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奶牛重大疫病净化方法
[email protected] [email protected]
哈尔滨市香坊区木材街59号 13845125612
现代奶牛场高级人才研修班
王君伟 高明春
哈尔滨市香坊区木材街59号13845125612
2014年•北京
主要内容提要
一、重大疫病防控概述
1. 传染病与疫病
2. 牛疫病名录
3. 我国优先防治的牛疫病
4. 疫病的共同特点
5. 疫病损失估算举例
6. 防控的目标与作用
7. 病原感染/免疫及其检测
8. 检测/监测试验类型的选择
二、奶牛重大疫病防控技术
1. 牛结核病防控
2. 副结核病防控
3. 布鲁氏菌病防控
4. 口蹄疫防控
5. 牛病毒性腹泻防控
6. 传染性鼻气管炎防控
传染病 [ Infectious Diseases ]：是由各种病原体引起的能在人与人、动物与动
物或人与动物之间相互传播的一类疾病。病原体中大部分是微生物，
小部分为寄生虫，寄生虫引起者又称寄生虫病。
疫 病 [epidemic disease] ：流行性急性传染病。即疫疠。
疫病泛指流行性的传染病，区别于普通病。
1.传染病与疫病
牛传染病——《牛的传染病》(80年出版）记述了47种
《中华人民共和国动物防疫法》 第十条根据动物疫病对养殖业生产和人体健康的危害程度，本法规定的动物疫病分为三类：
一类疫病，是指对人畜危害严重、需要采取紧急、严厉的强制预防、控制、扑灭措施的；
二类疫病，是指可造成重大经济损失、需要采取严格控制、扑灭措施，防止扩散的；
三类疫病，是指常见多发、可能造成重大经济损失、需要控制和净化的。
我国的三类动物疫病
重大动物疫病 （百度百科）
重大动物疫情，是指高致病性禽流感等发病率或者死亡率高的动物疫病突然发生，
迅速传播，给养殖业生产重大动物疫病安全造成严重威胁、危害，以及可能对公众
身体健康与生命安全造成危害的情形，包括特别重大动物疫情。
2. 牛疫病名录
一、二、三类牛疫病病种名录 农业部公告第1125号附件(二零零八年十二月十一日)
一类动物疫病（5/17）
牛病：口蹄疫、牛瘟（已根除）、牛传染性胸膜肺炎（已根除）、牛海绵状脑病（外来）、蓝舌病（牛隐性）
二类动物疫病（14/77种）
多种动物共患病：布鲁氏菌病、炭疽、魏氏梭菌病、副结核病、弓形虫病、钩端螺旋体
牛病：牛结核病、牛传染性鼻气管炎、牛恶性卡他热、牛白血病、牛出血性败血病、牛梨形虫病
三类动物疫病（11/63种）
牛病：牛流行热、牛病毒性腹泻/膜病、牛生殖器弯曲杆菌病、毛滴虫病、牛皮蝇蛆病
其他：牛（新）支原体肺炎、呼吸道合胞体感染
OIE牛疫病名录
Multiple species diseases
Cattle diseases
Brucellosis (Brucella abortus) Foot and mouth diseaseBrucellosis (Brucella melitensis) ParatuberculosisBrucellosis (Brucella suis) Rinderpest 已根除
Bovine anaplasmosis Bovine babesiosis Bovine genital campylobacteriosisBovine tuberculosis Bovine viral diarrhoea Contagious bovine pleuropneumoniaHaemorrhagic septicaemia Lumpy skin disease TheileriosisTrichomonosis Trypanosomosis (tsetse-transmitted) Bovine spongiform encephalopathyInfectious bovine rhinotracheitis/infectious pustular vulvovaginitis
Enzootic bovine leukosis
（不再分A B)
我国优先防治的牛疫病
国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年)
一类动物疫病（5种）：
口蹄疫（A型、亚洲I型、O型）、高致病性禽流感、
高致病性猪蓝耳病、猪瘟、新城疫。
二类动物疫病（11种）：
布鲁氏菌病、奶牛结核病、狂犬病、血吸虫病、包虫病、马鼻疽、
马传染性贫血、沙门氏菌病、禽白血病、猪伪狂犬病、
猪繁殖与呼吸综合征（经典猪蓝耳病）。
“重大”的相对性
中 国 布病、结核、口蹄疫
美 国加 拿 大澳大利亚
流行性腹泻、副结核、传染性鼻气管炎
“非重大疫病”经济损失估算举例
A 牛单产（kg/头） 6,000
B 产奶量下降 (5%-15%) 10%
产奶量损失 10*A*B 12,000
C 年度平均牛奶价格 3.2元/kg
损失1 牛奶出售损失 10*A*B*C 19,200元
D 平均更新牛成本 8,000元
损失2 额外的更新成本 10*D 80,000元
淘汰牛平均价格 5,000元
副结核病阶段Ⅲ淘汰牛平均价格 3,700元
E 市场销售收入差额 1,300元
损失3 临床症状奶牛销售收入损失 10*E 13,000元
牛场总损失 10*A*B*C + 10*D +10*E 112,200元
每头有临床症状的牛损失 11,220元
10头临床副结核的牛场
规模化牧场需要防控的疫病不能只是布病、结核、口蹄疫
4. 疫病的共同特点
目标：
均有病原引起 —— 病毒、细菌、寄生虫
以群体发病为主
可从多种途径引入牛场
一旦发生，难以控制
损失严重，可以毁灭整个牛群
5. 防控的目标与作用
1. 控制新病原传入牛场
2. 减少病原体在牛群中的传播消除疾病
1. 提高产奶量和繁殖率
2. 减低奶牛淘汰率和治疗费用
增加效益
作用：
6、疫病防控基本原则与净化路线要点
（一）采取综合措施，阻止新病原传入牛场
（二）控制病原体在牛群中的传播，减少疾病发生
（三）加强饲养管理，增强奶牛群体的疾病抵抗力
消灭传染源 切断传播途径 保护易感动物
五、疫病防控基本原则、共同要点
净化路线核心
防控基本原则
管理
免疫
检测捕杀
补充
牛场状态监测
序号 病名 常规检测防控 外购扩群
1 牛结核病1年2次抽检
2岁以上牛（皮试）皮试
2 副结核病2年1次抽检
2岁以上牛（ELISA)ELISA
3 布鲁氏菌病1年2次抽检
成母牛(琥红）琥红
4 口蹄疫 1年2次抽检（NSP-ELISA) 前1月检测、免疫，检效价。
5 牛病毒性腹泻 1年2次抽检（ELISA) ELISA
6 传染性鼻气管炎 1年2次抽检（ELISA) ELISA
7 牛白血病 1年1次抽检（ELISA) ELISA
8 呼吸道合胞体病 1年2次抽检（ELISA) ELISA
已确定的洁净群，坚持自繁扩群。
常规与扩群的免疫与检测
免疫与诊断基本制品概况
疫苗分类与特点
诊断制剂分类与特点
灭活苗
减毒活疫苗 减毒不代表对人无残余毒力
基因工程疫苗
合成肽疫苗
凝集反应
琼扩反应
补体结合反应
酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫层析、胶体金（试纸条）
迟发性变态反应（皮试）
聚合酶链式反应（PCR）
病毒性疫苗
细菌性疫苗
附：我国牛用生物制品
灭活疫苗牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗牛副结核灭活疫苗牛流行热灭活疫苗破伤风类毒素气肿疽灭火疫苗猪、牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗活疫苗牦牛副伤寒活疫苗牛传染性胸膜肺炎活疫苗牛环形泰勒虫病活疫苗抗体抗气肿疽血清抗炭疽血清抗猪、牛多杀性巴氏杆菌病血清诊断制品产气荚膜梭菌定型血清传染性牛鼻气管炎中和试验抗原、阳性血清与阴性血清茨城病琼脂扩散试验抗原、阳性血清与阴性血清冻干补体蓝舌病酶联免疫吸附试验抗原、阳性血清与阴性血清蓝舌病琼脂扩散试验抗原、阳性血清与阴性血清牛白血病琼脂扩散试验抗原、阳性血清与阴性血清牛病毒性腹泻/黏膜病中和试验抗原、阳性血清与阴性血清牛副结核补体结合试验抗原、阳性血清与阴性血清牛副结核酶联免疫吸附试验抗原与阳性血清牛无浆体病凝集试验抗原、阳性血清与阴性血清牛、羊副结核补体结合试验抗原、阳性血清与阴性血清炭疽沉淀素血清提纯副结核菌素提纯牛型结核菌素
