pembahasan fitokimia pemantuan klt dan kltp

7/25/2019 Pembahasan Fitokimia Pemantuan Klt Dan Kltp

1/11

PEMBAHASAN PEMANTAUAN KLT KOLOM

Pada praktikum kali ini dilakukan percobaan pemantauan kolom dengan metode KLT

tujuan dilakukan pemantauan aitu untuk menentukan jumla! komponen dalam campuran"

menentukan identita# anatara dua campuran dan memonitor perkembangan reak#i$ %a#ar

pemi#a!an pada KLT adala! perbedaan kecepatan migra#i diantara &a#e diam ang berupa

padatan dan &a#e gerak berupa campuran #ol'etn atau pelarut (eluen) ang jua dikenal dengan

pi#tila! pelarut pengembang campur$ Adapun &a#e diam ang digunakan pada praktikum ini

adala! menggunakan campuran met!anol " etil a#etat dan air dengan perbandingan * + , + - #elain

menggunakan campuran ter#ebut dilakukan pula elu#i dengan eluenang berbeda menggunakan

met!anol" etil a#etat dan air dengan perbandingan . + / + 0 larutan met!anol digunakan untuk

menarik #ena1a ang #emi polar #edangkan etil a#etat untuk menarik #ena1a ang polar$

Ta!ap ang digunakan aitu

-$ Per#iapan plat

0$ Pembuatan eluen,$ Per#iapan c!amber

/$ Penotolan dan pengembangan

Plat ang digunakan adala! #ilika gel 2& 03/ lapi# tipi# atau penangga terdiri dari plat (kaca"

aluminium" pla#tik) dan ad#orben (#ilika gel" alumina" #elulo#a" dll)$ Silika gel dapat membentuk

ikatan !idrogen di permukaana karena pada permukaanna terikat gugu# gidrok#il$ Ole! karena

itu #ilika gel #i&atna #angat polar$ Sebelum digunakan pro#e# KLT" plat !aru# di keringkan dulu

di dalam o'en agar plat beba# dari molekul4molekul air ang terikat$ 5umla! air ang terikat

ter#ebut #angat berpengaru! pada pemi#a!an karena air terikat #angat kuat pada ad#orben

#e!ingga meng!ambat terjadina ke#etimbangan dengan molekul4molekul analit$ Selain itu plat

juga tidak bole! ru#ak agar 1arna pada #ampel dapat terpi#a! dengan baik$ Setela! plat


2/11

diakti'a#i di dalam o'en plat di ambil dengan menggunakan pin#et dan meletakkanna di ata#

kaca ang #ebelumna tela! di ber#i!kan dengan alko!ol$ Ala#an menggunakan pin#et karena

lebi! e&ekti& dari pada menggunakan tangan lang#ung karena" dik!a1atirkan tangan berkeringat

#e!ingga dapat menamba!kan jumla! air pada plat$ Selanjutna plat diberi tanda gari# dan titik

untuk pro#e# penotolan dan elu#i$

Pada pemili!an eluen tergantung dari jeni# analit ang akan dipi#a!kan$ Eluen ang

menebabakan #eluru! noda ang ditotolkan pada plat naik #ampai bata# ata# plat (#ol'ent 6ron)

tanpa mengalami pemi#a!an berarti eluen terlalu polar$ Sebalikna jika noda ang ditotolkan

pada palt #ama #ekali tidak bergerak berarti eluen kurang polar$ Semakin dekat kepolaran antara

#ampel dan eluen maka #ampel akan #emakin terba1a ole! &a#e gerak ter#ebut$

Sebelum dilakukan pengembangan c!amber dijenu!kan terlebi! da!ulu karena ketika

&a#e gerak mulai naik ke &a#e diam #edapat mungkin tidak ada peng!alang atau gangguan$ 5ika

c!amber tidak jenu! maka di dalam c!amber ma#i! terdapat udara dengan uap eluen" maka

aliran eluen akan terta!an #e!ingga menebabkan pemi#a!an tidak berjalan dengan

baik$ parameter migra#i pada KLT adala! nilai 7& $ 7& adala! 1aktu tamba! atau 1aktu ang

diperlukan untuk mengelu#i mak#imum #uatu #ampel di!itung dari titik a1al penotolan$ Ole!

