diá

met

ro (

Wo

rkm

an e

t a

l.

20

10

).

30

Po

r co

nsi

guie

nte

, res

ult

a ad

ecu

ada

un

a cl

asif

icac

ión

pro

spe

ctiv

a d

e la

se

veri

dad

co

mo

LEV

E.

Al f

inal

de

este

mo

del

o f

igu

ra u

n e

jem

plo

de

un

a h

oja

de

ob

serv

ació

n r

elle

nad

a.

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Se e

lab

oró

un

a h

oja

de

pu

ntu

ació

n b

ásic

a q

ue

se c

on

cen

trab

a en

el

tam

año

del

tu

mo

r, e

l p

eso

co

rpo

ral,

la p

ost

ura

y l

a lo

com

oci

ón

, p

ues

no

se

pre

veía

n

mu

cho

s o

tro

s si

gno

s cl

ínic

os.

Se

dej

ó e

spac

io p

ara

regi

stra

r si

gno

s cl

ínic

os

imp

revi

sto

s en

fo

rma

de

text

o li

bre

. La

ind

icac

ión

de

NA

D (

nin

gun

a an

orm

alid

ad

det

ecta

da)

co

nfi

rma

qu

e se

insp

ecci

on

ó a

los

anim

ales

y q

ue

no

se

ob

serv

aro

n a

no

rmal

idad

es. A

co

nti

nu

ació

n s

e p

rese

nta

un

eje

mp

lo.

Re

sult

ado

s

No

se

regi

stró

un

a p

érd

ida

sign

ific

ativ

a d

e p

eso

en

nin

gun

o d

e lo

s an

imal

es.

En 5

an

imal

es n

o s

e o

bse

rvó

qu

e se

des

arro

llara

un

tu

mo

r.

En 2

5 a

nim

ales

se

des

arro

llaro

n t

um

ore

s en

el c

ost

ado

. Es

tos

tum

ore

s n

o in

terf

irie

ron

co

n e

l co

mp

ort

amie

nto

no

rmal

, y m

edía

n c

om

o m

áxim

o 1

cm

el

día

14

, cu

and

o s

e sa

crif

icó

a lo

s an

imal

es d

e ac

uer

do

co

n e

l pro

toco

lo d

el e

stu

dio

par

a ex

trae

r lo

s tu

mo

res.

En u

na

cub

eta

se o

bse

rvó

cie

rto

co

mp

ort

amie

nto

agr

esiv

o y

pel

eas;

un

an

imal

ten

ía h

erid

as d

e m

ord

edu

ras

en l

a co

la y

esp

ald

a, s

e le

tra

slad

ó a

un

a cu

bet

a in

div

idu

al, l

as h

erid

as s

e d

esin

fect

aro

n d

iari

amen

te h

asta

su

cu

raci

ón

y s

e co

nse

rvó

el a

nim

al h

asta

el f

inal

del

pro

ced

imie

nto

.

31

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Co

mp

leta

ron

el e

stu

dio

un

to

tal d

e 2

9 a

nim

ales

y s

olo

exp

erim

enta

ron

un

su

frim

ien

to le

ve d

ebid

o a

la in

yecc

ión

y e

l cre

cim

ien

to d

e lo

s tu

mo

res.

Se

co

nsi

der

ó q

ue

la s

ever

idad

par

a es

tos

anim

ales

fu

e LE

VE,

y u

n a

nim

al p

rese

nta

ba

her

idas

cau

sad

as p

or

mo

rded

ura

s q

ue

se t

rata

ron

de

form

a ef

icaz

.

Este

an

imal

exp

erim

entó

un

su

frim

ien

to m

ayo

r d

ebid

o a

la a

gres

ión

, p

ero

ello

no

est

uvo

rel

acio

nad

o c

on

el p

roce

dim

ien

to. E

sto

s in

cid

ente

s se

tra

taro

n

de

form

a ef

icaz

y e

l su

frim

ien

to s

e m

inim

izó

. A

un

qu

e el

niv

el

de

sufr

imie

nto

exp

erim

enta

do

po

r es

te a

nim

al f

ue

mo

der

ado

, se

co

nsi

der

ó q

ue

la

seve

rid

ad r

eal r

elac

ion

ada

con

el p

roce

dim

ien

to f

ue

LEV

E, y

a q

ue

este

inci

den

te n

o g

uar

dó

rel

ació

n c

on

el p

roce

dim

ien

to.

Eje

mp

lo d

e h

oja

de

ob

serv

ació

n (

relle

na

par

a u

n c

aso

hip

oté

tico

)

Cre

cim

ien

to d

e tu

mo

res

en r

ato

nes

des

nu

do

s –

Ho

ja d

e p

roce

dim

ien

to y

ob

serv

ació

n

Cu

bet

a 1

– R

ato

nes

nº

1 a

5

Fech

a P

roce

dim

ien

to

Tam

año

del

tum

or

(cm

)

Pes

o (

g)

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

– C

om

pro

bar

det

en

idam

en

te la

po

stu

ra y

la lo

com

oci

ón

28/

2

Inye

cció

n

sub

cutá

nea

1

- 21

2-

22

3-

21

4 -

22

5-

22

No

se

ob

serv

an s

ign

os

de

pro

ble

mas

de

bie

nes

tar

tras

las

inye

ccio

nes

.

1/3

Nin

gun

a an

orm

alid

ad d

etec

tad

a (N

AD

)

32

2/3

P

alp

ació

n

NA

D

3/3

NA

D

4/3

P

alp

ació

n

1

- 21

2-

22

3-

21

4-

22

5-

22

NA

D

5/3

NA

D

6/3

P

alp

ació

n

NA

D

7/3

Cie

rto

co

mp

ort

amie

nto

agr

esiv

o; n

o s

e o

bse

rvan

her

idas

.

8/3

M

edic

ión

de

los

tum

ore

s

1-

0,1

2-

0,1

3-

0,1

4-

sin

tu

mo

r

5-

0,2

1-

21

2-

22

3-

21

4-

22

5-

22

El r

ató

n 1

te

nía

her

idas

cau

sad

as p

or

mo

rded

ura

s en

la

cola

y la

esp

ald

a: t

rata

mie

nto

loca

l; tr

asla

do

a u

na

cub

eta

ind

ivid

ual

; se

pro

po

rcio

nó

un

a ca

ja p

ara

nid

o

de

un

ún

ico

an

imal

per

o s

e le

ret

iró

de

la c

ub

eta

en la

qu

e es

tab

an lo

s o

tro

s cu

atro

rat

on

es p

or

si f

uer

a la

cau

sa d

e la

agr

esió

n.

9/3

Des

infe

cció

n d

e la

s h

erid

as d

el r

ató

n 1

, cu

raci

ón

sati

sfac

tori

a; n

o s

e o

bse

rvan

sig

no

s d

e ag

resi

ón

en

tre

33

los

dem

ás a

nim

ales

.

10/

3

Med

ició

n d

e

los

tum

ore

s

1-

0,2

2-

0,1

3-

0,1

4-

sin

tu

mo

r

5-

0,2

D

esin

fecc

ión

de

las

her

idas

del

rat

ón

1.

11/

3

D

esin

fecc

ión

de

las

her

idas

del

rat

ón

1,

12/

3

Med

ició

n d

e

los

tum

ore

s

1-

0,4

2-

0,3

3-

0,3

4-

sin

tu

mo

r

5-

0,5

1-

22

2-

22

3-

21

4-

21

5-

23

Cu

raci

ón

de

las

her

idas

del

rat

ón

1, s

usp

ensi

ón

de

la

des

infe

cció

n,

13/

3

N

AD

14/

3

Sacr

ific

io y

extr

acci

ón

de

tum

ore

s

34

1b

– E

fica

cia

de

nu

evo

s fá

rmac

os

en

el c

reci

mie

nto

de

tum

ore

s –

Pro

ced

imie

nto

de

vari

os

pas

os

El e

stu

dio

tie

ne

po

r o

bje

tivo

eva

luar

la e

fica

cia

de

nu

evo

s ag

ente

s p

ara

red

uci

r o

det

en

er e

l cre

cim

ien

to d

e cé

lula

s tu

mo

rale

s. E

l tu

mo

r ti

ene

qu

e es

tar

bie

n

esta

ble

cid

o a

nte

s d

e q

ue

com

ien

ce e

l tr

atam

ien

to (

gen

eral

men

te b

asta

co

n u

n d

iám

etr

o d

e 0

,5 c

m),

ya

qu

e, d

ebid

o a

la

du

raci

ón

del

est

ud

io,

algu

no

s

tum

ore

s p

ued

en c

rece

r h

asta

alc

anza

r u

n m

áxim

o d

e 1

,2 c

m d

e d

iám

etro

, ge

ner

alm

en

te e

n e

l gr

up

o c

on

tro

l de

veh

ícu

lo.

Los

fárm

aco

s ci

totó

xico

s p

ued

en

cau

sar

algu

no

s ef

ecto

s ad

vers

os

par

a e

l bie

nes

tar.

Se a

dm

inis

trar

á a

30 r

ato

nes

des

nu

do

s B

ALB

/c u

na

inye

cció

n d

e cé

lula

s tu

mo

rale

s d

e cr

ecim

ien

to l

ento

(0

,1 m

l).

El b

ien

esta

r d

e lo

s an

imal

es s

e ev

alu

ará

dia

riam

en

te y

los

anim

ales

se

pes

arán

un

a ve

z a

la s

eman

a d

ura

nte

3 s

eman

as c

on

secu

tiva

s. E

l cre

cim

ien

to d

e lo

s tu

mo

res

se m

edir

á co

n u

n p

ie d

e re

y lo

s

día

s 7

y 1

4; l

os

tum

ore

s se

vo

lver

án a

med

ir e

l d

ía 2

0,

los

anim

ales

se

sele

ccio

nar

án d

e fo

rma

alea

tori

a y

el t

rata

mie

nto

co

men

zará

en

fo

rma

de

2 in

yecc

ion

es in

trap

erit

on

eale

s d

iari

as d

ura

nte

7 d

ías.

Eval

uac

ión

inic

ial p

rosp

ecti

va y

co

nsi

der

ació

n d

e re

fin

amie

nto

s es

pec

ífic

os

y p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n lo

s

anim

ale

s?

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Qu

é p

od

ría

em

peo

rarl

o?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

en

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Man

ten

imie

nto

de

rato

nes

inm

un

oló

gica

me

nte

dep

rim

ido

s

Los

anim

ales

pu

eden

su

frir

infe

ccio

nes

.

Alo

jam

ien

to e

n C

VI y

man

ejo

ad

apta

do

s

par

a m

inim

izar

el r

iesg

o d

e co

nta

min

ació

n.

Alo

jam

ien

to d

el g

rup

o d

e an

imal

es y

enri

qu

ecim

ien

to d

el e

nto

rno

par

a re

du

cir

el e

stré

s.

Se r

evis

arán

las

prá

ctic

as d

e al

oja

mie

nto

y

Se s

acri

fica

rá a

cu

alq

uie

r an

imal

qu

e

mu

estr

e si

gno

s d

e en

ferm

edad

inte

rcu

rren

tes.

35

cuid

ado

si s

e o

bse

rvan

sig

no

s d

e an

gust

ia,

agre

sió

n o

co

mp

ort

amie

nto

an

orm

al.

Inye

cció

n s

ub

cutá

nea

de

célu

las

tum

ora

les

Mal

esta

r p

asaj

ero

tra

s la

inye

cció

n.

Un

a so

la in

yecc

ión

.

Se in

yect

ará

el v

olu

men

ad

ecu

ado

(máx

imo

: 0,2

ml)

.

Los

anim

ales

ser

án o

bje

to d

e u

n e

stre

cho

segu

imie

nto

du

ran

te e

l per

íod

o

inm

edia

tam

ente

po

ster

ior

a la

inye

cció

n.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

po

r

mét

od

os

incr

uen

tos

si s

e o

bse

rva

un

a

angu

stia

o m

ales

tar

sup

erio

r a

leve

cuan

do

no

hay

a u

na

recu

per

ació

n

ráp

ida

des

pu

és d

e la

inye

cció

n (

mu

y

po

cos

caso

s).

Cre

cim

ien

to d

el t

um

or

Pu

ede

cau

sar

mal

esta

r o

afe

ctar

al

com

po

rtam

ien

to o

loco

mo

ció

n

no

rmal

es

El t

um

or

uti

lizad

o p

ued

e in

fect

arse

o

ulc

erar

se (

per

o n

o d

ebe

dar

luga

r a

met

ásta

sis)

.

Ob

serv

ació

n d

iari

a d

e lo

s an

imal

es,

segu

imie

nto

per

iód

ico

de

la s

alu

d g

ener

al

y cr

ecim

ien

to d

el t

um

or

El s

iste

ma

de

segu

imie

nto

incl

uir

á u

na

ob

serv

ació

n d

etal

lad

a d

e la

po

stu

ra,

loco

mo

ció

n y

tam

año

y e

stad

o d

el t

um

or.

Los

trat

amie

nto

s co

n f

árm

aco

s

com

enza

rán

cu

and

o e

l tu

mo

r al

can

ce u

n

diá

me

tro

de

0,5

cm

(m

edid

o c

on

un

pie

de

rey)

.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

si e

l tu

mo

r

se u

lcer

a o

si i

nte

rfie

re c

on

el

com

po

rtam

ien

to, l

a p

ost

ura

o la

loco

mo

ció

n n

orm

ales

, o s

i su

per

a

1,2

cm

de

diá

met

ro (

Wo

rkm

an e

t a

l.

20

10

).

Inye

cció

n in

trap

erit

on

eal

de

un

nu

evo

fár

mac

o

Mal

esta

r p

asaj

ero

tra

s la

inye

cció

n

Los

fárm

aco

s ci

totó

xico

s p

ued

en

cau

sar

dia

rrea

, pér

did

a d

e p

eso

,

Los

anim

ales

ser

án o

bje

to d

e u

n e

stre

cho

segu

imie

nto

du

ran

te e

l per

íod

o

inm

edia

tam

ente

po

ster

ior

a la

inye

cció

n.

Vo

lum

en m

áxim

o d

iari

o d

e 1

0 m

l/kg

Se s

acri

fica

rá a

los

anim

ales

qu

e

pie

rdan

más

del

20

% d

e su

pes

o

corp

ora

l in

icia

l. Se

sac

rifi

cará

a lo

s

anim

ales

qu

e n

o c

om

an o

qu

e te

nga

n

36

An

ális

is

Co

mo

co

nse

cuen

cia

del

tam

año

del

tu

mo

r, l

a cr

ecie

nte

po

sib

ilid

ad d

e u

lcer

ació

n,

la f

recu

enci

a d

e la

s in

yecc

ion

es y

lo

s ef

ect

os

adve

rso

s d

e lo

s fá

rmac

os

adm

inis

trad

os,

en

est

e ca

so r

esu

lta

adec

uad

a u

na

clas

ific

ació

n p

rosp

ect

iva

de

la s

eve

rid

ad M

OD

ERA

DA

.

¿Po

drí

a e

stab

lece

rse

el l

ímit

e d

e se

veri

dad

en

LEV

E?

Es m

uy

po

co p

rob

able

, a

men

os

qu

e lo

s o

bje

tivo

s ci

entí

fico

s p

ued

an a

lcan

zars

e co

n p

un

tos

fin

ales

más

tem

pra

no

s, p

or

ejem

plo

, si

se

red

uce

el

tam

año

máx

imo

del

tu

mo

r. E

llo i

mp

licar

ía i

nye

ctar

fár

mac

os

a d

osi

s q

ue

se s

abe

no

cau

san

efe

cto

s cl

ínic

os

adve

rso

s im

po

rtan

tes.

En

est

as c

ircu

nst

anci

as,

po

drí

a

con

sid

erar

se a

dec

uad

a u

na

seve

rid

ad L

EVE.

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Al f

inal

de

este

mo

del

o f

igu

ra u

n e

jem

plo

de

ho

ja d

e o

bse

rvac

ión

y u

na

mu

estr

a d

e h

oja

de

pu

ntu

ació

n.

Re

sult

ado

s

De

los

30 r

ato

nes

mac

ho

s B

ALB

/c,

25

se

uti

lizar

on

par

a ev

alu

ar la

efi

caci

a; 1

0 a

nim

ales

rec

ibie

ron

un

a d

osi

s H

del

fár

mac

o B

, 1

0 r

ecib

iero

n u

na

do

sis

X d

el

fárm

aco

B, y

5 r

ecib

iero

n u

na

do

sis

Y d

el f

árm

aco

C.

ano

rexi

a o

leta

rgia

. d

ura

nte

7 d

ías.

Se u

tiliz

arán

las

do

sis

mín

imas

(det

erm

inad

as m

edia

nte

est

ud

ios

de

do

sifi

caci

ón

).

Se u

tiliz

ará

un

sis

tem

a d

e p

un

tuac

ión

clín

ica

par

a ev

alu

ar e

l bie

nes

tar.

dia

rrea

du

ran

te m

ás d

e 4

8 h

ora

s

Se e

stab

lece

rá c

om

o p

un

to f

inal

hu

man

itar

io u

n lí

mit

e s

up

erio

r d

e

pu

ntu

ació

n c

línic

a.

37

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Tres

an

imal

es n

o d

esar

rolla

ron

tu

mo

res

y fu

ero

n s

acri

fica

do

s al

no

po

der

ser

uti

lizad

os

par

a el

exp

erim

ento

– L

EVE.

Do

s an

imal

es d

esar

rolla

ron

ulc

erac

ión

en

el

luga

r d

e la

in

yecc

ión

de

célu

las

tum

ora

les

ante

s d

e in

icia

r el

tra

tam

ien

to y

fu

ero

n s

acri

fica

do

s –

MO

DER

AD

A.

Die

z an

imal

es q

ue

reci

bie

ron

un

a d

osi

s H

del

fár

mac

o B

des

arro

llaro

n t

um

ore

s d

e ta

mañ

o r

elat

ivam

ente

peq

ueñ

o,

sin

pér

did

a si

gnif

icat

iva

de

pes

o

corp

ora

l ni s

ign

os

clín

ico

s –

LEV

E.

Siet

e an

imal

es q

ue

reci

bie

ron

un

a d

osi

s X

del

fár

mac

o B

exp

erim

enta

ron

un

a re

du

cció

n d

el t

amañ

o d

el t

um

or,

un

a p

érd

ida

de

pes

o c

orp

ora

l del

15

% y

h

ece

s su

elta

s, p

ero

se

man

tuvi

ero

n h

asta

el f

inal

del

exp

erim

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– M

OD

ERA

DA

.

Tres

an

imal

es q

ue

reci

bie

ron

un

a d

osi

s X

del

fár

mac

o B

exp

erim

enta

ron

un

a re

du

cció

n d

el t

amañ

o d

el t

um

or,

un

a p

érd

ida

de

pes

o c

orp

ora

l d

el 1

5 %

, h

ece

s su

elta

s, a

no

rexi

a y

un

a gr

an le

targ

ia, y

fu

ero

n s

acri

fica

do

s d

e m

od

o in

cru

ento

en

el d

ía 2

5 –

SEV

ERA

.

En c

inco

an

imal

es q

ue

reci

bie

ron

un

a d

osi

s Y

del

fár

mac

o C

, el

tam

año

del

tu

mo

r co

nti

nu

ó c

reci

en

do

, el

pes

o c

orp

ora

l au

men

tó y

no

se

ob

serv

aro

n

otr

os

sign

os

clín

ico

s ap

arte

del

cre

cim

ien

to d

el t

um

or.

Est

os

anim

ales

se

sac

rifi

caro

n c

uan

do

el t

amañ

o d

el t

um

or

sup

eró

1,2

cm

– M

OD

ERA

DA

. Ej

emp

lo d

e h

oja

de

pu

ntu

ació

n

Nº

de

anim

al

Fech

a 1

/6

2/6

3

/6

4/6

Asp

ecto

Pes

o c

orp

ora

l

Esta

do

del

pel

aje

Fun

cio

nes

co

rpo

rale

s

Dis

nea

o t

aqu

ipn

ea

38

Inge

sta

de

alim

ento

s

Ento

rno

Hec

es

suel

tas

o

dia

rrea

San

gre

en la

dia

rrea

Co

mp

ort

amie

nto

s

Man

ipu

laci

ón

Agr

esió

n

Loco

mo

ció

n a

no

rmal

Po

stu

ra a

no

rmal

Res

iste

nci

a a

mo

vers

e

Ind

icad

ore

s es

pec

ífic

os

del

pro

ced

imie

nto

Tam

año

del

tu

mo

r

Ulc

erac

ión

del

tu

mo

r

El t

um

or

imp

ide

el

mo

vim

ien

to

Pu

ntu

ació

n t

ota

l

Otr

as o

bse

rvac

ion

es

39

Acc

ion

es

Pu

ntu

ació

n 1

R

evis

ar la

fre

cuen

cia

del

seg

uim

ien

to

2

Co

nsi

der

ar la

po

sib

ilid

ad d

e ad

min

istr

ar

cuid

ado

s su

ple

men

tari

os,

po

r e

jem

plo

,

líqu

ido

s ad

icio

nal

es

4 C

on

sult

ar a

un

vet

erin

ario

6 A

do

pta

r u

n p

un

to f

inal

hu

man

itar

io

Ejem

plo

s d

e p

un

tuac

ion

es c

línic

as

Asp

ecto

P

un

tuac

ión

Pe

so c

orp

ora

l

Pér

did

a d

e p

eso

del

5 %

al 1

0 %

1

Pér

did

a d

e p

eso

del

11

% a

l 15

%

2

Pér

did

a d

e p

eso

del

16

% a

l 20

%

3

Pér

did

a d

e p

eso

su

per

ior

al 2

0 %

P

FH

Esta

do

del

pel

aje

Pel

aje

liger

amen

te d

escu

idad

o

1

Pilo

erec

ció

n le

ve

2

Pilo

erec

ció

n m

arca

da

3

Fun

cio

nes

co

rpo

rale

s

Taq

uip

nea

(re

spir

ació

n r

ápid

a)

1

Dis

nea

(d

ific

ult

ad p

ara

resp

irar

) 3

Ento

rno

40

Hec

es

suel

tas

o d

iarr

ea

1

San

gre

en la

dia

rrea

P

FH

Co

mp

ort

amie

nto

Ten

so y

ner

vio

so d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n

1

Mu

y an

gust

iad

o d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n,

po

r ej

emp

lo, c

on

tem

blo

res,

vo

caliz

ació

n,

agre

sivi

dad

3

Loco

mo

ció

n

Po

stu

ra/l

oco

mo

ció

n li

gera

men

te

ano

rmal

es

1

Po

stu

ra/l

oco

mo

ció

n m

uy

ano

rmal

es

2

Gra

nd

es p

rob

lem

as d

e

mo

vilid

ad/r

esis

ten

cia

a m

ove

rse

3

Inm

ovi

lidad

du

ran

te m

ás d

e 24

ho

ras

PFH

Ind

icad

ore

s e

spec

ífic

os

del

pro

ced

imie

nto

Tam

año

del

tu

mo

r su

per

ior

a 1

,2 c

m

PFH

Ulc

erac

ión

del

tu

mo

r

PFH

El t

um

or

imp

ide

el m

ovi

mie

nto

P

FH

41

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 2–

Ence

falit

is a

uto

inm

un

e e

xper

ime

nta

l (EA

E) e

n r

ato

ne

s Ú

ltim

a ac

tual

izac

ión

: 2 o

ctu

bre

20

14

Co

nte

xto

gen

eral

La e

nce

falo

mie

litis

au

toin

mu

ne

exp

erim

enta

l (EA

E) s

e u

tiliz

a p

ara

elab

ora

r m

od

elo

s d

e d

ive

rso

s as

pec

tos

de

la e

scle

rosi

s m

últ

iple

en

ro

edo

res

y p

rim

ates

.

La e

scle

rosi

s m

últ

iple

es

un

tra

sto

rno

neu

roló

gico

co

mp

lejo

qu

e ad

op

ta m

uch

as f

orm

as y

afe

cta

a lo

s ad

ult

os

jóve

nes

. En

tre

sus

efec

tos

se e

ncu

entr

an l

a

infl

amac

ión

, la

des

mie

liniz

ació

n y

la p

érd

ida

de

axo

nes

. Se

uti

lizan

mo

del

os

con

an

imal

es p

ara

inve

stig

ar la

fis

iop

ato

logí

a d

e es

ta e

nfe

rmed

ad y

par

a ev

alu

ar

po

sib

les

estr

ateg

ias

de

pro

tecc

ión

o c

ura

ció

n,

com

o l

a in

mu

no

mo

du

laci

ón

, la

in

mu

no

pro

tecc

ión

, la

reg

ener

ació

n d

e ax

on

es y

la

rep

arac

ión

de

la m

ielin

a.