节省篇幅去除下列疾病的相关制品1. 口蹄疫2. 布病3. 牛传染性胸膜肺炎4. 牛瘟5. 炭疽
病原与宿主相互作用
病毒基本结构
细菌基本结构
病毒、细菌等病原都可看做是蛋白质与核酸的复合物。
获得性抗感染免疫模式图
感染与免疫在宿主体内都留下了痕迹：
微生物抗 体核 酸
检测依据
免疫与诊断的分子生物学基础
3. 牛布鲁氏菌病
2. 牛副结核病
1. 牛结核病
4. 口蹄疫
8. 牛白血病
7. 牛呼吸道合胞体病毒感染
6. 牛传染性鼻气管炎
5. 牛病毒性腹泻/黏膜病
胞内菌
病毒
疫苗OIE推荐诊断方法
无
活/死
活
多物种共患慢性消耗性带菌状态变态反应性抗体无效
死
活/死
活/死
活/死
——
皮试
——
抗体
病原
病原
病原/抗体 / Real time PCR
——
抗体
奶牛主要疫病概述
治疗 预防 √
传播迅速
带毒状态
抗体保护
细胞免疫保护
抗体免疫保护
8 检测/监测试验类型的选择
相应检测方法 应用的病原
可检测物质:
蛋白质
核酸
抗体
血征
抗原捕获ELISA
PCR/RT-PCR
间接、竞争、阻断ELISA
细胞计数
BVDV
几乎所有病原 BLV
几乎所有病原 BT
BLV
金标准？OIE/国标？
抗体还是抗原？
蛋白还是核酸？
可检测样品：血清 奶液
其他体液 口咽 口涎 粪便
血细胞
组织 病变 耳
牧场疫病净化基本流程 以BVD为例
1. 牛群状态评估 抗体
ELISA方法检测奶罐中的牛奶，证实是否含有BVDV抗体。
可10天后重新取样检测确认。
2. 持续感染牛（PI牛）的发现与清除 （病原：蛋白核酸）
所有牛BVDV检测（后备牛优先）。 PCR ELISA
持续感染牛（PI牛）去除后，再对混合奶样进行检测
3. 筛查和监测
对新生犊牛每年进行病毒检测
对抗体进行监测 大缸奶
4. 预防感染提高免疫水平
疫苗接种以使牛群具有一定水平的免疫力，应对感染风险。
附：群体监（检）测技术
混合样品（奶、血清）监测疫病的优点：
305天产奶，产奶牛在60%
与采集血清相比，没有应激损失
适合现地检测，自检自查
方便进行群体监测，控制监（检）测成本
奶样监测疫病的缺点：
由于常奶中特异性抗体低于血清，且杂质多，敏感性较低。
检测不到所有动物，检测阴性结果仅作实际健康状态的参考。
材料不易保存
除口蹄疫、结核外其他疫病几乎都有群体检测相关制品
奶牛结核病及其净化
In cattle, clinical evidence of tuberculosis is usually lackinguntil very extensive lesions have developed. For this reason, itsdiagnosis in individual animals and an eradication programmewere not possible prior to the development of tuberculin byKoch in 1890.
洲别 消灭 国家 控制 国家
亚洲 日本
欧洲丹麦、比利时、挪威、德国、荷兰、瑞典、
芬兰、卢森堡英国、法国
北美洲 美国、加拿大
大洋洲 澳大利亚
控制或消灭（奶）牛结核的国家
到2015年 到2020年
北京、天津、上海、江苏4个省（市）
达到净化标准；其他区域达到控制标准。
北京、天津、上海、江苏4个省（市）维持
净化标准；浙江、山东、广东3个省达到净
化标准；其余区域达到控制标准。
奶牛结核防治考核标准
国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）
13
均无OIE认证
牛结核与人结核的关系
10%的人结核是由牛结核引起。
一部分牛结核由人结核引起。
Bovine tuberculosis is a chronic bacterial disease of animalsand humans caused by Mycobacterium bovis. OIE
阳性牛初乳不得饲喂犊牛
互传性
结核病的防控要点结核病
监测 净化 消毒检疫
奶牛要进行100%结核病监测，成年牛净化群每年春、秋
两季各监测一次。
初生犊牛，应于20日龄时进行第一次监测，100～120日
龄时，进行第二次监测。
奶牛调运必须来自于非疫区，调入后应隔离饲养30天，
经当地动物防疫监督机构检疫合格后，方可解除隔离。
结核防控要点
潜伏期一般为10～45天
结核病的防控要点 结核病
监测 净化 消毒检疫
①应用PPD皮内试验对牛场进行反复监测，每次间隔3个月，及时扑杀阳
性牛，直至全部阴性。
②PPD皮内试验疑似反应者，42天后复检阳性，则按阳性牛处理；若仍
呈疑似间隔42天再复检，仍为可疑者，按阳性牛处理。
凡连续两次以上监测结果均为阴性者，可认为是牛结核病净化群。
从奶牛群中检出并剔出结核病牛后，牛舍、用具
及运动场所等进行紧急消毒。
结核防控要点
11年：6，10，11； 12年： 5， 6。
只能在确定有捕杀补贴的时间进行，对结核而言检测次数与时间间隔都不合理。
12年7月检测的皮试阳性数量明显异常，不符合规律。
13年4月发现副结核感染，5月清除副结核血清学阳性牛后，检测数据正常化。
奶牛结核检疫净化与分析
检测时间 2011年6月 2011年10月 2011年11月 2012年5月 2012年7月 2013年5月
牛栏 阳性率（%）A 3 0 0 3.28 14.75 0
B 0 0 0 0 14.29 0
C 0 5.56 0 0 0 0
D 2.86 0 0 6.67 4 2.8
E 0 4.55 0 0 4 0
F 0 0 0 0 0 0
G 0 0 0 0 0 0
H 0 0 0 0 0 0
I 0 1.75 1.79 2.13 0 1.82
J 0 0 0 6.06 9.62 0
K 1.21 0 0 1.41 7.14 0
L 0 2.99 1.56 0 9.38 3.15
M 0 4.65 0 5.45 6.82 0
N 0 0 0 0 11.63 0
O 0 0 0 0 0 0
P 0 0 0 0 3.8 0
Q 0 0 0 0 8.33 0
R 0 0 0 0 13.64 0
结核检疫净化与分析
结核净化更为复杂。
D、I、K 始终有皮试阳性牛，最后一次共检出5头阳性牛。
18个牛舍2年6次检测捕杀后，15个暂时无阳性。
牛场 净化前 累计淘汰数
A 100 14B 31 4C 45 1D 35 4E 26 2F 20 0G 19 0H 55 0I 50 3J 112 9K 248 14L 97 9
M 65 8N 51 5O 13 0P 121 3Q 13 2R 21 3
0
2
4
6
8
10
12
14
16
A B C D E
F G H I J
K L M N O
P Q R
结核病的防控要点
试剂: 牛型提纯结核菌素
方法： 皮内变态反应试验
常规检疫的试剂和方法 检疫的辅助方法
临床剖检及病原鉴定
奶液PCR
血清抗体ELISA检测
-干扰素试验（OIE可选）
结核防控技术 本病无疫苗
结核病的防控要点结核菌素试验 结核菌素
检测原理：细胞免疫 DTH 皮肤变态反应
制品效期：10 年 （冻干）
外 观：部分消失 潮解
使 用：复溶
注射部位：颈侧中部上1/3处，剪毛10cm，皮内，用卡尺测量皮厚。
剂 量：2000 IU 旧标准 10 000 IUper bovine dose at least 2000 IU (±25%) in cattle. in national eradication campaigns, doses of up to 5000 IU are recommended.