karena itu nilai 7& #elalu lebi! kecil dari -$ Berda#arkan percobaan didapatkan nilai 7& 8", cm

pada perbandingan *+, " 8"9 cm pada perbandingan :+0" *+," dan .+/" #erta 8"8. cm pada

perbandingan 3+3$ 5adi #pot ang paling baik pada perbandingan *+, dengan eluen n4butanol dan

etanol dengan nilai 7& 8", cm$ Hal ini di#ebabkan karena nilai 7& ter#ebut paling mak#imal daa

elu#ina dalam pemi#a!an$ %aa elu#i #endiri terletak antara 8"0 #ampai 8":$

%ari pro#e# elu#i ter#ebut tidak terli!at adana #pot #ecara ka#at mata #e!ingga perlu di

detek#i di lampu U; 03/ nm dan U; ,.. nm$ Maka diperole! nada ang terli!at$ Pada lampu


3/11

U; 03/ nm noda terli!at karena adana daa interka#i anatara #inar u' dengan indicator

&louro#en#i #eperti tima! kadminum #ul&ida ang terdapat pada lempeng dimana lempeng

ber&louro#en#i #edangkan #ampel tampak gelap$ Pada lampu u' ,.. nm noda ber&louro#en#i

#edangkan lempeng ber1arna gelap$ Penampakan noda terjadi karena adana daa interka#i

antara #inar u' dengan gugu# kromo&or ang terikat ole! au#okrom ang ada pada noda ter#ebut$

PEMBAHASAN KLTP

Pada praktikum ini dilakukan percobaan Kromatogra&i lapi# tipi# preparati& (KLTP)$

%imana pada KLT preparati'e pada da#arna #ama dengan kromatogra&i lapi# tipi# bia#a" namun

perbedaan ang nata iala! pada KLT preparati'e menggunakan lempeng kaca ang be#ar

(ukuran -8 < 08 cm) dengan ketebalan 8"3 dan #ampel ditotolkan berupa gari# luru# pada #ala!

#atu #i#i lempeng$ %an pada bagian langka! ak!ir #ilica akan dikeruk ang mana di#ebut #ebagai

i#olate$

KLTP memiliki keuntungan aitu #ebagai #ala! #atu metode pemi#a!an ang memerlukan

pembiaaan paling mura! dan memakai peralatan da#ar$ Sedangkan kerugian KLTP aitu

pengambilan #ena1a dari plat ang dilanjutkan dengan pengek#trak#ian penjerap memerlukan

1aktu lama dan jika #ena1a beracun !aru# dikeruk dari plat akan meningmbulkan banak

ma#ala! teru#$

=ara kerja dari metode ini diambil &rak#i akti& dari !a#il KK dan &rak#i akti& dari !a#il

K=; kemudian ditotolkan berbentuk pita gari# penotolan ang tela! dibuat #ebelumna$

Lempeng ang digunakan berukuran -8 < 08 cm$ #etela! #ampel ditotolkan" kemudian

dikembangkan dengan eluen met!anol" etil a#etat dan air dengan perbandingan * + , + - didalam

c!amber KLTP$ Sala! #atu metode pemi#a!an ang memerlukan biaa ang paling mura! dan

memakai peralatan paling da#ar aitu KLTP$ >alaupun KLTP dapat memi#a!kan ba!an dalam


4/11

jumla! gram" #ebagian be#ar pemakaina !ana dalam jumla! milligram$ KLTP ber#ama4#am

dengan kromatigra&ikolom terbuka" ma#i! dijmpai dalam #ebagian be#ar publika#i mengenai

i#ola#i ba!an alam " terutama dari labiratorium ang tidak lengkapi degna cara pemi#a!a modern$

(Ho#tettmann$ -993 + 9)

Penyerap (adsorben)

Berbagai penelitian tela! dilakukan untuk memerik#a pengaru! ketebalan penerap

ter!adap kualita# pemi#a!an tetapi ketebalan ang #ering dipakai adala! 8"3 40 mm $ ukuran pelat

kromatogra&i bia#ana 08


5/11

=uplikan dilarutkan dengan #edikit pelarut #ebelum ditotolkan pada pelat KLTP$ Pelarut

ang baik iala! pelarut at#iri (!ek#ana" diklorometana" etil a#etat)" karena jika tidak at#iri terjadi

pelebaran pita$ Kon#entra#i cuplikan !aru# #ekitar 34-8?$ =uplikan ditotolkan berupa pita ang

