TECNICAS CITOQUIMICAS

Blgo. Rolando Ventura E.

TINCION

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico.

La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos: enzimas, metales pesados, sustancias orgánicas, moléculas de deposito y otras sustancias.• Son un complemento de las tinciones hematológicas.• Por medio de ellas se localizan enzimas y sustancias

inorgánicas.• Así se mejora la diferenciación celular.• También sirven para el diagnostico.

TIPOS DE TINCIONES

Se pueden clasificar en: Atendiendo al nivel de vitalidad de las

células que se pretende colorear, se pueden dividir en vitales y no vitales.

Atendiendo al momento en que empezaron a ser utilizadas para el Dx. hematológico, se divide en tradicionales y especiales.

TINCIONES VITALES Y NO VITALES Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que

se practican sobre células que están vivas. Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan

sobre células que están vivas, mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. Son colorantes vitales: el verde Jano y el azul de metileno.

Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados del organismo del que proceden.

Las tinciones no vitales se realizan sobre células muertas. La coloración de células muertas requiere un proceso previo de fijación, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portaobjetos.

TINCIONES TRADICIONALES Y ESPECIALES Colorantes ácidos: tienen una especial afinidad

por las estructuras alcalinas de las células, como por ejemplo la hemoglobina (eosina).

Colorantes básicos: tienen una especial afinidad por las estructuras acidas de las células, como por ejemplo los ácidos nucleicos (azul de metileno).

Colorantes neutros: son sales de un acido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro (eosinato de azul de metileno).

Colorantes indiferentes: Son los que no tienen afinidad por estructuras acidad o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del liquido empleado para preparar la solución colorante (Sudan III).

También hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones policromas. Una coloración es panóptica cuando se utilizan

sucesivamente sustancias colorantes neutras. (May-Grunwald-Giemsa)

Y es pancrómica cuando se aplican todas las sustancias colorantes neutras juntas (azul de metileno, eosina, Wright)

DEFINICION DE REACCION CITOQUIMICA

Es la reacción que por el método de uno o mas reactivos químicos: aplicados a la célula en condiciones definidas; determina la formación de productos coloreados; insolubles; no difusibles; que permiten el reconocimiento microscópico; de sustancias o grupos químicos definidos; en su real ubicación citológica; para lo cual no deben destruir a la célula, y si lo hacen deben reemplazar a la sustancia identificada en su topografia.

Las finalidades primordiales de la citoquímica son:

El reconocimiento y diagnóstico celular

El estudio de la fisiologia y la fisiopatología celular.

El Diagnóstico de la patología.

Sudán Black / Red Oil

Ambas se utiliza para la deteccion de lípidos, en el caso del Sudan Black este tiñe los fosfolípidos y esteroles de membrana de los gránulos.

Es un colorante lipófilo que se une de forma irreversible a un componente granular indefinido en los granulocitos, en los eosinofilos y en algunos monocitos.

COLORACIONES COMPUESTAS

Coloración Gram

PARED CELULAR

Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que está en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la Pared Celular, que esta formada en base a aminoacidos, azucares y grasas y ellas están entrelazadas formando un polimero complejo. La pared celular brinda una estructura rígida que da forma a la celula y estas pueden destruirse o romperse en condiciones especiales. Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram (+) y Gram negativas existen importantes diferencias.

BACTERIA GRAM POSITIVA

Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos: Acido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y Acido teicoico de la pared que está en la superficie y se une solo a la capa de peptidoglicano.

El acido teicoico es el

responsable del

determinante antigénico

del organismo.

BACTERIA GRAM NEGATIVA

Tiene una capa delgada de Peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por lipoproteinas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en el fosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la superficie. El lípido se llama Lípido A y es tóxico; pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina. La pared de la célula tiene poros llamado Priones para el transporte de substancias de peso molecular bajo.Entre la membrana citoplásmica y la

pared celular hay un espacio

periplásmico con enzimas hidrolíticas,

enzimas inactivadoras de antibióticos

y proteínas de transporte.

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