The tuberculin test (the prescribed test for international trade)
The standard method for detection of bovine tuberculosis is the tuberculin test OIE
结核病的防控要点结核菌素试验
LFGSD-10 可调节微量结核连续注射器 0-20 单位注射 台 4800.00（牛型结核分枝杆菌PPD和禽
型结核分枝杆菌PPD）
LFGSD-10¹配套针头
Mlintock®22G×5/16 36支/盒 500.00
英国 BAR KNIGHT,MCLINTOCK LTD
英国 MCLINTOCK 牛结核菌素注射器
器械
22元 5元 5元10支（7#）
结核病的防控要点
结果判定
阳性反应：有明显局部炎性反应，皮厚差 ≧ 4.0 mm。
疑似反应：炎性反应不明显，皮厚差 ≧ 2.0 mm，同时﹤4.0
mm。
阴性反应：无炎性反应，皮厚差﹤ 2.0 mm。
检疫注意事项：注射剂量要准确，并且一定要注射到皮内；量皮要准确，最好注射
前后两次量皮同一人操作。
牛结核检疫操作
结核病的防控要点
比较皮内变态反应：牛结核菌素与禽结核/副结核素平行检测。
标准：皮厚差 2mm
排除非特异性
与IFN-ɣ检测联用：OIE可选方法
适用于早期检测
与抗体检测联用：检感染后期
初次检测， 3 岁以上牛。
• as skin testing sometimes has practical drawbacks. The gamma interferon test is
increasingly being used as a diagnostic blood test for tuberculosis in cattle.
• IgG1 ELISA have proven to be useful as ancillary serial (to enhance specificity) and
parallel (to enhance sensitivity) tests in farmed red deer
辅助检测方法 迟发性过敏反应
凶狠牛、动物园动物，野生动物
牛副结核及其防控技术
• Paratuberculosis (Johne’s disease) is a chronic enteritis of ruminants caused by
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. paratuberculosis)
国内尚未引起普遍关注
International Association for Paratuberculosis
• 多种动物共患疫病
• 潜在的人畜共患病危险
Crohn’s disease
Johne’s disease
Country Herd prevalence overview Specific aim(s) of control activities
Australia
Endemic in South East dairy
and beef (lower prevalence)
farms; rare or absent
elsewhere
National Bovine Johne’s Disease Strategic Plan (initiated 1996): to minimise
contamination of farms/farm products by MAP and to protect non-infected herds
while minimising disruption to trade and the social, economic and trade impact of
BJD at herd, regional and national level (AHA, 2012)
Canada
Infected dairy (9.8–43.1%a)
and beef (7.9%a) herds present in
all provinces (Tiwari et al., 2006;
Scott et al., 2007)
Canadian Johne’s Disease Initiative (initiated 2006): to reduce the prevalence of BJD
(CJDI, 2009)
Canadian Voluntary Johne’s Disease Prevention and Control Programme (initiated
2006): to reduce prevalence, reduce impact on animal health and economics, to
reduce or eliminate MAP in milk, beef cattle and the environment and to provide
certification of herds as low risk for BJD (CVJDPCP, 2006)
Provincial programmes: vary with province
Denmark
Endemic in national dairy herd
(80–86%b); present in beef herd
at a lower prevalence (Nielsen,
2009a,b,c,d)
Operation paratuberculosis (initiated 2006): To provide tools to dairy farmers that
wish to control BJD; to reduce the over-all prevalence of BJD (Nielsen et al., 2007)
Netherlands
Endemic in the national dairy
herd (20–71%b) (Muskens et
al., 2000); no published reports in
small national beef herd
Intensive Paratuberculosis Programme (initiated 1998): to enable low-risk trade of
cattle between herds and to facilitate eradication of paratuberculosis from known
infected herds
Milk Quality Assurance Programme (initiated 2006): to reduce the concentration of
MAP in milk delivered to processing units (Weber and Schaik, 2007)
UK Endemic in national dairy (27.6–
42.5%b) and beef herd
(Anon,2009)
Cattle Health Certification Standards (CHeCS) accreditation schemes (initiated 1998):
to provide a graded system of accreditation which enables herds to maintain or move
towards clear herd tests (CHeCS, 2012)CheCS control schemes: Implement a control
programme to reduce the detrimental effects on herd productivity (CHeCS, 2012)
USA Endemic in national dairy (68%a)
and beef (7.9%a) herd
(USDA-APHIS-VS, 1999; VS, 2008)
Voluntary Bovine Johne’s Disease Control Plan (initiated 2002): To provide national
standards for the control of BJD and to reduce prevalence, impact and risk of
introducing
BJD to non-infected herds (USDA-APHIS-VS, 2010)
慢性、消耗性疾病• Lost Production 产奶降低
• Premature Culling of Animals 早产牛的淘汰
• Reduced Fertility 繁殖能力下降
• Increased Mastitis 乳房炎上升
淘汰牛中10%为副结核感染。
对于美国1000头规模牧场，副结核造成20万美金损失。(Kirk & Adaska 2008）
每头患病牛 11400 元
牧场 存栏数 检测数 感染数（III）/率 感染数（II）/率 感染数（I）/率
A 5000 3606 53/ 1.6% 318/ 9.6% 530/ 16%
B 12000 7373 35/ 0.3% 210/ 0.9% 350/ 3%
建议：副结核牛场防 5 年Herd owners should be advised that paratuberculosis control takes at least 5 yr
1头牛为临床型（III)时，可能有6头处于II型，10头处于I型。
危害概述
体重减轻喷射状稀便
• Infected as a young calf
年轻牛时感染
• Show signs when old (4+) /1–2 years.
