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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL PREVALÊNCIA DE Chlamydophila sp. E QUADRO HEMATOLÓGICO DE Ara ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITAÇÃO DE ANIMAIS SILVESTRES EM CAMPO GRANDE/MS Prevalence of Chlamydophila sp. and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild animals rehabilitation center in Campo Grande/MS Tatiana Mieko Ono CAMPO GRANDE MATO GROSSO DO SUL BRASIL MARÇO 2009

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Page 1:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL MESTRADO EM CIEcircNCIA ANIMAL

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO

HEMATOLOacuteGICO DE Ara ararauna E Amazona aestiva EM

CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS SILVESTRES

EM CAMPO GRANDEMS

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva

in wild animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Tatiana Mieko Ono

CAMPO GRANDE MATO GROSSO DO SUL ndash BRASIL

MARCcedilO 2009

Livros Graacutetis

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

MESTRADO EM CIEcircNCIA ANIMAL

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO

HEMATOLOacuteGICO DE Ara ararauna E Amazona aestiva EM

CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS SILVESTRES

EM CAMPO GRANDEMS

Tatiana Mieko Ono

Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal de Mato Grosso do Sul como requisito

agrave obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Ciecircncia Animal

Aacuterea de concentraccedilatildeo Sauacutede Animal

CAMPO GRANDE MATO GROSSO DO SUL ndash BRASIL

MARCcedilO 2009

Dados Internacionais de Catalogaccedilatildeo na Publicaccedilatildeo (CIP) (Coordenadoria de Biblioteca Central ndash UFMS Campo Grande MS Brasil)

Ono Tatiana Mieko O58p Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e

Amazona aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo Grande MS Tatiana Mieko Ono -- Campo Grande MS 2009 53 f 30 cm

Orientador Alfredo Sampaio Carrijo Co-orientador Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Mato Grosso do Sul Faculdade de Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia

1 Chlamydophila 2 Arara - Doenccedilas 3 Papagaio (Ave) - Doenccedilas 4 Hematologia veterinaacuteria I Carrijo Alfredo Sampaio II Arauacutejo Flaacutebio Ribeiro III Tiacutetulo

CDD (22) ndash 6360896959

AGRADECIMENTOS

Agrave FUNDECT pela bolsa de mestrado

Ao Fabio Pellegrini pelo auxiacutelio e parceria em todos os projetos em execuccedilatildeo

Ao Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo pela aceitaccedilatildeo como sua orientada pela amizade e paciecircncia

Ao Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo pela coorientaccedilatildeo no projeto e pelos ensinamentos

Profissional que aprendi a admirar

Agrave Dra Faacutetima Soares Motta Noronha por conceder DNA de Chlamydophila sp utilizado

como controle positivo

Ao Carlos Ramos e Daniel Guedes pela dedicaccedilatildeo tempo e paciecircncia atrasando por vezes

seus projetos para me auxiliarem Ao teacutecnico Renato Marccedilal pela presteza pelo ensinamento

e tambeacutem pela preparaccedilatildeo da Soluccedilatildeo de Natt e Herrick extremamente essencial para as

anaacutelises hematoloacutegicas

Ao Dr Luiz Eduardo Tavares que orientou brilhantemente nas anaacutelises estatiacutesticas

Ao teacutecnico Sandro do Laboratoacuterio de Patologia Cliacutenica da UFMS pela iniciaccedilatildeo em

hematologia Ao Dr Prof Pachaly pelo conhecimento passado e por sempre responder aos

emails prontamente

Agrave Msc Anahiacute Souto Vieira pela amizade e auxiacutelio em todos os aspectos vividos

Agraves meacutedicas veterinaacuterias Cristina Carrijo e Juliana Marcondes Rezende por permitirem o

uso dos Laboratoacuterios de Anaacutelises Cliacutenicas para as anaacutelises hematoloacutegicas

Aos teacutecnicos do CRAS Aacutelvaro Cavalcanti e Vinicius Lopes por ceder os animais

auxiliar nas coletas e abrir as portas do Centro Aos teacutecnicos Joatildeo Genivaldo e Vandir que

sempre auxiliaram com muita sabedoria e presteza

Aos amigos da Embrapa

Ao Felipe Pellegrini pelo auxiacutelio com a traduccedilatildeo

Agrave secretaacuteria Marilete que sempre nos atendeu com muito carinho e atenccedilatildeo

Ao Antocircnio Joseacute Sabino por transmitir sua experiecircncia na hematologia aviaacuteria

Ao Dr Aramis Pinto pelos artigos enviados e pela disponibilidade e presteza em auxiliar

Agrave Dra Tacircnia Raso pelas informaccedilotildees fornecidas

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 2:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

Livros Graacutetis

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

MESTRADO EM CIEcircNCIA ANIMAL

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO

HEMATOLOacuteGICO DE Ara ararauna E Amazona aestiva EM

CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS SILVESTRES

EM CAMPO GRANDEMS

Tatiana Mieko Ono

Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal de Mato Grosso do Sul como requisito

agrave obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Ciecircncia Animal

Aacuterea de concentraccedilatildeo Sauacutede Animal

CAMPO GRANDE MATO GROSSO DO SUL ndash BRASIL

MARCcedilO 2009

Dados Internacionais de Catalogaccedilatildeo na Publicaccedilatildeo (CIP) (Coordenadoria de Biblioteca Central ndash UFMS Campo Grande MS Brasil)

Ono Tatiana Mieko O58p Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e

Amazona aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo Grande MS Tatiana Mieko Ono -- Campo Grande MS 2009 53 f 30 cm

Orientador Alfredo Sampaio Carrijo Co-orientador Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Mato Grosso do Sul Faculdade de Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia

1 Chlamydophila 2 Arara - Doenccedilas 3 Papagaio (Ave) - Doenccedilas 4 Hematologia veterinaacuteria I Carrijo Alfredo Sampaio II Arauacutejo Flaacutebio Ribeiro III Tiacutetulo

CDD (22) ndash 6360896959

AGRADECIMENTOS

Agrave FUNDECT pela bolsa de mestrado

Ao Fabio Pellegrini pelo auxiacutelio e parceria em todos os projetos em execuccedilatildeo

Ao Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo pela aceitaccedilatildeo como sua orientada pela amizade e paciecircncia

Ao Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo pela coorientaccedilatildeo no projeto e pelos ensinamentos

Profissional que aprendi a admirar

Agrave Dra Faacutetima Soares Motta Noronha por conceder DNA de Chlamydophila sp utilizado

como controle positivo

Ao Carlos Ramos e Daniel Guedes pela dedicaccedilatildeo tempo e paciecircncia atrasando por vezes

seus projetos para me auxiliarem Ao teacutecnico Renato Marccedilal pela presteza pelo ensinamento

e tambeacutem pela preparaccedilatildeo da Soluccedilatildeo de Natt e Herrick extremamente essencial para as

anaacutelises hematoloacutegicas

Ao Dr Luiz Eduardo Tavares que orientou brilhantemente nas anaacutelises estatiacutesticas

Ao teacutecnico Sandro do Laboratoacuterio de Patologia Cliacutenica da UFMS pela iniciaccedilatildeo em

hematologia Ao Dr Prof Pachaly pelo conhecimento passado e por sempre responder aos

emails prontamente

Agrave Msc Anahiacute Souto Vieira pela amizade e auxiacutelio em todos os aspectos vividos

Agraves meacutedicas veterinaacuterias Cristina Carrijo e Juliana Marcondes Rezende por permitirem o

uso dos Laboratoacuterios de Anaacutelises Cliacutenicas para as anaacutelises hematoloacutegicas

Aos teacutecnicos do CRAS Aacutelvaro Cavalcanti e Vinicius Lopes por ceder os animais

auxiliar nas coletas e abrir as portas do Centro Aos teacutecnicos Joatildeo Genivaldo e Vandir que

sempre auxiliaram com muita sabedoria e presteza

Aos amigos da Embrapa

Ao Felipe Pellegrini pelo auxiacutelio com a traduccedilatildeo

Agrave secretaacuteria Marilete que sempre nos atendeu com muito carinho e atenccedilatildeo

Ao Antocircnio Joseacute Sabino por transmitir sua experiecircncia na hematologia aviaacuteria

Ao Dr Aramis Pinto pelos artigos enviados e pela disponibilidade e presteza em auxiliar

Agrave Dra Tacircnia Raso pelas informaccedilotildees fornecidas

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 3:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

MESTRADO EM CIEcircNCIA ANIMAL

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO

HEMATOLOacuteGICO DE Ara ararauna E Amazona aestiva EM

CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS SILVESTRES

EM CAMPO GRANDEMS

Tatiana Mieko Ono

Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade Federal de Mato Grosso do Sul como requisito

agrave obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Ciecircncia Animal

Aacuterea de concentraccedilatildeo Sauacutede Animal

CAMPO GRANDE MATO GROSSO DO SUL ndash BRASIL

MARCcedilO 2009

Dados Internacionais de Catalogaccedilatildeo na Publicaccedilatildeo (CIP) (Coordenadoria de Biblioteca Central ndash UFMS Campo Grande MS Brasil)

Ono Tatiana Mieko O58p Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e

Amazona aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo Grande MS Tatiana Mieko Ono -- Campo Grande MS 2009 53 f 30 cm

Orientador Alfredo Sampaio Carrijo Co-orientador Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Mato Grosso do Sul Faculdade de Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia

1 Chlamydophila 2 Arara - Doenccedilas 3 Papagaio (Ave) - Doenccedilas 4 Hematologia veterinaacuteria I Carrijo Alfredo Sampaio II Arauacutejo Flaacutebio Ribeiro III Tiacutetulo

CDD (22) ndash 6360896959

AGRADECIMENTOS

Agrave FUNDECT pela bolsa de mestrado

Ao Fabio Pellegrini pelo auxiacutelio e parceria em todos os projetos em execuccedilatildeo

Ao Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo pela aceitaccedilatildeo como sua orientada pela amizade e paciecircncia

Ao Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo pela coorientaccedilatildeo no projeto e pelos ensinamentos

Profissional que aprendi a admirar

Agrave Dra Faacutetima Soares Motta Noronha por conceder DNA de Chlamydophila sp utilizado

como controle positivo

Ao Carlos Ramos e Daniel Guedes pela dedicaccedilatildeo tempo e paciecircncia atrasando por vezes

seus projetos para me auxiliarem Ao teacutecnico Renato Marccedilal pela presteza pelo ensinamento

e tambeacutem pela preparaccedilatildeo da Soluccedilatildeo de Natt e Herrick extremamente essencial para as

anaacutelises hematoloacutegicas

Ao Dr Luiz Eduardo Tavares que orientou brilhantemente nas anaacutelises estatiacutesticas

Ao teacutecnico Sandro do Laboratoacuterio de Patologia Cliacutenica da UFMS pela iniciaccedilatildeo em

hematologia Ao Dr Prof Pachaly pelo conhecimento passado e por sempre responder aos

emails prontamente

Agrave Msc Anahiacute Souto Vieira pela amizade e auxiacutelio em todos os aspectos vividos

Agraves meacutedicas veterinaacuterias Cristina Carrijo e Juliana Marcondes Rezende por permitirem o

uso dos Laboratoacuterios de Anaacutelises Cliacutenicas para as anaacutelises hematoloacutegicas

Aos teacutecnicos do CRAS Aacutelvaro Cavalcanti e Vinicius Lopes por ceder os animais

auxiliar nas coletas e abrir as portas do Centro Aos teacutecnicos Joatildeo Genivaldo e Vandir que

sempre auxiliaram com muita sabedoria e presteza

Aos amigos da Embrapa

Ao Felipe Pellegrini pelo auxiacutelio com a traduccedilatildeo

Agrave secretaacuteria Marilete que sempre nos atendeu com muito carinho e atenccedilatildeo

Ao Antocircnio Joseacute Sabino por transmitir sua experiecircncia na hematologia aviaacuteria

Ao Dr Aramis Pinto pelos artigos enviados e pela disponibilidade e presteza em auxiliar

Agrave Dra Tacircnia Raso pelas informaccedilotildees fornecidas

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 4:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

Dados Internacionais de Catalogaccedilatildeo na Publicaccedilatildeo (CIP) (Coordenadoria de Biblioteca Central ndash UFMS Campo Grande MS Brasil)

Ono Tatiana Mieko O58p Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e

Amazona aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo Grande MS Tatiana Mieko Ono -- Campo Grande MS 2009 53 f 30 cm

Orientador Alfredo Sampaio Carrijo Co-orientador Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo

Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Mato Grosso do Sul Faculdade de Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia

1 Chlamydophila 2 Arara - Doenccedilas 3 Papagaio (Ave) - Doenccedilas 4 Hematologia veterinaacuteria I Carrijo Alfredo Sampaio II Arauacutejo Flaacutebio Ribeiro III Tiacutetulo

CDD (22) ndash 6360896959

AGRADECIMENTOS

Agrave FUNDECT pela bolsa de mestrado

Ao Fabio Pellegrini pelo auxiacutelio e parceria em todos os projetos em execuccedilatildeo

Ao Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo pela aceitaccedilatildeo como sua orientada pela amizade e paciecircncia

Ao Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo pela coorientaccedilatildeo no projeto e pelos ensinamentos

Profissional que aprendi a admirar

Agrave Dra Faacutetima Soares Motta Noronha por conceder DNA de Chlamydophila sp utilizado

como controle positivo

Ao Carlos Ramos e Daniel Guedes pela dedicaccedilatildeo tempo e paciecircncia atrasando por vezes

seus projetos para me auxiliarem Ao teacutecnico Renato Marccedilal pela presteza pelo ensinamento

e tambeacutem pela preparaccedilatildeo da Soluccedilatildeo de Natt e Herrick extremamente essencial para as

anaacutelises hematoloacutegicas

Ao Dr Luiz Eduardo Tavares que orientou brilhantemente nas anaacutelises estatiacutesticas