Las

cara

cter

ísti

cas

mu

ltif

ásic

as y

mu

ltif

orm

es d

e la

esc

lero

sis

mú

ltip

le h

acen

qu

e se

a n

eces

ario

uti

lizar

mo

del

os

adec

ua

do

s p

ara

resp

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der

a p

regu

nta

s

con

cret

as s

ob

re la

s d

ifer

ente

s fa

ses

de

la e

nfe

rmed

ad.

La E

AE

imp

lica

gen

erar

un

a ac

tivi

dad

del

sis

tem

a in

mu

ne

dir

igid

a co

ntr

a la

mie

lina,

lo q

ue

pro

du

ce in

flam

ació

n e

n e

l sis

tem

a n

ervi

oso

cen

tral

y la

ap

ertu

ra

de

la b

arre

ra h

emat

oen

cefá

lica,

lo q

ue

a su

vez

pu

ede

cau

sar

un

gra

ve s

índ

rom

e n

euro

lógi

co e

n e

l mo

del

o a

nim

al, q

ue

deb

e ir

seg

uid

o d

e u

na

recu

per

ació

n

par

cial

du

ran

te l

a p

rim

era

fas

e cr

ón

ica

rem

iten

te -

rec

idiv

ante

. Es

ta f

ase

está

aso

ciad

a a

infl

amac

ión

y d

esm

ielin

izac

ión

rev

ersi

ble

. Tr

ansc

urr

idas

en

tre

9 y

10

sem

anas

, el a

nim

al e

ntr

ará

en la

fo

rma

pro

gres

iva,

qu

e es

tá a

soci

ada

con

la d

esm

ielin

izac

ión

cró

nic

a y

la p

érd

ida

de

axo

ne

s. D

ura

nte

est

a fa

se e

s p

osi

ble

eval

uar

div

ersa

s es

trat

egi

as t

era

péu

tica

s. D

eben

ele

girs

e cu

idad

osa

men

te p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

y ci

entí

fico

s te

nie

nd

o e

n c

uen

ta l

os

ob

jeti

vos

del

estu

dio

.

Re

fere

nci

as

Emer

son

MR

et

al.

(200

9),

Enh

anci

ng

the

abili

ty o

f Ex

per

imen

tal

Au

toim

mu

ne

Ence

ph

alo

mye

litis

to

ser

ve a

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mo

re r

igo

rou

s m

od

el o

f M

ult

iple

Scl

ero

sis

thro

ugh

ref

inem

ent

of

the

exp

erim

enta

l des

ign

. Co

mpa

rati

ve M

edic

ine.

59

: 11

2-1

28

.

Mill

er S

D e

t a

l. (2

010

), E

xper

imen

tal A

uto

imm

un

e En

cep

hal

om

yelit

is in

th

e m

ou

se. C

urr

ent

Pro

toco

ls in

Imm

un

olo

gy.

88

: 15

.1.1

-15

.1.2

0.

42

Wei

sser

t R

(ed

) (2

012

), E

xper

imen

tal

Au

toim

mu

ne

Ence

ph

alo

mye

litis

- M

od

els,

Dis

ease

Bio

log

y a

nd

Exp

erim

enta

l Th

era

py.

Pu

blic

ado

po

r In

Te

ch,

DO

I:

10

.577

2/11

90, h

ttp

://w

ww

.inte

cho

pen

.co

m.

Wo

lfen

soh

n S

et

al.

(en

pre

par

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n),

Red

uci

ng

su

ffer

ing

in E

xper

imen

tal A

uto

imm

un

e En

cep

ha

lom

yelit

is.

Estu

dio

En e

ste

ejem

plo

se

pro

voca

rá E

AE

en c

uat

ro r

ato

nes

mac

ho

s y

cuat

ro r

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nes

hem

bra

s B

iozz

i A

BH

(u

na

cep

a u

tiliz

ada

amp

liam

ente

qu

e se

co

nsi

der

a q

ue

tien

e u

n g

ran

val

or

tran

slac

ion

al)

a fi

n d

e ev

alu

ar u

na

po

sib

le t

era

pia

par

a la

esc

lero

sis

mú

ltip

le.

En l

a fa

se d

e p

lan

ific

ació

n i

nic

ial

del

pro

yect

o,

el u

suar

io

exam

ina

cad

a p

osi

ble

efe

cto

ad

vers

o p

ara

los

anim

ales

e id

enti

fica

las

po

sib

les

cau

sas

de

sufr

imie

nto

en

co

lab

ora

ció

n c

on

el

técn

ico

, el p

erso

nal

en

carg

ado

del

cu

idad

o d

e lo

s an

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es y

el v

ete

rin

ario

a c

argo

. Est

os

bu

scan

ref

inam

ien

tos

y lo

s ap

lican

en

el p

roye

cto

. Lo

s ra

ton

es s

e a

loja

rán

en

gru

po

s d

e cu

atro

del

mis

mo

sex

o. S

e p

rest

ará

esp

ecia

l ate

nci

ón

al e

nto

rno

loca

l, ya

qu

e lo

s an

imal

es c

on

EA

E te

nd

rán

imp

ort

ante

s d

efic

ien

cias

mo

tora

s. L

as c

ajas

te

nd

rán

su

elo

sólid

o, l

ech

o d

e vi

ruta

lib

re d

e p

olv

o, r

efu

gio

s ad

ecu

ado

s y

mat

eria

l par

a an

idar

así

co

mo

blo

qu

es p

ara

roer

. Lo

s an

imal

es s

erá

n t

rata

do

s co

n u

n a

dyu

van

te

infl

amat

ori

o p

ara

pro

voca

r EA

E y

será

n o

bje

to d

e se

guim

ien

to d

ura

nte

la r

ecu

per

ació

n y

la f

ase

cró

nic

a re

mit

ente

- r

ecid

ivan

te (

de

nu

eve

a d

iez

sem

anas

).

Un

a ve

z q

ue

se h

aya

des

arro

llad

o l

a fo

rma

pro

gres

iva,

se

eval

uar

án l

os

com

pu

esto

s te

rap

éuti

cos

can

did

ato

s en

lo

s ra

ton

es e

n e

l m

arco

de

un

est

ud

io d

e

tres

sem

anas

de

du

raci

ón

.

Eval

uac

ión

inic

ial p

rosp

ecti

va y

co

nsi

der

ació

n d

e re

fin

amie

nto

s e

spec

ífic

os

y p

un

tos

fin

ale

s h

um

anit

ario

s

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n lo

s

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

43

anim

ale

s?

¿Qu

é p

od

ría

em

peo

rarl

o?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

en

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Mú

ltip

les

inye

ccio

nes

de

adyu

van

te in

flam

ato

rio

Mal

esta

r o

do

lor

deb

ido

a la

s p

rim

eras

inye

ccio

nes

.

Po

sib

le r

eacc

ión

en

el l

uga

r d

e la

inye

cció

n, c

ausa

nd

o ir

rita

ció

n o

mal

esta

r.

Se in

yect

arán

peq

ueñ

as d

osi

s e

n

dis

tin

tos

pu

nto

s su

bcu

tán

eos

(no

en

la

zon

a p

lan

tar

ni l

a b

ase

de

la c

ola

).

El a

dyu

van

te y

el v

ehíc

ulo

se

han

form

ula

do

de

tal m

od

o q

ue

apen

as

tien

en e

fect

os

irri

tan

tes

tras

la

inye

cció

n.

Los

anim

ales

ser

án o

bje

to d

e

segu

imie

nto

des

pu

és d

e la

inye

cció

n.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

po

r

mét

od

os

incr

uen

tos

si s

e o

bse

rva

un

do

lor

o a

ngu

stia

pas

ajer

os

qu

e

sup

eren

el n

ivel

mo

der

ado

tra

s la

inye

cció

n.

Ind

ucc

ión

de

EAE

–

sín

dro

me

neu

roló

gico

seve

ro s

egu

ido

de

un

a

fase

de

recu

per

ació

n

Par

ális

is, q

ue

pu

ede

cau

sar

angu

stia

o

ansi

edad

: pér

did

a d

e to

no

en

la c

ola

,

deb

ilid

ad d

e la

s ex

trem

idad

es

po

ste

rio

res,

hip

om

oti

lidad

, par

ális

is d

e la

s

extr

emid

ades

, dis

fun

ció

n u

rin

aria

(in

con

tin

enci

a o

ret

enci

ón

)

Se h

ará

un

se

guim

ien

to d

e la

fu

nci

ón

uri

nar

ia m

edia

nte

co

ntr

ol d

iari

o d

e la

vejig

a. S

e p

resi

on

ará

man

ual

me

nte

la

vejig

a d

e se

r n

eces

ario

en

cas

o d

e

rete

nci

ón

(se

har

á u

n s

egu

imie

nto

met

icu

loso

de

los

sign

os

de

do

lor

o

angu

stia

tra

s va

ciar

la v

ejig

a).

Si lo

s an

imal

es s

ufr

en in

con

tin

enci

a, s

e

con

tro

lará

fre

cuen

tem

ente

la c

ub

eta

par

a ve

r si

el l

ech

o o

el m

ater

ial p

ara

anid

ar e

stá

mo

jad

o; d

e se

r n

ece

sari

o, s

e

reem

pla

zará

po

r m

ate

rial

sec

o

Hab

rá r

efu

gio

s y

mat

eria

l par

a an

idar

PFH

si s

e cu

mp

le c

ual

qu

iera

de

los

sigu

ien

tes

crit

eri

os:

Par

ális

is b

ilate

ral d

e la

s ex

trem

idad

es a

nte

rio

res

du

ran

te

más

de

24

ho

ras.

Par

ális

is b

ilate

ral d

e la

s ex

trem

idad

es p

ost

eri

ore

s d

ura

nte

u

n m

áxim

o d

e 5

día

s.

Cu

alq

uie

r au

tom

uti

laci

ón

.

Ret

enci

ón

per

sist

en

te d

e o

rin

a/In

cap

acid

ad p

ara

vaci

ar la

ve

jiga.

Par

esia

(p

érd

ida

de

mo

vim

ien

to,

par

ális

is li

gera

).

Pér

did

a d

e p

eso

del

35

%*

.

44

adec

uad

os.

Dej

ar d

e co

mer

o b

eber

du

ran

te

más

de

24

ho

ras

tras

el i

nic

io d

e la

en

ferm

edad

.

No

re

cup

erac

ión

de

la E

AE

3 s

eman

as d

esp

ués

del

inic

io d

e la

en

ferm

edad

clín

ica.

Sign

os

clín

ico

s d

e en

ferm

edad

in

terc

urr

ente

, po

r e

jem

plo

, cif

osi

s d

e es

pal

da.

Pér

did

a im

po

rtan

te d

e p

eso

(p

or

ejem

plo

,

has

ta u

n 3

5 %

)

Se g

aran

tiza

rá e

l acc

eso

co

nst

ante

a

agu

a y

alim

ento

s co

loca

do

s e

n

reci

pie

nte

s e

n e

l su

elo

de

la c

ub

eta

El p

eso

y e

l est

ado

co

rpo

ral s

erá

n

ob

jeto

de

segu

imie

nto

dia

rio

y s

e

pu

ntu

arán

co

n m

ás f

recu

enci

a (d

e se

r

nec

esa

rio

) cu

and

o e

mp

iece

la p

érd

ida

de

pes

o.

Se s

um

inis

trar

án a

limen

tos

hú

med

os

y

flu

ido

s so

lidif

icad

os,

co

n

sup

lem

en

taci

ón

su

bcu

tán

ea d

e se

r

nec

esa

rio

.

Cu

rso

clín

ico

de

rem

isió

n y

reca

ída

Def

icie

nci

as n

euro

lógi

cas

cró

nic

as

Se r

edu

cirá

n t

od

os

los

agen

tes

estr

esan

tes,

incl

uid

o e

l ru

ido

.

La t

emp

erat

ura

am

bie

nte

se

aum

enta

rá

de

ser

nec

esa

rio

, co

n a

lmo

had

illas

térm

icas

, lec

ho

y m

ate

rial

ad

icio

nal

par

a an

idar

.

45

* La

pér

did

a d

e p

eso

del

35

% e

s u

n p

un

to f

inal

ext

rem

o q

ue

exig

e u

na

just

ific

ació

n c

ien

tífi

ca s

ólid

a. E

n e

ste

caso

, un

a p

érd

ida

de

pes

o im

po

rtan

te r

esu

lta

inev

itab

le y

los

anim

ales

pu

eden

rec

up

erar

se c

on

la a

yud

a ad

ecu

ada,

po

r ej

emp

lo, c

alo

r y

alim

enta

ció

n a

dic

ion

ales

, in

clu

ida

la a

limen

taci

ón

man

ual

de

ser

nec

esa

rio

. En

est

e e

stu

dio

se

esta

ble

ce u

n p

un

to f

inal

del

35

%, c

on

el f

in d

e re

du

cir

la n

eces

idad

de

ind

uci

r EA

E e

n u

n m

ayo

r n

úm

ero

de

anim

ales

no

som

etid

os

a tr

atam

ien

to, n

úm

ero

qu

e se

ría

sign

ific

ativ

amen

te m

ayo

r co

n u

n p

un

to f

inal

más

«co

nve

nci

on

al»

(p

or

ejem

plo

, un

20

%).

An

ális

is

Se c

on

sid

era

adec

uad

a u

na

clas

ific

ació

n p

rosp

ecti

va c

om

o S

EVER

A,

ya q

ue

se p

revé

qu

e el

pro

ced

imie

nto

te

nga

co

nse

cuen

cias

gra

ves

par

a el

bie

nes

tar

gen

eral

y e

l est

ado

de

los

anim

ales

.

¿Po

drí

a se

r la

cla

sifi

caci

ón

MO

DER

AD

A?

Au

nq

ue

la s

ever

idad

pro

spec

tiva

de

este

mo

del

o s

iem

pre

deb

e se

r SE

VER

A p

or

las

razo

nes

an

tes

ind

icad

as, l

a cl

asif

icac

ión

ret

rosp

ecti

va d

e la

sev

erid

ad

pu

ede

ser

MO

DER

AD

A e

n f

un

ció

n d

e la

du

raci

ón

del

est

ud

io y

la a

plic

ació

n d

e P

FH t

emp

ran

os,

co

mo

se

ind

ica

aqu

í.

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Du

ran

te e

l es

tud

io,

los

rato

nes

fu

ero

n o

bje

to d

e se

guim

ien

to p

or

par

te d

el p

erso

nal

téc

nic

o d

e an

imal

es d

e la

bo

rato

rio

y e

l p

erso

nal

en

carg

ado

de

su

cuid

ado

med

ian

te u

n s

iste

ma

de

ho

jas

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a ad

apta

das

al

pro

toco

lo,

pre

via

con

sult

a a

los

usu

ario

s, e

l p

erso

nal

té

cnic

o d

e an

imal

es d

e

lab

ora

tori

o,

el p

erso

nal

en

carg

ado

del

cu

idad

o d

e lo

s an

imal

es y

el v

eter

inar

io. E

stas

ho

jas

incl

uía

n p

arám

etro

s re

lati

vos

al p

eso

, el

est

ado

del

pel

aje,

to

no

Ad

min

istr

ació

n d

e u

n

nu

evo

age

nte

ter

apéu

tico

(du

ran

te la

fo

rma

pro

gres

iva)

Mal

esta

r d

ebid

o a

la in

yecc

ión

Efec

tos

secu

nd

ario

s o

fal

ta d

e ef

icac

ia d

el

agen

te

Los

anim

ales

ser

án o

bje

to d

e u

n

estr

ech

o s

egu

imie

nto

tra

s la

inye

cció

n

del

age

nte

ter

apéu

tico

pro

pu

esto

.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

po

r

mét

od

os

incr

uen

tos

si s

e o

bse

rva

cual

qu

iera

de

los

ind

icad

ore

s an

tes

men

cio

nad

os,

o s

i el n

uev

o a

gen

te

tera

péu

tico

pro

du

ce e

fect

os

secu

nd

ario

s se

vero

s.

46

de

la c

ola

, co

ntr

ol

de

la v

ejig

a, g

rad

o d

e in

corp

ora

ció

n,

loco

mo

ció

n,

par

esia

y s

ign

os

avan

zad

os

(po

sici

ón

de

des

can

so s

ob

re e

l co

stad

o,

par

ális

is c

asi

com

ple

ta,

resp

irac

ión

ráp

ida,

len

ta o

pro

fun

da)

. P

ues

to q

ue

el p

roye

cto

imp

licab

a la

rea

lizac

ión

de

pro

ced

imie

nto

s se

vero

s, lo

s an

imal

es f

uer

on

ob

jeto

de

un

se

guim

ien

to m

uy

det

alla

do

, y e

l usu

ario

rea

lizó

exá

men

es c

on

tin

uo

s d

e la

sev

erid

ad, t

ras

con

sult

ar a

l órg

ano

de

con

tro

l de

l bie

nes

tar

anim

al, a

l per

son

al

técn

ico

de

anim

ales

de

lab

ora

tori

o y

al v

eter

inar

io d

esig

nad

o. A

co

nti

nu

ació

n s

e p

rese

nta

un

eje

mp

lo il

ust

rati

vo d

e u

na

ho

ja d

e p

un

taci

ón

.

Ejem

plo

de

un

a h

oja

de

pu

ntu

ació

n a

dec

uad

a

Cu

adro

. Ho

ja d

e p

un

tuac

ión

clín

ica

uti

lizad

a p

ara

rato

nes

co

n E

AE

Fech

a:

Asp

ecto

Pes

o c

orp

ora

l

Esta

do

del

pel

aje

Fun

cio

nes

co

rpo

rale

s

Co

ntr

ol d

e la

vej

iga

Ton

o d

e la

co

la

Res

pir

ació

n

Ento

rno

Esta

do

del

nid

o

Co

mp

ort

amie

nto

Co

mp

ort

amie

nto

so

cial

47

Loco

mo

ció

n

Ind

icad

ore

s e

spec

ífic

os

del

pro

ced

imie

nto

Po

sici

ón

de

rep

oso

sob

re e

l co

stad

o

Tiem

po

par

a

inco

rpo

rars

e

Par

esia

Par

ális

is

Otr

as o

bse

rvac

ion

es

(Tex

to li

bre

)

No

tas:

Cad

a in

dic

ado

r se

eva

luó

co

n e

l si

stem

a in

dic

ado

en

el

cuad

ro q

ue

figu

ra a

co

nti

nu

ació

n,

en e

l q

ue

(po

r ej

emp

lo)

se i

nd

ica

«1»

ju

nto

a «

ton

o d

e la

cola

» s

i se

ob

serv

a q

ue

el a

nim

al la

leva

nta

men

os,

y «

2»

jun

to a

«es

tad

o d

el n

ido

» s

i est

e e

stá

des

org

aniz

ado

.

Cu

adro

. Sis

tem

a d

e e

valu

ació

n d

e lo

s in

dic

ado

res

en

la h

oja

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a d

e EA

E

Pu

ntu

ació

n:

1 =

Le

ve

2 =

Mo

de

rad

o

3 =

Sev

ero

Pé

rdid

a d

e p

eso

H

asta

el 1

0 %

D

el 1

0 %

al 2

0 %

D

el 2

0 %

al 3

5 %

48

Esta

do

del

pel

aje

Lige

ram

ente

des

cuid

ado

Fa

lta

de

acic

alad

o

Pilo

erec

ció

n m

arca

da

o p

rolo

nga

da

Co

ntr

ol d

e la

vej

iga

-

inco

nti

nen

cia

Ind

icio

s d

e p

érd

ida

de

con

tro

l, p

or

ejem

plo

, peq

ueñ

as c

anti

dad

es d

e

ori

na

en

el n

ido

«Fu

gas»

de

ori

na

más

pro

nu

nci

adas

In

con

tin

enci

a

Co

ntr

ol d

e la

vej

iga

-

rete

nci

ón

La v

ejig

a p

ued

e p

alp

arse

, per

o s

e

vací

a d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n

Se r

equ

iere

alg

o m

ás d

e es

fuer

zo

par

a va

ciar

la v

ejig

a

Inca

pac

idad

par

a o

rin

ar s

in

asis

ten

cia,

sig

no

s d

e

mal

esta

r/an

gust

ia d

ura

nte

o

des

pu

és d

el v

acia

do

man

ual

Ton

o d

e la

co

la

Dis

min

uci

ón

del

leva

nta

mie

nto

o

enro

scad

o d

e la

co

la

Pér

did

a d

e to

no

en

la m

itad

dis

tal d

e

la c

ola

Pér

did

a d

e to

no

en

to

da

la c

ola

Re

spir

ació

n: r

ápid

a, le

nta

o

pro

fun

da

Lige

ra

Mo

der

ada

Mar

cad

a

Esta

do

del

nid

o

Lige

ram

ente

des

org

aniz

ado

Se

ha

inte

nta

do

co

nst

ruir

un

nid

o,

per

o e

ste

est

á d

eso

rgan

izad

o

No

exi

ste

un

nid

o

Co

mp

ort

amie

nto

so

cial

Si

n c

amb

io p

revi

sto

co

n s

ufr

imie

nto

leve

, la

pu

ntu

ació

n c

om

ien

za e

n 2

Inte

racc

ión

re

du

cid

a co

n o

tro

s

anim

ales

Inte

racc

ión

su

mam

ente

red

uci

da,

pas

ivid

ad

Loco

mo

ció

n

Torp

e A

rras

tra

un

a ex

trem

idad

po

ster

ior

Arr

astr

a am

bas

ext

rem

idad

es

po

ste

rio

res

Po

sici

ón

de

rep

oso

so

bre

el

cost

ado

Sin

cam

bio

pre

vist

o c

on

su

frim

ien

to

leve

o m

od

erad

o, l

a p

un

tuac

ión

com

ien

za e

n 3

Sin

cam

bio

pre

vist

o c

on

su

frim

ien

to

leve

o m

od

erad

o, l

a p

un

tuac

ión

com

ien

za e

n 3

Pre

sen

te

Tiem

po

par

a in

corp

ora

rse

Len

titu

d p

ara

inco

rpo

rars

e al

est

ar

Gra

nd

es d

ific

ult

ades

par

a In

cap

acid

ad p

ara

inco

rpo

rars

e 5

segu

nd

os

des

pu

és d

e es

tar

de

49

de

esp

ald

as

inco

rpo

rars

e es

pal

das

Par

esia

A

bd

ucc

ión

len

ta d

e la

s ex

trem

idad

es

ante

rio

res

al e

star

de

esp

ald

as

Alc

ance

red

uci

do

de

la a

bd

ucc

ión

de

las

extr

emid

ades

an

teri

ore

s al

est

ar

de

esp

ald

as

Sin

ab

du

cció

n d

e la

s ex

trem

idad

es

ante

rio

res

Par

ális

is c

asi c

om

ple

ta o

com

ple

ta

Sin

cam

bio

pre

vist

o c

on

su

frim

ien

to

leve

o m

od

erad

o, l

a p

un

tuac

ión

com

ien

za e

n 3

Sin

cam

bio

pre

vist

o c

on

su

frim

ien

to

leve

o m

od

erad

o, l

a p

un

tuac

ión

com

ien

za e

n 3

Pre

sen

te

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Al f

inal

del

pro

ced

imie

nto

se

exam

inó

la h

oja

de

pu

ntu

ació

n d

e ca

da

ind

ivid

uo

par

a ve

r la

pu

ntu

ació

n d

e ca

da

ind

icad

or

y su

evo

luci

ón

en

el t

iem

po

.

Do

s ra

ton

es p

erd

iero

n u

n 8

% d

e su

pes

o c

orp

ora

l tr

as l

a in

du

cció

n d

e la

EA

E, t

en

ían

el

pel

aje

liger

amen

te d

escu

idad

o y

pre

sen

tab

an u

na

abd

ucc

ión

le

nta

de

las

extr

emid

ades

an

teri

ore

s, p

ero

ob

tuvi

ero

n u

na

pu

nta

ció

n d

e «

2» e

n t

od

os

los

dem

ás i

nd

icad

ore

s d

ura

nte

lo

s p

rim

ero

s 5

día

s d

el p

roye

cto

. Su

s p

un

tuac

ion

es p

asar

on

po

ster

iorm

ente

a «

1»

ó «

0»

en

cad

a in

dic

ado

r d

ura

nte

la

fase

de

reca

ída

y re

mis

ión

, y

du

ran

te e

l en

sayo

del

fár

mac

o.