成长之后（4岁后） 1–2 显示症状
• Scouring 腹泻
• weight loss 体重减小
• reduced milk 产奶减少
• death死亡 20-50%
牛副结核典型症状
牛场 阳性数（群体总数） I-ELISA阳性数 阳性检出率（%） 总群阳性率（%）
A 3（650） 1 33.3 0.15
B 40（1000） 4 10.0 0.4
C 18（560） 4 22.2 0.71
D 20（730） 2 10.0 0.27
E 20（700） 0 0 0
F 92（619） 15 16.3 2.4
G 20（267） 2 10.0 0.74
H 200（380） 33 16.5 8.6
• Normal Temperature体温正常
• Normal Appetite 胃口正常
2013部分规模化牛场的抽检
1. 临床发病牛无治疗价值，隐性感染牛难以诊断
2. 粪便（奶 尿）是最大的传染源 母乳可感染
3. 国内无疫苗？ （规程有制品名录，但找不到生产许可文号）
4. 国际疫苗 感染严重群使用 副作用明显
免疫1个月以下犊牛可有效的减少发病率
不能防止排菌或群中新病例的感染
5. 国内诊断制剂
副结核菌素 期望与结核菌素等效
补体结合抗原
6. OIE无推荐检测方法
防控需明确的基本事项
副结核检测方法
• The diagnosis of paratuberculosis is divided into two parts: the diagnosis of clinicaldisease and the detection of subclinical infection. The latter is essential for control of thedisease at the farm, national or international level
临床型检测 验证
显微镜
培养 粪便 可发展为混合样品检测（敏感性100%)
DAN探针 PCR
亚床型检测
血清学 （血清 抗体）
培养 粪便 耗时较长（特异性
100%）• ELISA 的敏感性是血清学中最高的， 30-40%，（临床型 85%）
• 在2、3、 4年牛中的实际敏感性是1.2%、8.9%、11.6
• 老龄牛20-30%
• 各年龄段平均15%
OIE Merck
防控要点
• 已知没有满意的治疗手段。控制目标在于限制青年牛暴露于微生物之下。
• 犊牛应产于无粪尿的地方，出生后应立即隔离。
• 推荐利用代乳粉取代废弃奶，除非奶经过了巴氏消毒。
• 对成年牛的例行检测程序有助于集中控制疾病，经济上可行的时候，那些强阳
性动物应立即捕杀。每年至少重复检测一次应能使感染率维持在5%以下。
• 由于可见子宫内感染，更积极的控制策略，犊牛离栏后有疾病症兆就应该淘汰
• 无疫后补充牛，应先进行检测。
• 较基本的程序是——最小化粪便污染也有所帮助，例如:提高食物、水槽的高度
• 应建议农场主副结核的防控应至少采取5年。
防控要点
第1步：12小时内移走犊牛
Image courtesy Dairy Australia
管理措施上的三步 通用
第2步：阻隔污水
Image courtesy Dairy Australia
第3步：与成年牛分离12个月
Image courtesy Dairy Australia
控制策略
荷兰牧场实施的 BMQAP Bulk Milk Quality Assurance ProgrammeIPP Intensive Paratuberculosis Programme
BMQAP 目标：减少细菌浓度
IPP 目标：降低贸易风险
大缸奶质量保证程序
密集副结核程序
IPP
BMQAP
M.F. Weber H. Groenendaal
目标：降低贸易风险
目标：减少细菌浓度
布鲁氏菌病及其防控
Multiple species diseases
Brucellosis (Brucella abortus)Brucellosis (Brucella melitensis)Brucellosis (Brucella suis)
多物种人畜共患病
布病可以根除，但代价巨大
国家 所用时间 年成本
英 国 20年 1985年 4亿美元
加拿大 14年 1983年 1亿美元
美 国 20 多年 2003年 7亿美元
中国有消灭布病的潜力„„
其他根除布病的国家：澳大利亚、新西兰、海峡群岛、挪威、瑞
典、芬兰、丹麦、瑞士、捷克斯洛伐克、罗马尼亚、英国、荷兰、日
本、奥地利、塞普路斯和保加利亚
动物布鲁氏菌病典型症状
布鲁氏菌对理化的抵抗性
Foster et al. . 1953年
含1.5×108 /ml布鲁氏菌的培养液可被61.5℃ 23 min或72℃12-14 S的
条件下所灭活。
Kronenwett et al. 1954年
HTST（62~65℃，保持30 min）与LTLT（75~90℃，保温15~16 S ）
这两种巴氏消毒法对布鲁氏菌具有完全杀灭作用。
1. 对消毒剂敏感、常用消毒药均有作用。
－－新洁尔灭、生石灰
2. 对温度极为敏感，60℃以上即可杀死本菌。
流产风暴布病概况——典型传播方式
12097
197211.77
0
5000
10000
15000
20000
25000
1950 1960 1970 1980 1990 2000
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
发病数 发病率
报告发病数（例）
报告发病率（1/
10
万）
1950～2007年间全国布病发病情况
布病概况——疫情形势
年 份 年累计发生次数 发病头数2004 138 3 4122005 167 6 0922006 174 3 9852007 75 1 2952008 98 3 4332009 197 49402010 522 75002011 5677 1163982012 5528 827712013 338 6572总计 12914 218181
0
20000
40000
60000
80000
100000
120000
140000
2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
2004-2012全国布病发病情况
Herd-牧群
Test-监测/检测
阴性动物-Negative test Positive test-阳性动物
Retest 30-90 days
Retest 30-90 days Latency 潜伏期
Retest 30-90 days30-90天后再检测
规模化牛场布病控制程序
Segregate/slaughter
隔离/屠宰
疫苗免疫免疫38月龄犊牛
保护率在70%－90%
潜伏期. 为7～60天，平均两周。少数1年以上。
布鲁氏菌病检疫净化与分析
检疫时间
2011.6 2011.7 2011.8 2011.9 2011.10 2011.11 2011.12 2012.5 2012.6 2012.7 2012.8 2012.10 2012.11 2013.5
牛场 感染率（%）
A 20 8.75 4.17 8.22 7.58 1.61 6.56 0 0 0 0 0 0 0B 6.45 3.57 7.41 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0C 20 0 16.13 21.74 11.11 0 0 7.69 3.23 6.45 3.57 0 0 0D 14.29 17.24 7.69 0 0 0 0 3.33 0 0 0 0 0 0E 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0F 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0G 15.79 0 0 9.52 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0H 9.09 12.77 6.98 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0I 22 5 0 1.79 0 0 1.82 0 0 0 0 2.33 0 0J 3.57 2.15 2.15 0 0 0 4.65 1.52 1.67 0 0 0 0 0K 8.87 4.83 3.05 1.09 0.55 0 0 0.7 0.72 0 0.83 1 1.08 0.74L 14.43 4.82 10.39 2.94 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0M 13.85 18.97 5.45 3.7 2.33 0 0 0 0 0 0 0 0 0N 19.61 4.88 5.13 0 0 5 2.7 4.55 0 0 5.41 2.94 0 0O 0 0 0 0 0 0 30.77 0 6.67 11.11 0 0 0 0P 9.92 0 0.97 1.05 0 0 2.17 0 0 3.8 0 0 1.72 0.52Q 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0R 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