Ao teacutecnico Sandro do Laboratoacuterio de Patologia Cliacutenica da UFMS pela iniciaccedilatildeo em

hematologia Ao Dr Prof Pachaly pelo conhecimento passado e por sempre responder aos

emails prontamente

Agrave Msc Anahiacute Souto Vieira pela amizade e auxiacutelio em todos os aspectos vividos

Agraves meacutedicas veterinaacuterias Cristina Carrijo e Juliana Marcondes Rezende por permitirem o

uso dos Laboratoacuterios de Anaacutelises Cliacutenicas para as anaacutelises hematoloacutegicas

Aos teacutecnicos do CRAS Aacutelvaro Cavalcanti e Vinicius Lopes por ceder os animais

auxiliar nas coletas e abrir as portas do Centro Aos teacutecnicos Joatildeo Genivaldo e Vandir que

sempre auxiliaram com muita sabedoria e presteza

Aos amigos da Embrapa

Ao Felipe Pellegrini pelo auxiacutelio com a traduccedilatildeo

Agrave secretaacuteria Marilete que sempre nos atendeu com muito carinho e atenccedilatildeo

Ao Antocircnio Joseacute Sabino por transmitir sua experiecircncia na hematologia aviaacuteria

Ao Dr Aramis Pinto pelos artigos enviados e pela disponibilidade e presteza em auxiliar

Agrave Dra Tacircnia Raso pelas informaccedilotildees fornecidas

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

REFEREcircNCIAS

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 5:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

AGRADECIMENTOS

Agrave FUNDECT pela bolsa de mestrado

Ao Fabio Pellegrini pelo auxiacutelio e parceria em todos os projetos em execuccedilatildeo

Ao Prof Dr Alfredo Sampaio Carrijo pela aceitaccedilatildeo como sua orientada pela amizade e paciecircncia

Ao Dr Flaacutebio Ribeiro de Arauacutejo pela coorientaccedilatildeo no projeto e pelos ensinamentos

Profissional que aprendi a admirar

Agrave Dra Faacutetima Soares Motta Noronha por conceder DNA de Chlamydophila sp utilizado

como controle positivo

Ao Carlos Ramos e Daniel Guedes pela dedicaccedilatildeo tempo e paciecircncia atrasando por vezes

seus projetos para me auxiliarem Ao teacutecnico Renato Marccedilal pela presteza pelo ensinamento

e tambeacutem pela preparaccedilatildeo da Soluccedilatildeo de Natt e Herrick extremamente essencial para as

anaacutelises hematoloacutegicas

Ao Dr Luiz Eduardo Tavares que orientou brilhantemente nas anaacutelises estatiacutesticas

Ao teacutecnico Sandro do Laboratoacuterio de Patologia Cliacutenica da UFMS pela iniciaccedilatildeo em

hematologia Ao Dr Prof Pachaly pelo conhecimento passado e por sempre responder aos

emails prontamente

Agrave Msc Anahiacute Souto Vieira pela amizade e auxiacutelio em todos os aspectos vividos

Agraves meacutedicas veterinaacuterias Cristina Carrijo e Juliana Marcondes Rezende por permitirem o

uso dos Laboratoacuterios de Anaacutelises Cliacutenicas para as anaacutelises hematoloacutegicas

Aos teacutecnicos do CRAS Aacutelvaro Cavalcanti e Vinicius Lopes por ceder os animais

auxiliar nas coletas e abrir as portas do Centro Aos teacutecnicos Joatildeo Genivaldo e Vandir que

sempre auxiliaram com muita sabedoria e presteza

Aos amigos da Embrapa

Ao Felipe Pellegrini pelo auxiacutelio com a traduccedilatildeo

Agrave secretaacuteria Marilete que sempre nos atendeu com muito carinho e atenccedilatildeo

Ao Antocircnio Joseacute Sabino por transmitir sua experiecircncia na hematologia aviaacuteria

Ao Dr Aramis Pinto pelos artigos enviados e pela disponibilidade e presteza em auxiliar

Agrave Dra Tacircnia Raso pelas informaccedilotildees fornecidas

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

Abratildeo MG Billerbeck AEC Nishi MY Marui S Mendonccedila BB 2005 Padronizaccedilatildeo da

teacutecnica de extraccedilatildeo de DNA de ceacutelulas de mucosa oral com NaCl Aplicaccedilatildeo no estudo do

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Ayres M Ayres Junior M Ayres DL Santos AAS 2004 BioEstat aplicaccedilotildees estatiacutesticas

nas aacutereas das Ciecircncias Biomeacutedicas 4ordm ed Imprensa Oficial do Estado do Paraacute Sociedade

Civil Mamirauaacute Beleacutem 324p

Benez SM 2004 Hematologia e bioquiacutemica sanguiacutenea das aves In Aves criaccedilatildeo cliacutenica

teoria praacutetica silvestres ornamentais avinhados 4 ed Ribeiratildeo Preto Tecmedd p 323-

332

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captive blue-fronted amazon parrots (Amazona aestiva) in the Gran Chaco Boliacutevia Journal

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2007 Study of Chlamydophila psittaci outbreak in budgerigars Bulletin of the Veterinary

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Gerlach H 1994 Chlamydia In Ritchie BW Harrison GJ Harrison LR (Ed) Avian

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Harkinezhad T Verminnen K Van Droogenbroeck C Vanrompay D 2007 Chlamydophila

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Mitchell EB Johns J 2008 Avian hematology and related disorders Veterinary Clinics

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Raso TF Berchieri AJr Pinto AA 2002 Evidence of Chlamydophila psittaci infection in

captive amazon parrots in Brazil Journal Zoo and Wildlife Medicine v 33 p 118ndash121

Raso TF Godoy SN Milanelo L Souza CAI Matuschima ER Araujo Jr JPA Pinto

AA 2004 An outbreak of chlamydiosis in captive blue-fronted Amazon parrots (Amazona

aestiva) in Brazil Journal Zoo and Wildlife Medicine v 35 n 1 p 94ndash96

Raso TF Seixas GHF Guedes NMR Pinto AA 2006 Chlamydophila psittaci in free-

living blue-fronted amazon parrots (Amazona aestiva) and hyacinth macaws (Anodorhynchus

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Veterinary Science v 12 n 3 p 9-20

Suwa T Touchi A Hirai K Itakura C 1990 Pathological studies on chlamydiosis in

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Van Loock M Verminnen K Messmer TO Volckaert G Goddeeris BM Vanrompay D

2005 Use of a nested PCR-enzyme immunoassay with an internal control to detect

Chlamydophila psittaci in turkeys BMC Infectious Diseases v 5 n 76

Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 6:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

SUMAacuteRIO

RESUMO 8

ABSTRACT 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 10

2 REVISAtildeO DE LITERATURA 11

21 Centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres 11

22 Psitaciacutedeos 13

23 Clamidiose 15

231 Aspectos Epidemioloacutegicos 15

232 Patogecircnese 17

233 Aspectos Cliacutenicos 19

234 Diagnoacutestico 20

24 Hematologia em aves 21

241 Hematologia e Clamidiose 24

3 REFEREcircNCIAS 26

4 ARTIGO 34

Prevalecircncia de Chlamydophila sp e quadro hematoloacutegico de Ara ararauna e Amazona

aestiva em centro de reabilitaccedilatildeo de animais silvestres em Campo GrandeMS

Resumo 35

Abstract

35

Introduccedilatildeo 36

Material e Meacutetodos 37

Hematologia 38

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes 38

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

40

Anaacutelise estatiacutestica 40

Resultados e Discussatildeo 41

Conclusatildeo 46

Referecircncias 47

APEcircNDICE 49

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 7:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

LISTA DE ABREVIATURAS

microL -

Microlitros

CE -

Corpuacutesculo elementar

cm -

Centiacutemetros

CRASMS -

Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres em Campo Grande Mato Grosso do Sul

DNA -

Aacutecido desoxirribonucleacuteico

EDTA -

Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico

fL -

Fentolitros

g -

Gramas

IBAMA -

Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

LCL -

Levinthal-Colles-Lillie

pb -

Pares de base

PCR -

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

PP -

Proteiacutena plasmaacutetica

PPT -

Proteiacutena plasmaacutetica total

RENCTAS

-

Rede Nacional de Combate ao Traacutefico de Animais Silvestres

VCM -

Volume corpuscular meacutedio

VG -

Volume globular

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

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A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 8:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose 25

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de

Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn 43

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e

Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila

sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

44

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 9:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda

reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb

41

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp

submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de

2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do

municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

42

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 10:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

RESUMO

As araras e papagaios pertencentes agrave famiacutelia Psittacidae e satildeo as aves que mais sofrem com o

traacutefico de animais silvestres Em Mato Grosso do Sul o Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) recebe os animais apreendidos do traacutefico desenvolvendo um importante

papel para a conservaccedilatildeo da fauna A clamidiose aviaacuteria enfermidade causada por Chlamydophila

psittaci eacute frequentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos em todo o mundo Por ser uma grave

zoonose um diagnoacutestico preciso eacute requerido para que accedilotildees preventivas relativas agrave sauacutede puacuteblica

sejam tomadas O hemograma eacute um exame amplamente utilizado na cliacutenica meacutedico-ciruacutergica dos

animais atuando com uma importante ferramenta nos diagnoacutesticos entretanto na cliacutenica de aves

natildeo satildeo comumente realizados Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de

clamidiose nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva em reabilitaccedilatildeo no CRASMS no

municiacutepio de Campo Grande Brasil e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade Foram amostradas 75 aves (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizando-se

os seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais Os animais foram divididos em dois grupos positivos e negativos

para clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada A

prevalecircncia de clamidiose foi de 5556 para A ararauna e 3542 para A aestiva esta

enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A

ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas entre os animais positivos e

negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Foi observado hemoparasitose por

Haemoproteus sp em uma arara-canindeacute pertencente ao grupo dos paacutessaros negativos A presenccedila

de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de

portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia arara-canindeacute papagaio-verdadeiro

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 11:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

ABSTRACT

The macaws and parrots belong to family Psittacidae which are the avian that most suffer with

the trafficking of wild animals In the state of Mato Grosso do Sul the Centro de Reabilitaccedilatildeo de

Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) receives animals seized from

smugglers thus being an important center to the conservation of the animals The aviand

chlamydiosis disease caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in

psittacines worldwide Itrsquos a serious zoonosis and a specific diagnosis is required to prevent actions to

the public health from being realized The hemogram is frequently utilized in the animals clinic as an

important tool in the diagnosis however in the birds clinic arenrsquot commonly realized The objectives

in this work were to verify the prevalence of the chlamydiosis in Ara ararauna and Amazona aestiva

species in rehabilitation at the CRASMS in the city of Campo Grande in the state of Mato Grosso do

Sul Brazil and point out the possible hematologycal disorder associated with the disease Seventy-

five birds were sampled (A ararauna n=27 A aestiva n=48) realizing the following procedures

clinical examination blood collection cloacal swabs and weight analyses The diagnosis of psittacosis

was obtained by polimerase chain reaction The animals were divided in two groups positives and

negatives by chamydiosis calculating the average and standard derivation to each variable studied

The prevalence of chlamydiosis was 5556 to A ararauna and 3542 to A aestiva This disease

was associated with reduction of the packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva there were no differences observed between the positive and negative birds to chlamydiosis in

the studied conditions A single case of blood parasites by Haemoproteus sp in blue-and-yellow

macaw was detected in a bird that was negative to chlamydiosis The presence of the Chlamydophila

sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the existence of asymptomatic and

symptomatic birds at the CRASMS

Key-words chlamydiosis hematology blue-and-yellow macaws blue-fronted-parrot

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 12:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

1 INTRODUCcedilAtildeO

A clamidiose aviaacuteria eacute causada por Chlamydophila psittaci (C psittaci) bacteacuteria gram

negativa obrigatoriamente intracelular A doenccedila em paacutessaros eacute na maioria das vezes

sistecircmica e ocasionalmente fatal (VAN LOOCK et al 2005) Em 1893 Morange descreveu

um agente infeccioso transmitido por papagaios que causava em humanos infecccedilatildeo no trato

respiratoacuterio semelhante agrave gripe e a denominou de psitacose da palavra grega ldquopsittacusrdquo

papagaio (MOSCHIONI et al 2001)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (VAN LOOCK et al 2005)

Sabe-se que os psitaciacutedeos satildeo hospedeiros de C psittaci e quase sempre estatildeo

envolvidos nos surtos eou na transmissatildeo desta doenccedila O Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais

Silvestres (CRASMS) em Campo Grande Mato Grosso do Sul recebe um grande nuacutemero de

araras e papagaios provenientes de apreensotildees de traacutefico de animais selvagens Estas aves

recebem atendimento veterinaacuterio e zooteacutecnico sendo posteriormente reabilitadas e soltas na

natureza

Segundo o Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

(IBAMA) para evitar a introduccedilatildeo de doenccedilas no meio ambiente normas especiacuteficas devem

ser seguidas para a reintroduccedilatildeo das aves na natureza Dentre tais normas se preconiza o

diagnoacutestico da clamidiose assim como hemograma completo com pesquisa de hemoparasitos

para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA 2007)

A pesquisa de clamidiose jaacute eacute realizada no CRASMS ulilizando coleta de fezes dos

recintos coletivos Os materiais satildeo enviados para laboratoacuterio privado e como meacutetodo

diagnoacutestico utiliza-se a reaccedilatildeo em cadeia da polimerase (PCR) Quando um recinto apresenta

resultado positivo para a clamidiose todos os paacutessaros do viveiro recebem tratamento com

doxiciclina Utilizando-se antibioticoterapia em todos os indiviacuteduos fica impossibilitada de

ser determinada a prevalecircncia da clamidiose nas aves em reabilitaccedilatildeo

