oral 36 muke - crdc@kmutt
TRANSCRIPT
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
1
Grapes•• VitisVitis:: VitisVitis viniferavinifera
•• nonnon--climacteric climacteric fruitfruit•• botanically a true botanically a true berryberry
•• woody climbing vinewoody climbing vine•• grows in grows in warm, summer,warm, summer, coldcold
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
2
Nutritional value of Grapes 100 g Nutritional value Content
(mg.)Carbohydrates 18100
- Sugars sucrose>
Nutritional value Content(mg.)
Vitamin C 10.8
Vitamin K 0.022Vitamin
CarbohydrateCarbohydrateVitamin CVitamin C
glucose> fructose- Dietary fiber
Fat 160
Protein 720
Thiamine (Vitamin B1) 0.069
Rib fl i (Vit i B2) 0 07
Vitamin K 0.022
Calcium 10
Iron 0.36
Magnesium 7
Manganese 0.071
Vitamin B
KK
Minerals
anthocyanin
ProteinProtein
Riboflavin (VitaminB2) 0.07
Niacin (VitaminB3) 0.188
Pantothenic acid(VitaminB5)
0.05
Vitamin B6 0.086
Folate(VitaminB9) 0.002
Phosphorus 20
Potassium 191
Sodium 3.02
Zinc 0.07
Phenolic compound
resveratrol
A phytochemical is a natural bioactive compound found in plant foods that works with nutrients and dietary
Phytochemicals or phytonutrients
found in plant foods that works with nutrients and dietary fiber to protect against diseases.
colorSmell
Other : phytosynthesis,FlavorAntioxidant
Enzyme activationSelf defensive
Other : phytosynthesis,respiration, growth and
development
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
3
Phytochemicals
Primary metabolite Secondary metabolite
Essential Oil
Resins and Balsums
Alkaloids
Carbohydrate
Lipids
P i Glycosides
Phenolic compounds
Proteins
Phenolic compounds are naturally occurring secondary
Phenolic compounds> 8000 type
Phenolic compounds are secondary metabolites that are derivatives of the pentose phophate, shikimate, and phenylpropanoid pathways in plant.
phytochemicals.
The term ‘phenolic’ is used to define substances that possess one or more hydroxy (OH) substituents bonded onto an aromatic ring.
Marinova et al.,2005, Balasundram et al.,2006
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
4
photosynthesis
7 groups of phenolic compounds1. Flavonoids (polyphenols): anthocyanins, isoflavones,catechins, QuercetinQuercetin, ,
myricetinmyricetin, , apigeninapigenin, , lueteolinlueteolin, , kaempferolkaempferol, isorhamnetinisorhamnetin
anthocyanins Isoflavones (ถวเหลอง)catechins
QuercetinQuercetin myricetinmyricetin apigeninapigenin
lueteolinlueteolin kaempferolkaempferol rutinrutin
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
5
2. Phenolic acids: gallic acid, tannic acids, vanillin, neochlorogenicneochlorogenic acidacid, pp--coumariccoumaric acidacid
gallic acid (มะมวง ชา )Vanillin (วะนลา)
tannic acids (ชา เบอรร)
pp‐‐coumaric acidcoumaric acidneochlorogenic acidneochlorogenic acid
3. Hydroxycinnamic acid: caffeic acid, ferulic acid chlorogenic acid
caffeic acid (แอปเปล) ferulic acid(สม สบปะรด)
chlorogenic acid (กาแฟ สตรอเบอร)
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
6
44. . LignansLignans: : pinoresinolpinoresinol
pinoresinol (เมลดงา)
55. Tannins: condensed tannins . Tannins: condensed tannins ((ชา)
66 Q i Q i b hb h thth
FlavoneGallic acid
66. Quinones, . Quinones, benzophenonesbenzophenones : : xanthonesxanthones ((มงคด)
77. Others: . Others: monophenolmonophenol, , tyrosoltyrosol ester, ester, stilbenoidsstilbenoids, , punicalaginspunicalagins
stilbenoidsstilbenoids
resveratrol glucopyranoside
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
7
Phenolic compound in grapes
ddSkinSkinanthocyanins
quercetinrutin
ll i id
catechin epicatechinmyricetin
seedseed
ellagic acidresveratrol
kaempferolresveratrol
Catechin is a polyphenolic antioxidant plant secondary metabolite. The term catechins is also commonly
Catechinsecondary metabolite. The term catechins is also commonlyused to refer to the related family of flavonoids andthe subgroup flavan-3-ols (or simply flavanols).
http://en.wikipedia.org/wiki/Catechin#Chemistry
(+)-catechin (-)-catechin
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
8
Epicatechin is a polyphenolic antioxidant plant secondary metabolite.