小区布病净化工作，至2013年5月，可确认16栏（共18栏）暂时无疫暂时无疫。
前期采用高频率琥红平板初筛，试管凝集试验确诊的方法，12年11月之后，采用ELISA确认
净化状态，并降低检测频率。
小区模式
布鲁氏菌病检疫净化与分析
0
5
10
15
20
25
30
35
A B C D
E F G H
I J K L
M N O P
Q R
牛场 净化前 净化后 总淘汰率
A 100头 38头 62%
B 31头 18头 41.94%
C 45头 19头 57.78%
D 35头 18头 48.57%
E 26头 18头 30.77%
F 20头 19头 5%
G 19头 19头 0%
H 55头 52头 0%
I 50头 40头 20%
J 112头 45头 59.82%
K 248头 92头 62.9%
L 97头 50头 48.45%
M 65头 40头 38.46%
N 51头 33头 35.29%
O 13头 8头 38.46%
P 121头 57头 52.89%
Q 13头 23头 －－R 21头 18头 14.29%布病可以净化，但损失较大。
A、B、G、M在3-6次检测后实现了净化。
E、F、Q、R从未发生过布病，长期监测也未见阳性。
C、J、N、O有较大波动，与引牛检疫不严格等因素相关。
D与I分别净化期间偶尔出现1-2例阳性，处理后即消失。
K与P始终有血清学阳性牛，可能为潜伏期较长导致，需要持续监测。
……
（四）布鲁氏菌病：在疫病流行区和受威胁区，对易感家畜进行免
疫，在春季或秋季进行一次免疫，奶牛和种公牛不得免疫。
国家奶牛布病免疫政策
2010 -2013年《国家动物疫病强制免疫计划》不包括布病
（一）布鲁氏菌病
一类地区是指北京、天津、河北、内蒙古、山西、黑龙江、吉林、辽宁、山
东、河南、陕西、新疆、宁夏、青海、甘肃等15个省份和新疆生产建设兵团。以县
为单位, 连续3年对牛羊实行全面免疫。牛羊种公畜禁止免疫。奶畜原则上不免疫，
个体病原阳性率超过2％的县，由县级兽医主管部门提出申请，报省级兽医主管部
门批准后实施免疫。免疫前监测淘汰病原阳性畜。 …… …… …… ……
免疫在消灭布病中的重要性——加拿大
• 50年代，发病率为9%，开始犊牛普遍疫苗注射。
• 到60年代，发病率降低到4%，免疫结合捕杀。
• 到1966年，发病率降到0.2%。
• 免费免疫停止，隐性或在潜伏期的布病暴露。
• 到1975年，布病感染率反弹：
• 到1985年，几乎不再发现布病。
• 加拿大宣布本国消灭布病。
• 1985年至2009年间，共发生5起散发布病。
Center for Food Security and Public Health Iowa State University - 2004
Year 20014.7 million calves vaccinated 9.9 million cattle tested under the Market Cattle Identification program
Center for Food Security and Public Health Iowa State University - 2004
• Free
• A No more than 0.25%
• B more than 1.5%
国内生产
牛种A19株疫苗（A19）： 与S19在赤藓醇代谢基因有差异
猪种S2株疫苗（S2）： 安全性高，保护期短，需多次免疫
羊种M5株疫苗（M5）： 毒力强，保护力强，安全性低
国外用于牛 —S19株疫苗（S19）
RB51株疫苗（RB51）
当前可选布病疫苗
诗华公司许可金宇保灵生产和销售的REV1和B19两种疫苗。预计2014年5月~7月将投
产。
早期的 S19 疫苗，可引起 1%~2.5%的怀孕母牛流产，并能够传染人。由于其安全性被美国农业部（USDA) 禁止使用。
一代
1956 年，USDA 开始使用安全性更高的 S19 疫苗株，并将其改名为US19 或S19。特点：eryABCD 基因中有702 bp 的缺失。
二代
我国多株来源 S19 菌株 ( 即《中国兽药典》中的 A19 株 ) ，均未检测到 ery 基因的缺失。实践中，S19 疫苗可以为牛提供较好的保护力。
疫苗 免疫月龄 免疫方法 免疫剂量 保护期 注意事项
A1938月龄1820月龄
皮下注射600亿800亿3亿10亿
6年 ？
S2 38月龄 口服？ 500亿 2年？ ？
M5 38月龄 皮下注射 250亿 3年成年奶牛一般不
接种
摘自：中华人民共和国兽药典（2010年版）
现有疫苗与免疫程序
疫苗几点问题
对人的致病性
灭活苗免疫力 无
抗体与保护力关系 无
对血清学诊断的影响
免疫抗体
感染抗体
大多数干预血清学检验（除了 RB51）
——所检测的免疫抗体与感染抗体都是针对LPS的抗体
布鲁氏菌弱毒疫苗小结
国内外80余年的疫苗研制现状：
• 没有非常理想的布鲁氏菌疫苗
• 使用中的疫苗都有残余的毒力
——包括对人在内的致病性
——对于接种物种以外的动物有致病性
• 没有或极少的交叉保护能力
配合免疫的布病血清学检测程序
OIE 推荐程序：
筛选检测：间接ELISA（I-ELISA）（血清 全血 奶液）
荧光偏振试验（FPA）
阳性确诊：竞争ELISA（C-ELISA）
配合疫苗免疫+检疫淘汰
加拿大、澳大利亚、新西兰
传统程序：
筛选检测：琥红平板凝集试验（RBPT）全乳环状试验（MRT）
阳性确诊：试管凝集试验（SAT）补体结合试验（CFT）
配合疫苗免疫+检疫淘汰
智利XII地区
已净化布病国家使用的检测技术：
布病检测方法
Disease name Prescribed tests Alternative tests
Bovine brucellosis
BBATCFELISAFPA
–
Caprine and ovine brucellosis
(excluding Brucella ovis)
BBATCFELISAFPA
Brucellin test
Ovine epididymitis (Brucella ovis)CF ELISA
Porcine brucellosis
BBATCFELISAFPA
–
RBT SAT Native hapten tests Milk tests
Milk I-ELISA Milk ring test Brucellin Interferon gamma test
No single serological test is appropriate in all epidemiological situations
布病检测方法特性比较
Test
检测方法
Sensitivity
敏感性
Specificity
特异性
Perf. Index
表现指数(敏+特)
RBT 81.2 86.2 167.4
BPAT 95.4 97.7 193.1
CFT 89.0 83.5 172.5
IELISA-1 98.6 99.0 197.6
IELISA-2 99.9 99.0 198.9
IELISA-M 100 98.7 198.7
CELISA-1 95.4 100 195.4
CELISA-2 99.5 99.0 198.5
FPA-1 97.5 98.9 196.4
FPA-2 99.9 99.0 198.9
布病检测方法特性比较
It should be stressed that the serum agglutination test (SAT)is generally regarded as being unsatisfactory for thepurposes of international trade.