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

Abratildeo MG Billerbeck AEC Nishi MY Marui S Mendonccedila BB 2005 Padronizaccedilatildeo da

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 13:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

A hematologia de aves eacute um meacutetodo raacutepido de baixo custo mas pouco utilizado na

rotina do CRASMS Segundo Schmidt et al (2007) as provas laboratoriais do sangue podem

servir como ferramentas importantes para auxiliar no monitoramento da sauacutede das aves no

diagnoacutestico de doenccedilas na avaliaccedilatildeo preacute-operatoacuteria e na eficaacutecia do tratamento Os estudos

dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir com o progresso

da medicina aviaacuteria A realizaccedilatildeo de estudos que permitam a interpretaccedilatildeo adequada das

respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos pode tornar possiacutevel a adoccedilatildeo

de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

Existem poucos relatos na literatura que indiquem alteraccedilotildees hematoloacutegicas de

animais positivos para clamidiose A partir do conhecimento desta hematologia pode ser

possiacutevel estimar um perfil sanguumliacuteneo de aves positivas para Chlamydophila spp devendo o

hemograma ser utilizado como exame de rotina no manejo sanitaacuterio do CRASMS

O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciformes

em reabilitaccedilatildeo no CRASMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a

esta enfermidade nestas aves

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres

A captura de animais da natureza para abastecer o mercado de aves de estimaccedilatildeo

somado agrave destruiccedilatildeo ambiental eacute um importante fator responsaacutevel pelo decliacutenio das

populaccedilotildees e pelo processo de extinccedilatildeo em que algumas espeacutecies se encontram (SNYDER et

al 2004)

O traacutefico de animais eacute considerado o terceiro maior comeacutercio ilegal do mundo

perdendo apenas para a comercializaccedilatildeo de drogas e armas No Brasil estima-se que esta

atividade ilegal seja responsaacutevel pela retirada anual de pelo menos 12 milhotildees de animais

silvestres das matas brasileiras (RENCTAS 2003)

Devido ao traacutefico e a maacute utilizaccedilatildeo da fauna brasileira foram criados os Centros de

Reabilitaccedilatildeo e Refuacutegios de Animais Silvestres que recebem animais apreendidos no traacutefico

fornecendo um manejo adequado para cada espeacutecie O CRASMS localiza-se no municiacutepio de

Campo Grande e desde 1988 presta atendimento agrave fauna silvestre realizando a recepccedilatildeo

triagem e destinaccedilatildeo dos animais provenientes do comeacutercio ilegal viacutetimas de atropelamentos

ou entregues pela comunidade

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 14:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

Entre os animais recepcionados no CRASMS 40 proveacutem do traacutefico e destes 23

destes animais satildeo papagaios da espeacutecie Amazona aestiva Desde a sua criaccedilatildeo jaacute foram

recebidos por este centro mais de trecircs mil papagaios apreendidos pelos oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo

Por ser a espeacutecie mais procurada como ave de estimaccedilatildeo a reintroduccedilatildeo em seu habitat

natural apoacutes a sua recuperaccedilatildeo torna-se essencial pois a captura desenfreada destes animais

para o abastecimento do comeacutercio ilegal pode levaacute-los agrave extinccedilatildeo (SEIXAS e FIRMINO

2002)

A maioria dos papagaios que chega ao CRASMS satildeo filhotes devido agrave facilidade de

captura pelos traficantes A taxa de mortalidade desses animais eacute altiacutessima durante as

primeiras semanas de tratamento Isso eacute explicado pela peacutessima alimentaccedilatildeo fornecida pelos

traficantes associados aos maus tratos e ao jejum que por vezes ocorre devido ao longo

transporte antes da chegada ao centro de reabilitaccedilatildeo O papagaio-verdadeiro foi a uacutenica

espeacutecie monitorada apoacutes a soltura pelo CRASMS sendo que de 1988 a 1998 foram

destinadas para repovoamento 47 dos papagaios recebidos No acompanhamento destas

aves na natureza verificou-se que aproximadamente 60 delas sobreviveram pelo menos 13

meses apoacutes a soltura (SEIXAS e MOURAtildeO 2000)

As araras chegam em menor nuacutemero e recebem os mesmos cuidados e alimentaccedilatildeo

que os papagaios sendo colocadas em recintos adequados para esta espeacutecie Segundo o

Relatoacuterio sobre o Traacutefico de Animais Silvestres no Pantanal Sul a arara e o papagaio

aparecem como o segundo animal mais criado como mascotes pelos moradores de quatro

comunidades de sub-regiotildees pantaneiras precedido apenas pelo paacutessaro-preto (SEIXAS e

FIRMINO 2002)

Uma importante consequumlecircncia do traacutefico diz respeito ao aspecto sanitaacuterio pois na

comercializaccedilatildeo ilegal de animais silvestres natildeo eacute realizado nenhum controle sanitaacuterio

podendo ser transmitidas doenccedilas graves e desconhecidas para o homem No traacutefico dos

psitaciacutedeos a zoonose que representa maiores riscos eacute a clamidiose Moschioni et al (2001)

destaca que nos humanos o diagnoacutestico precoce de clamidiose eacute fundamental devido agrave

excelente resposta terapecircutica entretanto o diagnoacutestico tardio pode levar a um curso grave e

fatal da doenccedila

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 15:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

22 Psitaciacutedeos

Psittacidae refere-se aos papagaios e agraves araras (257 espeacutecies) Os Psitaciacutedeos estatildeo

distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees tropicais Algumas espeacutecies se

estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se estendem ateacute regiotildees temperadas do

norte (LAMBERSKI 2003)

Os psitaciacutedeos podem ser divididos em quatro subfamiacutelias baseados na distribuiccedilatildeo

geograacutefica sendo que espeacutecies do novo mundo podem ser encontradas na Ameacuterica Central e

na Ameacuterica do Sul enquanto que espeacutecies do velho mundo podem ser encontradas na

Austraacutelia Aacutefrica e Aacutesia (LAMBERSKI 2003) O Brasil com 70 espeacutecies eacute o primeiro paiacutes

em nuacutemero de psitaciformes (FORSHAW 1978)

A espeacutecie A aestiva popularmente conhecida como papagaio-verdadeiro apresenta

comprimento meacutedio de 37 cm Na regiatildeo Centro-Oeste a subespeacutecie mais encontrada eacute A

aestiva aestiva a qual pesa em meacutedia 400 g e apresenta coloraccedilatildeo predominantemente verde

com o encontro da asa de coloraccedilatildeo vermelha O bico possui coloraccedilatildeo preta a fronte possui

penas azuis e amarelas ao redor dos olhos e pescoccedilo (BATES e BUSENBARK 1978

FORSHAW 1978 SICK 1997) Eacute uma das aves mais apreciadas em cativeiro no Brasil

sendo considerada a melhor ldquofaladorardquo entre os psitaciacutedeos nacionais (SICK 1985)

No Brasil satildeo encontradas as maiores representantes dos psitaciacutedeos as araras Dentre

as espeacutecies nativas podemos citar as araras-azuis Anodorhynchus hyacinthinus

Anodorhynchus leari e Anodorhynchus glaucus (extinta no iniacutecio do seacuteculo passado) as

araras-vermelhas Ara macao e Ara chloroptera e a arara-canindeacute Ara ararauna

(FORSHAW 1978 SICK 1985)

As araras embora apresentem uma grande variaccedilatildeo de tamanho coloraccedilatildeo e peso

possuem caracteriacutesticas muito marcantes que facilitam seu reconhecimento imediato como

bico curto alto recurvado de base larga maxila bem moacutevel articulada ao cracircnio com

movimentos de extensatildeo que aumentam a potecircncia do bico usado para partir sementes duras

A coloraccedilatildeo predominante das araras-canindeacutes eacute amarela e azul (SICK 1985 COLLAR e

JUNIPER 1992)

Na natureza os psitaciformes alimentam os filhotes regurgitando-lhes comida que

pode ser quase liacutequida a mandiacutebula do ninhego eacute como uma concha muito larga na base

facilitando a recepccedilatildeo do ldquomingaurdquo e durante a incubaccedilatildeo dos ovos o macho regurgita

comida para a fecircmea (SICK 1997)

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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de produccedilatildeo ndash Uma ferramenta para monitorar a sanidade aviacutecola ndash Revisatildeo Archives of

Veterinary Science v 12 n 3 p 9-20

Suwa T Touchi A Hirai K Itakura C 1990 Pathological studies on chlamydiosis in

parakeets (Psittacula krameri manillensis) Avian Pathology v 192 p 355-369

Van Loock M Verminnen K Messmer TO Volckaert G Goddeeris BM Vanrompay D

2005 Use of a nested PCR-enzyme immunoassay with an internal control to detect

Chlamydophila psittaci in turkeys BMC Infectious Diseases v 5 n 76

Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 16:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

Os psitaciacutedeos satildeo ldquoadoradosrdquo pelo seu companheirismo temperamento coloraccedilatildeo e

em particular pela sua habilidade de imitar a voz humana e satildeo ldquoodiadosrdquo pelos impactos que

causam sobre a agricultura Entre estes dois extremos eles satildeo apanhados na natureza para

suprir a demanda de aves de estimaccedilatildeo simplesmente como uma mercadoria ou ainda

exterminados como pragas nas regiotildees agriacutecolas que avanccedilam sobre seus habitats naturais

(COLLAR e JUNIPER 1992)

Estas espeacutecies sempre foram uma presenccedila comum nos lares do Brasil especialmente

nas pequenas cidades do interior como animais de companhia a despeito da legislaccedilatildeo de

fauna vigente que desde 1967 (lei ndeg 5197 de 3 de janeiro de 1967) proiacutebe a captura de

animais para comeacutercio (GOULART 2006)

Segundo a Uniatildeo Internacional para Conservaccedilatildeo da Natureza e Recursos Naturais

(IUCN) as espeacutecies A aestiva e A ararauna possuem amplo territoacuterio e satildeo espeacutecies de

baixo risco de extinccedilatildeo na lista de animais ameaccedilados entretanto haacute evidecircncias do decliacutenio

populacional o que denota sua vulnerabilidade devido ao traacutefico ilegal Estas aves foram

classificadas no anexo II do CITES (Convenccedilatildeo Internacional para o Tratado contra o Traacutefico

de Animais Silvestres) natildeo sendo portanto espeacutecies consideradas criticamente ameaccediladas

(IUCN 2008)

Embora a destruiccedilatildeo do habitat possa contribuir para a reduccedilatildeo das populaccedilotildees de

papagaios neotropicais a caccedila aos ninhos tem sido a causa principal de seu decliacutenio O

comeacutercio de papagaios tornou-se uma atividade econocircmica que ocorre devido a demanda do

comeacutercio ilegal de animais de estimaccedilatildeo Relatou-se preccedilo meacutedio de US$ 71100 para esta

espeacutecie quando comercializada nos Estados Unidos O papagaio-verdadeiro foi a espeacutecie mais

frequumlentemente negociada estimando-se que entre 1982 e 1986 aproximadamente 51000

espeacutecimes foram enviados para Argentina (BEISSINGER e BUCHER 1992)

A destruiccedilatildeo do habitat devido agrave agricultura e expansatildeo humana tem sido uma ameaccedila

ao papagaio-verdadeiro reduzindo as cavidades naturais para a nidificaccedilatildeo e disponibilidade

de alimento (COLLAR e JUNIPER 1992) No Pantanal as modificaccedilotildees no habitat satildeo em

grande parte devido ao cultivo de pasto para o gado enquanto em outras aacutereas esta destruiccedilatildeo

ocorre por causa da pressatildeo populacional da colonizaccedilatildeo e do desmatamento (GUEDES e

HARPER 1995)

Esta espeacutecie de papagaio eacute a mais capturada no mundo (BEISSINGER e BUCHER

1992) apesar disso somente alguns relatos sobre a biologia e a ecologia do A aestiva estatildeo

disponiacuteveis e satildeo restritos a poucos estudos realizados na Argentina e no Pantanal brasileiro

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

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p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 17:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

23 Clamidiose

Chlamydiaceae eacute uma famiacutelia de microrganismos intracelulares encontrados em

humanos e animais (BRANLEY et al 2008) A sistemaacutetica da Chlamydiaceae foi revista em

1999 com base nos dados da variaccedilatildeo do gene ribossomal em espeacutecies da ordem

Chlamydiales A famiacutelia Chlamydiaceae que anteriormente incluiacutea somente um gecircnero

Chlamydia foi dividida em dois gecircneros Chlamydia e Chlamydophila na nova classificaccedilatildeo

O gecircnero Chlamydophila inclui as espeacutecies Chlamydophila psittaci (anteriormente Chlamydia

psittaci) C pneumoniae (anteriormente Chlamydia pneumoniae) e C pecorum

(anteriormente Chlamydia pecorum) juntamente com C abortus C caviae e C felis que foi

separada da espeacutecie Chlamydia psittaci (YATSENTYUK e OBUKHOV 2007)

As bacteacuterias da famiacutelia Chlamydiaceae satildeo Gram negativas possuem forma cocoacuteide

com ciclo de vida que se alterna entre formas infectantes (corpuacutesculos elementares) e

vegetativas (corpuacutesculos reticulados) (CORSARO e GREUB 2006)