Cla

sifi

caci

ón

= M

OD

ERA

DA

.

Tres

rat

on

es p

erd

iero

n e

ntr

e u

n 2

2 %

y u

n 3

2 %

de

su p

eso

co

rpo

ral

y o

btu

vier

on

un

a p

un

taci

ón

de

«3»

, «

2»

y «

1»

du

ran

te t

od

a la

fas

e d

e re

caíd

a y

rem

isió

n, y

du

ran

te e

l en

sayo

del

fár

mac

o. C

lasi

fica

ció

n =

SEV

ERA

.

Un

rat

ón

per

dió

un

37

% d

e su

pes

o c

orp

ora

l d

ura

nte

la

fase

po

ste

rio

r a

la i

nd

ucc

ión

de

EAE

y fu

e sa

crif

icad

o d

e m

od

o i

ncr

uen

to.

Cla

sifi

caci

ón

=

SEV

ERA

.

Do

s ra

ton

es p

erd

iero

n e

l 1

5 %

y e

l 1

8 %

de

su p

eso

co

rpo

ral,

resp

ecti

vam

ente

, y

ob

tuvi

ero

n u

na

pu

ntu

ació

n d

e «2

» y

«3

» e

n t

od

os

los

dem

ás

ind

icad

ore

s d

ura

nte

los

pri

mer

os

4 d

ías

del

est

ud

io.

A c

on

tin

uac

ión

ob

tuvo

un

a p

un

tuac

ión

de

«1

» y

«2»

du

ran

te t

od

a la

fas

e d

e re

caíd

a y

rem

isió

n, y

d

ura

nte

el e

nsa

yo d

el f

árm

aco

. Cla

sifi

caci

ón

= S

EVER

A.

50

No

se

ob

serv

ó p

arál

isis

y r

esu

ltó

dem

asia

do

dif

ícil

eval

uar

la r

esp

irac

ión

al l

ado

de

la c

ub

eta,

po

r lo

qu

e es

tos

do

s p

arám

etro

s se

elim

inar

on

de

las

ho

jas

de

regi

stro

. En

las

cas

illas

par

a te

xto

lib

re a

men

ud

o s

e in

dic

ó q

ue

los

anim

ales

pas

aban

un

may

or

tiem

po

en

lo

s re

fugi

os,

lo

qu

e se

co

nsi

der

ó u

n i

nd

icad

or

tem

pra

no

de

sufr

imie

nto

, y s

e a

ñad

ió a

las

ho

jas

de

pu

ntu

ació

n p

ara

futu

ros

pro

yect

os.

La c

lasi

fica

ció

n d

e 6

an

imal

es s

e co

nsi

der

ó S

EVER

A y

la d

e 2

an

imal

es M

OD

ERA

DA

.

Op

ort

un

idad

es p

ara

aplic

ar e

l ree

mp

lazo

, la

red

ucc

ión

y e

l re

fin

amie

nto

en

el f

utu

ro

Tras

eva

luar

la

seve

rid

ad r

eal,

los

usu

ario

s co

nsu

ltar

on

a o

tro

s u

suar

ios

y b

usc

aro

n o

tro

s re

fin

amie

nto

s en

la

bib

liogr

afía

. Se

id

enti

fica

ron

lo

s si

guie

nte

s

refi

nam

ien

tos

adic

ion

ales

:

Alim

enta

r p

revi

amen

te a

lo

s an

imal

es c

on

alim

ento

s co

mp

lem

enta

rio

s ri

cos

en e

ner

gía,

co

mo

gel

atin

a y

lech

e co

nd

ensa

da,

an

tes

de

adm

inis

trar

el

adyu

van

te.

Usa

r u

na

men

or

do

sis

de

adyu

van

te.

Usa

r o

tro

pro

toco

lo p

ara

el e

stu

dio

a f

in d

e re

du

cir

la d

ura

ció

n d

el p

roye

cto

. Es

tos

refi

nam

ien

tos

se a

ñad

iero

n a

l p

roto

colo

par

a fu

turo

s es

tud

ios

con

la

inte

nci

ón

de

com

par

ar l

os

niv

eles

de

seve

rid

ad r

eal

par

a co

mp

rob

ar s

i lo

s

refi

nam

ien

tos

hab

ían

res

ult

ado

efi

cace

s.

51

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 3

– A

rtri

tis

Últ

ima

actu

aliz

ació

n: 0

2 o

ctu

bre

20

14

Co

nte

xto

gen

eral

Los

mo

del

os

de

artr

itis

co

n a

nim

ales

se

uti

lizan

par

a es

tud

iar

la p

ato

gén

esis

de

esta

en

ferm

edad

y p

ara

eval

uar

po

sib

les

fárm

aco

s co

ntr

a el

la p

ara

uso

clín

ico

. Po

r co

nsi

guie

nte

, en

tre

los

crit

erio

s im

po

rtan

tes

par

a la

sel

ecci

ón

del

mo

del

o s

e e

ncu

entr

an la

s si

mili

tud

es m

orf

oló

gica

s co

n la

en

ferm

edad

hu

man

a

y la

cap

acid

ad d

el m

od

elo

par

a p

red

ecir

la e

fica

cia

de

los

com

pu

esto

s te

rap

éuti

cos

can

did

ato

s en

hu

man

os.

Entr

e lo

s m

od

elo

s co

n a

nim

ales

más

usa

do

s p

ara

el e

stu

dio

de

la a

rtri

tis

reu

mat

oid

e se

en

cuen

tran

: la

art

riti

s in

du

cid

a p

or

ad

yuva

nte

en

rat

as,

la a

rtri

tis

ind

uci

da

po

r co

láge

no

de

tip

o II

en

rat

as,

la a

rtri

tis

ind

uci

da

po

r co

láge

no

tip

o II

en

rat

on

es y

la a

rtri

tis

ind

uci

da

po

r an

tíge

no

s en

var

ias

esp

ecie

s (B

end

ele,

200

1).

Gen

eral

men

te s

e u

tiliz

a u

na

inye

cció

n e

n l

a b

ase

de

la c

ola

, ya

qu

e o

frec

e u

na

bu

ena

resp

ues

ta i

nm

un

ogé

nic

a, s

i b

ien

en

la

bib

liogr

afía

se

señ

alan

tam

bié

n o

tro

s p

un

tos

par

a es

ta in

yecc

ión

. Asi

mis

mo

exi

sten

var

iaci

on

es c

on

sid

erab

les

en la

s ce

pas

en

lo q

ue

resp

ecta

a la

su

scep

tib

ilid

ad, l

a se

veri

dad

y la

late

nci

a al

inic

io d

e la

art

riti

s. P

or

ejem

plo

, la

susc

epti

bili

dad

de

las

línea

s m

od

ific

adas

gen

étic

amen

te p

ara

des

arro

llar

artr

itis

pu

ede

mo

dif

icar

se (

aum

enta

r

o s

up

rim

ir)

en f

un

ció

n d

e lo

s ef

ecto

s d

e la

s al

tera

cio

nes

de

los

gen

es.

En m

od

elo

s co

n a

nim

ales

par

a el

est

ud

io d

e la

art

riti

s m

ás c

om

ún

men

te u

tiliz

ado

s y

qu

e, p

or

end

e, h

an s

ido

val

idad

os,

el

inic

io d

e la

en

ferm

edad

es

pre

dec

ible

, y

las

técn

icas

de

eval

uac

ión

su

elen

est

ar b

ien

def

inid

as y

car

acte

riza

da

s. E

n

esto

s m

od

elo

s p

ued

en e

mp

lear

se m

últ

iple

s ev

alu

acio

nes

, in

clu

ido

el a

nál

isis

de

la lo

com

oci

ón

y e

l uso

de

fila

me

nto

s d

e V

on

Fre

y, p

or

op

osi

ció

n a

med

idas

ind

ivid

ual

es d

e o

bse

rvac

ión

.

52

Cab

e se

ñal

ar q

ue

es n

eces

ario

exa

min

ar p

erió

dic

amen

te l

as c

epas

, lo

s p

roto

colo

s y

los

refi

nam

ien

tos

exis

ten

tes

a fi

n d

e se

lecc

ion

ar c

aso

po

r ca

so e

l o

los

más

ad

ecu

ado

s p

ara

resp

on

der

a la

pre

gun

ta c

ien

tífi

ca q

ue

se f

orm

ula

(Jo

e et

al.,

19

99

).

El m

od

elo

qu

e se

pre

sen

ta e

n e

ste

ejem

plo

es

el d

e ar

trit

is in

du

cid

a p

or

colá

gen

o d

e ti

po

II e

n r

atas

, q

ue

pu

ede

cau

sar

un

su

frim

ien

to s

ever

o.

Po

r el

lo,

un

req

uis

ito

ab

solu

to p

ara

usa

rlo

es

con

tar

con

un

a ju

stif

icac

ión

cie

ntí

fica

co

nvi

nce

nte

. La

s ra

tas

se i

nm

un

izan

co

ntr

a el

co

láge

no

de

tip

o II

het

eró

logo

med

ian

te le

sio

nes

sim

ilare

s a

las

qu

e se

ob

serv

an e

n la

art

riti

s re

um

ato

ide

hu

man

a (B

end

ele,

20

01

). L

a p

olia

rtri

tis

resu

ltan

te s

e ca

ract

eri

za p

or

un

a am

plia

des

tru

cció

n d

e ca

rtíla

go a

soci

ada

con

dep

osi

ció

n c

om

ple

ja i

nm

un

e en

las

su

per

fici

es d

e la

s ar

ticu

laci

on

es,

reab

sorc

ión

de

hu

eso

y p

rolif

erac

ión

del

per

iost

io, a

sí c

om

o s

ino

viti

s m

od

erad

a a

grav

e e

infl

amac

ión

per

iart

icu

lar.

Re

fere

nci

as

Ben

del

e, A

.M.,

An

imal

mo

del

s o

f rh

eum

ato

id a

rth

riti

s, J

Mu

scu

losk

el N

euro

n In

tera

ct 2

00

1; 1

(4):

37

7-3

85

.

Jase

mia

n Y

. et

al.

(20

11),

Ref

inem

ent

of

the

colla

gen

ind

uce

d a

rth

riti

s m

od

el in

rat

s b

y in

frar

ed t

her

mo

grap

hy.

Br.

J. M

ed. &

Med

. Res

. 1(4

): 4

69-4

77

.

Joe,

B.,

Gri

ffit

hs,

M.M

., R

emm

ers,

E.F

., W

ilder

,R.L

., A

nim

al m

od

els

of

rheu

mat

oid

art

hri

tis,

Cu

rren

t R

heu

mat

olo

gy R

epo

rts

19

99

; 1 1

39

-14

9.

Estu

dio

En e

ste

ejem

plo

se

ind

uci

rá a

rtri

tis

en 3

6 r

atas

Lew

is, 1

8 m

ach

os

y 1

8 h

emb

ras,

med

ian

te in

yecc

ion

es r

epet

idas

de

FIA

(ad

yuva

nte

inco

mp

leto

de

Freu

nd

) y

colá

gen

o. L

as in

yecc

ion

es s

e re

aliz

arán

en

la b

ase

de

la c

ola

. El t

rata

mie

nto

dia

rio

co

men

zará

10

día

s d

esp

ués

(D

10

), c

uan

do

se

hay

a d

esar

rolla

do

la a

rtri

tis,

y lu

ego

co

nti

nu

ará

dia

riam

ente

du

ran

te o

tro

s 1

4 d

ías

(has

ta D

24

). E

l ob

jeti

vo d

el e

stu

dio

es

po

ner

a p

rueb

a ag

ente

s te

rap

éuti

cos

pu

tati

vos.

Se

con

sult

aro

n

dat

os

pu

blic

ado

s co

n a

nte

rio

rid

ad s

ob

re c

om

pu

esto

s re

laci

on

ado

s p

ara

ver

si l

a ad

min

istr

ació

n d

e an

algé

sico

s in

terf

erir

ía c

on

lo

s o

bje

tos

cien

tífi

cos,

y s

e

det

erm

inó

qu

e in

tro

du

cirí

a co

nfu

sió

n e

n e

l exp

erim

ento

. Po

r e

llo n

o s

e ad

min

istr

arán

an

algé

sico

s d

ura

nte

el d

esar

rollo

de

la a

rtri

tis

ni a

l gru

po

de

con

tro

l, y

se p

rest

ará

esp

ecia

l at

enci

ón

a l

os

mét

od

os

no

far

mac

oló

gico

s p

ara

aliv

iar

el d

olo

r (p

or

ejem

plo

, re

qu

isit

os

de

prá

ctic

as z

oo

técn

icas

) a

fin

de

red

uci

r el

sufr

imie

nto

.

53

Se o

bse

rvar

á y

se p

esar

á d

iari

ame

nte

a t

od

os

los

anim

ales

, y

se r

egis

trar

á u

na

pu

ntu

ació

n e

n la

ho

ja g

ener

al d

e p

un

tuac

ión

clín

ica,

y s

e ev

alu

arán

el

día

0

(D0;

an

tes

de

la p

rim

era

inye

cció

n)

y lo

s d

ías

D10

(an

tes

del

in

icio

del

tra

tam

ien

to),

D1

3,

D1

6,

D2

0 y

D2

4.

Las

pru

ebas

in

clu

irán

la

med

ició

n i

nd

irec

ta d

e

alte

raci

on

es f

ísic

as, c

om

o e

l diá

met

ro d

e la

s ar

ticu

laci

on

es (

real

izad

a m

edia

nte

un

pie

de

rey)

y la

pu

ntu

ació

n c

línic

a co

n a

rreg

lo a

un

sis

tem

a d

e p

un

tuac

ión

par

a la

art

riti

s. S

e ap

licar

án p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

en

fu

nci

ón

de

las

pu

ntu

acio

nes

clín

icas

(vé

ase

más

ab

ajo

).

Eval

uac

ión

de

nu

evo

s ag

ente

s fa

rmac

éuti

cos

tera

péu

tico

s e

n u

n m

od

elo

de

artr

itis

en

rat

as (

colá

gen

o d

e ti

po

II)

Cla

sifi

caci

ón

SEV

ERA

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n lo

s

anim

ale

s?

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s? ¿

Cu

ánto

sufr

imie

nto

po

drí

a ca

usa

r? ¿

Qu

é p

od

ría

emp

eora

rlo

?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

enci

on

es

Pu

nto

s fi

nal

es

Inye

ccio

nes

su

bcu

tán

eas

de

colá

gen

o b

ovi

no

tip

o II

en a

dyu

van

te in

com

ple

to

de

Freu

nd

(FI

A)

en

la b

ase

de

la c

ola

has

ta e

n t

res

oca

sio

nes

Estr

és d

e co

nfi

nam

ien

to.

Do

lor

pas

ajer

o, i

nfl

amac

ión

mo

der

ada

en

el

luga

r d

e la

inye

cció

n y

mal

esta

r d

ura

nte

un

o

o d

os

día

s.

Po

sib

ilid

ad d

e u

lcer

ació

n d

e la

pie

l, au

nq

ue

po

co p

rob

able

co

n F

IA.

Act

itu

des

em

pát

icas

y m

anip

ula

ció

n c

om

pet

ente

du

ran

te t

od

os

los

pro

ced

imie

nto

s.

Sele

cció

n d

e d

osi

s y

fórm

ula

s n

orm

aliz

adas

par

a

min

imiz

ar la

infl

amac

ión

y e

l do

lor

Si la

ulc

erac

ión

de

la p

iel p

ersi

ste

o s

e

infe

cta,

los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

incr

uen

to.

De

sarr

ollo

de

la a

rtri

tis

(D0

a D

10)

Mal

esta

r, d

olo

r, d

isca

pac

idad

y a

ngu

stia

; el

anim

al p

ued

e m

ost

rar

sign

os

de

en

ferm

edad

,

po

r ej

emp

lo, a

spec

to a

pag

ado

, fal

ta d

e

Segu

imie

nto

clín

ico

det

alla

do

uti

lizan

do

un

a h

oja

gen

eral

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a, c

on

au

men

to d

e la

frec

uen

cia

del

se

guim

ien

to a

l in

icio

de

los

sign

os

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

incr

uen

to s

i alc

anza

n la

s p

un

tuac

ion

es

clín

icas

det

erm

inad

as p

revi

amen

te

54

apet

ito

, res

iste

nci

a a

mo

vers

e, p

érd

ida

de

pes

o, i

nfl

amac

ión

de

las

arti

cula

cio

nes

,

voca

lizac

ión

au

dib

le d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n.

clín

ico

s (n

orm

alm

ente

en

tre

el D

8 y

el D

10

).

Du

ran

te t

od

o e

l est

ud

io s

e su

min

istr

ará

lech

o

suav

e ad

icio

nal

y m

ater

ial p

ara

anid

ar .

Fáci

l acc

eso

al a

gua

y lo

s al

imen

tos

(po

r ej

emp

lo,

en e

l su

elo

de

la c

ub

eta)

du

ran

te t

od

o e

l est

ud

io.

Se u

tiliz

ará

un

sis

tem

a d

e p

un

tuac

ión

clín

ica

qu

e

eval

úe

el g

rad

o d

e in

flam

ació

n y

el n

úm

ero

de

arti

cula

cio

nes

afe

ctad

as.

par

a lo

s p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

(véa

se e

l cu

adro

más

ab

ajo

).

Ad

min

istr

ació

n d

e

fárm

aco

s (g

rup

os

de

pru

eba

y co

ntr

ol,

do

s

vece

s al

día

) p

or

vía

sub

cutá

nea

o

intr

aper

ito

nea

l

(D10

a D

24)

Mal

esta

r p

asaj

ero

tra

s la

inye

cció

n.

No

se

pre

vé q

ue

los

fárm

aco

s te

nga

n e

fect

os

adve

rso

s, d

e ac

uer

do

co

n d

ato

s an

teri

ore

s

ob

ten

ido

s co

n a

nim

ales

.

Segu

imie

nto

clín

ico

det

alla

do

y d

iari

o u

tiliz

and

o

un

a h

oja

gen

eral

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a.

Se a

plic

arán

pu

nto

s fi

nal

es

hu

man

itar

ios

si s

e p

rod

uce

n e

fect

os

adve

rso

s si

gnif

icat

ivo

s.

Eval

uac

ión

de

los

efe

cto

s

de

los

fárm

aco

s e

n la

seve

rid

ad d

e la

art

riti

s

(D0,

D1

0, D

13

, D1

6, D

20

y

D2

4)

Dep

end

ien

do

de

los

mét

od

os

uti

lizad

os,

pu

ede

pro

du

cirs

e d

olo

r o

mal

esta

r ad

icio

nal

pas

ajer

o, p

or

eje

mp

lo, u

so d

e fi

lam

ento

s d

e

Vo

n F

rey,

uso

del

pie

de

rey,

nec

esi

dad

es d

e

man

ipu

laci

ón

.

Segu

imie

nto

clín

ico

det

alla

do

.

Red

ucc

ión

de

la f

recu

enci

a d

el s

egu

imie

nto

(al

mín

imo

nec

esar

io p

ara

alca

nza

r lo

s o

bje

tivo

s

cien

tífi

cos)

has

ta q

ue

los

anim

ales

se

recu

per

en.

Véa

se e

l cu

adro

más

ab

ajo

No

ta

55

El i

nve

stig

ado

r, e

l ve

teri

nar

io,

el p

erso

nal

téc

nic

o d

e an

imal

es d

e la

bo

rato

rio

y e

l p

erso

nal

en

carg

ado

del

cu

idad

o d

e lo

s an

imal

es d

iscu

tirá

n s

ob

re u

n

sist

ema

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a y

de

artr

itis

, y lo

ap

rob

arán

an

tes

del

co

mie

nzo

del

est

ud

io.

An

ális

is

Deb

ido

a la

po

sib

ilid

ad d

e q

ue

el e

stu

dio

ten

ga u

n e

fect

o c

línic

o s

ign

ific

ativ

o e

n lo

s an

imal

es, q

ue

pu

ede

pro

lon

gars

e va

rias

sem

anas

, se

con

sid

era

adec

uad

a

un

a cl

asif

icac

ión

SEV

ERA

.

¿Po

drí

a se

r la

cla

sifi

caci

ón

MO

DER

AD

A?

La p

osi

bili

dad

de

red

uci

r la

cla

sifi

caci

ón

a m

od

erad

a d

epe

nd

e d

el p

rop

ósi

to d

el e

stu

dio

. P

or

ejem

plo

, co

n u

n s

egu

imie

nto

fre

cuen

te y

det

alla

do

de

los

anim

ales

y c

uan

do

exi

ste

la p

osi

bili

dad

de

aplic

ar p

un

tos

fin

ales

tem

pra

no

s (a

sí,

al i

nic

iars

e la

co

jera

o d

esp

ués

de

un

per

íod

o d

e le

ve c

oje

ra e

n u

na

extr

emid

ad,

o s

i se

usa

n m

éto

do

s d

e d

iagn

óst

ico

de

imág

enes

in

viv

o p

ara

det

ecta

r lo

s p

rim

ero

s ca

mb

ios

en l

a p

ato

logí

a d

e la

s ar

ticu

laci

on

es),

el

pro

ced

imie

nto

po

drí

a cl

asif

icar

se c

om

o M

OD

ERA

DO

. Est

os

pu

nto

s fi

nal

es t

emp

ran

os

(po

r ej

emp

lo,

fin

aliz

ar e

l es

tud

io e

l se

xto

día

des

pu

és d

el d

iagn

óst

ico

de

imág

enes

) so

n p

osi

ble

s en

pro

yect

os

qu

e in

vest

igan

lo

s p

rim

ero

s ca

mb

ios

infl

amat

ori

os.

El

trat

amie

nto

pro

filá

ctic

o (

ante

s d

el p

len

o d

esar

rollo

de

la

artr

itis

) co

n n

uev

os

fárm

aco

s q

ue

ten

gan

po

ten

tes

efec

tos

anti

infl

amat

ori

os

y lim

iten

el

des

arro

llo d

e la

art

riti

s ta

mb

ién

pu

ede

red

uci

r la

cla

sifi

caci

ón

a

MO

DER

AD

A.

Sin

em

bar

go, e

l tip

o d

e es

tud

io q

ue

ilust

ram

os

aqu

í pre

ten

de

eval

uar

los

trat

amie

nto

s p

ara

la a

rtri

tis

ple

nam

ente

des

arro

llad

a, d

e m

od

o q

ue

la c

lasi

fica

ció

n s

igu

e si

end

o S

EVER

A.

¿Po

drí

a la

sev

erid

ad e

xced

er e

l lím

ite

su

per

ior?

Co

n a

rreg

lo a

l ar

tícu

lo 1

5,

apar

tad

o 2

, d

e la

Dir

ecti

va,

«lo

s Es

tad

os

mie

mb

ros

vela

rán

po

r q

ue

no

se

real

ice

un

pro

ced

imie

nto

si

imp

lica

do

lor

seve

ro,

sufr

imie

nto

o a

ngu

stia

qu

e p

ued

a se

r d

ura

der

o y

qu

e n

o p

ued

a ex

per

imen

tar

un

a m

ejo

ría»

. Es

te e

stu

dio

pu

ede

cau

sar

sufr

imie

nto

sev

ero

du

ran

te v

aria

s

sem

anas

, y d

ebe

con

sid

erar

se d

e la

rga

du

raci

ón

. Si l

os

anim

ales

des

arro

llara

n u

na

artr

itis

sev

era

en

las

cuat

ro e

xtre

mid

ades

y n

o s

e re

du

jera

su

su

frim

ien

to,

56

el e

stu

dio

exc

eder

ía e

l lím

ite

sup

erio

r d

e se

veri

dad

y s

ería

nec

esar

io r

efin

arlo

de

form

a si

gnif

icat

iva

o in

voca

r la

«cl

áusu

la d

e sa

lvag

uar

dia

» (

artí

culo

55

de

la

Dir

ecti

va)

y so

licit

ar a

uto

riza

ció

n a

la C

om

isió

n.