While not recognised as a prescribed or alternative test
No single serological test is appropriate in all epidemiological situations
布鲁氏菌病(布病)的防控要点
我国目前采用的方法：
筛选检测：琥红平板凝集试验（RBPT）
全乳环状试验（MRT）
阳性复核：试管凝集试验（SAT）
补体结合试验（CFT）
优点： 操作简便、设备简单
试剂成本低廉
不足： 判定主观性强
批量检测工作量大
算总净化成本不一定经济
布病监测、检疫方法和技术
agglutination test usually precedes an abortion or a normal parturition but may be delayed in ~15% of cows —— Merck
虎红凝集试验
加样 最后混合 设阴性对照
注意事项：
1) 试剂、血清温度 2) 器材选择 色泽一致
3) 加样顺序 4) 对照设置 阴 阳 5) 判定时间 6)光线问题
Score -
Score + / - Score + Score + + Score +++ Score ++++
the pH should be 3.65 ± 0.05
试管凝集试验
— + ++ +++ ++++
配制比浊管
注意事项：
1) 试剂、血清温度 2) 器材选择 色泽一致
3) 加样顺序 4) 对照设置 阴 阳 5) 判定时间 6)光线问题
灯箱与凝集反应观察
布病
OIE 推荐方法
筛选检测：间接ELISA（I-ELISA）
荧光偏振试验（FPA）
阳性复核：竞争ELISA（C-ELISA）
不足：不适合少量样品检测，试剂贵、试验条件要求高
优点： 准确性高，适合大批量检测，节省人力
结果判定较为客观，重复性好
可以鉴别疫苗免疫和自然感染
布病监测、检疫方法和技术
• 区分交叉抗原造成的假阳性
• 区分免疫抗体与感染抗体
２、６、８、９实际为阴性
C-ELISA与鉴别诊断
C-ELISA ：竞争抗体与抗原亲和
力高于疫苗免疫抗体，但低于感
染抗体。
布病
奶样间接ELISA（M-iELISA）
竞争ELISA（cELISA）
适应范围：
产奶牛
个体奶牛
奶牛群体(奶罐奶样)
奶样PCR（M-PCR）
奶样检测方法
布病净化奶牛场
产奶牛群
规模化奶牛场的布病监测——混合奶样、血清检测
可监测奶罐混合奶样
感染率不低于0.5%时可检出
如阳性，转入整群检测流程
特点和优势：
基于混合样品的群体监测
1.适合经济、有效的于判断布病状态
2.取样方便，易于多次检测
3.减少奶牛应激
4.降低监测费用
混合血清样品检测
有效减少整群检测成本。
口蹄疫及其防控技术
无口蹄疫国家与地区
List of FMD free Members 82According to RESOLUTION No. 14 (80 th General Session May 2012)
FMD free where vaccination is not practised 67FMD free where vaccination is practised 1 Uruguay
FMD free zone where vaccination is not practised 10FMD free zone where vaccination is practised 4
（一）杜绝病原传入牛场，减少病原体在牛群中的传播
（二）切实做好疫苗免疫接种
（三）了解疫情，实时监测牛群
口蹄疫防控要点免疫保护与捕杀结合
口蹄疫A型灭活疫苗（牛源 AF/72株）口蹄疫病毒O型、亚洲1型二价灭活疫苗（牛源O型强毒OHM/02株和亚洲1型强毒Asia1 KZ/03株）口蹄疫病毒O型、亚洲1型二价灭活疫苗（牛源O型强毒ONXC/92株和牛源亚洲1型强毒AKT/03株）口蹄疫病毒O型、亚洲1型二价灭活疫苗（牛源OS/99株和亚洲1型LC/96株）口蹄疫病毒O型、亚洲1型二价灭活疫苗（口蹄疫O型JMS株和亚洲1型AKT/03株）口蹄疫病毒O型、亚洲1型二价灭活疫苗（OJMS株+JSL株；生物反应器悬浮培养BHK21细胞获得）口蹄疫亚洲1型灭活疫苗（牛源强毒AKT/03株）牛口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗（牛源OA/58株和牛源AF/72株）牛口蹄疫O型灭活疫苗（JMS株）牛口蹄疫灭活疫苗（O型，NMXW-99、NMZG-99株）牛口蹄疫O型灭活疫苗（OA/58株）牛口蹄疫O型灭活疫苗（OJMS株）牛口蹄疫O型灭活疫苗（OS/99株）牛口蹄疫灭活疫苗（亚洲1型，LC/96株）猪口蹄疫灭活疫苗（O型，II；）（猪O型毒株OZK/93株或OR/80株）猪口蹄疫O型灭活疫苗（猪源毒株）猪口蹄疫O型灭活疫苗（猪O型强毒OZK/93株）猪口蹄疫O型灭活疫苗（OZK/93株+OR/80株或OS/99株）猪、牛口蹄疫O型灭活疫苗（牛O型口蹄疫病毒OS/99）猪、牛、羊口蹄疫O型灭活疫苗（可感染猪牛羊的O型强毒ONXC/92株）猪口蹄疫O型合成肽疫苗（病毒主要抗原位点多肽连接人工合成的可辅助激活T细胞的短肽）猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2570+7309）猪口蹄疫O型基因工程疫苗（大肠杆菌表达的免疫活性肽）新3价疫苗（O/MYA98/BY/2010株+ JSL株+Re-A/WH/09株）
近年口蹄疫形势
年份发病动物
数量捕杀头数
发病省份数
主要发病地区
2009 978 5 424 11北部（新疆、内蒙古）、
中南部（湖南、湖北、贵州、广西）、东部（上海）
2010 3 917 11 347 10北部（新疆、甘肃、宁夏、北京、西藏、
青海）、中南部（江西、贵州、广东）
2011 823 7 753 4北部（新疆、西藏、宁夏）、
中南部（贵州）
2012 365 3 557 5北部（辽宁、西藏、宁夏）、
中部（湖北）、东部（江苏）
2013 1433 11192 8北部（青海、新疆、西藏、宁夏）
东部（江苏）中南部（广东、云南、台湾）
我国2009～2013年动物口蹄疫发病情况
2013口蹄疫形势
时间开始时间报告日期 上报OIE时间事件解除时间类型 感染动物 发生地点
18/02/2013 01/03/2013 01/03/2013 27/03/2013 A 猪 广东茂名
15/03/2013 18/03/2013 18/03/2013 07/05/2013 A 牛猪 青海西宁城北区
08/04/2013 16/04/2013 16/04/2013 A 牛绵羊山羊 新疆和田
08/04/2013 15/05/2013 15/05/2013 A 牛 新疆乌鲁木齐
08/04/2013 24/09/2013 24/09/2013 A 牛 新疆建设兵团