Chlamydophila psittaci pode infectar 465 espeacutecies de aves em 30 ordens sendo no

miacutenimo 153 espeacutecies da ordem Psittaciformes (VANROMPAY et al 2007) Esta bacteacuteria

pode tambeacutem infectar ovinos caprinos e bovinos causando infecccedilatildeo crocircnica no sistema

reprodutor insuficiecircncia placentaacuteria e aborto nesses animais mas a infecccedilatildeo humana pela

ingestatildeo da carne infectada eacute rara (MOSCHIONI et al 2001)

231 Aspectos Epidemioloacutegicos

No periacuteodo de 1988 a 2003 935 casos de psitacose em humanos foram relatados no

centro de controle e prevenccedilatildeo de doenccedilas dos EUA (United State Centers for Disease

Control and Prevention) sendo que a maioria dos casos relatou o contato com aves

psitaciformes (VANROMPAY et al 2007) Yung e Grayson (1988) afirmaram que 85 dos

casos em humanos estatildeo associados ao contato com paacutessaros

Sabe-se que pombos assim como outras aves podem ser hospedeiros de C psittaci

Nos paacutessaros a bacteacuteria pode ser isolada das fezes cloaca secreccedilotildees respiratoacuterias e

conjuntivais Heddema et al (2006) demonstraram que 5 a 10 das amostras de fezes de

pombos de Amsterdan na Holanda apresentavam C psittaci A clamidiose estaacute

constantemente presente nos paacutessaros da Eslovecircnia (DOVC et al 2007)

No passado vaacuterios surtos de clamidiose em perus nos Estados Unidos foram

alarmantes envolvendo uma ou mais granjas Provavelmente a situaccedilatildeo eacute comparaacutevel com a

da Europa onde atualmente C psittaci eacute praticamente endecircmica nas criaccedilotildees de perus da

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

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A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

Abratildeo MG Billerbeck AEC Nishi MY Marui S Mendonccedila BB 2005 Padronizaccedilatildeo da

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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Page 18:  · para aves cujo peso esteja acima de 120g (IBAMA, 2007). A pesquisa de clamidiose já é realizada no CRAS/MS ulilizando coleta de fezes dos recintos coletivos. Os materiais são

Beacutelgica Alemanha e provavelmente Franccedila Surtos com altas taxas de mortalidade ocorrem

ocasionalmente enquanto os surtos mais comuns satildeo em sua maioria caracterizados por

sintomas respiratoacuterios sem mortalidade (VAN LOOCK et al 2005)

Chlamydophila psittaci causa importantes perdas como patoacutegeno primaacuterio e tambeacutem

como infecccedilatildeo concomitante com outros patoacutegenos respiratoacuterios como o pneumoviacuterus aviaacuterio

e o Ornithobacterium rhinotracheale Aleacutem das perdas econocircmicas as infecccedilotildees humanas satildeo

rotineiramente causadas pelo manejo ou processamento de patos ou perus infectados (VAN

LOOCK et al 2005)

A incidecircncia nas aves de estimaccedilatildeo eacute alta e encontra-se descrita em 15 a 30 das aves

testadas (OGLESBEE 1998) Aves jovens dos gecircneros Amazona e Ara satildeo altamente

susceptiacuteveis agrave clamidiose aguda Existem poucos estudos sobre clamidiose no Brasil

entretanto alta soroprevalecircncia de C psittaci entre papagaios de cativeiro foi demonstrada em

trecircs criatoacuterios de aves com 60 875 e 100 dos paacutessaros soropositivos Eacute possiacutevel que

muitos casos natildeo sejam diagnosticados ou relatados (RASO et al 2002)

Raso et al (2004) descreveram um surto de psitacose em filhotes de papagaios-

verdadeiros em um centro de reabilitaccedilatildeo de animais selvagens no Estado de Satildeo Paulo

Brasil onde a taxa de mortalidade foi de 965

Gilardi et al (1995) diagnosticaram psitacose em vaacuterias espeacutecies de papagaios-

australianos selvagens Haacute muitos relatos de animais de vida livre positivos sorologicamente

para a clamidiose mas existem poucos registros sobre a mortalidade destes paacutessaros

(FRANSON e PEARSON 1995) Esses animais satildeo importantes reservatoacuterios do

microrganismo na natureza Raso et al (2006) relataram araras-azuis (Anodorhynchus

hyacinthinus) e papagaios-verdadeiros (A aestiva) de vida livre positivos na pesquisa de

clamidiose atraveacutes da detecccedilatildeo de C psittaci em swabs cloacais pelo meacutetodo de fixaccedilatildeo de

complemento e pela PCR encontrando 63 e 267 de animais positivos respectivamente

Segundo Dovc et al (2007) paacutessaros jovens satildeo mais susceptiacuteveis agrave infecccedilatildeo do que

os mais velhos e algumas espeacutecies parecem ser mais susceptiacuteveis do que outras Muitos dos

paacutessaros jovens com a doenccedila podem apresentar-se caqueacuteticos e alguns com sinusite O

periacuteodo entre a exposiccedilatildeo agrave C psittaci e o aparecimento de animais doentes pode variar de

trecircs dias a semanas entretanto a doenccedila ativa pode surgir sem exposiccedilatildeo identificaacutevel

Fatores como a espeacutecie de ave a virulecircncia e sorovare do patoacutegeno estresse idade extensatildeo

do tratamento ou profilaxia podem indicar se um paacutessaro teraacute a doenccedila aguda crocircnica ou se

viraacute a oacutebito (DOVC et al 2007)

Existem ateacute o momento oito sorovares de C psittaci e os genoacutetipos correspondentes

foram identificados (GEENS et al 2005) acarretando em importantes dados para a

epidemiologia da doenccedila nos humanos e animais Nas zoonoses foram descritos os sorovares

A C D e E sendo que o sorovare A eacute endecircmico entre os psitaciacutedeos enquanto que o

sorovare E estaacute associado com pneumonites em humanos (ANDERSEN et al 1998

EVERETT et al 1999 GEENS et al 2005)

A transmissatildeo de C psittaci entre humanos eacute rara mas o contato com paacutessaros pode

resultar em uma alta taxa de infectividade O contaacutegio ocorre atraveacutes da inalaccedilatildeo de secreccedilotildees

e fezes de aves ou atraveacutes do contato com um paacutessaro infectado A probabilidade de infecccedilatildeo

eacute presumidamente relatada devido agrave exposiccedilatildeo a uma grande quantidade de organismos mas

o sorotipo da clamidiose tambeacutem pode ser um fator importante (BRANLEY et al 2008)

Natildeo eacute conhecido se os psitaciformes satildeo mais suscetiacuteveis agrave clamidiose do que outras

espeacutecies de paacutessaros Sabe-se que a doenccedila eacute diagnosticada mais frequumlentemente nos

psitaciformes devido aos graves sinais cliacutenicos No entanto quando comparados dados de

clamidiose nesta aves e nos pombos a prevalecircncia parece ser semelhante entre 16 a 81 e 23

a 85 respectivamente (HARKINEZHAD et al 2007)

Os pombos em sua maioria satildeo infectados pelo sorovare B e menos frequumlentemente

pelo sorovare E e a clamidiose apresenta-se menos severa nestes paacutessaros ocorrendo

mortalidade devido agraves infecccedilotildees secundaacuterias como salmonelose e tricomoniacutease De fato o

quadro cliacutenico geral em uma dada espeacutecie eacute o resultado da virulecircncia do microrganismo e da

imunogeneacutetica do hospedeiro (HARKINEZHAD et al 2007)

Existe pouco conhecimento sobre a imunogeneacutetica dos psitaciformes mas C psittaci

sorovare A eacute frequumlentemente isolado nestas aves e este sorovare eacute altamente virulento

excretado intensivamente e responsaacutevel por alta mortalidade Estas questotildees podem ser

provavelmente resolvidas quando a imunogeneacutetica do hospedeiro for mais conhecida bem

como as interaccedilotildees bacteacuteria-hospedeiro e fatores de virulecircncia bacteriana (HARKINEZHAD

et al 2007)

232 Patogecircnese

Os corpos elementares extracelulares infecciosos satildeo eliminados nas secreccedilotildees orais

eou nasais e nas fezes podendo sobreviver no ambiente um mecircs ou mais (OGLESBEE

1998) Raso et al (2006) demonstraram que filhotes de araras-azuis e papagaios-verdadeiros

de vida livre eliminam C psittaci pelas vias traqueais e cloacais no entanto o microrganismo

foi mais encontrado nas amostras cloacais

As fezes secreccedilotildees e poeira das penas satildeo frequumlentes fontes de transmissatildeo podendo

se dispersar atraveacutes do ar quando estatildeo secas Outros paacutessaros podem se infectar pela inalaccedilatildeo

ou ingestatildeo dessas fontes de infecccedilatildeo (SAREYYUPOGLU et al 2007) Os corpos

elementares satildeo inalados ou ingeridos e entram nas ceacutelulas hospedeiras onde sofrem um

rearranjo celular para formar corpos reticulados (a forma replicante do microrganismo) Apoacutes

a replicaccedilatildeo os corpos iniciais se reorganizam para formar corpos elementares infecciosos

que satildeo liberados com a ruptura da ceacutelula hospedeira Os corpos estranhos podem entatildeo se

disseminar para as ceacutelulas hepaacuteticas esplecircnicas pulmonares intestinais renais gonadais e do

sistema nervoso central (OGLESBEE 1998)

A psitacose pode persistir como uma infecccedilatildeo subcliacutenica por longo periacuteodo Haacute

evidecircncias que periacuteodos de verdadeira latecircncia (isto eacute sem multiplicaccedilatildeo) tambeacutem possam

ocorrer Muitos paacutessaros especialmente os psittaculas lovebirds periquitos-australianos e

calopsitas permanecem infectados sem sintomatologia Essas aves reservatoacuterios

aparentemente sadias podem eliminar grande quantidade de patoacutegeno durante periacuteodos de

estresse (SAREYYUPOGLU et al 2007) como fome superlotaccedilatildeo transporte e maus tratos

(MOSCHIONI et al 2001)

Deste modo paacutessaros receacutem-adquiridos satildeo importantes hospedeiros da infecccedilatildeo pois

a enfermidade nessas aves pode ser induzida por estas situaccedilotildees Se natildeo tratadas 10 das

aves infectadas tornam-se portadoras assintomaacuteticas (MOSCHIONI et al 2001) Muitos

fatores como a espeacutecie idade estresse e resistecircncia das aves ao hospedeiro podem contribuir

para converter a forma latente da clamidiose para a septicecircmica (SUWA et al 1990)

O controle da clamidiose eacute um desafio para os hospedeiros devido agrave infecccedilatildeo

extracelular distinta e as fases de desenvolvimento intracelular vegetativa (SPRAGUE et al

2008) Infecccedilotildees em psitaciacutedeos e aves domesticadas que podem causar consideraacuteveis danos

econocircmicos representam um importante reservatoacuterio na transmissatildeo para humanos O

patoacutegeno eacute transmitido tanto por animais com sintomatologia cliacutenica como por animais

assintomaacuteticos (GAEDE et al 2008) A transmissatildeo entre humanos eacute extremamente rara e

tende a ser mais grave (MOSCHIONI et al 2001)

A transmissatildeo de C Psittaci para os ovos tem sido demonstrada em frangos patos

gaivotas e tambeacutem em psitaciacutedeos A presenccedila de C psittaci na mucosa do oviduto e saco

viteliacutenico de embriotildees de periquitos-australianos jaacute foi confirmada e a morte embrionaacuteria foi

demonstrada em 679 dos ovos (DOVC et al 2007)

233 Aspectos Cliacutenicos

Os sinais cliacutenicos variam muito e dependem do sorovare de C psittaci da espeacutecie e

idade da ave A clamidiose aviaacuteria pode produzir letargia hipertermia excreccedilotildees anormais

descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo Segundo Van Loock et al (2005) as taxas

de mortalidade podem chegar a 30 Harkinezhad et al (2007) relataram os seguintes sinais

cliacutenicos de clamidiose em papagaios-cinzento-africanos depressatildeo penas ericcediladas baixo

peso e leve dispneacuteia Osglebee (1998) descreve como sinais especiacuteficos ericcedilamento das

penas perda de peso e depressatildeo

Em um surto no Estado de Satildeo Paulo (Brasil) as aves apresentaram sintomas

semelhantes aos encontrados por Harkinezhad et al (2007) seguido apoacutes alguns dias de

conjuntivite e blefarite bilateral mucopurulenta ou secreccedilatildeo nasal A taxa de letalidade foi de

965 na espeacutecie A aestiva (RASO et al 2004)

Muitos dos paacutessaros carregam a infecccedilatildeo crocircnica e natildeo apresentam sinais cliacutenicos ateacute

passarem por algum tipo de estresse Estas aves frequumlentemente eliminam C psittaci

intermitentemente servindo como fonte de infecccedilatildeo aos humanos e outros paacutessaros

(HARKINEZHAD et al 2007) Na forma crocircnica os sinais especiacuteficos (como emaciaccedilatildeo

muscular e alteraccedilotildees em empenamento) podem ser os uacutenicos observados Ocasionalmente

podem-se observar sinais respiratoacuterios gastrointestinais ou do sistema nervoso como por

exemplo torcicolo ataques convulsivos e paralisia do membro posterior (OGLESBEE

1998)

Segundo Suwa et al (1990) na infecccedilatildeo aparente os paacutessaros apresentam inatividade

inapetecircncia e emaciaccedilatildeo aleacutem dos sinais cliacutenicos jaacute citados Em alguns casos pode aparecer

serosite abdominal hepatomegalia esplenomegalia e pneumonia mas estes natildeo satildeo sinais

cliacutenicos especiacuteficos para a confirmaccedilatildeo do diagnoacutestico (SUWA et al 1990)

