Hari, Tanggal : Jumat, 14 Juni 2014Dosen : Nurlela, S.Si Adawiyah, S.SiAsisten : Fuady Hanief Lia Pratiwi

PENGARUH KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

I. Dasar TeoriTerdapat hubungan kuantitatif antara konsentrasi substrat dengan kecepatan reaksi enzim. Pada konsentrasi enzim yang tetap, peningkatan konsentrasi substrat akan menaikan kecepatan reaksi enzim sampai mencapai kecepatan maksimum (Vmaks) yang tetap. Dengan meningkatnya [S] maka kcepatan reaksiakan semakin meningkat sampai keadaan enzim telah jenuh oleh substrat.Konsentrasi substrat [S] pada saat enzim mencapai setengah kecepatan maksimumnya disebut tetapan Michaelis-Menten.Kecepatan pembentukan ES :k1 [E] [S] = k1 ([Et] [ES]) [S]Sedangkan kecepatan penguraian ES :k1 [ES] + k2 [ES]Dalam keadaan setimbang, ketika kecepatan pembentukan ES sama dengan kecepatan penguraiannya, maka :k1 ([Et] [ES]) [S] = k1 [ES] + k2 [ES]k1 [Et] [S] - k1 [ES] [S] = (k1 + k2) [ES]k1 [Et] [S] = (k1 [S] + k1 + k2) [ES]

Jika Vo = k2 [S], maka :

Km adalah ketetapan Michaelis-Menten, yang besarnya Dengan mendefinisikan Vmaks sebagai , maka didapat persamaan Michaelis-Menten:..................................................................................................................(1)Jika maka ....................................(2)

II. Tujuan PercobaanMengetahui faktor yang memengaruhi aktifitas enzimMenentukan nilai km dan Vmaks

III. Metodelogia. Alat dan BahanAlat yang digunakan adalah tabung reaksi, gelas kimia, corong, rak tabung reaksi, waterbath dan pipet ukur.Bahan yang digunakan adalah larutan amilum 2%, enzim amilase, larutan iodium dan pereaksi benedict.b. Cara kerjaEmpat tabung reaksi disiapkan. Kemudian diisi masing-masing tabung dengan larutan amilum 1ml, 2ml, 4ml dan 6ml. Lalu, ke dalam masing-masing tabung, ditambahkan 1ml enzim amilase. Dicampurkan dengan baik, inkubasi di dalam water bath 37 0C. Setelah itu jui masing-masing tabung dengan pereaksi iodium setiap 3 menit. Tentukan waktu yang dibutuhkan sampai warna biru tidak tampak (titik akromatik). Tentukan nilai Vmaks dan Km dari hasil percobaan.

IV. Hasil dan PembahasanTabungLarutan amilumKinetika reaksi

Titik Akromatik (det)1/[S]1/V

11ml603,03181,8

22ml1051,5156,7

34ml2100,75157,9

46ml5850,5292,5

Tabel 1. Hasil pengamatan titik akromatis enzim Perhitungan Pengenceran amilumLarutan amilum 1mlVa . Na = Vb . Nb1ml . 2% = 6 . NN = 0,33 %Larutan amilum 2mlVa . Na = Vb . Nb2ml . 2% = 6 . NN = 0,67 %Larutan amilum 4mlVa . Na = Vb . Nb4ml . 2% = 6 . NN = 1,33 %Larutan amilum 6mlVa . Na = Vb . Nb6ml . 2% = 6 . NN = 2%

1/[S]Larutan amilum 1ml = 1/[S] = 1/0,33 %= 3,03 %Larutan amilum 2ml = 1/[S] = 1/0,67 %= 1,5 %Larutan amilum 4ml = 1/[S] = 1/0,67 %= 0,75 %Larutan amilum 6ml = 1/[S] = 1/2 %= 0,5 % 1/[V]Larutan amilum 1ml1/V = t/konsentrasi1/V = 60/0,33 = 181,8Larutan amilum 2ml1/V = t/konsentrasi1/V = 105/0,67 = 156,7Larutan amilum 4ml1/V = t/konsentrasi1/V = 210/1,33 = 157,9Larutan amilum 6ml1/V = t/konsentrasi1/V = 585/2 = 292,5

Grafik Hubungan 1/[S] dengan 1/[V]

Menghitung nilai Km dan VmaksY = -22,97 x + 230,4Y = a x + b

Pembahasan Percobaan kali ini adalah percobaan pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas enzim. Enzim yang digunakan adalah enzim amilase yang ada pada saliva. Tujuan dari percobaan ini adalah mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim dan menentukan nilai Vmaks dan Km. Percobaan ini menggunakan amilum 2% sebagai substrat dengan jumlah yang berbeda-beda. Berdasarkan percobaan, semakin tinggi konsentrasinya maka semakin tinggi titik akromatiknya. Sehingga laju reaksinya semakin besar. Pada konsentrasi enzim yang tetap, peningkatan konsentrasi substrat akan menaikan kecepatan reaksi enzim sampai mencapai kecepatan maksimum (Vmaks) yang tetap. Dengan meningkatnya [S] maka kecepatan reaksi akan semakin meningkat sampai keadaan enzim telah jenuh oleh substrat. Dari percobaan tersebut, dapat dibuat grafik hubungan antara 1/[S] dengan 1/V. persamaan yang diperoleh adalah y = -22,97 x + 230,4. Dari persamaan tersebut, Vmaks adalah 0,0043 dan Km adalah -0,098. Percobaan ini membuktikan bahwa konsentrasi substrat mempengaruhi aktivitas enzim amilase.V. KesimpulanBerdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa :1. Faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim adalah konsentrasi substrat serta konsentrasi enzim, suasana pH dan shuhu yang optimum, dan keberadaan inhibitor.2. Nilai Vmaks dan Km berturut-turut adalah 0,0043 dan -0,098.VI. Daftar PustakaFox, P.F. (1991). Food Enzymology Vol 2. Elsevier Applied Science. London.Gaman, P.M & K.B. Sherrington. (1994). Ilmu Pangan, Pengantar Ilmu Pangan, Nutrisi dan Mikrobiologi. Universitas Gadjah Mada press. Yogyakarta.Sandra, Hermanto.2010. buku ajar biokimia. UIN Syarif Hidayatullah : Jakarta