No

ob

stan

te, e

n e

ste

eje

mp

lo s

e h

an a

do

pta

do

med

idas

par

a re

du

cir

el s

ufr

imie

nto

—te

nie

nd

o e

n c

uen

ta a

l mis

mo

tie

mp

o lo

s o

bje

tivo

s ci

entí

fico

s—, c

om

o

el r

efin

amie

nto

de

la c

om

po

sici

ón

, ví

a d

e ad

min

istr

ació

n y

ele

cció

n d

el c

oad

yuva

nte

, p

erm

itie

nd

o ú

nic

amen

te q

ue

la a

rtri

tis

se d

esar

rolle

en

las

extr

emid

ades

po

ster

iore

s y

bri

nd

and

o u

n e

nto

rno

có

mo

do

y d

e fá

cil a

cce

so a

los

alim

ento

s y

el a

gua,

un

sis

tem

a e

xhau

stiv

o d

e se

guim

ien

to y

pu

nto

s fi

nal

es

hu

man

itar

ios.

Así

pu

es,

no

se

con

sid

erar

ía q

ue

este

pro

yect

o e

xced

e el

lím

ite

su

per

ior,

y p

ued

e au

tori

zars

e m

edia

nte

un

a ev

alu

ació

n p

osi

tiva

del

pro

yect

o

qu

e in

clu

ya e

l exa

men

de

los

dañ

os

y lo

s b

enef

icio

s.

A c

on

tin

uac

ión

se

pre

sen

ta u

n e

jem

plo

de

ho

ja d

e p

un

tuac

ión

clín

ica

par

a la

ob

serv

ació

n d

iari

a d

e ra

tas

con

art

riti

s

Fech

a:

Día

1

Día

2

Día

3

Día

4

Asp

ecto

Pes

o c

orp

ora

l

Falt

a d

e ac

ical

ado

Des

hid

rata

ció

n

Fun

cio

nes

co

rpo

rale

s

Dis

nea

57

Taq

uip

nea

Co

mp

ort

amie

nto

Res

iste

nci

a a

mo

vers

e

Leta

rgia

/ap

atía

Inm

ovi

lidad

Vo

caliz

ació

n

Ind

icad

or

esp

ecíf

ico

del

pro

ced

imie

nto

Pu

ntu

ació

n

de

la

extr

emid

ad

artr

ític

a (v

éase

el c

uad

ro 2

)

Otr

as o

bse

rvac

ion

es

(Tex

to li

bre

)

Pu

ntu

ació

n t

ota

l

No

ta:

Cad

a in

dic

ado

r se

eva

luó

med

ian

te e

l sis

tem

a q

ue

se r

eco

ge e

n lo

s cu

adro

s 1

y 2

qu

e fi

gura

n a

co

nti

nu

ació

n.

Po

r ej

emp

lo,

en la

ho

ja d

e p

un

tuac

ión

,

jun

to a

«fa

lta

de

acic

alad

o»

(cu

adro

1)

se i

ntr

od

uci

ría

«1

» y

ju

nto

a «

ind

icad

or

esp

ecíf

ico

del

pro

ced

imie

nto

» s

e in

tro

du

cirí

a «

5»

, si

las

do

s ex

trem

idad

es

po

ste

rio

res

ob

tuvi

eran

un

a p

un

tuac

ión

de

«3

» y

«2

», r

esp

ecti

vam

ente

(cu

adro

2).

Las

acc

ion

es y

los

pu

nto

s fi

nal

es q

ue

figu

ran

más

ab

ajo

tie

nen

en

cu

enta

la n

ece

sid

ad d

e ev

itar

un

su

frim

ien

to s

ever

o c

uan

do

sea

po

sib

le,

per

o n

o d

e sa

crif

icar

de

mo

do

hu

man

itar

io a

lo

s an

imal

es a

nte

s d

e h

aber

ob

ten

ido

sufi

cien

tes

dat

os,

lo q

ue

har

ía n

ece

sari

o u

tiliz

ar o

tro

s an

imal

es n

o s

om

etid

os

a ex

per

imen

tos.

58

Cu

adro

1. S

iste

ma

de

pu

ntu

ació

n p

ara

los

ind

icad

ore

s u

tiliz

ado

s e

n la

ho

ja d

e p

un

tuac

ión

clín

ica

P

un

tuac

ión

Asp

ecto

No

rmal

, pér

did

a d

e p

eso

infe

rio

r al

5 %

0

Pér

did

a d

e p

eso

del

5 %

al 1

0 %

1

Pér

did

a d

e p

eso

del

11

% a

l 15

%

2

Pér

did

a d

e p

eso

del

16

% a

l 20

%

3

Pér

did

a d

e p

eso

su

per

ior

al 2

0 %

P

FH

Falt

a d

e ac

ical

ado

1

Plie

gue

cutá

neo

/des

hid

rata

ció

n

1

Fun

cio

nes

co

rpo

rale

s

Dis

nea

2

Taq

uip

nea

1

Cu

adro

2. I

nd

icad

or

esp

ecíf

ico

del

pro

ced

imie

nto

– P

un

tuac

ión

de

la p

ata

artr

ític

a

0

No

rmal

1

Erit

ema

e in

flam

ació

n d

e u

n t

ob

illo

2

Erit

ema

e in

flam

ació

n d

el t

ob

illo

y la

mit

ad p

roxi

mal

de

las

arti

cula

cio

nes

del

tar

so

3

Erit

ema

e in

flam

ació

n d

el t

ob

illo

y t

od

as la

s ar

ticu

laci

on

es

des

de

el t

arso

has

ta e

l met

atar

so

4

Erit

ema

e in

flam

ació

n d

e to

da

el p

ie, i

ncl

uid

os

los

ded

os

Este

si

ste

ma

de

pu

ntu

ació

n

de

la

artr

itis

u

tiliz

ado

co

mo

ind

icad

or

esp

ecíf

ico

d

el

pro

ced

imie

nto

se

b

asa

en

niv

ele

s

incr

emen

tad

os

de

infl

amac

ión

y

erit

ema

per

iart

icu

lar.

La

s

pu

ntu

acio

nes

se

bas

an e

n e

l exa

men

fís

ico

y la

insp

ecci

ón

vis

ual

y

se u

tiliz

an p

ara

calc

ula

r el

«ín

dic

e ar

trít

ico

»,

qu

e se

def

ine

com

o

la

sum

a d

e la

s p

un

tuac

ion

es

par

a la

s d

os

extr

emid

ades

po

ste

rio

res.

59

Co

mp

ort

amie

nto

Res

iste

nci

a a

mo

vers

e 1

Leta

rgia

/ap

atía

2

Inm

ovi

lidad

per

sist

ente

du

ran

te m

eno

s d

e

24

ho

ras

3

Inm

ovi

lidad

du

ran

te m

ás d

e 24

ho

ras

PFH

Vo

caliz

ació

n d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n

1

Vo

caliz

ació

n, t

enso

y n

ervi

oso

du

ran

te la

man

ipu

laci

ón

2

Vo

caliz

ació

n a

l mo

vers

e/es

po

ntá

nea

3

Ind

icad

or

esp

ecíf

ico

del

pro

ced

imie

nto

Pu

ntu

ació

n d

e la

ext

rem

idad

art

ríti

ca

(cu

adro

2)

0-8

PFH

: ap

licac

ión

del

pu

nto

fin

al h

um

anit

ario

, in

dep

end

ien

tem

ente

de

la p

rese

nci

a o

au

sen

cia

de

otr

os

sign

os

clín

ico

s.

Ejem

plo

s d

e in

terv

enci

on

es a

dec

uad

as e

n r

esp

ues

ta a

las

pu

ntu

acio

ne

s cl

ínic

as t

ota

les

Med

ida

qu

e d

eber

á to

mar

se

Pu

ntu

ació

n

tota

l

Au

men

tar

la f

recu

enci

a d

el s

egu

imie

nto

; co

nsi

der

ar la

po

sib

ilid

ad d

e ad

min

istr

ar lí

qu

ido

s o

cu

idad

os

≥ 4

60

sup

lem

enta

rio

s

Exam

inar

la e

volu

ció

n c

on

el v

ete

rin

ario

5

-15

Pu

nto

fin

al h

um

anit

ario

16

No

ta:

Las

pu

ntu

acio

nes

to

tale

s p

roce

den

de

las

ho

jas

de

pu

ntu

ació

n c

línic

a q

ue

se h

an c

um

plim

enta

do

de

acu

erd

o c

on

lo

s si

stem

as d

e p

un

tuac

ión

qu

e

figu

ran

en

los

cuad

ros

1 y

2.

Po

r ej

emp

lo,

un

an

imal

qu

e h

a p

erd

ido

un

12

% d

e su

pes

o c

orp

ora

l, q

ue

ha

red

uci

do

el a

cica

lad

o d

e su

pel

aje

y q

ue

pre

sen

ta

infl

amac

ión

en

am

bo

s to

bill

os

tras

ero

s te

nd

ría

un

a p

un

tuac

ión

to

tal d

e 5

.

Eval

uac

ión

ret

rosp

ecti

va:

Se i

nm

un

izar

on

36

rat

as c

on

co

láge

no

bo

vin

o d

e ti

po

II e

n a

dyu

van

te i

nco

mp

leto

de

Freu

nd

(FI

A).

To

do

s lo

s an

imal

es d

esar

rolla

ron

art

riti

s, y

las

pu

nta

cio

nes

de

extr

emid

ad a

rtrí

tica

era

n d

e 6

en

el

D1

0.

Tod

os

los

anim

ales

exp

erim

enta

ron

un

a p

érd

ida

de

pes

o d

e en

tre

un

5 %

y u

n 1

0 %

. La

s

med

icio

nes

del

diá

met

ro d

e la

s ar

ticu

laci

on

es in

dic

aro

n u

n c

amb

io s

ign

ific

ativ

o r

esp

ecto

a lo

s d

ato

s in

icia

les.

Las

ob

serv

acio

nes

clín

icas

dia

rias

incl

uía

n f

alta

de

acic

alad

o,

resi

ste

nci

a a

mo

vers

e, a

pat

ía,

voca

lizac

ión

du

ran

te l

a m

anip

ula

ció

n (

du

ran

te l

a o

bse

rvac

ión

y e

n l

os

cam

bio

s d

e c

ub

eta)

, d

ism

inu

ció

n d

e la

inge

sta

de

alim

ento

s y

per

íod

os

de

inm

ovi

lidad

.

Se u

tiliz

aro

n 1

2 a

nim

ales

en

el

gru

po

tra

tad

o c

on

so

luci

ón

sal

ina.

Las

pu

ntu

acio

nes

más

alt

as d

e la

ext

rem

idad

art

ríti

ca d

e to

das

las

med

icio

nes

se

situ

aro

n e

ntr

e 6

y 8

(D

13, D

16, D

20

y D

24).

Las

med

icio

nes

del

diá

met

ro d

e la

s ar

ticu

laci

on

es in

dic

aro

n ig

ual

me

nte

au

men

tos

sign

ific

ativ

os

resp

ecto

a

los

valo

res

inic

iale

s en

el m

om

ento

de

cad

a m

edic

ión

. La

s p

un

tuac

ion

es c

línic

as o

scila

ron

en

tre

4 y

8,

con

un

a p

érd

ida

de

pes

o c

orp

ora

l de

en

tre

un

5 %

y u

n 1

5 %

, sal

vo e

n e

l cas

o d

e u

n a

nim

al q

ue

alca

nzó

un

a p

érd

ida

de

pes

o d

el 2

1 %

el D

17

, cu

and

o f

ue

sacr

ific

ado

de

mo

do

incr

uen

to.

Eval

uac

ión

ret

rosp

ecti

va: S

EVER

A

Se t

rató

a 1

2 a

nim

ales

co

n u

na

do

sis

baj

a d

el F

ÁR

MA

CO

A.

En t

od

os

los

anim

ales

, la

pu

ntu

ació

n d

e ex

trem

idad

art

ríti

ca n

o v

arió

res

pec

to a

la

del

gr

up

o d

e an

imal

es t

rata

do

s co

n s

olu

ció

n s

alin

a h

asta

el D

16

. En

el D

20, u

n a

nim

al t

enía

un

a p

un

tuac

ión

de

extr

emid

ad a

rtrí

tica

de

8 y

la p

un

tuac

ión

de

los

dem

ás o

scila

ba

en

tre

6 y

7.

En e

l D2

4, 5

an

imal

es m

ost

raro

n u

na

pu

ntu

ació

n d

e ex

trem

idad

art

ríti

ca li

gera

men

te in

feri

or

(5 a

7).

Lo

s si

gno

s cl

ínic

os

de

esto

s an

imal

es in

dic

aro

n

cier

ta m

ejo

ra, s

u p

eso

co

rpo

ral a

ún

hab

ía d

ism

inu

ido

en

tre

un

5 %

y u

n 1

0 %

, y s

u m

ovi

lidad

en

la c

aja

sigu

ió s

ien

do

re

du

cid

a.

61

Los

otr

os

7 a

nim

ales

no

mo

stra

ron

un

a re

du

cció

n d

e lo

s si

gno

s ar

trít

ico

s y

clín

ico

s e

n c

om

par

ació

n c

on

el g

rup

o t

rata

do

co

n s

olu

ció

n s

alin

a.

Eval

uac

ión

ret

rosp

ecti

va: S

EVER

A

Se t

rató

a 1

2 an

imal

es c

on

un

a d

osi

s al

ta d

el F

ÁR

MA

CO

A.

En e

l D1

3,

las

pu

ntu

acio

nes

de

extr

emid

ad a

rtrí

tica

era

n d

e 4

a 6

, y lo

s d

iám

etro

s d

e la

s ar

ticu

laci

on

es m

ost

raro

n u

n a

um

ento

no

sig

nif

icat

ivo

. Lo

s si

gno

s cl

ínic

os

señ

alab

an f

alta

de

acic

alad

o y

un

a p

érd

ida

de

pes

o in

feri

or

al 1

0 %

. El D

16

, la

s p

un

tuac

ion

es d

e ex

trem

idad

art

ríti

ca d

ism

inu

yero

n a

4 y

lo

s d

iám

etro

s d

e la

s ar

ticu

laci

on

es m

ost

raro

n r

edu

ccio

nes

sig

nif

icat

ivas

. El

pes

o

corp

ora

l se

esta

bili

zó e

l D

16.

En a

lgu

no

s an

imal

es a

ún

se

ob

serv

aba

resi

ste

nci

a a

mo

vers

e. A

par

tir

del

D2

0,

la in

flam

ació

n d

e la

s ar

ticu

laci

on

es s

e re

du

jo a

un

a p

un

tuac

ión

de

entr

e 2

y 4

. Se

ob

serv

aro

n c

om

po

rtam

ien

tos

no

rmal

es e

n l

a cu

bet

a. E

l p

eso

co

rpo

ral

recu

per

ó s

u n

ivel

an

teri

or

al

pro

ced

imie

nto

. Ev

alu

ació

n r

etro

spec

tiva

: SEV

ERA

No

ta:

Al

fin

al d

el e

stu

dio

, en

el

terc

er

gru

po

de

12

an

imal

es,

el f

árm

aco

so

met

ido

a e

stu

dio

«FÁ

RM

AC

O A

» a

dm

inis

trad

o a

un

a d

osi

s al

ta d

emo

stró

su

efic

acia

par

a re

du

cir

la c

lasi

fica

ció

n r

eal a

mo

der

ada.

Sin

em

bar

go,

deb

ido

a q

ue

el m

od

elo

exi

gía

qu

e to

do

s lo

s an

imal

es d

esar

rolla

ran

ple

nam

ente

art

riti

s

ante

s d

el c

om

ien

zo d

el t

rata

mie

nto

, mo

men

to e

n q

ue

los

anim

ales

mo

stra

ron

sig

no

s cl

ínic

os

corr

esp

on

die

nte

s a

un

a cl

asif

icac

ión

«se

vera

»,

la c

lasi

fica

ció

n

de

la s

ever

idad

rea

l par

a es

tos

anim

ales

sig

uió

sie

nd

o s

eve

ra.

Co

mo

est

e p

roye

cto

in

clu

ye p

roce

dim

ien

tos

seve

ros,

el

usu

ario

deb

e re

aliz

ar e

valu

acio

nes

co

nti

nu

as d

e la

sev

erid

ad e

n c

on

tact

o c

on

el

órg

ano

de

con

tro

l

del

bie

nes

tar

anim

al,

el p

erso

nal

téc

nic

o d

e an

imal

es d

e la

bo

rato

rio

y e

l ve

teri

nar

io d

esig

nad

o,

par

a as

egu

rars

e d

e q

ue

se a

pliq

uen

co

nti

nu

amen

te e

l

reem

pla

zo, l

a re

du

cció

n y

el r

efin

amie

nto

.

62

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 4

– Ic

tus

Últ

ima

actu

aliz

ació

n: 0

2 o

ctu

bre

20

14

Co

nte

xto

gen

eral

El ic

tus

se d

efin

e co

mo

la p

érd

ida

o a

lte

raci

ón

de

las

fun

cio

nes

co

rpo

rale

s n

orm

ales

res

ult

ante

de

un

su

min

istr

o in

sufi

cien

te d

e sa

ngr

e a

par

te d

el c

ere

bro

.

A p

esar

de

qu

e co

no

cem

os

mej

or

la p

ato

fisi

olo

gía

de

las

lesi

on

es v

ascu

lare

s ce

reb

rale

s, u

n t

rata

mie

nto

efi

caz

par

a el

ict

us

sigu

e si

end

o u

na

imp

ort

ante

nec

esi

dad

méd

ica

no

sat

isfe

cha,

y s

e si

gue

inve

stig

and

o p

ara

en

con

trar

med

idas

pre

ven

tiva

s y

tera

péu

tica

s.

Las

per

son

as s

ufr

en t

res

tip

os

de

ictu

s: i

squ

émic

o,

hem

orr

agia

in

trac

ereb

ral

y h

emo

rrag

ia s

ub

arac

no

idea

, p

ero

la

may

orí

a d

e lo

s m

od

elo

s co

n a

nim

ales

exis

ten

tes

actu

alm

ente

se

bas

an e

n e

l ic

tus

isq

uém

ico

. P

or

su p

rop

ia n

atu

rale

za,

los

mo

del

os

de

ictu

s re

pre

sen

tan

to

do

un

ret

o d

esd

e la

per

spec

tiva

del

bie

nes

tar

de

los

anim

ales

. Es

cru

cial

qu

e to

das

las

per

son

as q

ue

inte

rvie

nen

en

los

pro

ced

imie

nto

s ci

entí

fico

s (v

ete

rin

ario

s, in

vest

igad

ore

s, p

erso

nal

téc

nic

o

de

anim

ales

de

lab

ora

tori

o y

per

son

al e

nca

rgad

o d

e cu

idar

a l

os

anim

ales

) in

tera

ctú

en y

se

com

un

iqu

en c

orr

ecta

men

te p

ara

gara

nti

zar

un

eq

uili

bri

o

adec

uad

o e

ntr

e lo

grar

un

mo

del

o v

álid

o e

n e

ste

ámb

ito

de

inve

stig

ació

n y

min

imiz

ar e

l su

frim

ien

to d

e lo

s an

imal

es.

No

rmal

men

te,

el i

ctu

s se

pro

voca

en

ro

edo

res

med

ian

te l

a o

clu

sió

n t

emp

ora

l o

per

man

ente

de

la a

rter

ia c

ere

bra

l m

edia

(o

clu

sió

n d

e la

art

eria

cer

eb

ral

med

ia, m

od

elo

MC

AO

, po

r su

s si

glas

en

ingl

és).

El m

od

elo

de

«M

CA

O»

inte

nta

rep

rod

uci

r d

e m

aner

a ex

per

imen

tal l

a is

qu

emia

cer

ebra

l lo

caliz

ada

qu

e ti

ene

luga

r al

pro

du

cirs

e u

n i

ctu

s, y

se

usa

mu

y fr

ecu

ente

men

te p

ara

estu

dia

r lo

s m

ecan

ism

os

de

lesi

ón

, p

ara

iden

tifi

car

po

sib

les

dia

nas

te

rap

éu

tica

s y

par

a

pro

bar

po

sib

les

agen

tes

neu

rop

rote

cto

res.

Se

han

des

cub

iert

o d

ifer

enci

as e

ntr

e ce

pas

de

rato

nes

y r

atas

, y

se h

a o

bse

rvad

o l

a c

om

ple

ja e

im

po

rtan

te

infl

uen

cia

de

la e

dad

, el

sex

o y

las

co

mo

rbili

dad

es,

com

o l

a d

iab

ete

s, l

a h

iper

ten

sió

n y

la

ater

oes

cler

osi

s. M

ien

tras

qu

e lo

s es

tud

ios

pre

clín

ico

s d

el i

ctu

s a

men

ud

o u

tiliz

an r

oed

ore

s m

ach

os

jóve

nes

san

os,

el

efec

to d

e fa

cto

res

com

o l

os

ante

s m

enci

on

ado

s p

ued

e es

tud

iars

e m

edia

nte

mo

del

os

con

co

nd

icio

nes

63

de

com

orb

ilid

ad (

po

r ej

emp

lo,

rata

s co

n h

iper

ten

sió

n e

spo

ntá

nea

, ra

tas

con

dia

bet

es p

rovo

cad

a p

or

estr

epto

zoto

cin

a).

En e

sto

s ca

sos

con

co

nd

icio

nes

de

com

orb

ilid

ad p

ued

en s

er

nec

esa

rias

ob

serv

acio

nes

más

met

icu

losa

s d

e lo

s si

gno

s cl

ínic

os

y p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

(PFH

) m

ás t

emp

ran

os.

En e

l d

ise

ño

de

un

est

ud

io e

stán

dar

, lo

s an

imal

es s

on

en

tren

ado

s p

ara

real

izar

cie

rtas

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to a

nte

s d

el p

roce

dim

ien

to d

e M

CA

O.

Du

ran

te e

l p

erío

do

ter

apéu

tico

, es

tab

leci

do

de

acu

erd

o c

on

el

mec

anis

mo

de

acci

ón

del

fár

mac

o y

el

ob

jeti

vo d

el e

stu

dio

, lo

s an

imal

es r

ecib

en e

l

com

pu

esto

qu

e se

des

ea p

rob

ar.

El a

nál

isis

de

los

resu

ltad

os

deb

e in

clu

ir i

nfo

rmac

ión

so

bre

el

tam

año

del

in

fart

o,

la t

asa

de

mo

rtal

idad

, la

fre

cuen

cia

de

com

plic

acio

nes

(p

or

ejem

plo

, h

emo

rrag

ia s

ub

arac

no

idea

), j

un

to c

on

la

eval

uac

ión

fu

nci

on

al y

neu

roló

gica

par

a re

aliz

ar u

n s

egu

imie

nto

de

los

avan

ces.

Se

ha

dem

ost

rad

o q

ue

las

reso

nan

cias

mag

nét

icas

en

ser

ie s

on

un

inst

rum

ento

mu

y ú

til p

ara

ob

ten

er in

form

ació

n s

ob

re la

var

iaci

ón

del

tam

año

del

infa

rto

a lo

larg

o d

el t

iem

po

, p

ero

tam

bié

n p

ued

en o

frec

er i

nfo

rmac

ión

ad

icio

nal

so

bre

el

flu

jo s

angu

íneo

o e

l est

ado

met

abó

lico

. A

sim

ism

o,

se p

ued

en in

clu

ir p

un

tos

fin

ales

his

toló

gico

s, b

ioq

uím

ico

s y

mo

lecu

lare

s.

Exis

ten

div

ersa

s p

rueb

as d

e co

mp

ort

amie

nto

qu

e p

ued

en a

plic

arse

a l

os

mo

del

os

de

ict

us.

Las

pru

ebas

más

sen

cilla

s in

clu

yen

sis

tem

as d

e p

un

tuac

ión

neu

roló

gica

, qu

e ev

alú

an e

l est

ado

neu

roló

gico

en

gen

eral

, y p

rueb

as d

e p

osi

cio

nam

ien

to d

e la

s ex

trem

idad

es, q

ue

se u

san

par

a m

edir

los

refl

ejo

s m

oto

res.

Esta

s p

rueb

as s

e u

tiliz

an g

ener

alm

ente

par

a ev

alu

ar a

los

anim

ales

en

fas

e ag

ud

a tr

as e

l ic

tus.

En

los

estu

dio

s d

e la

rga

du

raci

ón

pu

eden

uti

lizar

se p

rueb

as

más

co

mp

leja

s p

ara

eval

uar

las

fu

nci

on

es s

enso

rial

es y

mo

tora

s (p

or

ejem

plo

, la

pru

eba

de

etiq

uet

a ad

hes

iva

bila

tera

l, ca

min

ar

sob

re u

na

bar

ra,

exp

erim

ento

s co

n b

arra

s gi

rato

rias

o e

scal

eras

) y

fun

cio

nes

co

gnit

ivas

, co

mo

la

mem

ori

a (p

or

ejem

plo

, p

rueb

as d

e ev

itac

ión

pa

siva

o e

valu

acio

nes

de

estr

ateg

ias

de

apre

nd

izaj

e).