Num surto de psitacose em periquitos-australianos Dovc et al (2007) relataram as

mesmas alteraccedilotildees seguidas de enterite catarral a hemorraacutegica e sinusite serohemorraacutegica

observando mais alteraccedilotildees nas aves jovens do que nas adultas Esplenomegalia eacute

frequumlentemente relatada como um achado comum na doenccedila entretanto aerosaculite

fibrinosa eacute mais indicativa da enfermidade em psitaciformes e pombas (GERLACH 1994)

Histologicamente satildeo observadas lesotildees de pneumonia aerosaculite traqueiacutete

hepatite miocardite esplenite nefrite orquite enterite ceratoconjutivite e encefalite Estas

lesotildees satildeo associadas com os corpuacutesculos elementares (CE) (SUWA et al 1990) Entretanto

achados histopatoloacutegicos satildeo geralmente inespeciacuteficos exceto pela presenccedila de corpuacutesculos

LCL (Levinthal-Colles-Lillie) que satildeo patognomocircnicos Estes corpuacutesculos satildeo muacuteltiplas

micro-colocircnias de Chlamydophila spp sendo esfeacutericos e medindo de 02 a 04 microm de

diacircmetro Os LCLs podem ocorrer em vaacuterios oacutergatildeos mas satildeo especialmente comuns em

membranas serosas Infecccedilotildees secundaacuterias bacterianas fuacutengicas ou virais podem alterar as

lesotildees e confundir o diagnoacutestico (GERLACH 1994)

A psitacose nos seres humanos eacute considerada uma doenccedila rara mas extremamente

grave caracterizada por sintomas semelhantes aos causados por influenzas nos estaacutegios

iniciais tais como dor de cabeccedila febre e anorexia Tosse seca e os outros sintomas de

pneumonia atiacutepica tornam-se aparentes apoacutes a primeira semana de aparecimento da doenccedila

Com a progressatildeo da infecccedilatildeo podem ocorrer alteraccedilotildees cardiovasculares Na ausecircncia de

antibioticoterapia a infecccedilatildeo pode se tornar fatal Pessoas que manipulam paacutessaros devido agrave

atividade profissional ou por lazer fazem parte do grupo de risco devido principalmente agrave

inalaccedilatildeo de aerossoacuteis contendo o patoacutegeno (GAEDE et al 2008)

234 Diagnoacutestico

O diagnoacutestico de clamidiose ainda representa um desafio sendo baseado no

isolamento do microrganismo na pesquisa de antiacutegenos na sorologia ou na detecccedilatildeo de

aacutecidos nucleacuteicos clamidiais (KALTENBOECK et al 1991 SPRAGUE et al 2008)

Esfregaccedilos de secreccedilotildees nasais ou oculares podem ser corados pela coloraccedilatildeo de Stam

Giemsa Gimenez Macchiavellorsquos ou Castantildeeda ideais para evidenciar a presenccedila de

corpuacutesculos LCL patognomocircnicos para a doenccedila O exame histopatoloacutegico revela

principalmente no baccedilo e no fiacutegado a presenccedila destes corpuacutesculos Quando haacute lesatildeo no

sistema nervoso central o exame histopatoloacutegico revela meningite O exame radiograacutefico

mostrando esplenomegalia ou hepatomegalia pode ser sugestivo de psitacose em paacutessaros

(GERLACH 1994)

Os testes imunoenzimaacuteticos (ELISA) satildeo uacuteteiscomo exame de triagem ou apoacutes a

doenccedila declarada Evidecircncias conclusivas da presenccedila de clamidiose satildeo requeridas para

diagnoacutesticos inequiacutevocos devido agrave preponderacircncia da infecccedilatildeo persistente e clinicamente

inaparente O isolamento em cultura celular eacute difiacutecil e depende da presenccedila de quantidade

suficiente de corpuacutesculos elementares viaacuteveis Portanto meacutetodos sensiacuteveis para a detecccedilatildeo de

clamidiose que natildeo sejam fundamentados na infectividade satildeo necessaacuterios para identificar C

psittaci especialmente em infecccedilotildees persistentes (KALTENBOECK et al 1991)

Em humanos o meacutetodo de fixaccedilatildeo de complemento eacute o mais aplicado pois os

anticorpos podem ser detectados de 7 a 10 dias apoacutes a infecccedilatildeo inicial Entretanto este teste

natildeo consegue distinguir anticorpos especiacuteficos contra C psittaci de outras clamiacutedias

patoacutegenas como C pneumoniae e Chlamydia trachomatis Por isso o exame de fixaccedilatildeo de

complemento estaacute sendo frequumlentemente substituiacutedo pelo teste de imunofluorescecircncia

(GEENS et al 2005)

Em contraste agrave cultura celular e aos outros meacutetodos soroloacutegicos a imunofluorescecircncia

e a PCR provecircm como diagnoacutesticos alternativos mais raacutepidos especiacuteficos e sensiacuteveis para

identificaccedilatildeo da infecccedilatildeo por C psittaci (VAN LOOCK et al 2005)

O teste de imunofluorescecircncia distingue todas as espeacutecies de clamidias e mede os

tiacutetulos de IgG e IgM permitindo a detecccedilatildeo de infecccedilotildees recentes Contudo a

antibioticoterapia pode interferir na produccedilatildeo de anticorpos e em alguns pacientes a resposta

humoral pode ser mais lenta Foram desenvolvidos vaacuterios meacutetodos comerciais de detecccedilatildeo de

antiacutegenos para ambos aves e humanos mas eles satildeo menos sensiacuteveis ou menos especiacuteficos

Devido a estas falhas meacutetodos de amplificaccedilatildeo de aacutecidos nucleacuteicos tecircm sido desenvolvidos

(GEENS et al 2005)

A PCR tem sido documentada como um meacutetodo altamente sensiacutevel para a detecccedilatildeo de

C psittaci A teacutecnica oferece vantagens sobre outros testes eacute mais raacutepida e natildeo requer

organismos presentes em grande nuacutemero ou organismos viaacuteveis (SAREYYUPOGLU et al

2007) Para um diagnoacutestico preciso Harkinezhad et al (2007) tambeacutem recomendam o teste de

amplificaccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos em animais e humanos que detecta especificamente C

psittaci com alta sensibilidade e permite a caracterizaccedilatildeo molecular

24 Hematologia em Aves

Os sinais cliacutenicos apresentados pelas aves satildeo frequumlentemente inespeciacuteficos e as

informaccedilotildees obtidas pelo exame fiacutesico satildeo limitadas (LUMEIJ 1997) Os exames

laboratoriais por sua vez auxiliam no diagnoacutestico acompanhamento e prognoacutestico das

patologias existentes (SCHMIDT et al 2007)

O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo entretanto nas aves sua realizaccedilatildeo

fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave variaccedilatildeo da morfologia celular (SCHMIDT et al

2007) Segundo VALLE et al (2008) esta escassez de dados cliacutenicos epidemioloacutegicos e

exames complementares limita o diagnoacutestico de doenccedilas metaboacutelicas eou nutricionais em

espeacutecies em cativeiro

O volume total do sangue das aves corresponde a 10 do peso corpoacutereo A quantidade

maacutexima de sangue que se pode coletar das aves corresponde a 10 do seu volume sanguiacuteneo

total Portanto em um papagaio com peso de 400 gramas podem ser coletados no maacuteximo

quatro mililitros de sangue (PHILIPS 1999) Os principais locais de coleta de sangue satildeo

veia jugular veia ulnar veia metataacutersica medial seio venoso occipital e punccedilatildeo cardiacuteaca

(SCHMIDT et al 2007)

As aves possuem algumas particularidades que alteram o exame de sangue em relaccedilatildeo

aos padrotildees dos mamiacuteferos As ceacutelulas sanguumliacuteneas das aves satildeo 1) gloacutebulos vermelhos

eritroacutecitos 2) gloacutebulos brancos heteroacutefilos basoacutefilos eosinoacutefilos linfoacutecitos e monoacutecitos 3)

tromboacutecitos (BENEZ 2004)

Os eritroacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas e biconvexas com formato variando de oval a

oblongo (BENEZ 2004) O tamanho dos eritroacutecitos varia muito conforme a espeacutecie estudada

Em um grupo de psitaciacutedeos adultos e saudaacuteveis os valores do volume corpuscular meacutedio

(VCM) variavam de 116 a 219 fL (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os heteroacutefilos representam nas aves as ceacutelulas equivalentes aos neutroacutefilos dos

mamiacuteferos Em muitas espeacutecies como nos papagaios os heteroacutefilos satildeo o tipo predominante

de leucoacutecito (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Essas ceacutelulas realizam fagocitose

e aparecem no iniacutecio do processo inflamatoacuterio (BENEZ 2004) Apesar disso Mitchell e

Johns (2008) afirmam que algumas espeacutecies de aves satildeo normalmente linfociacuteticas com os

linfoacutecitos representando mais de 70 dos leucoacutecitos Exemplos de espeacutecies linfociacuteticas

incluem os papagaios do novo mundo e os canaacuterios (MITCHELL e JOHNS 2008)

Os eosinoacutefilos satildeo diferenciados dos heteroacutefilos principalmente em funccedilatildeo da forma

de seus gracircnulos que satildeo esfeacutericos (GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994) Benez

(2004) relata que haacute eosinofilia em infestaccedilotildees por parasitas e processos aleacutergicos

Contrariamente Philips (1999) afirma que ainda natildeo se conhece com clareza a funccedilatildeo dos

eosinoacutefilos nos psitaciacutedeos natildeo ocorrendo aumento destas ceacutelulas devido agrave presenccedila de

parasitas como eacute encontrado nos mamiacuteferos Esse tipo celular eacute raramente visto no sangue

perifeacuterico de psitaciacutedeos entretanto podem ser comuns em outros paacutessaros (PHILIPS 1999)

Os basoacutefilos satildeo semelhantes aos dos mamiacuteferos e nos papagaios apresentam gracircnulos

grandes que recobrem parte do nuacutecleo (BENEZ 2004) Natildeo satildeo ceacutelulas comumente

visualizadas em esfregaccedilos sanguumliacuteneos de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999)

Os linfoacutecitos em algumas espeacutecies de psitaciacutedeos (Amazona eclectus por exemplo)

satildeo os leucoacutecitos mais abundantes na circulaccedilatildeo perifeacuterica Essas ceacutelulas podem estar

presentes em trecircs diferentes grupos de acordo com o tamanho pequenos meacutedios e grandes

linfoacutecitos Os monoacutecitos satildeo ceacutelulas mononucleares sendo menos visualizadas do que os

linfoacutecitos em sangue de psitaciacutedeos (PHILIPS 1999) Normalmente satildeo maiores do que os

linfoacutecitos e apresentam citoplasma mais volumoso que se cora em azul-claro (GARCIA-

NAVARRO e PACHALY 1994)

Os tromboacutecitos satildeo ceacutelulas nucleadas homoacutelogas agraves plaquetas dos mamiacuteferos que

participam do mecanismo de coagulaccedilatildeo sanguiacutenea e apresentam atividade fagocitaacuteria Sua

forma tiacutepica eacute oval com um nuacutecleo redondo central circundado por citoplasma claro

(GARCIA-NAVARRO e PACHALY 1994)

O volume globular (VG) pode ser facilmente obtido atraveacutes da centrifugaccedilatildeo de tubos

capilares preenchidos de sangue As contagens de hemaacutecias e leucoacutecitos satildeo realizadas

utilizando a soluccedilatildeo de Natt e Herrick (NATT e HERRICK 1952)

A concentraccedilatildeo de proteiacutenas plasmaacuteticas totais (PPT) reflete um equiliacutebrio entre as

concentraccedilotildees extra e intravascular de proteiacutenas As funccedilotildees fisioloacutegicas da PPT incluem

fonte de aminoaacutecidos aos tecidos manutenccedilatildeo da pressatildeo oncoacutetica regulaccedilatildeo do equiliacutebrio-

aacutecido-baacutesico transporte de moleacuteculas hemostasia resposta inflamatoacuteria e resistecircncia agraves

infecccedilotildees (THOMAS 2000) As avaliaccedilotildees dos teores de PPT e de suas fraccedilotildees propiciam

subsiacutedios para adequada interpretaccedilatildeo do estado de hidrataccedilatildeo bem como de inflamaccedilatildeo

infecccedilatildeo doenccedila imunomediada e alteraccedilatildeo na siacutentese proteacuteica (SANTANA et al 2008)

A desidrataccedilatildeo pode causar hiperproteinemia relativa enquanto hemorragia externa

pode causar hipoproteinemia absoluta Os distuacuterbios inflamatoacuterios tecircm significante efeito

sobre os niacuteveis de PPT As proteiacutenas plasmaacuteticas satildeo um importante constituinte

complementar no diagnoacutestico de doenccedilas hepaacuteticas gastrintestinais renais eou doenccedilas

infecciosas A determinaccedilatildeo das proteiacutenas plasmaacuteticas raramente conduz a um diagnoacutestico

especiacutefico mas auxilia o cliacutenico na avaliaccedilatildeo da natureza severidade e progressatildeo da doenccedila

(LUMEIJ 1997)

Em relaccedilatildeo ao meacutetodo de dosagem das proteiacutenas plasmaacuteticas haacute discordacircncia na

literatura Para alguns autores o meacutetodo do biureto eacute o ideal (CAMPBEL 2004) no entanto

estudos realizados em frangos perus e patos revelaram uma boa correlaccedilatildeo entre o meacutetodo do

refratocircmetro e do biureto (ANDERSON 1989)

