polimorfismo no gene tcf7l2 associado a diabetes mellitus 2
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Association between the TCF7L2 Association between the TCF7L2 rs12255372 (G/T) gene polymorphism rs12255372 (G/T) gene polymorphism
and type 2 diabetes mellitus in a and type 2 diabetes mellitus in a Cameroonian population: a pilot study Cameroonian population: a pilot study
Alunas: Bárbara Nazly, Crisvânia Santos, Hemilly RayanneProfessores: Tereza Cartaxo, Adriana Vieira, Nara Diniz, Geyner Alves
Disciplina: Biologia Celular e Molecular
Universidade de Pernambuco – UPEInstituto de Ciências Biológicas – ICB
Mestrado em Biologia Celular e Molecular Aplicada
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INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO
Diabetes mellitus 2
Fatores genéticosFatores ambientais
Estilo de vida
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INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO
Teia de interações para manifestação do diabetes mellitus tipo 2
Fonte: Capra 2006
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INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO
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INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO
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INTRODUÇÃOINTRODUÇÃO
• Diversos são os efeitos metabólicos do GLP-1 no organismo humano:
Ação de saciedade (influenciando no peso corporal); Aumenta a secreção de insulina (glicose dependente); Estimula a expressão do gene da insulina e potencializa todos os passos da
sua biossíntese; Aumenta a captação de glicose nos tecidos periféricos; Possui efeito proliferativo e anti-apoptótico sobre as células beta-
pancreáticas.
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SINTOMAS DO DIABETES MELLITUS TIPO 2SINTOMAS DO DIABETES MELLITUS TIPO 2
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DIAGNÓSTICODIAGNÓSTICO
Resumidamente, os testes laboratoriais mais comumente utilizados para suspeita de diabetes ou regulação glicêmica alterada são: glicemia de jejum, teste de tolerância à glicose (TTG-75 g) e glicemia casual.
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TRATAMENTO E PREVENÇÃOTRATAMENTO E PREVENÇÃO
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PATOGÊNESE DO PATOGÊNESE DO
DIABETES MELLITUS TIPO 2DIABETES MELLITUS TIPO 2
• Os polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) em determinados segmentos do DNA são considerados fatores de predisposição (SLADEK et al., 2007);
• A identificação de genes suscetíveis para o diabetes mellitus tipo 2 tem sido investigada comparando a frequência de determinados alelos entre populações sadias e doentes (Farbstein et al., 2010);
• Recentes avanços revelaram a participação de polimorfismo em novos genes( TCF7L2, SLC30A8, IDE-KIF11- HHEX, CDKN2A-CDKN2B, IGF2BPL, FTO) (Taylor et al., 2007);
• Dois polimorfismo (rs7903146 e rs12255372) localizados no TCF7L2 estão relacionados com a disfunção das células beta-pancreáticas.
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PATOGÊNESE DO PATOGÊNESE DO
DIABETES MELLITUS TIPO 2DIABETES MELLITUS TIPO 2
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PATOGÊNESE DO PATOGÊNESE DO
DIABETE MELLITUS TIPO 2DIABETE MELLITUS TIPO 2
TCF7L2
O produto desse gene é o fator de transcrição 4 (TCF4) de células T humanas
Que atua na cascata de sinalização Wnt
Estas proteínas estão relacionadas com a homeostase da glicose
É necessário para sobrevivência e proliferação da célula beta-pancreática.
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PATOGÊNESE DO DIABETE MELLITUS TIPO 2PATOGÊNESE DO DIABETE MELLITUS TIPO 2
TCF7L2
Codifica um componente do fator de transcrição do complexo beta-catenina-fator de transcrição 7-like 2
Wnt
A b-catenina é rapidamente fosforilada pela GSK3B e degradada .
b-catenina e se ligam a receptores nucleares TCF7L2
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JUSTIFICATIVAJUSTIFICATIVA
•A maioria dos estudos demonstraram uma forte associação entre o polimorfismo rs7903146 (C/T) do TCF7L2 com T2DM. Ao contrário nenhuma associação entre variantes rs12255372 (G/T) e T2DM tem sido encontrada em Chineses, Árabes e Sul-africanos.
•A relação entre as variantes do gene TCF7L2 e T2DM nunca tem sido estudada nas populações centrais africanas, onde T2DM é muito prevalente, com altas taxas de morbidade e mortalidade.
OBJETIVO OBJETIVO
•Investigação da associação entre o polimorfismo rs12255372 (G/T) e T2DM em uma população Camaronesa.