Un

a b

uen

a p

ráct

ica

con

sist

e en

rea

lizar

un

gru

po

de

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to, i

ncl

uye

nd

o a

l men

os

un

a p

ara

cad

a fa

se (

agu

da

o d

e la

rga

du

raci

ón

), a

fin

de

reu

nir

in

form

ació

n c

om

ple

ta s

ob

re l

os

efec

tos

en l

as f

un

cio

nes

sen

sori

ales

, m

oto

ras

y co

gnit

ivas

. Es

tas

pru

ebas

deb

en e

leg

irse

cu

idad

osa

men

te p

ara

det

ecta

r to

do

s lo

s ef

ect

os

de

las

po

sib

les

estr

ateg

ias

tera

péu

tica

s. A

qu

í n

o s

e p

rese

nta

n d

escr

ipci

on

es d

etal

lad

as d

e ca

da

un

a d

e es

tas

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to, q

ue

incl

uye

n p

rogr

amas

de

entr

enam

ien

to, p

ero

en

Sch

aar

et a

l. (2

01

0)

pu

ede

enco

ntr

arse

un

a am

plia

ref

eren

cia

y ex

po

sici

ón

de

su u

so.

Re

fere

nci

as

64

Bra

eun

inge

r S

and

Kle

insc

hn

itz

C.,

Re

cen

t m

od

els

of

foca

l ce

reb

ral i

sch

emia

: pro

ced

ura

l pit

falls

an

d t

ran

slat

ion

al p

rob

lem

s. E

xper

imen

tal &

Tr

ansl

atio

nal

Str

oke

Med

icin

e, n

ovi

emb

re d

e 20

09; 1

:8.

Frer

et T

an

d B

ou

et V

., Im

pro

vem

ents

of

the

Stro

ke M

od

el G

uid

elin

es –

An

imal

bo

dy

wei

ght

and

lon

g-te

rm f

un

ctio

nal

co

nce

rns.

Exp

erim

enta

l &

Tran

slat

ion

al S

tro

ke M

edic

ine,

20

09; 2

(2):

28

-31

.

Gra

ham

SM

et

al.,

An

imal

mo

del

s o

f is

chem

ic s

tro

ke: b

alan

cin

g e

xper

imen

tal a

ims

and

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imal

car

e. C

om

par

ativ

e M

edic

ine,

oct

ub

re d

e 2

00

4; 5

4(5

):

486

-49

6.

Yan

amo

to H

et

al.,

Eva

luat

ion

of

MC

Ao

str

oke

mo

del

s in

no

rmo

ten

sive

rat

s: s

tan

dar

diz

ed n

eoco

rtic

al in

farc

tio

n b

y th

e 3

VO

tec

hn

iqu

e. E

xpN

euro

l, ag

ost

o d

e 20

03; 1

82(2

):2

61-7

4.

Liu

S e

t a

l., R

od

ent

stro

ke m

od

el g

uid

elin

es f

or

pre

clin

ical

str

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tri

als

(1ª

edic

ión

). J

ou

rnal

of

exp

erim

enta

l str

oke

an

d t

ran

slat

ion

al m

edic

ine,

en

ero

d

e 20

09 1

; 2(2

):2

-27

.

Sch

aar

KL

et a

l., F

un

ctio

nal

ass

essm

ents

in t

he

rod

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stro

ke m

od

el. E

xper

imen

tal &

Tra

nsl

atio

nal

Str

oke

Me

dic

ine,

20

10

; 2: 1

3; l

ibre

acc

eso

en

h

ttp

://w

ww

.ets

mjo

urn

al.c

om

/co

nte

nt/

2/1

/13

.

Vir

ley

et a

l., A

tem

po

ral M

RI a

sses

smen

t o

f n

euro

pat

ho

logy

aft

er t

ran

sien

t m

idd

le c

ereb

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rter

y o

cclu

sio

n in

th

e ra

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orr

elat

ion

s w

ith

beh

avio

ur.

J

Cer

eb B

loo

d F

low

Met

ab, 2

00

0; 2

0: 5

63-5

82

. Es

tud

io

Efic

acia

de

un

nu

evo

age

nte

ter

apéu

tico

en

la o

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sió

n d

e la

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a ce

reb

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ed

ia (

MC

AO

) co

n u

n f

ilam

ento

intr

alu

min

al

En e

ste

ejem

plo

, 4

0 r

atas

jó

ven

es S

pra

gue

-Daw

ley

(300

a 3

50

g)

será

n s

om

etid

as a

un

a o

clu

sió

n d

e la

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eria

cer

ebra

l m

edia

med

ian

te l

a té

cnic

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e

fila

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to i

ntr

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min

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este

sia

gen

eral

. La

s ra

tas

se s

elec

cio

nar

án a

leat

ori

amen

te (

n=1

0 p

or

gru

po

) p

ara

reci

bir

ya

sea

el v

ehíc

ulo

(1

0 m

l/kg

) o

un

nu

evo

age

nte

ter

apéu

tico

(co

mp

ues

to A

) en

do

sis

de

1, 3

o 1

0 m

g/kg

, med

ian

te in

fusi

ón

intr

aven

osa

en

un

a ve

na

de

la c

ola

du

ran

te u

na

ho

ra, c

om

enza

nd

o

30

min

uto

s d

esp

ués

de

la o

clu

sió

n.

Se a

dm

inis

trar

án d

osi

s p

ost

erio

res

(ya

sea

de

veh

ícu

lo o

de

do

sis

de

1,

3 o

10

mg/

kg d

el c

om

pu

esto

A)

po

r ví

a

intr

aper

ito

nea

l 6 y

24

ho

ras

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

. Las

rat

as s

e al

oja

rán

inic

ialm

ente

en

cu

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ob

les

con

su

elo

só

lido

y u

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ech

o g

rues

o y

mat

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al p

ara

anid

ar.

Los

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s se

res

trin

girá

n d

ura

nte

la

fase

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teri

or

al e

ntr

enam

ien

to p

ara

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litar

la

real

izac

ión

de

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rueb

a d

e es

cale

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qu

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un

a ta

rea

mo

tiva

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po

r el

ap

etit

o. L

os

anim

ales

rec

ibir

án a

limen

tos

ad

lib

itu

m d

esd

e 6

ho

ras

ante

s d

e la

cir

ugí

a h

asta

6 d

ías

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

par

a p

rom

ove

r la

recu

per

ació

n p

ost

op

erat

ori

a y

de

pes

o.

65

Los

resu

ltad

os

fun

cio

nal

es s

e ev

alu

arán

dia

riam

ente

med

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te u

n s

iste

ma

de

pu

ntu

ació

n n

euro

lógi

ca (

la e

scal

a d

e B

eder

son

; vé

ase

Sch

aar

et a

l. 2

01

0)

y

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to (

pru

eba

de

la e

tiq

uet

a ad

hes

iva

bila

tera

l y c

amin

ar s

ob

re u

na

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ra).

La

pru

eba

de

la e

scal

era

tam

bié

n s

e re

aliz

ará

dia

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en

te

des

de

el s

épti

mo

día

s d

esp

ués

de

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clu

sió

n,

a fi

n d

e d

ar t

iem

po

su

fici

ente

par

a la

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up

erac

ión

po

sto

per

ato

ria

ante

s d

e vo

lver

a r

estr

ingi

r lo

s al

imen

tos.

No

se

pre

vé q

ue

las

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to c

ause

n u

na

angu

stia

sig

nif

icat

iva.

Se

real

izar

án r

eso

nan

cias

mag

nét

icas

de

las

rata

s an

este

siad

as lo

s d

ías

1,

7, 1

4 y

28

par

a ev

alu

ar e

l vo

lum

en d

e la

lesi

ón

. To

do

s lo

s an

imal

es s

e s

acri

fica

rán

28

día

s d

esp

ués

de

la o

clu

sió

n.

Eval

uac

ión

inic

ial p

rosp

ecti

va y

co

nsi

der

ació

n d

e re

fin

amie

nto

s e

spe

cífi

cos

y p

un

tos

fin

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s h

um

anit

ario

s

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

estu

dio

en

los

anim

ale

s?

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Qu

é p

od

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em

peo

rarl

o?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

enci

on

es

Pu

nto

s fi

nal

es

Entr

enam

ien

to p

req

uir

úrg

ico

co

n

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to

du

ran

te u

n p

erío

do

de

do

s a

tres

sem

anas

: pru

eba

de

etiq

uet

a

adh

esiv

a b

ilate

ral (

par

a ab

and

on

o

con

tral

ater

al),

cam

inar

so

bre

un

a

bar

ra (

par

a la

co

ord

inac

ión

de

las

extr

emid

ades

po

ste

rio

res)

y

pru

eba

de

la e

scal

era

(par

a

entr

enar

la e

xten

sió

n d

e la

s

extr

emid

ades

an

teri

ore

s)

Se p

ued

e ca

usa

r es

trés

o a

nsi

edad

mín

imo

s an

tes

de

qu

e lo

s an

imal

es s

e

hab

itú

en a

las

pru

ebas

, ya

qu

e es

tas

imp

lican

tra

slad

ar a

los

anim

ales

a

nu

evas

est

anci

as o

am

bie

nta

les.

Hab

itu

ació

n g

rad

ual

a lo

s ap

arat

os

de

las

pru

ebas

.

Man

ipu

laci

ón

tra

nq

uila

y e

mp

átic

a.

Los

anim

ales

se

reti

rará

n d

e

la s

esió

n s

i se

ob

serv

an

sign

os

de

angu

stia

.

Los

anim

ales

qu

e n

o

alca

nce

n e

l niv

el

inic

ial e

n

un

pla

zo e

stab

leci

do

se

excl

uir

án d

el e

stu

dio

.

66

Res

tric

ció

n d

e al

imen

tos

(has

ta e

l

85

% y

el 9

0 %

del

pes

o c

on

alim

enta

ció

n li

bre

) an

tes

de

la

op

erac

ión

y a

par

tir

del

día

7

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

par

a

faci

litar

la e

jecu

ció

n d

e la

pru

eba

de

la e

scal

era

Ham

bre

lige

ra, p

osi

bili

dad

de

fru

stra

ció

n y

an

sied

ad.

La p

érd

ida

de

pes

o n

o s

up

erar

á e

l

10

%, d

e lo

co

ntr

ario

se

su

spen

der

á la

rest

ricc

ión

de

alim

ento

s.

Si s

e o

bse

rvan

pro

ble

mas

de

com

po

rtam

ien

to d

ebid

o a

la

falt

a d

e al

imen

tos,

los

anim

ales

se

ret

irar

án d

el

estu

dio

.

Ocl

usi

ón

pas

ajer

a (9

0 m

inu

tos)

de

la a

rter

ia c

ereb

ral m

edia

baj

o

anes

tesi

a ge

ner

al, u

tiliz

and

o u

n

fila

men

to in

tral

um

inal

a t

ravé

s d

e

la a

rter

ia c

aró

tid

a co

mú

n

Do

lor

y m

ales

tar

aso

ciad

os

a la

cir

ugí

a.

Po

sib

ilid

ad d

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mp

licac

ion

es

qu

irú

rgic

as im

pre

vist

as, p

or

eje

mp

lo,

hem

orr

agia

su

bar

acn

oid

ea, l

esió

n

ipsi

late

ral d

e la

ret

ina,

fo

rmac

ión

de

tro

mb

os

intr

alu

min

ales

, ed

ema

cere

bra

l, in

terf

eren

cia

en e

l hip

otá

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o

con

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on

sigu

ien

te h

iper

term

ia o

nec

rosi

s te

mp

ora

l de

mú

scu

los.

Est

as

com

plic

acio

nes

pu

eden

pre

sen

tars

e d

e

dif

eren

tes

man

eras

, po

r ej

emp

lo,

cola

pso

rep

enti

no

, par

ális

is, i

ncl

inac

ión

seve

ra d

e la

cab

eza,

co

nvu

lsio

nes

.

Ave

rsió

n y

po

sib

les

efe

cto

s d

e la

anes

tesi

a so

bre

las

vari

able

s fi

sio

lógi

cas

(co

mo

hip

ote

rmia

, hip

ote

nsi

ón

,

Uso

de

anes

tesi

a ad

ecu

ada

y

mín

imam

ente

ave

rsiv

a, c

on

anal

gési

cos

adec

uad

os

(es

dec

ir,

efic

aces

per

o c

on

pro

pie

dad

es

neu

rop

rote

cto

ras

mín

imas

)

Cir

uja

no

cu

alif

icad

o e

n la

ap

licac

ión

de

un

a té

cnic

a q

uir

úrg

ica

asép

tica

(co

n

exam

en p

erió

dic

o n

ivel

de

éxit

o).

Man

ten

imie

nto

de

la h

om

eost

asis

du

ran

te la

an

este

sia.

Uso

de

mo

no

fila

men

tos

y té

cnic

as

qu

irú

rgic

as n

orm

aliz

adas

par

a re

du

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la v

aria

bili

dad

y la

s co

mp

licac

ion

es

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

incr

uen

to e

n lo

s

sigu

ien

tes

caso

s:

Si s

e p

rod

uce

n

pro

ble

mas

téc

nic

os

grav

es d

ura

nte

la

ciru

gía.

Si n

o s

e re

cup

eran

d

e la

an

este

sia.

Si s

e o

bse

rvan

sig

no

s d

e co

mp

licac

ion

es

qu

irú

rgic

as

imp

revi

stas

.

Si lo

s an

imal

es

pie

rden

más

del

2

0 %

de

su p

eso

an

tes

de

la c

iru

gía

a p

esar

de

la

alim

enta

ció

n

adic

ion

al y

la

reh

idra

taci

ón

, o s

i

67

hip

oxi

a).

Inge

sta

de

alim

ento

s in

sufi

cien

tes

resu

ltan

te d

e u

n n

ivel

re

du

cid

o d

e

con

scie

nci

a, m

asti

caci

ón

y m

oti

lidad

def

icie

nte

s, p

or

lo g

ener

al d

ura

nte

las

pri

me

ras

48

ho

ras

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

.

Cie

rto

gra

do

de

def

icie

nci

a lo

com

oto

ra,

qu

e p

od

ría

cau

sar

est

rés

y fr

ust

raci

ón

.

der

ivad

as d

e le

sio

nes

ext

ensa

s.

Cu

idad

o p

ost

op

erat

ori

o in

ten

sivo

du

ran

te lo

s p

rim

ero

s tr

es a

cin

co d

ías,

po

r e

jem

plo

, fu

ente

s d

e ca

lor

exte

rnas

.

Co

ntr

ol p

erió

dic

o d

el p

eso

co

rpo

ral;

ob

serv

ació

n d

iari

a y

cuid

ado

de

las

her

idas

Fáci

l acc

eso

a lo

s al

imen

tos

y e

l agu

a

du

ran

te e

l per

íod

o d

e re

cup

erac

ión

, o

alim

ento

s ad

icio

nal

es (

pap

illa,

líqu

ido

s) y

ayu

da

par

a al

imen

tars

e en

caso

nec

esa

rio

; re

hid

rata

ció

n (

po

r

ejem

plo

, med

ian

te in

yecc

ión

de

solu

ció

n s

alin

a), d

e se

r n

eces

ario

.

per

man

ecen

in

mó

vile

s d

ura

nte

m

ás d

e 2

4 h

ora

s.

Se r

ealiz

arán

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to (

pru

eba

de

la

etiq

uet

a ad

hes

iva

bila

tera

l y

pru

eba

de

cam

inar

so

bre

un

a

Las

pru

ebas

pu

eden

cau

sar

est

rés

a lo

s

anim

ales

si n

o c

uen

tan

co

n t

od

as s

us

cap

acid

ades

mo

tora

s.

Segu

imie

nto

de

los

ind

icad

ore

s d

e

ansi

edad

o a

ngu

stia

.

Un

per

son

al e

xper

imen

tad

o o

bse

rvar

á

No

rmal

men

te s

e es

tab

lece

un

tie

mp

o m

áxim

o

(in

terr

up

ció

n)

par

a re

aliz

ar la

tare

a re

qu

erid

a y

se c

on

ced

e

68

bar

ra)

a d

iari

o d

el d

ía 1

al 2

8

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

; la

pru

eba

de

la e

scal

era

se e

fect

uar

á

dia

riam

ente

a p

arti

r d

el d

ía 7

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

con

tin

uam

ente

a lo

s an

imal

es.

un

a p

un

tuac

ión

fin

al.

Ad

min

istr

ació

n d

e u

n n

uev

o

agen

te t

erap

éuti

co p

or

vía

sub

cutá

nea

, in

trav

eno

sa o

intr

aper

ito

nea

l an

tes

y/o

des

pu

és

de

la c

iru

gía

(pro

fila

xis/

tera

pia

)

Mal

esta

r p

asaj

ero

deb

ido

a la

vía

de

adm

inis

trac

ión

.

No

se

pre

vén

efe

cto

s ad

vers

os

con

las

do

sis

qu

e se

ad

min

istr

arán

.

Ad

min

istr

ació

n d

e ac

uer

do

co

n

bu

enas

prá

ctic

as, u

tiliz

and

o la

s ví

as y

técn

icas

men

os

do

loro

sas

o

angu

stia

nte

s q

ue

per

mit

an lo

s

ob

jeti

vos

cien

tífi

cos.

Se o

bse

rvar

á d

eten

idam

ente

si l

os

anim

ales

mu

estr

an e

fect

os

adve

rso

s a

las

sust

anci

as d

el e

stu

dio

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

hu

man

itar

io s

i se

ob

serv

an e

fect

os

secu

nd

ario

s se

vero

s

cau

sad

os

po

r lo

s n

uev

os

agen

tes

tera

péu

tico

s.

Res

on

anci

as m

agn

étic

as

lon

gitu

din

ales

baj

o a

nes

tesi

a lo

s

día

s 1

, 7, 1

4 y

28

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

Rep

etic

ión

de

la a

nes

tesi

a.

Ave

rsió

n y

po

sib

les

efe

cto

s d

e la

anes

tesi

a e

n v

aria

ble

s fi

sio

lógi

cas

(co

mo

hip

ote

rmia

, hip

ote

nsi

ón

, hip

oxi

a)

Uso

de

anes

tési

cos

adec

uad

os

y

mín

imam

ente

ave

rsiv

os.

Man

ten

imie

nto

de

la h

om

eost

asis

du

ran

te la

an

este

sia,

po

r ej

emp

lo,

tera

pia

a b

ase

de

flu

ido

s an

tes

o

du

ran

te la

an

este

sia

si s

e p

rese

nta

n

pro

ble

mas

de

des

hid

rata

ció

n, o

cal

or

par

a m

ante

ner

la t

emp

erat

ura

no

rmal

.

Se s

acri

fica

rá d

e m

od

o

hu

man

itar

io a

los

anim

ales

qu

e n

o s

e re

cup

eren

ple

nam

ente

de

la a

nes

tesi

a.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

hu

man

itar

io s

i no

se p

ued

e m

ante

ner

la

ho

meo

stas

is d

esp

ués

de

la

recu

per

ació

n.

69

An

ális

is

Este

mo

del

o s

e co

nsi

der

a SE

VER

O d

ebid

o a

l pro

ced

imie

nto

qu

irú

rgic

o q

ue

uti

liza,

los

efe

cto

s ad

vers

os

(gen

eral

men

te p

asaj

ero

s) q

ue

tien

e la

ocl

usi

ón

de

la

arte

ria

cere

bra

l med

ia e

n e

l b

ien

esta

r d

el a

nim

al y

la

po

sib

ilid

ad d

e q

ue

se p

rod

uzc

an c

om

plic

acio

nes

per

iop

erat

ori

as i

mp

ort

ante

s. N

o o

bst

ante

, el

efe

cto

neg

ativ

o e

n e

l b

ien

esta

r d

e lo

s an

imal

es p

ued

e re

du

cirs

e m

edia

nte

cu

idad

os

po

sto

per

ato

rio

s in

ten

sivo

s d

ura

nte

al

men

os

las

pri

mer

as 4

8 h

ora

s y

un

estr

ech

o s

egu

imie

nto

de

la f

ase

po

ste

rio

r, t

om

and

o r

ápid

amen

te m

edid

as e

n c

aso

de

qu

e se

pre

sen

ten

pro

ble

mas

. D

esd

e u

n p

un

to d

e vi

sta

exp

erim

enta

l,

si s

e p

rest

a at

enci

ón

al

refi

nam

ien

to y

la

no

rmal

izac

ión

de

cad

a u

no

de

los

pro

ced

imie

nto

s, e

s p

osi

ble

red

uci

r la

in

cid

enci

a d

e co

mp

licac

ion

es y

la

vari

abili

dad

y, p

or

con

sigu

ien

te, o

bte

ner

dat

os

de

un

a m

ejo

r ca

lidad

y d

ism

inu

ir e

l nú

mer

o d

e an

imal

es u

tiliz

ado

s.

Po

r co

nsi

guie

nte

, res

ult

a ad

ecu

ada

un

a cl

asif

icac

ión

pro

spe

ctiv

a d

e la

se

veri

dad

co

mo

SEV

ERA

.

¿Po

drí

a se

r la

cla

sifi

caci

ón

MO

DER

AD

A?

Au

nq

ue

la c

lasi

fica

ció

n p

rosp

ecti

va d

e es

te m

od

elo

sie

mp

re d

eber

ía s

er S

EVER

A p

or

los

mo

tivo

s an

tes

exp

ues

tos,

es

po

sib

le r

edu

cir

la i

nci

den

cia

de

los

efec

tos

seve

ros

en m

ano

s d

e té

cnic

os

exp

erim

enta

do

s, j

un

to c

on

la

sup

ervi

sió

n d

e ve

teri

nar

ios

exp

erto

s y

un

bu

en c

uid

ado

de

los

anim

ales

, e

inte

rven

cio

nes

ráp

idas

aco

rdad

as e

n c

aso

de

surg

ir c

om

plic

acio

nes

. P

od

ría

auto

riza

rse

un

a cl

asif

icac

ión

MO

DER

AD

A e

n a

lgu

no

s ca

sos,

per

o s

olo

si

son

real

izad

os

po

r gr

up

os

de

inve

stig

ació

n q

ue

cuen

tan

co

n e

xper

ien

cia

dem

ost

rad

a en

est

e m

od

elo

y s

e re

con

oce

qu

e p

ued

en u

tiliz

arlo

sin

su

per

ar u

n

sufr

imie

nto

mo

der

ado

.

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Los

anim

ales

so

n o

bje

to d

e u

n s

egu

imie

nto

mu

y d

etal

lad

o e

n e

l p

erío

do

po

sto

per

ato

rio

. Se

ad

min

istr

an a

nal

gési

cos

y te

rap

ia d

e a

po

yo l

oca

l en

cas

o

nec

esa

rio

.

70

Al

fin

al d

e es

te m

od

elo

se

pre

sen

ta u

n e

jem

plo

de

sist

ema

com

bin

ado

de

pu

ntu

ació

n n

euro

lógi

ca y

clín

ica

qu

e se

uti

liza

par

a ay

ud

ar a

l se

guim

ien

to d

el

esta

do

clín

ico

de

los

anim

ales

a t

od

o lo

larg

o d

el p

roce

dim

ien

to.

Re

sult

ado

s

Tod

os

los

anim

ales

, ex

cep

to u

no

del

gru

po

tra

tad

o c

on

el

veh

ícu

lo,

se r

ecu

pe

raro

n d

e l

a ci

rugí

a si

n c

om

plic

acio

nes

im

pre

vist

as g

raci

as a

l cu

idad

o

per

iop

erat

ori

o in

ten

sivo

pre

stad

o.

- Lo

s 10

an

imal

es t

rata

do

s co

n e

l veh

ícu

lo o

btu

vier

on

la p

un

tuac

ión

neu

roló

gica

más

baj

a a

lo la

rgo

de

tod

o e

l est

ud

io, a

sí c

om

o u

n b

ajo

ren

dim

ien

to

en la

s p

rueb

as d

e co

mp

ort

amie

nto

en

co

mp

arac

ión

co

n lo

s an

imal

es t

rata

do

s co

n e

l age

nte

del

est

ud

io. L

a p

un

tuac

ión

clín

ica

fue

sim

ilar

a la

de

los

anim

ales

tra

tad

os

con

el

agen

te e

n e

l p

erío

do

in

med

iato

(p

rim

eras

48

ho

ras)

des

pu

és d

e la

ocl

usi

ón

; a

par

tir

de

ese

mo

men

to,

se o

bse

rvar

on

d

ifer

enci

as e

ntr

e lo

s an

imal

es d

el g

rup

o a

l qu

e se

ad

min

istr

ó e

l veh

ícu

lo:

Un

o d

e lo

s 1

0 an

imal

es t

uvo

qu

e se

r sa

crif

icad

o e

l día

2 d

esp

ués

de

la c

iru

gía

po

r h

aber

per

did

o m

ás d

el 2

0 %

de

su p

eso

co

rpo

ral (

a p

esar

d

e re

cib

ir a

limen

taci

ón

ad

icio

nal

y r

ehid

rata

ció

n).