Os eritroacutecitos das aves possuem meia-vida curta em comparaccedilatildeo aos de muitos

mamiacuteferos aproximadamente entre 25 a 45 dias em vaacuterias espeacutecies Devido agrave troca dos

eritroacutecitos ser mais raacutepida os paacutessaros tendem a apresentar mais policromatofilia em animais

saudaacuteveis do que os mamiacuteferos (MITCHELL e JOHNS 2008)

Parasitos sanguiacuteneos satildeo encontrados esporadicamente em paacutessaros Usualmente seu

significado cliacutenico eacute mais acadecircmico do que danoso Sob algumas circunstacircncias entretanto

as aves desenvolvem uma moderada agrave severa anemia e podem exarcebar uma condiccedilatildeo

patoloacutegica de etiologia diferente Alguns gecircneros como Plasmodium e Haemoproteus satildeo

relativamente faacuteceis de serem identificados outros como Babesia Aegyptianella e Rickettsia-

like satildeo facilmente confundidos com inclusotildees de origem diferente (PENDL 2006)

O Trypanosoma avium tambeacutem tem sido descrito desde 1885 quando Danielwsky

registrou a primeira ocorrecircncia deste parasito em aves na Europa (PIERCE 1989) Apesar de

outros membros do gecircnero serem conhecidos como causadores de patologias no homem e

animais ainda existem poucas evidecircncias sobre a patogenicidade destes parasitos em aves

(BAKER 1976)

Os principais insetos relacionados com o ciclo das hemoparasitoses satildeo os diacutepteros

ornitofiacutelicos Destes destacam-se a famiacutelia Simuliidae os Ceratopogonidae em especial o

gecircnero Culicoides relacionados com os parasitos Haemoproteidae a famiacutelia Hippoboscidae

com destaque para a mosca Pseudolynchia canariensis tambeacutem relacionados aos parasitos

Haemoproteidae a famiacutelia Culicidae no qual os gecircneros Anopheles Culex e Aedes se

destacam na transmissatildeo dos parasitos Plasmodiidae (GARNHAM 1966 RESENDE et al

2001)

No Brasil estes levantamentos de parasitos sanguumliacuteneos satildeo escassos Existem alguns

estudos sobre a avifauna selvagem da mata atlacircntica em populaccedilotildees de aves urbanas como a

pomba-domeacutestica (Columba livia domestica) e alguns relatos isolados de caso (RESENDE et

al 2001) Natildeo existe no Brasil estudo amplo estimando a prevalecircncia das hemoparasitemias

por bioacutetopos e biomas e portanto ainda natildeo eacute possiacutevel tecer um perfil do estado

hemoparasitaacuterio das aves brasileiras (GOULART 2006)

241 Hematologia e clamidiose

Embora a utilizaccedilatildeo de exames laboratoriais para complementar o diagnoacutestico

apresente uma limitada aplicabilidade para aves individuais (OGLESBEE 1998) o

conhecimento das alteraccedilotildees hematoloacutegicas e bioquiacutemicas de aves em cativeiro pode servir

como modelo para o estudo das respostas dos animais na natureza frente a um determinado

desafio bem como facilitar o diagnoacutestico de enfermidades Na maioria das vezes as doenccedilas

de animais cativos satildeo comparaacuteveis agravequelas observadas em vida livre e portanto

determinados programas de conservaccedilatildeo ambiental podem ser beneficiados com esses dados

(MUNSON amp COOK 1993 POLO et al 1998)

A anaacutelise hematoloacutegica de paacutessaros com psitacose segundo Benez (2004) pode

apresentar alteraccedilotildees como basofilia Apesar disso Lamberski (2003) descreve que estes

animais podem apresentar leucocitose caracterizada por heterofilia e linfocitose jaacute Oglesbee

(1998) relata que a leucocitose pode ser maior do que 40 x 109L ocorrendo tambeacutem

heterofilia com desvio agrave esquerda heteroacutefilos toacutexicos e frequumlentemente monocitose relativa

Nos casos subcliacutenicos a contagem leucociacutetica pode permanecer normal (OGLESBEE 1998)

Mitchell e Johns (2008) tambeacutem relatam que a infecccedilatildeo por C psittaci pode levar agrave

heterofilia sendo que outros agentes infecciosos que podem acarretar na mesma alteraccedilatildeo satildeo

Mycobacterium spp e Aspergillus spp Geralmente a heterofilia associada a estas infecccedilotildees eacute

acompanhada pela monocitose (MITCHELL e JOHNS 2008)

Heterofilia com granulaccedilotildees toacutexicas pode ser indicativa de doenccedila severa sistecircmica

como septicemias clamidiose infecccedilatildeo fuacutengica ou viremia O desenvolvimento de toxicidade

em heteroacutefilos pode indicar descontrole de um processo infeccioso e frequumlentemente leva a

um mau prognoacutestico Paacutessaros com clamidiose frequumlentemente desenvolvem monocitose

devido agrave produccedilatildeo de agentes quimiotaacuteticos que atraem os monoacutecitos mas esta alteraccedilatildeo

tambeacutem eacute frequumlentemente vista em outras doenccedilas inflamatoacuterias ou infecciosas especialmente

nas doenccedilas granulomatosas como aspergilose ou micobacteriose (MITCHELL e JOHNS

2008)

As modificaccedilotildees hematoloacutegicas tiacutepicas relacionadas com a febre do papagaio

sintomaacutetica estatildeo descritas por Gerlach (1994) na Tabela 1 Um hematoacutecrito baixo eacute comum

tanto na doenccedila aguda quanto na crocircnica A proteiacutena seacuterica geralmente eleva-se como

resultado de estiacutemulo inflamatoacuterio crocircnico (GERLACH 1994)

Tabela 1 Achados cliacutenico-patoloacutegicos associados com Clamidiose Paracircmetros Alteraccedilotildees Leucograma total Elevado (2 ndash 3 vezes o valor normal) Volume Globular Diminuiacutedo (20 ndash 30) Heteroacutefilos Normal Linfoacutecitos Diminuiacutedo agrave normal Monoacutecitos Normal Eosinoacutefilos Normal Basoacutefilos Normal Proteiacutena total Leve aumento Fonte Gerlach (1994) modificado

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ARTIGO

PREVALEcircNCIA DE Chlamydophila sp E QUADRO HEMATOLOacuteGICO DE Ara

ararauna E Amazona aestiva EM CENTRO DE REABILITACcedilAtildeO DE ANIMAIS

SILVESTRES EM CAMPO GRANDEMS

Ono TM Carrijo AS Arauacutejo FR Ramos CA Cavalcanti AR Tavares LE

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci tem sido frequumlentemente

diagnosticada nos psitaciacutedeos sendo uma enfermidade relatada em vaacuterios paiacuteses em animais

domeacutesticos e silvestres naturalmente infectados Os objetivos deste trabalho foram verificar a

prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

GrandeMS e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade Foram

avaliadas 75 aves das espeacutecies Ara ararauna (n=27) e Amazona aestiva (n=48) sendo realizados os

seguintes procedimentos exame cliacutenico coleta de sangue e swabs cloacais e afericcedilatildeo do peso

corpoacutereo O diagnoacutestico de clamidiose foi obtido atraveacutes da reaccedilatildeo em cadeia da polimerase

analisando os swabs cloacais As aves foram divididas em dois grupos positivos e negativos para

clamidiose calculando-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada variaacutevel estudada Chlamydophila sp foi

encontrada nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS sendo que a prevalecircncia em A ararauna

foi de 5556 e em A aestiva 3542 Esta enfermidade foi associada agrave reduccedilatildeo das taxas de volume

globular e peso corpoacutereo na espeacutecie A ararauna Na espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas

diferenccedilas entre os animais positivos e negativos para clamidiose nas condiccedilotildees estudadas Nos

psitaciacutedeos com clamidiose podem-se observar os seguintes sinais cliacutenicos diarreacuteia apatia anorexia

musculatura peitoral diminuiacuteda e problemas no empenamento A presenccedila de Chlamydophila sp nas

espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e

sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo

Grande Mato Grosso do Sul

Palavras-chave clamidiose hematologia papagaio-verdadeiro arara-canindeacute

Prevalence of Chlamydophila sp and hematology of Ara ararauna and Amazona aestiva in wild

animals rehabilitation center in Campo GrandeMS

Abstract

Bird chlamydiosis caused by Chlamydophila psittaci is frequently diagnosed in psittacines being a

disease related in several countries in household and wild animals naturally infected The objectives

of this work were to verify the prevalence of chlamydiosis in psittacines in rehabilitation at the Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres - CRASMS (Wild Animals Rehabilitation Center) in the city

of Campo Grande state of Mato Grosso do Sul Brazil and point out the possible hematologycal

disorders associated with this disease A number of 75 birds of the Ara ararauna (n=27) and of the

Amazona aestiva species (n=48) were evaluated The following procedures were made in these birds

clinical exanination blood collection and cloacal swabs and weight analysis The diagnosis of

psittacosis was obtained by polymerase chain reaction analising the cloacal swabs The animals were

divided in two groups positives and negatives by chlamydiosis calculating the average and standard

derivation to each variable studied Chlamydophila sp was find in the two species of psittacines of

CRASMS being that the prevalence in A ararauna was of 55 56 and in A aestiva This disease

was associated with the reduction of packed cell volume and body weight in the A ararauna In the A

aestiva specie there were no differences observed between the positive and negative birds

to chlamydiosis in the studied conditions In the psittacines with chlamydiosis the following clinical

signs were observed diarrhea weakness anorexia chest muscle decrease and alterations in plumage

The presence of the Chlamydophila sp in the Ara ararauna and Amazona aestiva species indicate the

existence of asymptomatic and symptomatic birds at the CRASMS

Keywords chlamydiosis hematology blue-fronted-parrot blue-and-yellow macaws

Introduccedilatildeo

A ordem Psittaciforme inclui trecircs famiacutelias de paacutessaros Loridae Cacatuidae e

Psittacidae Os psitaciacutedeos estatildeo distribuiacutedos por todo o mundo principalmente em regiotildees

tropicais Algumas espeacutecies se estendem ateacute regiotildees temperadas do sul mas poucas se

estendem ateacute regiotildees temperadas do norte (Lamberski 2003)

A clamidiose aviaacuteria causada pela bacteacuteria Chlamydophila psittaci (C psittaci)

anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci tem sido uma importante doenccedila

frequumlentemente diagnosticada nos psitaciacutedeos Trata-se de uma bacteacuteria obrigatoriamente

intracelular transmitida das aves para os humanos (Dovc et al 2007)

A psitacose tambeacutem conhecida como ornitose clamidiose ou febre do papagaio tem

sido um problema agrave sauacutede puacuteblica como zoonose e precauccedilotildees devem ser tomadas quando

houver o manuseio de paacutessaros infectados ou material contaminado Esta doenccedila ocorre em

todo o mundo com sua incidecircncia e distribuiccedilatildeo variando amplamente dependendo da espeacutecie

de paacutessaro e do sorotipo do organismo clamidial (Van Loock et al 2005)

Aves jovens dos gecircneros Ara e Amazona satildeo altamente susceptiacuteveis agrave clamidiose

aguda (Raso et al 2004) Os sinais cliacutenicos da clamidiose aviaacuteria variam muito e dependem da

espeacutecie idade da ave e do sorovare de C psittaci A enfermidade pode produzir letargia

hipertermia excreccedilotildees anormais descarga nasal e ocular e diminuiccedilatildeo da reproduccedilatildeo (Van

Loock et al 2005)

Os estudos dos paracircmetros hematoloacutegicos e bioquiacutemicos satildeo essenciais para contribuir

com o progresso da medicina aviaacuteria Com a realizaccedilatildeo de levantamentos que permitam a

interpretaccedilatildeo adequada das respostas do organismo e do acompanhamento de casos cliacutenicos

possiacuteveis adoccedilotildees de medidas visando uma melhora no diagnoacutestico e na produccedilatildeo industrial

podem ser aplicadas O hemograma eacute um exame raacutepido e de baixo custo poreacutem em se

tratando de aves sua realizaccedilatildeo fica limitada agrave escassa literatura existente e agrave grande variaccedilatildeo

da morfologia celular (Schmidt et al 2007)

Os objetivos deste trabalho foram verificar a prevalecircncia de clamidiose nos psitaciacutedeos

em reabilitaccedilatildeo no Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres (CRASMS) no municiacutepio de

Campo Grande Estado de Mato Grosso do Sul e apontar as possiacuteveis alteraccedilotildees

hematoloacutegicas associadas a esta enfermidade

Material e Meacutetodos

Foram utilizadas 75 aves adultas das espeacutecies A ararauna (n=27) e A aestiva (n=48)

mantidas no CRASMS Brasil O CRASMS localiza-se dentro da Unidade de

Conservaccedilatildeo Parque Estadual do Prosa que dispotildee de 137 hectares e abriga mais de 200

espeacutecies de animais da fauna nativa e introduzida O manuseio dos animais foi autorizado

pelo IBAMA pelo Instituto de Meio Ambiente do Mato Grosso do Sul atraveacutes das licenccedilas

de nuacutemeros 13499-1 e 022008 respectivamente (Anexo 1 e 2)