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MATERIAIS E MÉTODOSMATERIAIS E MÉTODOS
• População do estudo:
o 60 pacientes com DM2 / 60 controles não diabéticos;o Etnia camaronesa e idade superior a 40 anos;o Coleta de dados:
PesoCircunferência da cintura e do quadril
Índice de massa corpórea (IMC)Relação cintura-quadril
Pressão sanguínea
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MATERIAIS E MÉTODOSMATERIAIS E MÉTODOS
• Ensaios bioquímicos e genotipagem molecular:
Bioquímicos
Moleculares
Glicose¹
Triglicerídeo²
Colesterol total³
HDL³
LDL4
Extração de DNA5
¹ Método glicose oxidase-peroxidase² Método glicerol fosfatase oxidase-fenol4-amino antipireno peroxidase³ Método colesterol oxidase-fenol4-amino antipireno peroxidase4 Fórmula de Friedwald’s5 Método Chelex (Plowe et al, 1995)
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MATERIAIS E MÉTODOSMATERIAIS E MÉTODOS
• O polimorfismo rs12255372 (G/T) do TCF7L2 foi genotipado por RFLP-PCR;
• Os produtos de amplificação foram digeridos com a enzima de restrição Termus species (Tsp509I);
• Os produtos digeridos foram separados por eletroforese em gel de agarose a 3.5% na presença de brometo de etídio.
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MATERIAIS E MÉTODOSMATERIAIS E MÉTODOS
• Análises estatísticas:
o Os dados foram analisados com STATA 11.0;o As frequências genotípicas e alélicas foram comparadas usando o X² ou
teste exato de Fisher;o Variáveis contínuas foram comparadas usando testes não paramétricos;o O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi testado;o A razão de Odds foi calculada por regressão logística, ajustando para a
idade;o Um valor de p inferior a 0.05 foi considerado estatisticamente significante.
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RESULTADOSRESULTADOS• Diferenças significantes foram observadas entre os pacientes T2DM e os
controles normoglicêmicos;
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RESULTADOSRESULTADOS
• 115 casos foram positivos para genotipagem, caracterizado em gel de agarose por duas bandas de 143 pb e 104 pb (homozigoto tipo selvagem – GG), duas bandas de 126 pb e 104 pb (homozigoto mutante – TT) e três bandas de 143 pb, 126 pb e 104 pb (heterozigoto mutante – GT).
PCR-RFLP do polimorfismo rs12255372 (G/T). Os tamanhos esperados dos produtos foram: homozigoto normal GG, 143 pb, 104 pb; homozigoto mutante TT, 126 pb, 104 pb; e heterozigoto GT, 143, 126 e 104 pb, respectivamente. MWM: Marcador de peso molecular de 100 pb.
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RESULTADOSRESULTADOS
• A frequência do genótipo GG foi 66,96%, em comparação com 5,21% e 27,82% para os genótipos GT e TT, respectivamente;
• As frequências genotípicas violaram o equilíbrio de Hardy-Weinberg na população geral;
• O alelo G apresentou uma frequência maior (70%), quando comparado com o alelo T que mostrou uma frequência menor (30%).
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RESULTADOS
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DISCUSSÃO•A frequência do alelo T de 30% foi comparável à observada na população
Checa (30,15%), a população do Irã (34,45%) e a população árabe (36,15%).
•A variação da frequência do alelo T em toda a população poderia ser
explicada pela diversidade genética entre grupos étnicos diferentes.
•O alelo T foi significativamente associado ao risco de DM2 com um OR de
3,92 (IC 95% 2,04 -7,67, p <0,0001), sendo este resultado é consistente com
os relatados por estudos anteriores em diferentes populações.
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DISCUSSÃODISCUSSÃO
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DISCUSSÃODISCUSSÃO•Uma metaanálise publicada em 2009 mostrou que a magnitude da associação
entre este gene variante e DM2 é moderado e que a variante homozigoto TT
vai causar um aumento de aproximadamente 2 vezes na DM2.
•Os valores deste estudo foram mais elevados (cerca de duas vezes maior), e
pode ter sido devido ao nosso tamanho da amostra que não foi adequada
(pequeno) para este tipo de estudo, como observamos intervalos de confiança
muito grande para OR.
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DISCUSSÃODISCUSSÃO
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DISCUSSÃODISCUSSÃO•O equilíbrio de HardyWeinberg foi violado na população em geral:
erros de genotipagem;
dados RFLP-PCR difíceis de interpretar;
pequeno tamanho da amostra.
•Estes resultados devem ser replicados com maior tamanho amostral e a
genotipagem deve ser feita utilizando técnicas mais sensíveis, como a sonda
Taqman ensaio em PCR em tempo real.
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CONCLUSÃOCONCLUSÃO•O polimorfismo rs12255372 (G / T) do gene TCF7L2 provavelmente está
associado com DM2 nessa população. Esta variante poderia ajudar a prever a
ocorrência de DM2 na população camaronesa e possivelmente outras
populações subsaariana.
•Estes resultados devem ser confirmados por um estudo maior com
ferramentas de genotipagem mais precisos.
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OBRIGADA!!!OBRIGADA!!!