Ev

alu

ació

n: S

EVER

A.

De

los

10

an

imal

es, 6

des

arro

llaro

n d

efic

ien

cias

neu

roló

gica

s m

od

erad

as, p

ero

mo

stra

ron

un

a m

ejo

ra m

ínim

a e

n la

pu

ntu

ació

n c

línic

a co

n e

l p

aso

del

tie

mp

o.

Eval

uac

ión

: SEV

ERA

.

De

los

10

an

imal

es,

3 d

esar

rolla

ron

def

icie

nci

as n

euro

lógi

cas

mo

der

adas

y m

ost

raro

n u

na

red

ucc

ión

gra

du

al d

e la

pu

ntu

ació

n c

línic

a co

n e

l ti

emp

o, q

ue

po

sib

lem

ente

sea

res

ult

ado

de

su c

apac

idad

par

a co

mp

ensa

r y

adap

tars

e a

def

icie

nci

as n

euro

lógi

cas

de

larg

a d

ura

ció

n.

Eval

uac

ión

: MO

DER

AD

A.

- Lo

s 2

0 a

nim

ales

tra

tad

os

con

do

sis

baj

as (

de

1 a

3 m

g/kg

) d

el c

om

pu

esto

A m

ost

raro

n u

na

mej

ora

de

la p

un

tuac

ión

neu

roló

gica

48

ho

ras

des

pu

és

de

la o

clu

sió

n, a

sí c

om

o u

na

mej

ora

de

la p

un

tuac

ión

clín

ica.

Eval

uac

ión

: MO

DER

AD

A.

71

Acc

ion

es

Pu

ntu

ació

n 1

R

evis

ar la

fre

cuen

cia

del

seg

uim

ien

to

Pro

po

rcio

nar

cu

idad

os

sup

lem

enta

rio

s, p

or

- Lo

s 1

0 a

nim

ales

tra

tad

os

con

la d

osi

s m

ás a

lta

(10

mg/

kg)

del

co

mp

ues

to A

mo

stra

ron

un

a m

ejo

ra d

e la

pu

ntu

ació

n n

euro

lógi

ca r

esp

ecto

al g

rup

o a

l q

ue

se a

dm

inis

tró

el

veh

ícu

lo 2

4 h

ora

s d

esp

ués

de

la o

clu

sió

n,

un

a p

érd

ida

mín

ima

(5 %

) d

e p

eso

co

rpo

ral

24

ho

ras

des

pu

és d

e la

cir

ugí

a, y

un

a m

ejo

ra im

po

rtan

te d

e la

pu

ntu

ació

n c

línic

a 4

8 h

ora

s d

esp

ués

de

la o

clu

sió

n.

Ev

alu

ació

n: M

OD

ERA

DA

.

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

La c

lasi

fica

ció

n d

e 7

an

imal

es s

e co

nsi

der

ó S

EVER

A y

la d

e 3

3 a

nim

ales

MO

DER

AD

A.

Sist

em

a d

e p

un

tuac

ión

La

eval

uac

ión

d

e la

se

veri

dad

se

lle

va

a ca

bo

med

ian

te

un

a co

mb

inac

ión

de

ob

serv

acio

nes

cl

ínic

as

de

cará

cter

ge

ner

al

(pes

o

corp

ora

l, as

pec

to,

com

po

rtam

ien

to,

ento

rno

de

la c

ub

eta)

, ju

nto

co

n u

na

eval

uac

ión

neu

roló

gica

esp

ecíf

ica

del

pro

ced

imie

nto

. La

esc

ala

de

Bed

erso

n e

s u

na

eval

uac

ión

neu

roló

gica

gen

eral

qu

e se

des

arro

lló p

ara

med

ir l

as d

efic

ien

cias

neu

roló

gica

s tr

as u

n i

ctu

s. U

tiliz

a u

na

esca

la d

e 0

a 3

, en

la

qu

e 0

co

rres

po

nd

e a

la

no

rmal

idad

y 3

al m

ayo

r n

ive

l de

dis

cap

acid

ad. L

as p

rueb

as in

clu

yen

fle

xió

n d

e la

s ex

trem

idad

es a

nte

rio

res,

res

iste

nci

a al

em

pu

je la

tera

l y c

om

po

rtam

ien

to

al g

irar

en

cír

culo

s.

Pu

ntu

ació

n 0

: no

se

ob

serv

an d

efic

ien

cias

.

Pu

ntu

ació

n 1

: fle

xió

n d

e la

s e

xtre

mid

ades

an

teri

ore

s.

Pu

ntu

ació

n 2

: res

iste

nci

a d

ism

inu

ida

al e

mp

uje

late

ral (

y fl

exió

n d

e la

s e

xtre

mid

ades

an

teri

ore

s) s

in m

ovi

mie

nto

en

cír

culo

.

Pu

ntu

ació

n 3

: mis

mo

co

mp

ort

amie

nto

qu

e e

n la

pu

ntu

ació

n 2

co

n m

ovi

mie

nto

en

cír

culo

.

PFH

: Pu

nto

fin

al h

um

anit

ario

.

72

P

un

tuac

ión

Asp

ecto

Pér

did

a d

e p

eso

del

5 %

al 1

0 %

1

Pér

did

a d

e p

eso

del

11

% a

l 15

%

2

Pér

did

a d

e p

eso

del

16

% a

l 20

%

3

Pér

did

a d

e p

eso

su

per

ior

al 2

0 %

P

FH

Pel

aje

liger

amen

te d

escu

idad

o

1

Pilo

erec

ció

n li

gera

2

Pilo

erec

ció

n m

arca

da

3

Co

mp

ort

amie

nto

Loco

mo

ció

n li

gera

men

te a

no

rmal

1

Loco

mo

ció

n s

um

amen

te a

no

rmal

2

Gra

nd

es p

rob

lem

as d

e m

ovi

lidad

3

Inm

ovi

lidad

du

ran

te m

ás d

e 24

ho

ras

PFH

Ten

so y

ner

vio

so d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n

2

Mu

y an

gust

iad

o d

ura

nte

la m

anip

ula

ció

n,

po

r ej

emp

lo, c

on

tem

blo

res,

vo

caliz

ació

n,

agre

sivi

dad

3

73

Acc

ion

es –

Cab

e se

ñal

ar q

ue

com

o g

ener

alm

en

te s

e o

bse

rvan

co

mp

licac

ion

es

qu

irú

rgic

as e

n e

l per

íod

o d

e re

cup

erac

ión

inm

ed

iata

me

nte

po

ste

rio

r a

la

inte

rven

ció

n q

uir

úrg

ica,

es

ese

nci

al r

ealiz

ar u

n e

stre

cho

se

guim

ien

to y

em

itir

un

juic

io e

xper

to y

em

pát

ico

du

ran

te la

s p

rim

eras

24

ho

ras,

a f

in d

e id

enti

fica

r

los

efe

cto

s ad

vers

os

y to

mar

med

idas

par

a co

ntr

arre

star

los,

y lo

s an

imal

es s

e sa

crif

ican

de

mo

do

incr

uen

to s

i su

su

frim

ien

to s

up

era

la c

ate

gorí

a d

e se

vero

.

Ento

rno

Nid

o li

gera

men

te d

eso

rgan

izad

o

1

Nid

o a

pen

as r

eco

no

cib

le

2

No

exi

ste

un

nid

o

3

Pu

ntu

ació

n n

euro

lógi

ca

Flex

ión

de

las

extr

emid

ades

an

teri

ore

s 1

Res

iste

nci

a d

ism

inu

ida

al e

mp

uje

late

ral (

y

flex

ión

de

las

extr

emid

ades

an

teri

ore

s) s

in

mo

vim

ien

to e

n c

írcu

lo

2

Mis

mo

co

mp

ort

amie

nto

qu

e en

la

pu

ntu

ació

n 2

, co

n m

ovi

mie

nto

en

cír

culo

3

74

Ejem

plo

de

un

a h

oja

de

ob

serv

ació

n in

div

idu

al (

día

s 0

a 4

)

Día

0

1 2

3

4

Asp

ecto

Pes

o c

orp

ora

l (g)

(p

un

tuac

ión

) 3

20 (

0)

29

2 (

1)

28

5 (

2)

28

7 (

1)

29

2 (

1)

Esta

do

del

pel

aje

Pel

aje

des

cuid

ado

/pilo

erec

ció

n

1 1

0 1

0

Co

mp

ort

amie

nto

s

Loco

mo

ció

n

3 2

2 2

1

Res

pu

esta

a la

man

ipu

laci

ón

0

0 2

0

0

Ento

rno

Esta

do

del

nid

o

3 2

1 0

0

Pu

ntu

ació

n

neu

roló

gica

es

pec

ífic

a

del

pro

ced

imie

nto

2

2 1

1

1

Pu

ntu

ació

n t

ota

l 9

8 8

5

3

Vo

lum

en d

e la

s le

sio

nes

(ev

alu

ació

n

med

ian

te r

eso

nan

cia

mag

nét

ica)

*

11

%

75

Otr

as o

bse

rvac

ion

es

Se r

ecu

per

ó s

in

com

plic

acio

nes

de

la

ciru

gía

Ad

min

istr

ació

n d

el

agen

te a

los

30

min

uto

s y

a la

s 6

ho

ras

Se m

uev

e

alre

ded

or

de

la

cub

eta

y h

a

inte

nta

do

con

stru

ir u

n n

ido

An

sied

ad in

icia

l

en la

s p

rueb

as d

e

com

po

rtam

ien

to,

per

o la

s co

mp

letó

tod

as; e

l nid

o

está

más

estr

uct

ura

do

Ho

y ti

ene

el p

elaj

e

men

os

acic

alad

o,

per

o s

u p

eso

es

esta

ble

y e

l nid

o e

s

corr

ecto

Co

mp

letó

las

pru

ebas

de

com

po

rtam

ien

to,

men

os

ansi

edad

,

mej

ora

co

nsi

der

able

de

la lo

com

oci

ón

* Se

incl

uye

el «

volu

men

de

las

lesi

on

es»

(ev

alu

ado

med

ian

te r

eso

nan

cia

mag

nét

ica)

par

a q

ue

el in

vest

igad

or

lo r

elle

ne

al f

inal

del

est

ud

io. S

e p

ued

e

esta

ble

cer

un

a co

rrel

ació

n e

ntr

e es

tos

dat

os

y la

s o

bse

rvac

ion

es c

línic

as y

de

com

po

rtam

ien

to p

ara

refi

nar

aú

n m

ás e

l seg

uim

ien

to, e

l cu

idad

o d

e lo

s

anim

ales

y lo

s p

roce

dim

ien

tos.

76

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 5

– P

rod

ucc

ión

de

an

ticu

erp

os

po

liclo

nal

es e

n c

on

ejo

s Ú

ltim

a ac

tual

izac

ión

: 02

oct

ub

re 2

01

4

Co

nte

xto

gen

eral

El p

rin

cip

al o

bje

tivo

de

la p

rod

ucc

ión

de

anti

cuer

po

s en

an

imal

es d

e la

bo

rato

rio

es

ob

ten

er s

uer

os

inm

un

oló

gico

s d

e va

lor

y a

fin

idad

ele

vad

os

par

a u

sar

en

exp

erim

ento

s o

pru

ebas

de

dia

gnó

stic

o.

Gra

n p

arte

de

la b

iolo

gía

y la

bio

qu

ímic

a m

od

ern

as s

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asa

en la

exi

sten

cia

de

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cuer

po

s su

mam

ente

esp

ecíf

ico

s p

ara

usa

r en

div

ersa

s té

cnic

as,

com

o e

l

dia

gnó

stic

o i

nm

un

oh

isto

qu

ímic

o,

ELIS

A,

la i

nm

un

op

reci

pit

ació

n y

la

inm

un

otr

ansf

eren

cia.

Así

pu

es,

la g

ener

ació

n d

e g

ran

des

can

tid

ades

de

anti

cuer

po

s

esp

ecíf

ico

s d

irig

ido

s a

pro

teín

as o

pép

tid

os

de

inte

rés

es

esen

cial

par

a e

l éxi

to d

e m

uch

os

pro

gram

as d

e in

vest

igac

ión

fu

nd

amen

tal y

ap

licad

a.

En e

ste

ejem

plo

se

uti

lizar

á u

n c

on

ejo

par

a p

rod

uci

r an

ticu

erp

os

fren

te a

pép

tid

os

peq

ueñ

os

qu

e se

co

nsi

der

an im

po

rtan

tes

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a la

reg

ula

ció

n d

e la

div

isió

n

de

las

célu

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co

mo

par

te d

e u

n p

rogr

ama

de

inve

stig

ació

n q

ue

com

pre

nd

e e

stu

dio

s b

ioq

uím

ico

s so

bre

la d

ivis

ión

cel

ula

r en

ma

míf

ero

s.

Re

fere

nci

as

Can

adia

n C

ou

nci

l on

An

imal

Car

e g

uid

elin

es o

n; a

nti

bo

dy

pro

du

ctio

n (

20

02

). D

esca

rgab

le e

n:

htt

p:/

/ww

w.c

cac.

ca/D

ocu

men

ts/S

tan

dar

ds/

Gu

idel

ines

/An

tib

od

y_p

rod

uct

ion

.pd

f.

EFP

IA/E

CV

AM

(D

ieh

l K-H

et

al.)

(20

01),

A g

oo

d p

ract

ice

guid

e to

th

e ad

min

istr

atio

n o

f su

bst

ance

s an

d t

he

rem

ova

l of

blo

od

, in

clu

din

g ro

ute

s an

d

volu

mes

. Jo

urn

al o

f A

pp

lied

To

xico

log

y 21

: 15

-23

.

JWG

R (

200

1),

Re

fin

ing

pro

ced

ure

s fo

r th

e ad

min

istr

atio

n o

f su

bst

ance

s. L

ab

ora

tory

An

ima

ls 3

5:

1-4

1.

Ke

atin

g SC

J, T

ho

mas

AA

, Fle

ckn

ell P

A &

Lea

ch M

C (

201

2),

Eva

luat

ion

of

EMLA

cre

am f

or

pre

ven

tin

g p

ain

du

rin

g ta

tto

oin

g o

f ra

bb

its:

ch

ange

s in

p

hys

iolo

gica

l, b

ehav

iou

ral a

nd

fac

ial e

xpre

ssio

n r

esp

on

ses.

PLO

S O

NE

7(9

): e

44

43

7 (

libre

acc

eso

, htt

p:/

/ww

w.p

loso

ne.

org

).

Lee

nar

s M

, Hen

dri

ksen

CFM

(2

005

), C

riti

cal s

tep

s in

th

e p

rod

uct

ion

of

po

lycl

on

al a

nd

mo

no

clo

nal

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tib

od

ies:

eva

luat

ion

an

d r

eco

mm

end

atio

n. I

LAR

Jo

urn

al 4

6:2

69-2

79

.

77

Still

s H

F (2

005

), A

dju

van

ts a

nd

an

tib

od

y p

rod

uct

ion

: Dis

pel

ling

the

myt

hs

asso

ciat

ed

wit

h F

reu

nd

’s c

om

ple

te a

nd

oth

er a

dju

van

ts. I

LAR

Jo

urn

al 4

6:2

80

-2

93.

UFA

W/R

SPC

A (

200

8), R

efin

ing

Ra

bb

it C

are

: A R

eso

urc

e fo

r Th

ose

Wo

rkin

g W

ith

Ra

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its

in R

esea

rch

. So

uth

wat

er,

Rei

no

Un

ido

: RSP

CA

(d

esca

rga

grat

uit

a en

: h

ttp

://w

ww

.rsp

ca.o

rg.u

k/re

sear

chra

bb

its)

. Es

tud

io

Med

ian

te e

xper

imen

tos

ante

rio

res

se d

eter

min

ó q

ue

un

so

lo c

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ejo

deb

e p

rod

uci

r m

ater

ial s

ufi

cien

te p

ara

cad

a p

épti

do

de

inte

rés.

El c

on

ejo

se

alo

jará

en

un

co

rral

co

n s

uel

o f

irm

e d

entr

o d

e u

n g

rup

o e

stab

le d

e co

nej

os

com

pat

ible

s (u

sad

os

tam

bié

n p

ara

la p

rod

ucc

ión

de

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cuer

po

s),

con

su

fici

ente

esp

acio

par

a p

erm

itir

el

enri

qu

ecim

ien

to,

hac

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jerc

icio

y m

ante

ner

un

co

mp

ort

amie

nto

so

cial

no

rmal

(U

FAW

/RSP

CA

20

08

). E

l an

imal

se

inm

un

izar

á co

n u

na

mez

cla

de

antí

gen

o y

ad

yuva

nte

. En

mo

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tos

pre

det

erm

inad

os

se r

eco

gerá

n p

equ

eñas

mu

estr

as d

e sa

ngr

e p

ara

esta

ble

cer

si l

a in

mu

niz

ació

n h

a te

nid

o

éxit

o.

Cu

and

o s

e h

aya

ob

ten

ido

un

a ca

nti

dad

ad

ecu

ada

de

anti

cuer

po

s, s

e d

esan

grar

á al

an

imal

baj

o a

nes

tesi

a p

rofu

nd

a si

n r

ecu

per

ació

n p

ara

ob

ten

er lo

s

anti

cuer

po

s p

rese

nte

s en

la s

angr

e.

La m

anip

ula

ció

n d

e lo

s co

nej

os

pu

ede

cau

sar

estr

és, p

or

lo q

ue

solo

deb

e se

r ef

ectu

ada

po

r u

n p

erso

nal

co

mp

eten

te y

em

pát

ico

. El

co

mp

ort

amie

nto

de

los

con

ejo

s p

ued

e re

sult

ar d

ifíc

il d

e in

terp

reta

r, y

un

a b

uen

a p

ráct

ica

con

sist

e e

n m

ante

ner

se a

ctu

aliz

ado

co

nsu

ltan

do

la b

iblio

graf

ía s

ob

re e

l co

mp

ort

amie

nto

y el

bie

nes

tar

de

los

con

ejo

s. P

or

ejem

plo

, u

n e

stu

dio

pu

blic

ado

rec

ien

tem

ente

in

dic

a q

ue

los

con

ejo

s p

ued

en m

ost

rar

«ca

ras

de

do

lor»

(o

exp

resi

on

es

faci

ales

de

do

lor)

en

det

erm

inad

as c

ircu

nst

anci

as (

Kea

tin

g et

al.

20

12

), p

or

lo q

ue

se d

ebe

estu

dia

r ca

so p

or

caso

la p

osi

bili

dad

de

uti

lizar

est

a ca

ract

erí

stic

a

com

o u

na

her

ram

ien

ta p

ara

eva

luar

el b

ien

esta

r.

Deb

ido

a l

a b

aja

inm

un

oge

nic

idad

del

pép

tid

o d

e ca

den

a co

rta,

ser

á n

ece

sari

o a

dm

inis

trar

lo e

n c

om

bin

ació

n c

on

un

ad

yuva

nte

. C

on

an

teri

ori

dad

se

ha

uti

lizad

o e

l ad

yuva

nte

co

mp

leto

de

Freu

nd

(FC

A),

per

o a

ctu

alm

ente

exi

ste

n a

dyu

van

tes

sin

téti

cos

qu

e ta

mb

ién

res

ult

an e

fica

ces

par

a es

te p

roce

dim

ien

to y

son

mu

y p

oco

irri

tan

tes.

Eval

uac

ión

inic

ial p

rosp

ecti

va y

co

nsi

der

ació

n d

e re

fin

amie

nto

s e

spec

ífic

os

y p

un

tos

fin

ale

s h

um

anit

ario

s

78

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

estu

dio

en

los

anim

ale

s?

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Qu

é p

od

ría

em

peo

rarl

o?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efec

tos

adve

rso

s M

eto

do

logí

a e

inte

rven

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Inm

un

izac

ión

co

n a

ntí

gen

o y

adyu

van

te; t

res

inye

ccio

nes

sub

cutá

nea

s lo

s d

ías

8, 2

2 y

37

Mal

esta

r tr

as la

inye

cció

n.

Se p

ued

en d

esar

rolla

r h

inch

azó

n n

o

do

loro

sa c

om

o r

esp

ues

ta a

l ad

yuva

nte

Po

sib

ilid

ad (

esca

sa)

de

ulc

erac

ión

en

el

luga

r d

e la

inye

cció

n .

El v

olu

men

, la

form

ula

ció

n y

la

frec

uen

cia

de

las

inye

ccio

nes

se

ado

pta

rán

de

acu

erd

o c

on

dir

ectr

ices

sob

re b

uen

as p

ráct

icas

(p

or

eje

mp

lo,

EFP

IA/E

CV

AM

o J

WG

R),

no

rmal

men

te

un

máx

imo

de

4 p

un

tos

y 0

,25

ml p

or

luga

r.

Las

po

sib

les

úlc

eras

rec

ibir

án d

e

inm

edia

to e

l tra

tam

ien

to v

eter

inar

io

adec

uad

o.

El a

nim

al s

erá

sacr

ific

ado

de

mo

do

incr

uen

to s

i se

ob

serv

an s

ign

os

de

mal

esta

r,

do

lor

o a

ngu

stia

pro

lon

gad

os

(po

r e

jem

plo

, ate

nci

ón

con

stan

te a

los

pu

nto

s d

e

inye

cció

n o

hin

chaz

ón

) o

si

se f

orm

an ú

lcer

as q

ue

no

cica

triz

an.

Tom

a d

e m

ues

tras

de

san

gre

par

a

eval

uar

las

resp

ues

tas

de

los

anti

cuer

po

s (h

asta

5 e

xtra

ccio

nes

)

Cap

tura

, man

ipu

laci

ón

y c

on

fin

amie

nto

qu

e p

ued

en c

ausa

r es

trés

.

Lige

ro m

ales

tar

aso

ciad

o a

las

agu

jas

de

las

jeri

ngu

illa.

s

Baj

o r

iesg

o d

e h

emo

rrag

ia o

de

form

ació

n d

e h

emat

om

as.

Las

mu

estr

as s

e e

xtra

erán

de

un

a ve

na

sup

erfi

cial

(d

e la

ore

ja).

Se e

xtra

erán

peq

ueñ

as c

anti

dad

es d

e

san

gre

(men

os

de

5 m

l) ú

nic

amen

te

par

a co

mp

rob

ar e

l nú

mer

o d

e

anti

cuer

po

s.

Se a

plic

ará

pre

sió

n e

n e

l lu

gar

de

la

tom

a d

e m

ues

tras

.

Si e

l pro

ced

imie

nto

cau

sa u

n

estr

és e

xtre

mo

en

el a

nim

al,

la t

om

a d

e m

ues

tras

se

retr

asar

á h

asta

qu

e e

l

com

po

rtam

ien

to d

el a

nim

al

vuel

va a

ser

no

rmal

.

79

An

ális

is

Solo

se

pre

vé u

na

seve

rid

ad l

eve

grac

ias

a lo

s re

fin

amie

nto

s d

e lo

s p

roce

dim

ien

tos

de

man

ejo

y a

loja

mie

nto

y l

os

cuid

ado

s, l

as

bu

enas

prá

ctic

as d

e

adm

inis

trac

ión

y t

om

a d

e m

ues

tras

, y la

ele

cció

n d

e u

n a

dyu

van

te m

uy

po

co ir

rita

nte

.

Po

r co

nsi

guie

nte

, un

a cl

asif

icac

ión

pro

spec

tiva

de

la s

eve

rid

ad c

om

o L

EVE

es a

de

cuad

a.

¿Po

drí

a r

efin

ars

e a

ún

má

s el

pro

ced

imie

nto

?