!aru# #e#empit mungkin karena pemi#a!ann bergantung pada lebar pita$ Penotolan dapat

dilakukan dengan tangan (pipet) tetapi lebi! baik dengna penotolan otomati# (camag" de#aga"

d#b)$ Untuk pita ang terlalu lebar" dapat dilakukan pemekatan dengan cara pengembangan

memakai palerut polar #ampai kira4kira 0 cm diata# tempat totolan $ kemudian pelat dikeringkan

dan dielu#i dengan pelarut ang diinginkan (Sta!l -9.*)$ Pelat pralapi# k!u#u# dengan daera!

pemekatan dapat dibeli$ (Ho#tettmann$ -993 + 9)

Isolasi senyawa yang sudah terpisah

Kebanakan penerap KLTP mengandung indikator &luore#en#i ang membantu

mendetek#i kedudukan pita ang terpi#a! #epanjang #ena1a ang dipi#a!kan menerap #iunar

U;$ Akan tetapi beberapa indicator menimbulkan ma#ala! bereak#i dengan a#am kadang4kadang

a#am a#etat$

Untuk #ena1a ang tidak menerap U; ada beberapa pili!an +

a) Menemprot dengan air (mi#alna #aponini)

b) Menutup pelat dengan #epotong kaca meemprot #ala! #atu #i#i dengna pereak#i #emprot$

c) Menamba!kan #ena1a pembanding

Pita ang kedudukana tela! diketa!ui dikerok dari pelat dengan #patula atau pengerok

berbentuk tabung ang di#ambungkan ke pengumpul 'akum$ =ara terak!ir tidak dapat dilakukan

untuk #ena1a peka karena penerap ang mengandung #ena1a ang #uda! murni teru#

meneru# kena aliran udara dan ri#iko kena otook#ida#i #elalu ada$ =ara mengumpulkan mana pun

ang dipakai" #ena1a !aru# diek#tra#i dari penerap dengan pelarut ang paling kurang polar


6/11

ang mungkin (#ekitar 3 ml pelarut untuk - gram penerap)$ Haru# diper!atikan ba!1a makin

lama #ena1a berkontak denga penerap makin be#ar kemungkinan penguraian$ Ek#trak di#aring

melalui @&rit @ kaca berkeporian / dan kemudian melalui membran 8"048"/3 m$ (Ho#tettmann$

-993 + --)

Setela! pengelu#ian" lempeng4lempeng dan diaamati di ba1a! lampu U;$ Kemudian pita4

pita ter#ebut didetek#i dan diberi ba1a! lampu U;$ Kemudian pita4pita ter#ebut didetek#i dan

diberi tanda kemudian dikeruk ang #elanjutna di#ebut #ebagai i#olate$ Sena1a didetek#i

adala! &la'onoid ang ditandai dengannoda ang berpendar di ba1a! U; ,.. nm$

KLT 2 DIMENSI

Kromatogra&i merupakan #uatu metode pemi#a!an komponen kimia berda#arkan prin#ip

parti#i dan ad#orp#i antra &a#e diam (ad#orben) dan &a#e gerak (eluen)$ Komponen kimia bergerak

naik mengikuti cairan pengembang karena adana daa #erap ad#orben (#ilica gel) ter!adap

komponen4komponen kimia tidak #ama #e!ingga komponen dapat bergerak dengan kecepatan

ang berbeda4beda berda#arkan tingkat kepolaranna dan !al innila! ang menebabkan

terjadina pemi#a!an (Soebagio" 0888)$

Kromatogra&i dalam bidang kimia merupakan #ebua! te!nik anali#i# ang digunakan

untuk memi#a!kan #ebua! campuran ataupun per#ena1aan kimia$ Te!nik ini ditemukan pada

ta!un -98. ole! Mik!ail T#1ett #eorang a!li botani dari talia ang la!ir di 7u#ia$ Te!nik

pemi#a!an ini dilakukan ter!adap pigmen tumbu!an (kloro&il)" dengan cara menuangkan ek#trak

petroleum eter dari daun tumbu!an di ata# #ebua! kolom kaca ang beri#i #erbuk kal#ium

karbonat dalam ara! ang tegak luru# (Sumar" 08-8)$

Kromatogra&i lapi# tipi# dikembangkan ole! Cmailo&& dan Sc!raiber pada ta!un -9,:$

KLT merupakan bentuk kromatogra&i planar" #elain kromatogra&i kerta# dan elektro&ore#i#$

