practica 1 simulacro de cultivo.docx

7/29/2019 Practica 1 Simulacro de cultivo.docx

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Prctica No. 1: Manipulacin de material estril en un simulacro decultivo celular. Cultivo de linfocitos.

Integrantes:

Hernndez Alejandro Juan Daniel

Prez Hernndez Itzel

30 de enero del 2013

UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DEHIDALGO

INSTITUTO DE CIENCIAS DE LA SALUD

REA ACADMICA DE MEDICINA

Laboratorio de Gentica


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MARCO TERICO:

El ambiente en el que trabajemos puede estar contaminado por microorganismos

invisibles por el ojo humano y el contacto directo con materiales que nosotros ocupemos

en la realizacin de pruebas de cultivo celular y puede producir una contaminacin de la

muestra y para prevenir la contaminacin o alteracin de muestras en el manejo del

material es necesario utilizar mtodos de esterilizacin y manipulacin del material para

evitar contaminaciones en los experimentos, y contaminacin del usuario y as llevar a

cabo mejores pruebas y con ello mejores resultados.

Entre algunas recomendaciones y especificaciones para la correcta manipulacin y

utilizacin de material estril en el simulacro de cultivos celulares son:

Desinfectar el rea de trabajo

Lavarse las manos antes y despus de la practica

El material estril slo puede abrir dentro de la campana de cultivos, o a la llama

del mechero.

Desinfectar el material mediante algn mtodo de esterilizacin

Entre algunos mtodos de esterilizacin se encuentran:

I esterilizacin por calor1.- calor seco

A) incineracin. Es un mtodo excelente para materiales desechables, comoapsitos sucios, pauelos de papel, basura, etcB) hornos. Para esterilizar materiales secos como: vidrio, jeringas, agujas.

2.- calor hmedoA) agua hirviendo.B) vapor fluente. Este consiste en exponer a las sustancias (generalmentelquidos) a vapor fluente durante 30 min.C) vapor a presin. Para esterilizar con vapor rpida y eficazmente se utiliza alvapor a presin el auto clave.

Esterilizacin sin calor1.- esterilizacin con radiaciones

A) luz ultravioleta. Es muy adecuada para esterilizar el aire en salas deoperaciones y en superficies lisasB) rayos x. Se emplean sobre todo para trabajos mdicos y experimentales y en laproduccin de mutantes microbianos.C) rayos alfa. Son bactericidas eficaces, carecen casi totalmente de penetracin.D) rayos gamma. Tienen ms poder de penetracin que los rayos x.E) rayos catdicos (electrones). Se utilizan cada vez ms con fines generalescomo la elaboracin de alimentos.

Esterilizacin con productos qumicosA) oxido de etileno. Este gas se aplica en autoclaves especiales.Se le ha dado gran utilidad en la esterilizacin de materiales de plstico desechos.B) beta propiolactona.


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Esterilizacin por filtracinSe logra mecnicamente obligando a los lquidos que van a esterilizarse alatravesar filtros muy finos. Este mtodo es aplicable a lquidos que se destruyencon el calor y no pueden utilizarse en ninguna otra forma como los lquidos ymedicaciones, para el empleo hipodrmico o intravenoso.

OBJETIVOS:

Conocer las condiciones necesarias para el manejo del material estril en un

simulacro de cultivo celular y de linfocitos.

MATERIAL Y MTODOS:

Cultivo2 pipetas Pasteur de 5ml2 pipetas Pasteur de 10ml2 frascos viables esterilizables con tapnde rosca de 15 ml

1 matraz erlenmeyer con tapn de roscade 50 ml1 franela100gr de algodn

1 fibra1 pinza con punta de goma1 marcador1 bulbo para pipeta Pasteur1 propipeta

1 mechero de alcohol1 gradillaCubre bocasGuantes de ltex

RESULTADOS:

Por cuestiones de tiempo solo se pudieron revisar los frascos a las 0 horas y a las 24horas

Tubo 0 horas 24 horas1 Sin turbidez , color naranja Sin turbidez y ligeramente

aumentado de tono naranja2 Sin turbidez, color naranja Sin turbidez y muy

ligeramente aumentado detono naranja

Al trascurrir las 24 horas los cultivos permanecieron

transparentes y sin turbidez por lo que debemos concluir

que nuestro cultivo no fue contaminado y los mtodos

empleados fueron realizados correctamente.

En la prctica de cultivo de linfocitos al igual que en el cultivo celular por cuestiones de

tiempo se tuvieron que reducir a 6 gotas la cantidad de sangre para que as la

fitohemaglutinina tuviera mayor efecto.


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ANLISIS DE RESULTADOS:

Nuestros cultivos no fueron contaminados debido a que mantuvimos el ambiente

de esterilidad y evitamos que agentes patgenos del medio externo entraran en

contacto con nuestra muestra. Esto fue gracias a que adoptamos las condicionesde asepsia al tomar el material con sus respectivos cuidados, as como para

colocarlo en el medio, estas condiciones implicaron flamear la boca del tubo, en la

parte de la boquilla, despus de quitar el tapn y antes de volver a ponerlo hay

que pasar la boca de los tubos de igual manera por la llama de la lmpara de

alcohol brevemente y trabajar en las proximidades de la lmpara de alcohol (10 cm

a la redonda).

Otro medio que se utilizo para que no se contaminara nuestras muestras fue el

uso de guantes y cubre bocas.

Antes de manejar nuestro cultivo, se aseo el area, primero con agua y jabon,

despus secamos debidamente con algodn esteril y por ultimo con desinfectante

en aerosol.

Como punto importante en el proceso de la practica que derramo un poco de

alcohol de la lmpara, en la mesa, lo cual no importo por que cambiamos de lugar

para no contaminar nuestro campo.

La coloracin naranja- rojizo fue debido a que le agregamos 15 gotas de rojo de

fenol.

CONCLUSIONES

El correcto manejo del material para que conservara su esterilidad as como haber

desinfectado correctamente nuestra rea de trabajo nos permiti tener mejoresresultados en nuestra prctica

No se produjeron cambios que indicaran contaminacin alguna del cultivo

BIBLIOGRAFA

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http://www.ispch.cl/sites/default/files/norma_13_manejo_material_esteril.pdf [29 enero,2013]

Ramos m; martnez a. (junio 2008) curso de cultivos celulares, disponible en:

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