12/04/2013 22/04/2013 22/04/2013 A 牛绵羊山羊 西藏日喀则
12/04/2013 22/04/2013 22/04/2013 02/07/2013 A 牛 西藏拉萨
12/04/2013 22/04/2013 22/04/2013 02/07/2013 A 牛山羊猪 西藏山南
12/04/2013 22/04/2013 22/04/2013 02/07/2013 A 牛 西藏拉萨
09/06/2013 10/07/2013 11/07/2013 A 牛猪 西藏林芝
12/04/2013 10/09/2013 11/09/2013 A 牛 西藏那曲县
09/06/2013 09/06/2013 09/06/2013 A 牛猪 云南迪庆香格里拉
03/06/2013 10/06/2013 10/06/2013 A 牛 俄罗斯（与格鲁吉亚的交界处）
03/06/2013 10/06/2013 10/06/2013 A 牛猪 俄罗斯（与格鲁吉亚的交界处）
08/03/2013 18/03/2013 18/03/2013 29/05/2013 A 牛猪 俄罗斯边界，与外蒙、内蒙交界处（东北）
04/07/2013 10/07/2013 10/07/2013 A 牛绵羊山羊 蒙古国（与哈萨克斯坦交界处）
2013年A型口蹄疫爆发统计
时间开始时间报告日期 上报OIE时间事件解除时间类型 感染动物 发生地点19/02/2012 02/05/2013 03/05/2013 02/05/2013 O 牛羊 宁夏固原
19/02/2012 07/01/2013 08/01/2013 02/05/2013 O 猪 四川广元
19/02/2012 01/03/2013 01/03/2013 02/05/2013 O 牛 西藏拉萨
20/05/2013 13/06/2013 13/06/2013 O 牛 西藏日喀则
20/05/2013 22/07/2013 22/07/2013 O 牛 西藏日喀则
20/05/2013 13/08/2013 14/08/2013 O 牛、绵羊、山羊 西藏昌都
20/05/2013 20/05/2013 20/05/2013 O 猪 江苏常州
17/05/2013 23/05/2013 23/05/2013 12/07/2013 O 猪 台湾宝中
17/05/2013 17/06/2013 17/06/2013 12/07/2013 O 猪 台湾Wuri District, T'AI-CHUNG SHIH
16/05/2013 30/05/2013 30/05/2013 04/06/2013 O 猪 台湾Jinhu Township, KINMEN COUNTY
2013年O型口蹄疫爆发统计
2013Ａ型口蹄疫
核酸检测与进化分析，表明口蹄疫2013最新A型毒株（A/GDMM/CHA/2013）：
与中国60年代的老Ａ型毒株无进化关系；与我国09年新引入的A型毒株（A/HuBWH/CHA/2009）
无进化关系；与Genbank中最相似的毒株也不能聚类到一个分枝，其衍化历程尚不明确。
140-160aa，200-213aa是口蹄疫病毒两个重要的能够激发保护性中和抗体的抗原性位点，200-
213aa位点无变化，这也许可以解释具有高效价Re-A/WH/09株疫苗抗体的牛场为何可以对抗本次流
行，位于140-160 aa位点上的病毒受体结合位点RGD未发现生变异，那么也可能其他毒株的中和抗体
对A/GDMM/CHA/2013也具有一定中和能力。
口蹄疫病毒七个血清型间存在较弱或无交叉免疫现象。
口蹄疫的防控要点
口蹄疫A型灭活疫苗
口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗
口蹄疫O型灭活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）
口蹄疫O型、A型、亚洲Ⅰ型三价灭活疫苗 146S
牛口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗
猪牛羊口蹄疫O型灭活疫苗
牛口蹄疫O型灭活疫苗
猪口蹄疫O型灭活疫苗
口蹄疫的免疫预防
常规免疫每年可接种2～4次。建议：每间隔4个月免疫一次，一年3次。
犊牛90日龄初免，剂量为成年牛的一半，间隔1个月进行一次强化免疫，以后
每隔4个月免疫一次。
对调出奶牛场的种用或非屠宰奶牛，在调运前2周进行一次强化免疫。
发生疫情时，要对疫区、受威胁区域的全部易感动物进行一次强化免疫即紧急
免疫，最近1个月内已免疫的家畜可以不强化免疫。
注意事项：第一免疫接种一个月后，要进行一次加强免疫。
两种疫苗同时接种如有副作用，可间隔两周。
疫苗接种率应达到100%，免疫抗体护率不低于70%。
疫苗一定要冷藏保存（4ºC～15ºC）。
口蹄疫的防控要点口蹄疫免疫程序
口蹄疫的免疫预防
奶牛场O型和A型口蹄疫的免疫抗体水
平高于128的比例，即免疫合格率均大于
90%，远高于国家规定的群体免疫抗体合格
率70%的标准，牛群整体免疫抗体水平的提
高有益于群防群控口蹄疫。
3价疫苗（O/MYA98/BY/2010株+ JSL株
+Re-A/WH/09株）
2价苗只能达到3个月，如3价苗能达
到6个月的有效保护期，则可实现一年2
针，一针防3型口蹄疫效果。
口蹄疫
免疫接种后21天，进行免疫效果监测，存栏家畜免疫抗体
合格率≥70%判定为合格。
亚洲I型口蹄疫： 液相阻断ELISA的抗体效价≥26
O型口蹄疫： 液相阻断ELISA的抗体效价≥26
A型口蹄疫： 液相阻断ELISA的抗体效价≥26
口蹄疫的防控要点口蹄疫免疫抗体监测
感染抗体检测
——口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒（中国农业科学院兰州兽医研究所）
——口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA试剂盒（北京世纪元亨动物防疫技术有限公司）
病毒核酸检测——可定型
——RT-PCR方法
非结构蛋白抗体检测
口蹄疫感染监测
口蹄疫的防控要点感染抗体检测
串联表位非结构蛋白抗体检测
RT-PCR检测
采集O/P液
抗体阳性牛
口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA 抗体检测试剂盒
阴性牛
间隔15天，采样复检
口蹄疫感染和带毒监测流程
口蹄疫阳性牛
口蹄疫口蹄疫的防控要点持续性感染？散发口蹄疫？
附：牛母源抗体与疾病防控的关系
抗体介导抗感染免疫的疾病 例 FMDV BVDV BRSV 感染
A. 临产前2-3个月免疫——初乳
B. 母源抗体持续相当长的时间
C. 影响免疫程序
提供犊牛的抗感染免疫
牛病毒性腹泻/黏膜病及其防控
• BVD是影响收入最大的牛疫病之一 $10–$88 /头
高传染性，能够感染各个年龄阶段牛只，任何规模的牛群