O manejo alimentar consistiu de triturado composto de cenoura beterraba raccedilatildeo

canina e gratildeo de milho com adiccedilatildeo de frutas como maccedilatilde banana laranja goiaba mamatildeo e

melatildeo e sementes de oleaginosas tais como amendoim e girassol fornecidos duas vezes ao

dia

Os psitaciacutedeos foram manejados durante o periacuteodo de maio a setembro de 2008 sendo

contidos com puccedilaacute e posteriormente manipulados apenas por contenccedilatildeo manual Os olhos

foram vedados para reduzir o estresse da manipulaccedilatildeo As aves possuiacuteam anilhas com

numeraccedilatildeo individual no peacute direito e os dados de cada ave foram anotados em fichas cliacutenicas

individuais (Anexo 3) O swab cloacal de cada animal foi obtido com swabs esteacutereis que

tiveram parte da haste cortada para acondicionamento em tubos de polipropileno esteacutereis de 2

mL Por uacuteltimo procedeu-se a afericcedilatildeo do peso

Foi coletado 10 mL de sangue atraveacutes da veia ulnar ou jugular apoacutes anti-sepsia com

etanol 70ordmGL utilizando-se seringa de 3 mL e agulha 20 x 55 descartaacuteveis com adiccedilatildeo

preacutevia de EDTA 10 (lavagem interna da seringa) para evitar a coagulaccedilatildeo imediata O

sangue foi acondicionado em tubos para microcentrifugaccedilatildeo contendo 20 microL de EDTA

soacutedico a 10 homogeneizado e refrigerado (4 C) ateacute o momento de seu processamento

laboratorial que variou de 2 a 4 horas Foi realizada compressatildeo com algodatildeo no local de

venipunccedilatildeo ateacute a completa coagulaccedilatildeo sanguiacutenea administrando-se polissulfato de

mucopolissacariacutedeo por via toacutepica para evitar a formaccedilatildeo de hematomas

Hematologia

Dois esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram realizados em ateacute duas horas da coleta de sangue e

posteriormente corados utilizando um conjunto de reativo panoacutetico raacutepido comercial1 Depois

de lavada e seca em temperatura ambiente os esfregaccedilos sanguumliacuteneos foram examinados sob

microscopia oacuteptica convencional (imersatildeo 1000x) sendo contadas 100 ceacutelulas seguindo a

teacutecnica de ziguezague de Shilling

A determinaccedilatildeo do volume globular (VG) foi realizada pelo meacutetodo do

microhematoacutecrito Para a contagem de eritroacutecitos e leucoacutecitos utilizou-se a mesma teacutecnica de

contagem manual descrita para mamiacuteferos (pipeta de Thomas) poreacutem substituindo-se o

liacutequido de Gower pela soluccedilatildeo de Natt e Herrick utilizando-se diluiccedilotildees de 1200 e 120

respectivamente (Natt e Herrick 1952 Jain 1993 Benez 2004)

As contagens globulares foram realizadas em cacircmara de Neubauer Paras as hemaacutecias

somaram-se as ceacutelulas de cinco quadrados da aacuterea central (quadrados meacutedios) sendo o valor

total de hemaacutecias multiplicado por 10000 Contaram-se os leucoacutecitos de quatro quadrados

grandes localizados nos extremos da cacircmara multiplicando-se o valor total por 50 Os

caacutelculos do Volume Corpuscular Meacutedio (VCM) foram realizados conforme o meacutetodo de

Wintrobe A determinaccedilatildeo da Proteiacutena Plasmaacutetica Total (PPT) foi realizada pelo meacutetodo

refratomeacutetrico utilizando-se refratocircmetro manual (ATAGO Japan) previamente calibrado

(Garcia-Navarro e Pachaly 1994 Benez 2004)

Extraccedilatildeo de DNA genocircmico e amplificaccedilatildeo dos fragmentos de genes

Para a extraccedilatildeo do DNA genocircmico as amostras de swabs cloacais foram mantidas

congeladas ateacute o seu processamento (7 a 90 dias) Para extraccedilatildeo de DNA total presente nos

swabs cloacais utilizou-se a teacutecnica de Abratildeo et al (2005) Aos tubos de polipropileno foram

adicionados 200 microL de TES (Tris HCl 10mM pH 76 EDTA 1mM SDS 06) e 5microL de

proteinase K (10mgml) e incubados por 2h a 42degC Apoacutes a incubaccedilatildeo retirou-se o swab e

adicionou-se 42microL de NaCl saturado (6 M) agitando manualmente com vigor Centrifugou-se

1 Instant-Prov Marca NewProv Pinhais-PR

por 1 minuto a 15000 x g O sobrenadante foi transferido para um novo tubo e adicionou-se 2

vezes o volume de etanol absoluto

Os tubos foram agitados e centrifugados por 1 minuto a 15000 x g O etanol absoluto

foi descartado e foi adicionado 1 mL de etanol 70ordmGL invertendo-se os tubos diversas vezes

para lavar o sedimento Os tubos foram centrifugados por 1 minuto a 15000 x g e o

sobrenadante desprezado Repetiu-se a lavagem com etanol 70ordmGL mais uma vez e apoacutes

desprezar o sobrenadante os tubos permaneceram abertos para evaporaccedilatildeo do etanol residual

Ao final da extraccedilatildeo o DNA foi resuspendido em 40 microL de TE (Tris HCl 10mM EDTA

01mM) O DNA extraiacutedo foi avaliado por eletroforese em gel de agarose a 1 em TAE

(Tris-Acetato EDTA) corado com Syber Gold (Invitrogen) e visualizado com transiluminador

sob luz ultravioleta

Realizou-se a semi-nested PCR empregando-se os oligonucleotiacutedeos descritos abaixo

em termociclador Bio-Rad Mycycler (Bio-Rad USA) Foram utilizados os oligonucleotiacutedeos

iniciadores para o gene da proteiacutena principal da membrana externa clamidial (ompA) segundo

Raso et al (2006) Para a primeira reaccedilatildeo utilizou-se os oligonucleotiacutedeos A

(5rsquoCAGGATATCTTGTCTGGCTTTAA3rsquo) e B (5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo)

amplificando um produto estimado em 260 pares de base (pb) Na segunda reaccedilatildeo utilizou-se

os oligonucleotiacutedeos C (5rsquoTTAGAGGTGAGTATGAAAAAACTC3rsquo) e B

(5rsquoGCAAGGATCGCAAGGATC3rsquo) amplificando um fragmento estimado em 165 pb que

compreende um segmento da regiatildeo 5acute natildeo traduzida e parte da regiatildeo codificante do gene

ompA

A primeira reaccedilatildeo foi realizada em volume de 50 microL contendo 100 mM Tris-HCL pH

85 500 mM KCL 15 mM de MgCl2 250 microM de dNTP 25 U de Taq DNA polimerase

(Cenbiot) 100 ng do oligonucleotiacutedeo A e B 2 microL de DNA molde e aacutegua Milli-Q esteacuteril A

segunda reaccedilatildeo foi similar agrave primeira utilizando como DNA molde 05 microL da primeira

amplificaccedilatildeo As condiccedilotildees das reaccedilotildees foram 1 ciclo a 94degC 30 ciclos a 94degC por 30

segundos 64degC por 30 segundos e 72degC por 20 segundos e uma extensatildeo final a 72degC por 7

minutos

Como controles positivo e negativo da PCR utilizou-se DNA de cultura de

Chlamydophila spp e aacutegua Milli-Q esteacuteril substituindo o DNA molde respectivamente Os

produtos da amplificaccedilatildeo foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2 em TAE

corados com Syber Gold (Invitrogen) e visualizados com transiluminador sob luz ultravioleta

As amostras que apresentaram produto de aproximadamente 165 pb na segunda reaccedilatildeo da

semi-nested PCR foram consideradas positivas

A prevalecircncia foi calculada segundo Bush et al (1997) em que o resultado eacute obtido

calculando-se o nuacutemero de animais positivos sobre o nuacutemero total de animais examinados

sendo o valor expresso em porcentagem

Clonagem e sequumlenciamento dos fragmentos de genes

Realizou-se clonagem e posteriormente o sequumlenciamento para confirmar se o

resultado da amplificaccedilatildeo na PCR era devido agrave existecircncia de material geneacutetico de

Chlamydophila spp nas aves estudadas

Os fragmentos gecircnicos amplificados por PCR de trecircs psitaciacutedeos sendo duas araras-

canindeacutes e um papagaio-verdadeiro foram clonados em plasmiacutedeo pGEM-T Easy (Promega)

segundo as recomendaccedilotildees do fabricante Como ceacutelula hospedeira utilizou-se Escherichia

coli cepa TOP10 A seleccedilatildeo dos clones contendo inserto de interesse foi feita por PCR de

colocircnia usando-se os oligonucleotiacutedeos B e C

Apoacutes purificaccedilatildeo dos plasmiacutedeos recombinantes usando kit Wizard Minipreps

(Promega) realizou-se sequumlenciamento dos fragmentos clonados em ambas as direccedilotildees As

amostras de DNA molde (30 a 45 ng) foram marcadas com 32 pmol dos oligonucleotiacutedeos

T7 ou M13 reverso e 2 microL de reagente BigDye Terminator v31 Cycle Sequencing RR-100

(Applied Biosystems) em um volume final de 10 microL

As reaccedilotildees foram realizadas em termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied

Biosystems) As amostras foram precipitadas com isopropanol e desnaturadas com formamida

Hi-di (Applied Biosystems) A eletroforese capilar foi realizada em sequumlenciador automaacutetico

ABI 3700 (Applied Biosystems) Os dados das sequumlecircncias foram coletados com programa

Data Collection v 101 (Applied Biosystems) A qualidade das sequumlecircncias foi avaliada pelo

programa Sequencer Scanner 10 (Applied Biosystems)

As sequumlecircncias consensos passaram por alinhamento e os intervalos dos fragmentos

que alinharam foram submetidas ao Blastn (para sequumlecircncias de nucleotiacutedeos) efetuando-se agrave

busca por homologia dos genes (httpwwwncbinlmnihgovblastBlastcgi)

Anaacutelise estatiacutestica

Para a anaacutelise estatiacutestica os animais foram divididos em dois grupos positivos e

negativos para clamidiose Para cada grupo calculou-se a meacutedia e o desvio padratildeo de cada

variaacutevel estudada As variaacuteveis foram submetidas ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk

recomendado para 2 lt n lt 51 Quando as variaacuteveis apresentaram distribuiccedilatildeo normal

comparou-se as meacutedias atraveacutes do teste t de Student Para as variaacuteveis que natildeo apresentaram

distribuiccedilatildeo normal utilizou-se o teste de aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-

pb

2652

800

350

50

Whitney Niacutevel de significacircncia adotado p lt 005 Executou-se as anaacutelises estatiacutesticas no

programa Bioestat (Zar 1999 Ayres et al 2005)

Resultados e Discussatildeo

Os animais considerados positivos para Chlamydophila sp apresentaram produto

estimado de 165 pb no gel de agarose da segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR observado na

Figura 1 A prevalecircncia de clamidiose diagnosticada pela teacutecnica de PCR em araras da

espeacutecie A ararauna mantidas em cativeiro no CRASMS foi de 5556 (1527) no periacuteodo

estudado (Figura 2) Prevalecircncias maiores estatildeo descritas na literatura para animais do mesmo

gecircnero no entanto provas soroloacutegicas foram utilizadas como teste diagnoacutestico para obtenccedilatildeo

de tais dados (Harkinezhad et al 2007) Ainda utilizando-se de provas soroloacutegicas Herrera et

al (2001) encontraram prevalecircncia de 1239 para a espeacutecie de A macao mantida em

cativeiro na Costa Rica

Sabe-se que provas soroloacutegicas podem ter baixa especificidade e falsos negativos

podem ocorrer em aves com infecccedilatildeo aguda quando a coleta de amostras ocorre antes da

soroconversatildeo (Nasphv 2004) entretanto natildeo estatildeo disponiacuteveis na literatura pesquisas para

clamidiose em A ararauna que utilizassem nos diagnoacutesticos meacutetodos moleculares

dificultando assim a comparaccedilatildeo dos dados

Figura 1 Gel de agarose a 2 corado com Syber Gold demonstrando a segunda reaccedilatildeo da semi-nested PCR para Chlamydophila sp com 165 pb Colunas M marcador de pares de base (50pb DNA Ladder Invitrogen) C- controle negativo C+ controle positivo 1 Ara anilha 006 2 Ara anilha 221 3 Ara anilha 335 4 Ara anilha 376 5 Ara anilha 379 6 Amazona anilha 003 7 Amazona anilha 004 8 Amazona anilha 468 9 Amazona anilha 1653 10 Amazona anilha 2002

165 pb

Em um estudo de Raso et al (2006) relataram 267 de prevalecircncia de clamidiose em

araras da espeacutecie Anodorhynchus hyacinthinus (arara-azul-grande) tambeacutem se utilizando da

teacutecnica de PCR No entanto neste estudo aleacutem da utilizaccedilatildeo de animais de outra espeacutecie os

animais avaliados eram filhotes de vida-livre

A prevalecircncia de clamidiose para a espeacutecie A aestiva a partir da teacutecnica de PCR foi

de 3542 (1748) na espeacutecie A aestiva da presente populaccedilatildeo amostral (Figura 2) Raso et

al (2002) evidenciaram a eliminaccedilatildeo de C psittaci em 358 dos swabs cloacais de

papagaios-verdadeiros de cativeiro a partir da imunofluorescecircncia direta Foram relatadas

63 de prevalecircncia de psitacose em filhotes de papagaios-verdadeiros de vida livre nos testes

moleculares (Raso et al 2006) e Harkinezhad et al (2007) descreveram 25 em papagaios-

africano-cinzentos de cativeiro

Apesar dos diferentes meacutetodos diagnoacutesticos o que dificulta a comparaccedilatildeo os

resultados obtidos satildeo similares aos de Raso et al (2002) Entretanto ao comparar ao uacutenico

dado de literatura que utiliza a mesma metodologia (mesma espeacutecie meacutetodo diagnoacutestico e

regiatildeo geograacutefica) a prevalecircncia encontrada foi maior

5556

4444

3542

6458

000

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

positivos negativos positivos negativos

Ara ararauna Amazona aestiva

Figura 2 Percentual de psitaciacutedeos positivos e negativos para Chlamydophila sp submetidos agrave pesquisa molecular no periacuteodo de maio a setembro de 2008 oriundos do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Sareyyupoglu et al (2007) descreveram que as aves que atuam como portadoras de

psitacose podem ter periacuteodos de latecircncia e que em situaccedilotildees de estresse podem eliminar

grande quantidade do patoacutegeno Houve relatos de que menor prevalecircncia eacute encontrada em

animais de vida livre (Raso et al 2004) pois nestes casos fatores prejudiciais agrave sauacutede das aves