La

po

sib

ilid

ad

de

uti

lizar

ad

yuva

nte

s m

uy

po

co

irri

tan

tes

y ag

ente

s an

esté

sico

s m

eno

s re

pu

lsiv

os

deb

e ex

amin

arse

p

erió

dic

amen

te

med

ian

te

un

segu

imie

nto

de

la b

iblio

graf

ía y

ab

ord

and

o l

a cu

esti

ón

co

n o

tro

s in

vest

igad

ore

s. A

fin

de

red

uci

r aú

n m

ás e

l es

trés

, p

od

ría

est

able

cers

e u

n p

rogr

ama

par

a

hab

itu

ar a

co

nej

os

jóve

nes

a la

man

ipu

laci

ón

(U

FAW

/RSP

CA

, 20

08

).

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Co

mo

en

est

e es

tud

io s

e es

per

aban

ún

icam

ente

efe

cto

s ad

vers

os

de

men

or

imp

ort

anci

a, s

e u

tiliz

ó u

n s

iste

ma

de

segu

imie

nto

bás

ico

, es

dec

ir,

se

con

tro

lab

an lo

s an

imal

es c

ada

día

y s

e re

gist

rab

an la

s o

bse

rvac

ion

es, p

ero

no

se

con

sid

eró

nec

esar

ia u

na

ho

ja d

e re

gist

ro e

stru

ctu

rad

a.

Al f

inal

de

este

mo

del

o f

igu

ra u

n e

jem

plo

ilu

stra

tivo

de

un

a h

oja

de

ob

serv

ació

n.

San

grad

o b

ajo

an

este

sia

gen

eral

Li

gero

mal

esta

r y

po

sib

le a

vers

ión

al

agen

te d

ura

nte

la in

du

cció

n d

e la

anes

tesi

a

Se u

tiliz

arán

age

nte

s an

esté

sico

s m

uy

po

co r

ep

uls

ivo

s

El a

nim

al p

erm

anec

erá

anes

tesi

ado

has

ta s

u m

uer

te

80

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Se r

egis

tró

un

a lig

era

infl

amac

ión

pas

ajer

a e

n e

l lu

gar

de

la in

yecc

ión

, per

o n

o r

equ

irió

tra

tam

ien

to. E

l co

nej

o p

rest

ó c

iert

a at

enci

ón

a lo

s p

un

tos

de

las

inye

cció

n d

ura

nte

po

co t

iem

po

, per

o s

e co

nsi

der

ó q

ue

ello

ind

icab

a ta

n s

olo

un

mal

esta

r le

ve. N

o s

e o

bse

rvar

on

«ca

ras

de

do

lor»

(e

xpre

sio

nes

fac

iale

s d

e

do

lor)

.

No

se

ob

serv

aro

n e

fect

os

adve

rso

s d

ebid

o a

la t

om

a d

e m

ues

tras

de

san

gre

des

de

un

a ve

na

de

la o

reja

.

Un

a cl

asif

icac

ión

rea

l LEV

E se

co

nsi

der

ó a

dec

uad

a p

ara

est

e an

imal

.

Ejem

plo

de

ho

ja d

e o

bse

rvac

ión

Pro

du

cció

n d

e an

ticu

erp

os

en

co

nej

os –

Ho

ja d

e p

roce

dim

ien

to y

ob

serv

ació

n

Fech

a P

eso

corp

ora

l (kg

)

Ob

serv

acio

nes

1/3

3

,5

San

grad

o p

revi

o –

5 m

l de

un

a ve

na

de

la o

reja

; no

se

ob

serv

aro

n

efec

tos

adve

rso

s

2/3

Nin

gun

a an

orm

alid

ad d

etec

tad

a (N

AD

)

6/3

NA

D

7/3

NA

D

8/3

3

,6

Inm

un

izac

ión

– 0

,25

ml e

n 2

pu

nto

s d

e in

yecc

ión

po

r ví

a su

bcu

tán

ea,

81

liger

a at

enci

ón

a lo

s p

un

tos

de

adm

inis

trac

ión

(ac

ical

ado

) d

ura

nte

vari

os

min

uto

s, a

nte

s d

e re

gres

ar a

la n

orm

alid

ad

9/3

NA

D

10/

3

N

AD

11/

3

N

AD

12/

3

Li

gera

infl

amac

ión

sin

ten

sió

n y

no

do

loro

sa e

n e

l lad

o iz

qu

ierd

o

13/

3

C

on

tin

úa

la in

flam

ació

n e

n e

l lad

o iz

qu

ierd

o; n

o h

a em

peo

rad

o

14/

3

Se

man

tien

e la

infl

amac

ión

en

el l

ado

izq

uie

rdo

, per

o n

o d

uel

e al

pal

par

la

15/

3

3,6

H

a d

esap

arec

ido

la in

flam

ació

n; t

od

o n

orm

al

21/

3

N

AD

22/

3

3,6

In

mu

niz

ació

n –

0,2

5 m

l en

2 p

un

tos

de

inye

cció

n p

or

vía

sub

cutá

nea

,

bre

ve a

ten

ció

n a

dic

ho

s p

un

tos

de

inye

cció

n

28/

9

N

AD

29/

3

3,7

N

AD

30/

3

Sa

ngr

ado

de

pru

eba

– 2

ml d

e u

na

ven

a d

e la

ore

ja; s

in e

fect

os

adve

rso

s

5/4

NA

D

82

6/4

3

,6

Inm

un

izac

ión

– 0

,25

ml e

n 2

pu

nto

s d

e in

yecc

ión

14/

4

3,6

N

AD

15/

4

Sa

ngr

ado

de

pru

eba

– 2

ml d

e u

na

ven

a d

e la

ore

ja; s

in e

fect

os

adve

rso

s

26/

4

N

AD

27/

4

3,6

Ex

angu

inac

ión

baj

o a

nes

tesi

a ge

ner

al; s

in e

fect

os

adve

rso

s

Es n

eces

ario

dis

po

ner

de

un

reg

istr

o q

ue

con

firm

e q

ue

se h

a co

ntr

ola

do

a lo

s an

imal

es a

l men

os

un

a ve

z al

día

, po

r ej

emp

lo, e

n e

l re

gist

ro d

e ca

da

anim

al

(co

mo

en

el c

aso

an

teri

or)

o e

n e

l reg

istr

o d

e sa

la.

83

Eje

mp

los

ilust

rati

vos

de

l pro

ceso

de

eva

luac

ión

de

la s

eve

rid

ad

Mo

de

lo 6

– P

rod

ucc

ión

y m

ante

nim

ien

to d

e a

nim

ale

s m

od

ific

ado

s ge

né

tica

me

nte

Ú

ltim

a ac

tual

izac

ión

: 02

oct

ub

re 2

01

4

1.

Co

nte

xto

gen

eral

El u

so d

e an

imal

es m

od

ific

ado

s ge

nét

icam

ente

en

la

inve

stig

ació

n h

a co

ntr

ibu

ido

a c

om

pre

nd

er l

a fu

nci

ón

de

los

gen

es y

su

s re

spec

tiva

s p

rote

ínas

.

Dis

tin

tos

fen

oti

po

s ti

enen

efe

cto

s d

iver

sos

en e

l bie

nes

tar

de

los

anim

ales

, y a

lgu

no

s p

ued

en c

ausa

r d

olo

r, s

ufr

imie

nto

o a

ngu

stia

. Si b

ien

alg

un

os

fen

oti

po

s

y re

sult

ado

s so

n p

red

ecib

les,

du

ran

te l

a cr

eaci

ón

de

anim

ales

mo

dif

icad

os

gen

étic

amen

te p

ued

en p

rod

uci

rse

mu

cho

s ef

ecto

s in

esp

erad

os

o s

ecu

nd

ario

s,

de

mo

do

qu

e n

o s

iem

pre

es

po

sib

le p

red

ecir

la s

ever

idad

co

n p

reci

sió

n. E

n la

prá

ctic

a e

n m

uch

as lí

nea

s d

e an

imal

es m

od

ific

ado

s ge

nét

icam

ente

el f

eno

tip

o

no

se

ve a

fect

ado

y s

e p

ued

en e

stab

lece

r p

roto

colo

s d

e ev

alu

ació

n p

ara

gara

nti

zar

la d

etec

ció

n

de

los

fen

oti

po

s ad

vers

os.

Alt

ern

ativ

amen

te e

l fe

no

tip

o

pre

vist

o p

ued

e as

oci

arse

a f

eno

tip

os

secu

nd

ario

s im

pre

vist

os

qu

e se

man

ifie

stan

en

dif

eren

tes

mo

men

tos

y q

ue

pu

eden

ver

se a

fect

ado

s p

or

div

erso

s

fact

ore

s m

edio

amb

ien

tale

s.

Al

eval

uar

el

dañ

o r

eal

qu

e su

fre

el a

nim

al d

eben

ten

erse

en

cu

enta

var

ios

fact

ore

s, c

om

o e

l ti

po

de

mu

taci

ón

, el

gen

oti

po

, e

l fe

no

tip

o y

la

estr

ateg

ia d

e

rep

rod

ucc

ión

(p

or

ejem

plo

, ev

itar

fen

oti

po

s h

om

oci

góti

cos

no

civo

s m

edia

nte

el

cru

zam

ien

to d

e h

eter

oci

goto

s x

no

mu

tan

tes

), a

sí c

om

o l

a n

atu

rale

za d

e

los

pro

ced

imie

nto

s ci

entí

fico

s y

zoo

técn

ico

s ad

icio

nal

es y

lo

s p

osi

ble

s ef

ecto

s d

e to

do

s el

los.

Se

req

uie

ren

ob

serv

acio

nes

sis

tem

átic

as e

n e

l m

om

ento

op

ort

un

o, t

anto

du

ran

te la

pro

gres

ión

de

la c

olo

nia

co

mo

a lo

larg

o d

e to

da

la f

ase

exp

erim

enta

l de

un

a co

lon

ia, p

ara

eval

uar

de

form

a ef

icaz

el e

stad

o d

el

bie

nes

tar

de

los

anim

ales

.

Las

nu

evas

lín

eas

deb

en s

er o

bje

to d

e u

n s

egu

imie

nto

det

alla

do

y d

e u

na

eval

uac

ión

no

rmal

izad

a d

el b

ien

esta

r. T

od

as l

as l

ínea

s d

eben

ser

eva

luad

as d

e

form

a in

div

idu

al p

or

par

te d

e p

erso

nal

co

mp

eten

te c

on

la f

orm

ació

n a

dec

uad

a d

ura

nte

la p

rogr

esió

n y

man

ten

imie

nto

de

la c

olo

nia

, y la

info

rmac

ión

so

bre

los

efe

cto

s ad

vers

os

ob

serv

ado

s d

ebe

reco

pila

rse

y tr

ansm

itir

se. E

l per

son

al a

uto

riza

do

deb

e lle

var

a ca

bo

los

pro

ced

imie

nto

s ci

entí

fico

s p

revi

sto

s y

hac

er e

l

segu

imie

nto

y

regi

stra

r lo

s ef

ecto

s o

bse

rvad

os

en

los

anim

ales

, ju

nto

co

n

el

per

son

al

enca

rgad

o

del

cu

idad

o

de

esto

s.

Deb

en

est

able

cers

e

pro

spec

tiva

men

te p

un

tos

fin

ales

hu

man

itar

ios

bas

ado

s en

par

ámet

ros

com

o l

a p

érd

ida

de

pes

o,

el e

stad

o c

orp

ora

l y l

os

com

po

rtam

ien

tos

pro

ble

mát

ico

s,

84

jun

to c

on

car

acte

ríst

icas

de

des

arro

llo e

spec

ífic

as.

Nin

gún

an

imal

deb

e m

ante

ner

se c

on

vid

a si

su

per

a lo

s lím

ites

de

seve

rid

ad

pre

vist

os,

a m

eno

s q

ue

pre

sen

te u

n in

teré

s ci

entí

fico

co

nvi

nce

nte

y ú

nic

amen

te c

on

per

mis

o d

e la

au

tori

dad

co

mp

eten

te.

La n

atu

rale

za,

el m

om

ento

y l

a d

ura

ció

n d

e la

s o

bse

rvac

ion

es d

epen

der

án d

e va

rio

s fa

cto

res

adem

ás d

e la

mu

taci

ón

ap

licad

a. P

or

ejem

plo

, el

fo

nd

o s

gen

étic

o y

las

co

nd

icio

nes

med

ioam

bie

nta

les

en l

as q

ue

se m

anti

ene

a lo

s an

imal

es p

ued

en a

lter

ar c

on

sid

erab

lem

ente

la

exp

resi

ón

del

fen

oti

po

. Es

tos

fact

ore

s es

pec

ífic

os

deb

en a

no

tars

e co

n p

reci

sió

n p

ara

faci

litar

las

co

mp

arac

ion

es e

ntr

e i

nst

alac

ion

es y

el

segu

imie

nto

de

anim

ales

mo

dif

icad

os

gen

étic

amen

te e

n g

ener

al. T

amb

ién

deb

e te

ner

se e

n c

uen

ta la

vid

a m

edia

de

cad

a lín

ea e

n u

na

inst

alac

ión

det

erm

inad

a, y

a q

ue

alg

un

os

fen

oti

po

s ap

arec

en

de

form

a ta

rdía

, de

mo

do

qu

e so

lo p

ued

en o

bse

rvar

se s

i se

man

tien

e a

los

anim

ales

du

ran

te p

erío

do

s m

ás la

rgo

s.

Re

fere

nci

as

RSP

CA

GA

Pas

spo

rt W

ork

ing

Gro

up

(2

010

), G

A P

ass

por

ts: T

he

Key

to

Co

nsi

sten

t A

nim

al C

are

. So

uth

wat

er,

UK

: RSP

CA

(d

esca

rgab

le e

n:

htt

p:/

/ww

w.r

spca

.org

.uk/

scie

nce

gro

up

/res

earc

han

imal

s/im

ple

men

tin

g3rs

/gap

assp

ort

).

Wel

ls D

J e

t al

(2

006)

, Ass

essi

ng

th

e w

elfa

re o

f g

enet

ica

lly a

lter

ed m

ice,

La

bo

rato

ry A

nim

als

40

(2):

11

1-1

14

(d

esca

rgab

le e

n:

htt

p:/

/ww

w.n

c3rs

.org

.uk/

do

wn

load

do

c.as

p?i

d=3

56&

pag

e=2

31

&sk

in=0

).

2.

Ejem

plo

s

Los

tres

eje

mp

los

qu

e se

pre

sen

tan

en

las

sec

cio

nes

2.1

a 2

.3 a

co

nti

nu

ació

n i

lust

ran

có

mo

se

pu

ede

eval

uar

la

seve

rid

ad e

n r

ato

nes

mo

dif

icad

os

gen

étic

amen

te e

incl

uye

n u

na

revi

sió

n d

e la

s et

apas

de

des

arro

llo, l

os

efec

tos

del

pro

ced

imie

nto

y e

l des

arro

llo d

e la

co

lon

ia. C

ada

eje

mp

lo s

e ce

ntr

a en

los

pri

nci

pio

s d

e la

eva

luac

ión

de

la s

ever

idad

, en

luga

r d

e te

ner

en

cu

enta

to

das

las

hip

óte

sis

po

sib

les

en

el d

esar

rollo

de

la c

olo

nia

.

La c

reac

ión

de

cad

a m

od

elo

seg

uir

á p

roce

dim

ien

tos

no

rmal

izad

os

qu

e re

qu

iere

n la

pre

par

ació

n q

uir

úrg

ica

de

los

mac

ho

s va

sect

om

izad

os,

la m

anip

ula

ció

n

de

los

emb

rio

nes

y la

imp

lan

taci

ón

qu

irú

rgic

a e

n la

s h

emb

ras

pse

ud

oge

stan

tes.

Se

sup

on

e la

ap

licac

ión

de

bu

enas

prá

ctic

as e

n m

ate

ria

de

asep

sia,

ges

tió

n

del

do

lor

y co

mp

eten

cia

del

cir

uja

no

.

85

La c

on

firm

ació

n d

e la

pre

sen

cia

de

la m

uta

ció

n e

n e

l fu

nd

ado

r o

en

la

pro

gen

ie d

e su

lín

ea g

erm

inal

se

lleva

rá a

cab

o a

par

tir

de

mu

estr

as d

e te

jido

s

ob

ten

idas

co

mo

pro

du

cto

sec

un

dar

io d

e la

id

enti

fica

ció

n (

mar

cad

o d

e la

s o

reja

s) o

med

ian

te e

l m

éto

do

men

os

inva

sivo

qu

e su

min

istr

e te

jido

su

fici

ente

par

a ev

alu

ar e

l ge

no

tip

o.

La e

stra

tegi

a p

ara

la d

eter

min

ació

n d

el f

en

oti

po

de

cad

a lín

ea d

epen

der

á d

el g

en,

el á

mb

ito

de

inve

stig

ació

n y

lo

s ef

ecto

s

pre

vist

os.

Un

a se

rie

de

ob

serv

acio

nes

no

rmal

izad

as d

eter

min

ará

la e

valu

ació

n d

e la

sev

erid

ad.

2.1

. M

od

elo

de

rató

n g

en

éti

cam

en

te a

lte

rad

o –

Gen

Atm

1a

(Fu

nd

ing

)La

b

2.1

.1.

Co

nte

xto

gen

eral

Se c

reó

un

a co

lon

ia d

e ra

ton

es c

on

un

a n

uev

a m

uta

ció

n e

n e

l Gen

A,

po

r m

uta

gén

esis

dir

igid

a en

un

a lín

ea d

e cé

lula

s m

adre

em

bri

on

aria

s d

eriv

ada

de

un

fon

do

gen

étic

o C

57B

L/6

N c

on

un

efe

cto

fen

otí

pic

o d

esco

no

cid

o.

El m

od

elo

se

man

tuvo

en

un

fo

nd

o g

enét

ico

def

inid

o (

C5

7B

L/6

N).

Un

a ve

z q

ue

se

esta

ble

ció

la t

ran

smis

ión

a lí

nea

ger

min

al e

n lo

s ra

ton

es d

e la

pri

me

ra g

ener

ació

n, s

e ll

evó

a c

abo

un

a e

valu

ació

n b

ásic

a d

el b

ien

esta

r u

tiliz

and

o p

ara

ello

s a

30

crí

as p

roce

den

tes

de

3 a

5 c

amad

as

per

ten

ecie

nte

s a

dis

tin

tos

cru

ces.

La

pro

gen

ie f

ue

ob

jeto

de

segu

imie

nto

en

mo

men

tos

pre

det

erm

inad

os

del

des

arro

llo d

e la

co

lon

ia:

en e

l m

om

ento

del

nac

imie

nto

, a

los

14

día

s d

e vi

da

(ju

nto

co

n l

a id

enti

fica

ció

n d

e la

s cr

ías

y la

rec

up

erac

ión

de

tejid

o p

ara

det

erm

inar

el g

eno

tip

o)

y en

el m

om

ento

del

des

tete

. Se

ela

bo

ró u

na

ho

ja d

e p

un

taci

ón

ad

ecu

ada

bas

ada

en e

l sis

tem

a d

e ev

alu

ació

n d

el b

ien

esta

r d

e lo

s

anim

ales

mo

dif

icad

os

gen

étic

amen

te (

Wel

ls e

t a

l. 2

006

). E

l per

son

al t

écn

ico

de

anim

ales

de

lab

ora

tori

o r

ealiz

ó la

s o

bse

rvac

ion

es d

e la

s cr

ías

en la

cu

bet

a, y

los

enca

rgad

os

de

las

colo

nia

s h

icie

ron

un

seg

uim

ien

to d

e la

s p

rop

orc

ion

es

entr

e ge

no

tip

os.

En

la

med

ida

de

lo p

osi

ble

, lo

s ra

ton

es s

e al

oja

ron

en

gru

po

des

pu

és d

el d

este

te e

n c

ub

etas

co

n v

enti

laci

ón

in

div

idu

al c

on

lec

ho

, m

ate

rial

par

a an

idar

y e

l en

riq

uec

imie

nto

med

ioam

bie

nta

l n

ece

sari

o.

El p

erso

nal

técn

ico

de

anim

ales

de

lab

ora

tori

o ll

evó

a c

abo

eva

luac

ion

es e

n la

cu

bet

a d

ura

nte

su

inte

racc

ión

dia

ria

has

ta q

ue

los

rato

nes

alc

anza

ron

la m

adu

rez

sexu

al.

Se r

ealiz

aro

n y

reg

istr

aro

n

eval

uac

ion

es a

lar

go p

lazo

de

los

efec

tos

adve

rso

s p

ara

el b

ien

esta

r re

laci

on

ado

s co

n l

a ed

ad e

n l

os

anim

ales

de

la c

olo

nia

y

anim

ales

asi

gnad

os

a la

rep

rod

ucc

ión

,. To

das

las

ob

serv

acio

nes

se

com

par

aro

n c

on

el f

on

do

gen

étic

o o

rigi

nal

y s

e ev

alu

ó s

u r

elev

anci

a.

2.1

.2.

Eval

uac

ión

pro

spec

tiva

¿Qu

é ac

cio

nes

lle

va

a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n l

os

¿Qu

é ex

per

ime

nta

rán

lo

s an

imal

es?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Q

ué

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

86

anim

ale

s?

po

drí

a e

mp

eora

rlo

?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

en

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Efe

cto

s b

ásic

os

de

la

mo

dif

icac

ión

gen

étic

a

La m

od

ific

ació

n g

enét

ica

pu

ede

ten

er

efec

tos

clín

ico

s ad

vers

os.

En lo

s ca

sos

en

qu

e e

sto

s so

n

imp

red

ecib

les,

cu

alq

uie

r in

dic

io d

e q

ue

los

anim

ales

co

n la

mu

taci

ón

se

han

ap

arta

do

de

par

ámet

ros

físi

cos

o d

e

com

po

rtam

ien

to n

orm

ales

(e

s d

ecir

,

aqu

ello

s q

ue

se s

abe

qu

e se

pro

du

cen

en

fen

oti

po

s re

laci

on

ado

s co

n e

l an

tece

den

te

gen

étic

o o

en

gru

po

s d

e co

ntr

ol d

e ti

po

silv

estr

e) p

ued

en p

on

er d

e m

anif

iest

o u

n

pro

ble

ma

de

bie

nes

tar.

Segu

imie

nto

co

nti

nu

o e

n la

pro

pia

cub

eta.

Eval

uac

ión

del

bie

nes

tar

en m

om

ento

s

det

erm

inad

os

del

des

arro

llo:

nac

imie

nto

, des

tete

y m

adu

rez

sexu

al.

Dep

end

ien

do

de

la n

atu

rale

za d

e lo

s

efe

cto

s ad

vers

os

det

ecta

do

s, s

e

aplic

arán

fac

tore

s d

e m

ejo

ra

adec

uad

os

en la

med

ida

de

lo p

osi

ble

,

com

o d

isti

nta

s es

trat

egi

as d

e

rep

rod

ucc

ión

o r

efi

nam

ien

tos

zoo

técn

ico

s (p

or

ejem

plo

, au

men

to d

el

mat

eria

l par

a an

idar

a f

in d

e ay

ud

ar a

regu

lar

la t

emp

erat

ura

).

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

si l

a

seve

rid

ad e

xced

e u

n n

ivel

mo

der

ado

.

Tom

a d

e m

ues

tras

d

e

teji

do

s p

ara

det

erm

inar

gen

oti

po

s

Po

sib

ilid

ad d

e d

olo

r y

angu

stia

deb

ido

al

mét

od

o p

ara

tom

ar m

ues

tras

de

tejid

os,

po

r ej

emp

lo, p

erfo

raci

ón

o c

olo

caci

ón

de

pen

die

nte

en

la o

reja

o c

ort

e o

de

cola

.

Cu

and

o s

e id

enti

fiq

ue

a lo

s an

imal

es

mar

can

do

las

ore

jas

es

con

ven

ien

te

uti

lizar

, de

ser

po

sib

le, e

l tej

ido

de

la

ore

ja p

ara

det

erm

inar

gen

oti

po

s.

No

ap

licab

le, y

a q

ue

el p

roce

dim

ien

to

solo

se

real

iza

un

a ve

z y

es

po

co

pro

bab

le q

ue

el d

olo

r o

an

gust

ia

alca

nce

un

niv

el q

ue

hag

a n

ece

sari

o u

n

sacr

ific

io h

um

anit

ario

.

87

No

rmal

men

te s

e u

sa u

na

bio

psi

a d

e la

co

la

cuan

do

se

nec

esit

an m

ayo

res

can

tid

ades

de

AD

N, p

ero

pu

ede

cau

sar

do

lor

de

cort

a

y la

rga

du

raci

ón

(es

te ú

ltim

o d

ebid

o a

la

form

ació

n d

e n

euro

mas

).