• BVD致死率低，易被忽视
• 经济危害
奶产量和乳品质降低 繁殖周期变差
增加流产和死胎 呼吸系统疾病频发
免疫力下降 饲养成本和总兽药费用增加
牛病毒性腹泻/黏膜病概述
我们接触到的牛场70%以上都是BVDV污染场
中国的 BVDV 2 型 外来病
BVDV 的传播途径
病毒类生物制品：疫苗污染
BVDV感染的免疫反应
总病毒数
攻毒
感染后时间（天）
病毒血症
血清学
鼻散毒
平均抗体水平
非胎牛一过性感染，暂时的免疫抑制
* * * * * * * * * * * * *
健康牛 持续感染牛
后代都是持续感染牛持续感染犊牛
怀孕期40-120天
每天排出1千到1万个病毒颗粒
BVDV 的传播方式 PI牛对整群的影响
检测、防止PI牛入群
检测、移走感染群中的PI牛
牛病毒性腹泻/黏膜病的防控要点 BVD/MD
防控要点：监测牛群
检出持续性感染(PI)牛，及时淘汰
RT-PCR检测
牛病毒性腹泻/黏膜病阳性牛群抗体检测(ELISA)
PI牛
方法和过程：
非PI牛 抗原捕捉ELISA 法
阴性
或
注意事项：
1.抗体检测仅能确定阳性牛群
2.只能通过个体抗原或病原核酸检测，才能确定PI牛
检测样品：血清奶样
检测样品：血清、耳组织奶样、分泌物
牛病毒性腹泻/黏膜病的防控要点
牛病毒性腹泻净化流程 执行BVDV清除计划
1. 牛群状态评估 抗体
ELISA方法检测奶罐中的牛奶，证实是否含有BVDV抗体。
可10天后重新取样检测确认。
2. 持续感染牛（PI牛）的发现与清除 （病原：蛋白核酸）
所有牛BVDV检测（后备牛优先）。 PCR ELISA
持续感染牛（PI牛）去除后，再对混合奶样进行检测
3. 筛查和监测
对新生犊牛每年进行病毒检测
对抗体进行监测 大缸奶
4. 预防感染提高免疫水平
疫苗接种以使牛群具有一定水平的免疫力，应对感染风险。
奶牛场 阳性血清数(份) /样品数(份) 血清阳性率/%
黑A 56/195 28.7
黑B 58/260 22.3
黑C 41/164 25.0
黑D 5/25 20.0
黑E 6/25 24.0
黑F 0/10 0
黑G 0/21 0
黑H 28/87 32.2
黑I 0/10 0
黑J 0/13 0
黑K 32/170 18.8
黑L 8/32 25.0
黑M 18/56 32.1
黑N 73/150 48.7
合计 325/1218 26.7
奶牛场 样品数 血清阳性率/% 核酸检测结果
黑A 195 28.7 阳性，BVDV I型
黑B 260 22.3 阳性，BVDV I型
黑C 124 25.8 阳性，BVDV I型
黑D 25 20.0 阴性
黑E 25 24.0 阴性
黑F 10 0 阴性
黑G 21 0 阴性
黑H 87 32.2 阳性，BVDV I型
黑I 10 0 阴性
黑J 13 0 阴性
黑K 170 18.8 阳性，BVDV I型
黑L 32 25.0 阴性
黑M 56 32.1 阳性，BVDV I型
黑N 150 48.7 阳性，BVDV I型
牛病毒性腹泻/黏膜病净化实践
1. 血清学抽检确定阳性场2. 混合样品RT-PCR或者病毒蛋白
ELISA确定PI个体3. 淘汰与净化
大奶缸检测抗体水平与 BVD 状态评估
S/P > 1.0 急性或最近爆发BVDV
S/P > 0.75 最近接触BVDV
S/P > 0.5 过去感染过BVDV
S/P > 0.25 可能暴露
S/P < 0.25 阴性
确诊BVDV 抗原 ？核酸？抗体？• 抗原、核酸是整个病毒的一部分
• 抗体是机体对接触病毒后免疫系统所生产应对抗原/疾病的
PI牛
混合奶样PCR与混合血清ELISA
用来发现持续感染动物
非常敏感和特异性高
耳组织可用于检测
– 耳组织容易获得 不受母源干扰 敏感性100% 特异性96%
– 血清 有时受到抗体干扰
抗原捕获ELISA
阳性者 两周后再检测
牛病毒性腹泻抗原快速检测卡
阳性者 两周后再检测
• 用于临床或现场
• 新型快速检测PI牛的BVDV，15分钟出结果
• 任何年龄、任何品种和任何泌乳阶段的牛
RT-PCR RT-LAMP检测BVDV
阳性者 两周后再检测
梯状DNA 沉淀 荧光
黑龙江20份血清检测1-3：20份血清 7份一混合 4：阴性对照
某农场30份血清检测1-6：每5份一混合血清7：阴性对照
黑龙江省某农场60份血清检测1-9：混合血清10：阴性对照
某农场血清检测1-3：混合血清4：阴性对照
传染性鼻气管炎/传染性脓疱性外阴阴道炎及其防控
牛疱疹病毒• Bovine Herpesvirus Type 1 牛疱疹病毒1型
– BHV 1.1 牛疱疹病毒1.1型
• Respiratory Form 呼吸型
– Classical Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR)典型的牛鼻气管炎
– BHV 1.2 牛疱疹病毒1.2型
• Genital Form 生殖道型
– Infectious Pustular Vulvovaginitis (IPV)传染性疱疹外阴阴道炎
– Infectious Balano Posthitis (IBP)传染性包皮炎
– BHV 5 牛疱疹病毒5型
• Encephalitis 脑炎
传染性鼻气管炎临床症状
呼吸道型上呼吸道充血 发热 严重时导致脓性鼻分泌物 多涎 结膜炎可导致支气管肺炎
生殖道型在性传播症状出现后3-4天 发热 萎靡 厌食水肿和充血性阴道炎/阴茎炎进而发展为溃疡和坏死性斑 最终形成继发性细菌感染自然流产或孕4月后流产
传播方式• BHV 1.1 呼吸型1.1
– 呼吸排出物传播
• BHV 1.2 生殖型1.2
– 性传播/本交
• 两者主要感染灶，病毒通过神经组织潜伏在中枢神经形成持久
携带者而传播
– 病毒复发，然后在应激条件下在正常牛群中重新传播
– 关键在于牛群中病毒的持续传播
检测技术• 抗体酶联反应
– 急性病例以及潜伏感染中测定IBR抗体
– 特殊酶联反应能区别自然感染和疫苗免疫
– 对个体牛或混合奶样有用的牛奶样ELISA
大缸奶样可用于测定发病率2%的潜伏期感染
• 血清中和
– 需要双份的急性期和康复期样品
– 测定病毒的免疫荧光
• PCR 测定冻精和血清中的病毒– Virus isolation from semen (a prescr ibed test for international trade)
– Real-time polymerase chain reaction (a prescribed test for international trade)
净化路线• 大缸抗体ELISA法
– 筛选牛群中IBR抗体
– 当发病率在2%以下时可采用1:50的混合样法
– 抗体ELISA法
– 测定潜伏期和急性感染期
– 淘汰
• 若可使用鉴别性疫苗
– 采用合适ELISA区分野毒和疫苗免疫的抗体
– 动物进场时筛选
– 30天再次筛选
附：几种参考资料
奶牛疫病防控技术培训