Berbeda dengan kromatogra&i kolom ang mana &a#e diamna dii#ikan atau dikema# di

dalamna" pada kromatogra&i lapi# tipi#" &a#e diamna berupa lapi#an ang #eragam (uni&orm)

pada permukaan bidang$ Kromatogra&i digunakan untuk memi#a!kan #ub#tan#i campuran


7/11

menjadi komponen4komponen" mi#alna #ena1a 6la'onoid dan #o&la'onoida ang terdapat

pada ta!u" tempe" bubuk kedelai dan tauco #erta Scoparia dulcis" Lindernia anagalis, dan

Torenia violacea.6a#e gerak ang dikenal #ebagai pelarut pengembang akan bergerak #epanjang

&a#e diam karena pengaru! kapiler pada pengembangan #ecara mekanik (ascending) atau karena

pengaru! gra'ita#i pada pengembangan #ecara menurun (descending)$ Kromatogra&i lapi# tipi#

dalam pelak#anaanna lebi! muda! dan lebi! mura! #erta peralatan ang digunakan lebi!

#eder!ana (7o!man" 0889)$

Multi eluen adala! penggunaan eluen atau &a#e gerak ang berbeda ang memungkinkan

pemi#a!an analit dengan berda#arkan tingkat polarita# ang berbeda$ %alam multi eluen" #etela!

eluen naik" plat diangkat dari chamber dan dikeringkan #elama 3 D -8 menit$ Plat ter#ebut

kemudian dielu#i lagi dengan eluen ang baru namun pelarut ang digunakan #ama dan dengan

ara! ang #ama untuk jarak ang #ama$ Pro#e# ini dapat diulangi berkali4kali dengan tujuan

untuk meningkatkan re#olu#i komponen dengan nilain 7& diba1a! 8"3$ Beberapa pengembang

dilakukan dengan pelarut ang berbeda dalam ara! ang #ama" ma#ing4ma#ing eluen bergerak

pada jarak ang #ama atau berbeda dan di#ebut dengan elu#i berta!ap$ Sebua! &a#e kurang polar

dpat digunakan pertama ang kemudian diikuti ole! &a#e ang lebi! polar" atau #ebalikna$

Peminda!an material non polar ke bagian ata# lapi#an" meninggalkan Cat terlarut polar pada

bagian ba1a!$ Setela! kering" Cat terlarut polar dipi#a!kan ole! pengembang dengan eluen

(6ried" -999)$

KLT dua ara! atau KLT dua dimen#i ini bertujuam untuk meningkatkan re#olu#i #ampel

ketika komponen4komponen #olut mempunai karakteri#tik kimia ang !ampir #ama" karena

nilai 7& juga !ampir #ama$ Selain itu" dua #i#tem &a#e gerak ang #angat berbeda dpat digunakan

#ecara berurutan pada #uatu campuran tertentu #e!ingga memungkinkan untuk melakukan

pemi#a!an analit ang mempunai tingkat polarita# ang !ampir #ama$ KLT dua ara! dilakukan

dengan melakukan penotolan #ampel di #ala! #atu #udut lapi#an lempeng tipi# dan

mengembangkanna #ebagiamana bia#a dengan eluen pertama$ Lempeng kromatogra&i

#elanjutna dipinda!kan dari c!amber ang menggunakan eluen kedua #e!ingga pengmbangan

dapat terjadi pada ara! kedua ang tegak luru# dengan ara! pengembangan ang pertama$

Ber!a#ilna pemi#a!an tergantung pada kemampuan memodi&ika#i #elekti&ita# eluen kedua

dibandingkan dengan #elekti&ita# eluen pertama (7o!man" 0889)$


8/11

Pada lempeng lalu dikembangkan dengan #atu #i#tem &a#e gerak #e!ingga campuran

terpi#a! menurut jalur ang #ejajar dengan #ala! #atu #i#i lempeng diangkat" dikeringkan dan

diputar 988 dan diletakkan dalam bejana kromatogra&i ang beri#i &a#e gerak kedua" #e!ingga

bercak ang terpi#a! pada pengembang pertama terletak dibagian ba1a! #epanjang lempeng" lalu

dikromato!ra&i lagi (2andjar" 0889)$

%alam #i#tem KLT dua dimen#i ini" keuntunganna adala! pemi#a!an komponen dari

#ampel pada plat tidak memerlukan 1aktu ang lama$ Keber!a#ila! pemi#a!an tergantung pada