Par

a el

co

rte

de

la c

ola

deb

e u

tiliz

arse

la m

eno

r p

arte

po

sib

le d

e es

ta

(ten

ien

do

en

cu

enta

qu

e d

ebe

evit

arse

en la

med

ida

de

lo p

osi

ble

un

a

segu

nd

a to

ma

de

mu

estr

as);

deb

erá

uti

lizar

se a

nes

tesi

a y

anal

gési

cos

cuan

do

se

a ap

rop

iad

o, y

un

a

hem

orr

agia

exc

esi

va d

ebe

de

ser

trat

ada

ráp

idam

ente

.

Deb

era

hac

erse

un

seg

uim

ien

to d

e lo

s

avan

ces

con

nu

evas

téc

nic

as m

eno

s

inva

siva

s, e

valu

arlo

s y

aplic

arlo

s

cuan

do

se

a p

osi

ble

De

term

inac

ión

d

e

fen

oti

po

s

Estr

és c

ausa

do

po

r la

man

ipu

laci

ón

o la

aplic

ació

n d

el e

stu

dio

fe

no

típ

ico

, po

r

ejem

plo

, est

rés

al s

er c

olo

cad

o e

n u

n

ento

rno

des

con

oci

do

, ad

min

istr

ació

n d

e

com

pu

esto

s ex

per

imen

tale

s p

ara

cau

sar

un

a re

spu

esta

, se

guim

ien

to d

e in

fecc

ion

es,

anes

tesi

a y

con

fin

amie

nto

par

a to

ma

de

imág

enes

, etc

.

Form

ació

n d

el p

erso

nal

qu

e re

aliz

a la

det

erm

inac

ión

de

fen

oti

po

s e

n

técn

icas

co

mp

ete

nte

s, e

mp

átic

as y

no

rmal

izad

as d

e m

anip

ula

ció

n y

ob

serv

ació

n

Uso

de

anes

tesi

a d

ura

nte

la t

om

a d

e

imág

enes

o p

roce

dim

ien

tos

do

loro

sos.

Estr

uct

ura

ció

n d

e la

s p

rueb

as

fen

otí

pic

as p

ara

pas

ar d

e la

s m

eno

s

inva

siva

s (p

or

eje

mp

lo, o

bse

rvac

ión

Si la

mu

taci

ón

co

nlle

va u

na

resp

ues

ta

seve

ra a

un

en

sayo

fen

otí

pic

o, s

e

llega

rá a

los

pu

nto

s fi

nal

es

hu

man

itar

ios

y se

sac

rifi

cará

a lo

s

anim

ales

88

El g

en o

bje

to d

e es

tud

io e

s u

n n

uev

o m

uta

nte

, au

nq

ue

con

efe

cto

s ad

vers

os

des

con

oci

do

s. L

a ex

per

ien

cia

de

este

est

able

cim

ien

to m

ues

tra

qu

e la

gra

n

may

orí

a d

e lo

s m

od

elo

s si

mila

res

gen

eral

men

te m

ues

tran

un

fen

oti

po

leve

. Si

n e

mb

argo

, en

oca

sio

nes

, u

n m

od

elo

man

ifes

tará

de

form

a im

pre

vist

a si

gno

s

clín

ico

s m

od

erad

os

y, p

or

end

e, la

cla

sifi

caci

ón

pro

spec

tiva

de

este

eje

mp

lo d

eber

ía s

er

MO

DER

AD

A.

2.1

.3.

Re

sult

ado

s

Eva

lua

ció

n in

icia

l de

los

an

ima

les

neo

na

tos

(al n

aci

mie

nto

)

Co

lor

de

las

cría

s

(ún

icam

en

te n

eon

ato

s)

No

rmal

Act

ivid

ades

de

las

cría

s

(ún

icam

en

te n

eon

ato

s)

No

rmal

Pre

sen

cia

de

lech

e en

el

estó

mag

o M

iliu

m

(ún

icam

en

te n

eon

ato

s)

Pre

sen

te

del

co

mp

ort

amie

nto

en

un

esp

acio

abie

rto

) a

las

más

inva

siva

s (p

or

ejem

plo

, pro

ced

imie

nto

s q

ue

req

uie

ren

an

este

sia)

89

Cam

ada

To

das

las

cría

s e

ran

co

nfo

rmes

a lo

s p

arám

etro

s d

el f

on

do

gen

étic

o e

n lo

ref

eren

te a

l tam

año

y la

ho

mo

gen

eid

ad d

e la

cam

ada

y al

des

arro

llo y

el c

reci

mie

nto

de

las

cría

s

Los

sig

uie

nte

s in

dic

ad

ore

s se

ob

serv

aro

n 1

4 d

ías

des

pué

s d

el n

aci

mie

nto

y e

n e

l mo

men

to d

el d

este

te:

Asp

ecto

gen

eral

To

das

las

cría

s so

n m

orf

oló

gica

men

te «

no

rmal

es»

No

se

ob

serv

aro

n in

dic

ios

de

mal

form

acio

nes

Tam

año

, co

nfo

rmac

ión

y

crec

imie

nto

Cre

cim

ien

to n

orm

al d

e ac

uer

do

co

n l

a cu

rva

de

crec

imie

nto

típ

ica

par

a el

fo

nd

o g

enét

ico

de

ori

gen

Esta

do

del

pel

aje

No

rmal

Co

mp

ort

amie

nto

: p

ost

ura

, lo

com

oci

ón

, ac

tivi

dad

e in

tera

ccio

nes

co

n

el e

nto

rno

Co

mp

ort

amie

nto

e i

nte

racc

ion

es n

orm

ales

en

tre

tod

os

los

hab

itan

tes

de

la

cub

eta;

n

o

se

ob

serv

ó

hip

erac

tivi

dad

n

i

agre

sió

n

Sign

os

clín

ico

s N

o s

e d

etec

taro

n

Tam

año

rel

ativ

o

No

rmal

en

co

mp

arac

ión

co

n e

l fo

nd

o g

enét

ico

Nú

me

ros

La t

asa

de

mo

rtal

idad

an

tes

del

des

tete

fu

e n

orm

al p

ara

el

fon

do

gen

étic

o

Ob

serv

acio

nes

clín

icas

Tod

as l

as o

bse

rvac

ion

es y

rat

ios

de

los

neo

nat

os

has

ta e

l d

este

te s

e co

nsi

der

aro

n n

orm

ales

en

rel

ació

n c

on

el

fon

do

gen

étic

o (

C5

7B

L/6

N),

y l

os

rato

nes

ho

mo

cigó

tico

s, h

eter

oci

góti

cos

y n

o m

uta

nte

s n

acie

ron

co

n p

rop

orc

ion

es m

end

elia

nas

no

rmal

es.

90

A l

as 4

sem

anas

de

edad

, si

ete

rat

on

es h

om

oci

góti

cos

y si

ete

no

mu

tan

tes(

7+7

) fu

ero

n s

om

etid

os

a u

na

seri

e d

e p

rueb

as d

e o

bse

rvac

ión

y p

roce

dim

ien

to

leve

, co

mo

SH

IRP

A,

dis

mo

rfo

logí

a, t

est

de

cam

po

ab

iert

o,

bio

qu

ímic

a sa

ngu

ínea

clín

ica,

DEX

A y

cap

tura

de

imág

enes

de

Faxi

tro

n,

du

ran

te u

n p

erío

do

de

16

sem

anas

. A

l fin

aliz

ar e

ste

exp

erim

ento

, el a

nál

isis

fen

otí

pic

o p

uso

de

relie

ve u

na

red

ucc

ión

de

la e

limin

ació

n d

e la

glu

cosa

en

los

rato

nes

ho

mo

cigó

tico

s

tras

un

a p

rueb

a in

trap

erit

on

eal d

e to

lera

nci

a a

la g

luco

sa.

Au

nq

ue

la e

limin

ació

n d

e gl

uco

sa s

e re

du

jo d

ura

nte

la p

rueb

a, t

od

os

los

anim

ales

vo

lvie

ron

a s

u

esta

do

bas

al d

esp

ués

del

pro

ced

imie

nto

y n

o s

e o

bse

rvar

on

otr

os

efe

cto

s ad

vers

os.

2.1

.4.

An

ális

is d

e lo

s re

sult

ado

s

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Tras

el

esta

ble

cim

ien

to d

e la

co

lon

ia,

par

a el

man

ten

imie

nto

y l

a p

rogr

esió

n d

e la

mis

ma

se

uti

lizar

on

cru

ces

de

anim

ales

he

tero

cigo

tes

con

an

imal

es s

in

alte

raci

ón

gen

étic

a. N

o s

e o

bse

rvar

on

fen

oti

po

s n

oci

vos

en lo

s ra

ton

es u

tiliz

ado

s p

ara

la r

epro

du

cció

n y

el m

ante

nim

ien

to,

po

r lo

qu

e se

co

nsi

der

ó q

ue

no

mo

stra

ban

efe

cto

s ad

vers

os.

Pu

esto

qu

e n

o s

e p

revé

n f

eno

tip

os

no

civo

s, e

sta

línea

pu

ede

lleva

rse

a h

om

oci

gosi

s y

man

ten

erse

sin

pro

yect

o a

uto

riza

do

El a

par

eam

ien

to a

nte

s in

dic

ado

en

tre

rato

nes

het

ero

cigó

tico

s p

rod

ujo

rat

on

es h

om

oci

góti

cos.

Un

gru

po

de

esto

s ra

ton

es s

e u

tiliz

ó p

ara

un

exa

men

está

nd

ar d

e fe

no

tip

os

con

sist

ente

en

un

a se

rie

de

pro

toco

los

leve

s, q

ue

incl

uía

n la

inse

rció

n d

e u

na

agu

ja p

ara

tom

ar m

ues

tras

de

san

gre

du

ran

te la

pru

eba

de

tole

ran

cia

a la

glu

cosa

. Rat

on

es n

o m

uta

nte

s se

so

met

iero

n a

l mis

mo

tie

mp

o a

las

pru

ebas

. El e

fect

o a

cum

ula

tivo

en

los

rato

nes

hab

ría

sid

o le

ve, d

ebid

o

a la

to

ma

de

mu

estr

as d

e sa

ngr

e y

a lo

s p

ost

eri

ore

s p

roce

dim

ien

tos

de

det

erm

inac

ión

de

fen

oti

po

s, p

or

op

osi

ció

n a

l ef

ecto

gen

eral

de

la m

od

ific

ació

n

gen

étic

a.

Re

sum

en

Rep

rod

ucc

ión

y m

ante

nim

ien

to: s

in e

fect

os

adve

rso

s.

Rat

on

es h

om

oci

góti

cos

y d

e co

ntr

ol —

LEV

E— d

ebid

o a

las

pru

ebas

de

det

ecci

ón

(n

o a

l efe

cto

de

la m

od

ific

ació

n g

enét

ica)

.

En r

esu

me

n, p

ued

e co

nsi

der

arse

qu

e e

sta

línea

de

rato

ne

s m

od

ific

ado

s ge

né

tica

me

nte

no

pre

sen

ta f

en

oti

po

s n

oci

vos.

La

rep

rod

ucc

ión

de

línea

s

esta

ble

cid

as n

o r

equ

erir

ía u

n p

roye

cto

au

tori

zad

o c

on

arr

egl

o a

la D

irec

tiva

.

91

2.2

. M

od

elo

de

rató

n g

en

éti

cam

en

te a

lte

rad

o –

Tg

(Gen

B)La

bco

de

2.2

.1.

Co

nte

xto

gen

eral

Co

mo

mo

del

o p

ara

el e

stu

dio

de

un

a fo

rma

de

cán

cer

se c

rear

á u

na

colo

nia

de

rato

nes

co

n u

na

mu

taci

ón

qu

e so

bre

exp

resa

un

tra

nsg

en. L

a lín

ea s

e cr

eará

en u

n f

on

do

gen

étic

o C

57B

L/6

N.

Sin

em

bar

go,

el i

nic

io d

el t

um

or

y su

tas

a d

e d

esar

rollo

no

se

pu

eden

def

inir

, y

deb

erán

eva

luar

se c

om

o p

arte

de

la

cara

cter

izac

ión

del

mo

del

o.

Un

a ve

z q

ue

se h

ayan

est

able

cid

o l

as l

ínea

s fu

nd

ado

ras,

se

real

izar

á el

exa

men

bás

ico

de

eval

uac

ión

del

bie

nes

tar

qu

e se

des

crib

e en

la s

ecci

ón

2.1

. Se

des

arro

llará

la lí

nea

más

úti

l par

a es

tud

iar

est

e t

ipo

de

leu

cem

ia.

2.2

.2.

Eval

uac

ión

pro

spec

tiva

¿Qu

é ac

cio

nes

llev

a a

cab

o e

ste

est

ud

io e

n lo

s

anim

ale

s?

¿Qu

é e

xper

ime

nta

rán

los

anim

ale

s?

¿Cu

ánto

su

frim

ien

to p

od

ría

cau

sar?

¿Q

ué

po

drí

a e

mp

eora

rlo

?

¿Có

mo

se

re

du

cirá

al m

ínim

o e

l su

frim

ien

to?

Efe

cto

s ad

vers

os

Me

tod

olo

gía

e in

terv

en

cio

nes

P

un

tos

fin

ales

Eval

uac

ión

y

cara

cter

izac

ión

del

des

arro

llo d

el t

um

or

La p

érd

ida

de

pes

o y

la c

on

dic

ión

fís

ica

avan

zará

n c

on

el d

esar

rollo

del

cán

cer.

Las

inte

rven

cio

nes

se

bas

arán

en

las

ob

serv

acio

nes

dia

rias

de

crit

erio

s

com

o la

pér

did

a d

e p

eso

, la

pér

did

a d

e

la c

on

dic

ión

fís

ica,

la le

targ

ia, e

tc.

Los

anim

ales

del

est

ud

io y

los

rep

rod

uct

ore

s q

ue

mu

estr

en s

ign

os

clín

ico

s n

o c

on

tem

pla

do

s p

or

los

pro

ced

imie

nto

s ex

per

imen

tale

s, c

om

o

un

a p

érd

ida

de

pes

o s

up

erio

r al

15

%,

mal

est

ado

del

pel

aje

o le

targ

ia, s

e

sacr

ific

arán

de

mo

do

hu

man

itar

io.

92

El m

od

elo

ob

jeto

de

estu

dio

se

mo

dif

icar

á p

ara

crea

r el

tra

sto

rno

gen

étic

o p

revi

sto

. El

in

icio

de

la e

nfe

rmed

ad n

o p

ued

e p

red

ecir

se c

on

fac

ilid

ad,

per

o

pu

eden

def

inir

se p

revi

amen

te s

ign

os

clín

ico

s p

ara

po

der

car

acte

riza

rlo

. U

na

vez

cara

cte

riza

do

, el

mo

del

o d

eber

ía m

ante

ner

se p

ara

po

der

uti

lizar

lo e

n

estu

dio

s ex

per

imen

tale

s p

ost

erio

res

sob

re p

osi

ble

s tr

atam

ien

tos

par

a el

tip

o d

e cá

nce

r o

bje

to d

e es

tud

io. D

ebid

o a

ello

, la

clas

ific

ació

n p

rosp

ecti

va d

e es

te

ejem

plo

ser

ía M

OD

ERA

DA

.

2.2

.3.

Re

sult

ado

s

Se r

ealiz

aro

n l

as e

valu

acio

nes

del

bie

nes

tar

des

crit

as e

n l

a se

cció

n 2

.2.

No

se

ob

serv

aro

n a

no

rmal

idad

es e

n l

as e

tap

as d

e d

esar

rollo

ni

en e

l cr

ecim

ien

to

has

ta l

a m

adu

rez

sexu

al.

La c

olo

nia

se

amp

lió c

on

an

imal

es d

e es

tud

io y

an

imal

es d

esti

nad

os

a r

epro

du

cció

n q

ue

se a

par

earo

n a

par

tir

de

10

sem

anas

de

edad

par

a m

ante

ner

la

colo

nia

y p

rod

uci

r n

uev

os

anim

ales

exp

erim

enta

les.

Lo

s an

imal

es f

uer

on

ob

jeto

de

segu

imie

nto

du

ran

te t

od

o e

ste

per

íod

o,

y se

ob

serv

ó e

l des

arro

llo d

e tu

mo

res

a p

arti

r d

e la

s 1

8 s

eman

as d

e ed

ad e

n u

n 6

0 %

de

los

anim

ales

co

n la

mu

taci

ón

. El d

esar

rollo

clín

ico

de

la e

nfe

rmed

ad f

ue

de

4 a

6 s

eman

as, m

om

ento

en

qu

e lo

s an

imal

es t

uvi

ero

n q

ue

ser

sacr

ific

ado

s.

Las

infl

amac

ion

es s

ub

cutá

nea

s p

ued

en

cau

sar

mal

esta

r, a

fect

ar a

l

com

po

rtam

ien

to, l

a p

ost

ura

o la

loco

mo

ció

n n

orm

ales

.

Los

anim

ales

pu

eden

ser

más

pro

pen

sos

a

enfe

rmed

ade

s d

ebid

o a

l deb

ilita

mie

nto

del

sist

ema

inm

un

e.

Ob

serv

acio

nes

dia

rias

y s

egu

imie

nto

de

la s

alu

d e

n g

ener

al y

del

crec

imie

nto

del

tu

mo

r.

Los

anim

ales

se

sacr

ific

arán

de

mo

do

hu

man

itar

io s

i el t

um

or

se u

lcer

a o

inte

rfie

re c

on

el c

om

po

rtam

ien

to

no

rmal

, la

po

stu

ra o

la lo

com

oci

ón

, o

si s

up

era

1,2

cm

de

diá

met

ro.

Se s

acri

fica

rá d

e m

od

o in

cru

ento

a lo

s

anim

ales

qu

e m

ues

tren

sig

no

s d

e

enfe

rmed

ades

inte

rcu

rren

tes.

93

2.2

.4.

An

ális

is d

e lo

s re

sult

ado

s

Eval

uac

ión

de

la s

ever

idad

rea

l

Se o

bse

rvó

qu

e u

n 6

0 %

de

los

anim

ales

co

n la

mu

taci

ón

des

arro

llaro

n t

um

ore

s a

par

tir

de

las

18

sem

anas

de

edad

. La

estr

ate

gia

de

rep

rod

ucc

ión

co

nsi

stió

en e

l ap

area

mie

nto

de

anim

ales

a p

arti

r d

e la

s 10

sem

anas

de

edad

. La

po

sib

ilid

ad d

e q

ue

las

par

ejas

rep

rod

uct

ora

s d

esar

rolla

ran

tu

mo

res

se c

on

sid

eró

sufi

cien

te p

ara

mo

dif

icar

la r

epro

du

cció

n y

el m

ante

nim

ien

to. A

co

nti

nu

ació

n, l

as p

arej

as r

epro

du

cto

ras

se a

par

earo

n a

par

tir

de

las

6 s

eman

as d

e ed

ad;

las

par

ejas

se

sep

arar

on

al

cab

o d

e 1

2 s

eman

as y

lo

s m

ach

os

sem

enta

les

fuer

on

sac

rifi

cad

os.

Las

hem

bra

s d

e es

tud

io y

rep

rod

uct

ora

s fu

ero

n o

bje

to d

e u

n

segu

imie

nto

dia

rio

par

a d

etec

tar

los

pri

mer

os

sign

os

de

des

arro

llo t

um

ora

l. Lo

s an

imal

es n

o u

tiliz

ado

s se

sac

rifi

caro

n d

e m

od

o i

ncr

uen

to a

nte

s d

e q

ue

apar

ecie

ran

sig

no

s cl

ínic

os.

Re

sum

en

An

imal

es m

eno

res

de

18

sem

anas

: sin

efe

cto

s ad

vers

os.

An

imal

es m

ayo

res

de

18

sem

anas

qu

e d

esar

rolla

ron

tu

mo

res:

LEV

E d

ebid

o a

los

pu

nto

s fi

nal

es c

línic

os

anti

cip

ado

s.

An

imal

es m

ayo

res

de

18

sem

anas

qu

e d

esar

rolla

ron

tu

mo

res

y u

tiliz

ado

s: L

EVE

o M

OD

ERA

DA

, dep

end

ien

do

de

la a

plic

ació

n d

e p

un

tos

fin

ales

clín

ico

s.

2.3

. M

od

elo

co

n r

ato

ne

s g

en

étic

ame

nte

alt

era

do

s –

Gen

Ctm

1a

(Fu

nd

ing

)La

b

2.3

.1.

Co

nte

xto

gen

eral

Se c

reó

un

a co

lon

ia d

e ra

ton

es c

on

un

a m

uta

ció

n e

n e

l G

en C

dir

igid

a a

un

a lín

ea d

e cé

lula

s m

adre

em

bri

on

aria

s d

e fo

nd

o g

enét

ico

C5

7B

L/6

N c

on

un

po

ten

cial

fen

otí

pic

o c

on

oci

do

par

a es

tud

iar

co

mp

ort

amie

nto

y l

a m

emo

ria.

El

mo

del

o s

e m

antu

vo e

n u

n f

on

do

gen

étic

o d

efin

ido

(C

57

BL/

6N

). U

na

vez

esta

ble

cid

a la

tra

nsm

isió

n a

la

línea

ger

min

al e

n lo

s ra

ton

es d

e la

pri

mer

a ge

ner

acio

n, s

e lle

vó a

cab

o u

n e

xam

en b

ásic

o d

e ev

alu

ació

n d

el b

ien

est

ar.

2.3

.2.

Eval

uac

ión

pro

spec

tiva

94

Al i

gual

qu

e en

el c

aso

des

crit

o e

n la

sec

ció

n 2

.1, e

l gen

ob

jeto

de

estu

dio

es

un

a n

uev

a m

uta

ció

n L

a in

ten

ció

n e

s u

tiliz

ar e

l mo

del

o e

n f

utu

ros

estu

dio

s d

el

com

po

rtam

ien

to d

esti

nad

os

a co

mp

rob

ar l

a ef

icac

ia d

e n

uev

os

com

pu

esto

s fa

rmac

éuti

cos.

La

exp

erie

nci

a en

el

esta

ble

cim

ien

to m

ues

tra

qu

e la

gra

n

may

orí

a d

e m

od

elo

s si

mila

res

gen

eral

men

te m

ues

tran

un

fen

oti

po

lev

e. S

in e

mb

argo

, en

oca

sio

nes

, u

n m

od

elo

man

ifes

tará

de

form

a im

pre

vist

a si

gno

s

clín

ico

s m

od

erad

os

y, p

or

end

e, la

cla

sifi

caci

ón

pro

spec

tiva

de

este

eje

mp

lo d

eber

ía s

er

MO

DER

AD

A.

2.3

.3.

Re

sult

ado

s

Tod

as l

as o

bse

rvac

ion

es y

rat

ios

se c

on

sid

erar

on

no

rmal

es e

n r

elac

ión

co

n e

l fo

nd

o g

enét

ico

(C

57

BL/

6N

) d

e es

te m

od

elo

, y

los

rato

nes

ho

mo

cigó

tico

s,

het

ero

cigó

tico

s y

no

mu

tan

tes

nac

iero

n c

on

un

a d

istr

ibu

ció

n m

end

elia

na

no

rmal

.

A la

s cu

atro

sem

anas

de

edad

, lo

s ra

ton

es h

om

oci

góti

cos

y lo

s ra

ton

es n

o m

uta

nte

s d

el g

rup

o d

e co

ntr

ol f

uer

on

so

met

ido

s a

un

a se

rie

de

ob

serv

acio

nes

y

pru

ebas

par

a ev

alu

ar s

u a

pre

nd

izaj

e y

su m

emo

ria.

Est

as p

rueb

as s

e ef

ectu

aro

n d

ura

nte

un

per

íod

o d

e d

iez

sem

anas

. Al f

inal

iza

r es

te a

nál

isis

fen

otí

pic

o n

o

se o

bse

rvar

on

fen

oti

po

s n

oci

vos.

A c

on

tin

uac

ión

, est

e m

od

elo

se

uti

lizó

par

a co

mp

rob

ar la

efi

caci

a d

e n

uev

os

com

pu

esto

s fa

rmac

éuti

cos.

El c

ruce

de

rato

nes

het

ero

cigó

tico

s p

rod

ujo

an

imal

es h

om

oci

góti

cos

san

os

qu

e p

rese

nta

ron

un

re

nd

imie

nto

re

pro

du

ctiv

o s

imila

r al

de

la c

epa

de

ori

gen

. Po

r

tan

to, p

ara

red

uci

r el

nú

mer

o d

e an

imal

es, s

e u

tiliz

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96