(como estresse de cativeiro alta densidade populacional nos recintos por exemplo) natildeo

estariam presentes Este desequiliacutebrio que o cativeiro impotildee pode ser a explicaccedilatildeo para as

diferentes prevalecircncias

Os resultados do sequumlenciamento estatildeo descritos na tabela 2 Pode-se afirmar que os

fragmentos visualizados na PCR provinham da amplificaccedilatildeo do gene ompA de

Chlamydophila sp realizada a partir das amostras de swabs cloacais dos psitaciacutedeos em

reabilitaccedilatildeo O tamanho reduzido do fragmento somado agrave alta homologia no gene ompA entre

C felis e C psittaci foram fatores determinantes para natildeo se objetivar a caracterizaccedilatildeo

molecular das amostras clonadas

Tabela 2 Avaliaccedilatildeo das sequumlecircncias de DNA dos fragmentos gecircnicos de ompA de Chlamydophila sp submetidos aos algoritmos Blastn

Animal Nordm acesso Genbank (best hits)

Espeacutecie Escore (bits)

e-value Identidade

() Gaps

AB4689561 Ara ararauna 006 EU8560371

C psittaci 194 (214) 7x10-47 98 0112

AB4689561 Amazona aestiva 1653 EU8560371

C psittaci 176 (194) 2x10-41 94 0112

Amazona aestiva 1806

AP0068611 AF2692581

C felis 178 (196) 5x10-42 95 0111

Durante o exame cliacutenico e coleta de amostras nenhum dos psitaciacutedeos apresentou

alteraccedilotildees respiratoacuterias ou oculares (secreccedilotildees anormais) que indicassem a presenccedila de

clamidiose jaacute que estes sintomas satildeo os mais relatados por outros pesquisadores (Suwa et al

1990 Raso et al 2004 Van Loock et al 2005)

Ao exame cliacutenico 2222 (627) das araras apresentavam diarreacuteia esbranquiccedilada

apatia anorexia alteraccedilatildeo no empenamento (com queda de penas) e musculatura peitoral

reduzida (Anexo 4) destes animais cinco (1852) morreram de um a seis dias apoacutes a coleta

de amostras Todas as araras observadas com as alteraccedilotildees descritas acima foram positivas

para Chlamydophila sp

A maioria dos papagaios no exame cliacutenico (9375) apresentou bom estado sanitaacuterio

(4548) caracterizando-se por condiccedilotildees normais da musculatura peitoral do empenamento e

das mucosas Dois animais possuiacuteam problemas no empenamento sendo que um destes foi

positivo para clamidiose Um papagaio estava obeso sendo tambeacutem positivo entretanto

apresentava-se ativo com bom empenamento e coloraccedilatildeo normal das mucosas

As variaacuteveis estudadas e os resultados estatiacutesticos nas aves amostradas estatildeo

apresentados na Tabela 3 Avaliando o peso corporal das A ararauna observou-se diferenccedila

estatiacutestica entre as meacutedias (p lt 001) no qual o grupo dos animais positivos (88177 14080)

apresentou meacutedia menor do que o grupo dos animais negativos (105138 plusmn 12176) Este fato

pode ser explicado pela diarreacuteia desidrataccedilatildeo e anorexia que a doenccedila pode ocasionar

Entretanto para A aestiva as meacutedias do peso corpoacutereo entre os animais positivos (40184 plusmn

6242) e negativos (38447 plusmn 5381) natildeo foram diferentes estatisticamente natildeo sendo

portanto detectado menor peso em papagaios com psitacose

Tabela 3 Valores meacutedios das variaacuteveis estudadas nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva submetidas agrave pesquisa molecular para Chlamydophila sp oriundas do Centro de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

Ara ararauna Amazona aestiva Variaacuteveis Estudadas Positivos

(n=15) Negativos

(n=12) Valor t ou Z

Positivos (n=17)

Negativos (n=31)

Valor t ou Z

Eritroacutecitos (x1012L)

171 plusmn 119 165 plusmn 074 027 159 plusmn 071 171 plusmn 069 058

Volume Globular (LL)

040 plusmn 007 048 plusmn 007 330 040 plusmn 010 040 plusmn 009 008

VCM (fL) 30293 plusmn 13801 34942 plusmn 14950 084 29055 plusmn 12720 27661 plusmn 14764 033

PPT (gL) 499 plusmn 069 517 plusmn 051 073 586 plusmn 046 583 plusmn 056 -017

PP (gL) 474 plusmn 068 472 plusmn 065 -009 535 plusmn 050 534 plusmn 056 -011

Leucoacutecitos totais (x109L)

646 plusmn 204 809 plusmn 418 083 422 plusmn 166 450 plusmn 206 003

Heteroacutefilos (x109L)

513 plusmn 183 621 plusmn 455 015 275 plusmn 114 296 plusmn 150 018

Eosinoacutefilos (x109L)

006 plusmn 007 005 plusmn 011 088 005 plusmn 008 004 plusmn 006 005

Basoacutefilos (x109L)

003 plusmn 005 002 plusmn 006 039

005 plusmn 005 004 plusmn 004 091

Monoacutecitos (x109L)

029 plusmn 023 049 plusmn 057 061

045 plusmn 032 048 plusmn 051 019

Linfoacutecitos (x109L)

095 plusmn 040 132 plusmn 075 152 092 plusmn 057 098 plusmn 058 046

Peso corpoacutereo (g)

88177 plusmn 14080 105138 plusmn

12176 285 40184 plusmn 6242 38447 plusmn 5381 -101

Valores apresentados como meacutedia plusmn desvio-padratildeo n = nuacutemero total de indiviacuteduos em cada grupo Comparaccedilatildeo realizada atraveacutes do teste t de Student e da aproximaccedilatildeo normal Z do teste U de Mann-Whitney Valor significativo em p lt 005

A meacutedia de peso destas aves estaacute de acordo com os dados de Deem et al (2005) para

aves em cativeiro da Boliacutevia (4226 plusmn 5468 g) Em um surto no Brasil Raso et al (2004)

descreveram anorexia diarreacuteia verde-amarelada e baixo peso em papagaios-verdadeiros

Suwa et al (1990) relataram que os paacutessaros podem apresentar inapetecircncia emaciaccedilatildeo e

diarreacuteia esverdeada Portanto baixo peso em aves com clamidiose eacute uma alteraccedilatildeo

frequumlentemente encontrada e na espeacutecie A araruana esta alteraccedilatildeo estatisticamente evidente

Na comparaccedilatildeo das meacutedias dos valores de VG entre o grupo das araras positivas (040

007) e negativas (048

007) para clamidiose (Tabela 3) houve diferenccedila estatisticamente

relevante entre os resultados Gerlach (1994) relata diminuiccedilatildeo do VG em ateacute 30 nas aves

com psitacose O resultado obtido neste estudo foi menor do que 30

Devido agrave diarreacuteia que algumas araras apresentaram esperava-se um possiacutevel aumento

do VG ocasionado pela desidrataccedilatildeo entretanto ocorreu uma diminuiccedilatildeo deste paracircmetro que

pode estar associado ao sequumlestro das hemaacutecias pelo baccedilo Uma outra possibilidade pode estar

correlacionada com provaacutevel aplasia medular decorrente de enfermidade crocircnica Com uma

amostra populacional de 27 araras-canindeacutes natildeo se pode comprovar outras alteraccedilotildees

sanguumliacuteneas estatisticamente significativas que pudessem ser ocasionadas pela doenccedila Talvez

com um nuacutemero amostral superior as meacutedias possam apresentar uma acentuada diferenccedila

para um iacutendice de confianccedila de 95

Foram encontrados poucos dados de literatura sobre hematologia em animais com

clamidiose tornando-se difiacutecil a comparaccedilatildeo dos paracircmetros Alguns autores relataram que a

psitacose pode acarretar heterofilia (Mitchell e Johns 2008) ou basofilia (Benez 2004) Nos

resultados obtidos natildeo foi possiacutevel comprovar estas alteraccedilotildees

O uacutenico hemoparasito encontrado no esfregaccedilo sanguumliacuteneo foi Haemoproteus sp em

uma arara que foi negativa para a psitacose No presente trabalho ao se comparar os valores

da contagem total de leucoacutecitos entre os grupos de animais positivos (660 plusmn 26) e negativos

(823 plusmn 453) natildeo houve diferenccedila estatiacutestica

Para a espeacutecie A aestiva natildeo foram observadas diferenccedilas na anaacutelise estatiacutestica entre

as meacutedias das variaacuteveis estudadas entre os grupos de animais positivos (n=17) e negativos

(n=31) para Chlamydophila sp (Tabela 3) Apesar dos recintos das araras e papagaios serem

proacuteximos (aproximadamente 15 metros) e com livre acesso para insetos (recintos telados) natildeo

foram observados hemoparasitos nos esfregaccedilos sanguumliacuteneos da espeacutecie A aestiva

Mitchell e Johns (2008) afirmaram que espeacutecies de papagaios do novo mundo e

canaacuterios apresentam normalmente grande nuacutemeros de linfoacutecitos podendo chegar a 70 dos

leucoacutecitos Os resultados deste estudo e natildeo confirmaram esta afirmaccedilatildeo apresentando o

heteroacutefilo como o leucoacutecito mais predominante

Analisando a alta prevalecircncia de clamidiose na espeacutecie A ararauna e os achados

cliacutenicos poderia haver a possibilidade de que as araras apresentavam a doenccedila aguda

sintomaacutetica com maior prevalecircncia e tambeacutem maiores alteraccedilotildees cliacutenico-laboratoriais durante

o periacuteodo do estudo

Os papagaios apresentaram menor prevalecircncia quando comparados agraves araras mas a

doenccedila permaneceu assintomaacutetica com a relaccedilatildeo parasito-hospedeiro em aparente equiliacutebrio

natildeo demonstrando alteraccedilotildees hematoloacutegicas relevantes

Confirmou-se a enfermidade nas duas espeacutecies de psitaciacutedeos do CRASMS mas

provavelmente no periacuteodo da amostragem as araras apresentaram a doenccedila sintomaacutetica e os

papagaios permaneceram eliminando a bacteacuteria atraveacutes da cloaca entretanto sem demonstrar

sinais cliacutenicos ou hematoloacutegicos da mesma supostamente revelando-se portadores

assintomaacuteticos Apesar disso mais estudos com um nuacutemero amostral maior e com repeticcedilotildees

deveriam ser realizados para a confirmaccedilatildeo dessa possibilidade

Natildeo haacute dados suficientes para afirmar se esta prevalecircncia de clamidiose nos

psitaciacutedeos sofre uma influecircncia sazonal dependendo do ciclo reprodutivo do clima da

densidade populacional dos recintos ou outras variaacuteveis Isto talvez pudesse ser comprovado

se as coletas de amostras bioloacutegicas fossem realizadas em diferentes periacuteodos do ano

Na presente amostra de 75 psitaciacutedeos foi observada alteraccedilatildeo em apenas um

paracircmetro hematoloacutegico A realizaccedilatildeo de levantamentos em uma amostra maior de aves se faz

necessaacuteria para concluir se a resposta sanguumliacutenea agrave enfermidade eacute ou natildeo observaacutevel no

hemograma

Conclusatildeo

A presenccedila de Chlamydophila sp nas espeacutecies Ara ararauna e Amazona aestiva

indicam a existecircncia de portadores assintomaacuteticos e sintomaacuteticos para a clamidiose no Centro

de Reabilitaccedilatildeo de Animais Silvestres de Campo Grande Mato Grosso do Sul

REFEREcircNCIAS

Abratildeo MG Billerbeck AEC Nishi MY Marui S Mendonccedila BB 2005 Padronizaccedilatildeo da

teacutecnica de extraccedilatildeo de DNA de ceacutelulas de mucosa oral com NaCl Aplicaccedilatildeo no estudo do

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Zar J H 1999 Bioestatistical analysis 4 ed Prentice-Hall Upper Saddle River New Jersey

p 663

APEcircNDICE

Anexo 1 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaacuteveis

Anexo 2 Licenccedila ambiental cedida pelo Instituto de Meio Ambiente de Mato Grosso do Sul

Anexo 3 Planilha de contenccedilatildeo e avaliaccedilatildeo cliacutenica dos psitaciacutedeos

Planilha de Contenccedilatildeo Psitaciacutedeos Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta ______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Recinto ___________________________ Ndeg de animais no mesmo recinto _____________ Data_________ Hora ____ Espeacutecie ______________________________________ Anilha________________________________ Peso__________ Idade ( )F ( )J ( )A Coleta de sangue ( )S ( )N Coleta swab cloacal ( )S ( )N Coleta de fezes ( )S ( )N Coleta de ectoparasitas ( )S ( )N Local da coleta _______________________ Recaptura ( )S ( )N Estado Cliacutenico Geral ( ) Ruim ( ) Regular ( ) Bom Particularidades ____________________________________________________________________________ Observaccedilotildees _______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anexo 4 Arara-canindeacute positiva para clamidiose proveniente do CRASMS do municiacutepio de Campo Grande Mato Grosso do Sul

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