kemampuan untuk memodi&ika#i #elekti'ita# eluen kedua dibandingkan dengan #elekti'ita# eluen

pertama (>all" 0883)$

Suatu #ena1a dapat dikatakan murni apabila pada #aat dilakukan pemurnian dengan

KLT dua dimen#i terdapat noda tunggal (5aanti" 08-0)$

SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis

Spektro&otometer adala! cabang anali#i# in#trumental ang mencakup #eluru! metoda

pengukuran berda#arkan interak#i antara #uatu #pektrum #inar (7adia#i Elektromagnetik7EM)

dengan larutan molekul atau atom (%epke#" -993)$

Spektro&otometri merupakan #uatu metoda anali#a ang dida#arkan pada pengukuran

#erapan #inar monokromati# ole! #uatu lajur larutan ber1arna pada panjang gelombamg #pe#i&ik

dengan menggunakan monokromator pri#ma atau ki#i di&rak#i dengan detektor fototube

(Under1ood" 088-)$

Spektro&otometer merupakan alat ang digunakan untuk mengukur ab#orban#i dengan

cara mele1atkan ca!aa dengan panjang gelombang tertentu pada #uatu obek kaca atau ang

di#ebut ku'et$ Sebagian dari ca!aa ter#ebut akan di#erap dan #i#ana akan dile1atkan$ Nilai

ab#orban#i dari ca!aa ang dile1atkan akan #ebanding dengan kon#entra#i larutan di dalam

ku'et$

a$ Prin#ip Metode Spektro&otometri


9/11

Spektro&otometri merupakan teknik anali#i# ang ber!ubungan dengan penggunaan

ca!aa untuk mengukur kon#entra#i ba!an kimia$ Prin#ip kerja dari #pektro&otometri aitu

larutan #ampel dikenai radia#i elektromagnetik" #e!ingga menerap energiradia#i ang

menebabkan terjadina interak#i antara radia#i elektromagnetik dengan materi

(atommolekul)$ 5umla! inten#ita# radia#i ang di#erap ole! larutan #ampel dikon'er#i

dengan kon#entra#i analit #e!ingga didapat data kuantitati&$

Berda#arkan !okum Lambert4Beer" prin#ip kerja #pektro&otometri iala! bila ca!aa

monokromatik (8) melalui #uatu media (larutan)" maka #ebagian ca!aa ter#ebut di#erap (a)"

#ebagian dipantulkan (r)" dan #ebagian lagi dipancarkan (t)$

b$ Komponen4Komponen Spektro&otometer

-$ Sumber Sinar

Sumber energi radia#i ang bia#a digunakan adala! lampu 1ol&arm" ber&ung#i

#ebagai #umber #inar polikromati# dengan berbagai macam rentang panjang gelombang$

Sumber energi radia#i terdiri dari benda ang terek#ita#i menuju ke tingkat ang lebi!

tinggi ole! #umber li#trik bertegangan tinggi atau ole! pemana#an li#trik$

0$ Monokromator

Monokromator adala! #uatu piranti#i opti#i untuk memecilkan radia#i dari #umber

berke#inambungan$ %igunakan untuk memperole! #umber #inar monokromati#$ Alatdapat berupa pri#ma atau gratting (K!opkar" -998)$

,$ SelPengukuran pada daera! U; !aru# menggunakan #el kuar#a karena gela# tidak

tembu# ca!aa pada daera! ini$ Sel ang bia#a digunakan berbentuk per#egi maupun

berbentuk #ilinder dengan ketebalan -8 mm$ Sel ter#ebut adala! #el pengab#orp#i"

merupakan #el untuk meletakkan cairan ke dalam berka# ca!aa #pektro&otometer$ Sel

!aru#la! meneru#kan energi ca!aa dalam daera! #pektral ang diminati$ Sebelum #el

dipakai diber#i!kan dengan air atau dapat dicuci dengan larutan detergen atau a#am nitrat

pana# apabila dike!endaki (Sa#tro!amidjojo" 088-)$/$ %etektor

%etektor adala! alat ang dapat meruba! energi ca!aa menjadi energi li#trik atau

i#arat li#trik$ %etektor radia#i ang di!ubungkan menggunakan #i#tem meter atau


10/11

pencatat$ Peranan detektor penerima adala! memberikan re#pon ter!adap ca!aa pada

berbagai panjang gelombang (K!opkar" -998)$


11/11

pembahasan fitokimia pemantuan klt dan kltp

Documents