Epicatechin
Epicatechin can be found in cacao beans. The different other enantiomers can as well be found in chocolate.
http://en.wikipedia.org/wiki/Catechin#Chemistry
(-)-epicatechin (+)-epicatechin
Variety/clonePhenolic content (mg/100 g DM)
SeedsCatechin Epicatechin
AP SG1 96.9+5.9 d 106.8+1.6 d
Related research
F 9 74.4+0.9 e 98.4+9.9 deISV 2 72.9+7.0 e 88.0+0.7 eISV RC1 60.3+8.3 e 67.9+6.2 fMerlot 138.8+0.4 bc 131.8+9.7 cCabernet Sauv. 141.8+7.9 b 127.6+4.4 cCanaiolo 140.7+2.2 bc 205.7+3.1 aColorino V.no 124.4+0.1 c 89.0+8.6 eFoglia Tonda 67.4+5.1 e 47.2+3.5 gMontepulciano 205.7+19.0 a 164.6+16.8 b
Iacopini และคณะ, 2008
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
9
years Sample Variables Influence on
Alonso et al. 1991
Entire dried seeds from red grape marc after vinification
Water content in ethanol: 5–40–60–80% Extraction time (without stirring): 3–6–12 h
Yield of catechins and proanthocyanidins
Entire dried seeds from
Related research
Pekic et al. 1998
white grape marc after pressing
Water content in ethyl acetate: 3.3–5–10–15–20% Extraction time 1–12–24 h Yield of proanthocyanidins
Manzano et al. 2004 grape seed and skin 80% ethanol Extraction time 1-5 h Yield of flavan-3-ols
Pinelo et Dried red and white
Solvent: ethanol, methanol, water Solvent/solid ratio: 1–3–5 (v/w) Extraction time: 30–60–90 min Extraction
Yield of total phenols, concentration andantioxidant
al 2005grape marc temperature: 25–37.5–50 ˚C activity of extract
Iacopini et al. 2008grape seed and skin
ethanol:water:hydrochloric acid 0.12M(70:29:1 v/v/v) f: 4 h
Yield of catechins and epicatechin
Resveratrol
• Resveratrol is a phytoalexin produced naturally by several plants when under attack by pathogens such as bacteria or fungi.
• Resveratrol is found in the skin of red grapes and is a constituent of red wine
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
10
StructureStructure
B
A
Content of Resveratrol and Piceid Isomers in Grape Berry Skins Extracted in Ethanol 80% at 60 °C during 30 min
Romero‐Perez, 2001
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
11
years Sample Variables Influence on
Romero-Perez et l 2001
grape berries selected were from the Carinena
d i t
five extraction solvents were tested: ethanol/water(80:20 v/v), ethanol 100%, ethyl acetate/methanol (50:50 v/v),acetone/water (75:25 / ) d t 100% t 60 °C f 30 i
Resveratrol and Piceid Isomers in G B Ski
Related research
al. 2001red variety v/v), and acetone 100%. at 60 °C for 30 min Grape Berry Skins
Pineiro et al. 2006
grapes of the Viura(white) and Tempranillo(red)varieties cultivated in Jerez (Spain)
Solvent: methanol different temperatures 50, 100, 150 ˚C
Determination of trans-resveratrol in grapes
Spignoand De
Dried powdered red grape marc (after
Solvent: 90% ethylacetate–ethanol FaveriExtraction time: 5–24 hExtraction temperature: 28–
Yield of total phenols, resveratrol and antioxidant
Faveri 2007g p (vinification) and stems
p60 ˚C activity of extract
Iacopiniet al. 2008grape seed and skin
ethanol:water:hydrochloric acid 0.12M(70:29:1 v/v/v) f: 4 h Yield of resveratrol
Marti และคณะ 2001
สกด resveratrol จาก grape skin (Vitis vinifera)
Final extraction conditions were:40°C, 150 bar, 7.5% ethanol and extraction time 15 min.
Related research
Piantinoและคณะ 2008
สกด phenolic จากBaccharisdracunculifolia
temperatures of 40, 50 and 60 ◦C and pressures of 20, 30 and 40MPa.
Gelmezและคณะ 2009
สกด phenolic จาก roasted wheat germ
pressure (148–602 bar), temperature (40–60 ◦C) and time (10–60 min)
Benova และคณะ 2010
สกด resveratrol จาก Japanese knotweed
pressure 25–40 Mpa , temperature 50–110 ◦C and extraction time 5–60 min
Casas และคณะ 2010
สกด resveratrol จาก Palomino finograpes
pressure 100, 400 bar, temperature 35, 55 ◦C addition of modifier (5% v/v of ethanol)
Castro‐Vargas และคณะ 2010
สกด phenolic จาก guava seeds (Psidium guajava L.)
co‐solvents:ethyl acetate (EtAc)and ethanol (EtOH) conditions, using 10, 20 and 30MPa and 40,50 and 60 ◦C.
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
12
งานวจยทเกยวของกบการศกษาคณสมบตของ
resveratrol
ศกษาผลของ resveratrol ในการยบยงเนอLi และคณะ 2007
ศกษาผลของ resveratrol ในการยบยงเนองอก และ Leukemia cell L 1210
Colin และคณะ 2008ศกษาคณสมบตผลของ resveratrol ในการยบยงเซลลมะเรง
Fukui และคณะ 2010ศกษาคณสมบตผลของ resveratrol ในการยบยงเซลลมะเรง
Leiro และคณะ 2010ศกษาผลของ resveratrol ในการยบยงเนองอก
กระบวนการผลตไวน
องนปอกดา ไวน
ทง
บมคนแยกนาและกาก
peel seed
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
13
วตถประสงค
เพอศกษาปรมาณสาร resveratrol, catechin, epicatechin และ ประสทธภาพการตานอนมลอสระของสารสกดเมลดและเปลอกองนพนธปอกดา
การเตรยมตวอยางและการสกด
40°C
แยกเปลอกและเมลด
องนปอกดา
บด
40°C
แยกเปลอกและเมลด
องนปอกดา
รอนดวย mesh ขนาด 60
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
14
วเคราะหปรมาณฟนอลกทงหมดโดยใช Folin Ciocalteu method
10% folin‐ciocalteu phenol reagent 5 mL 7.5% sodium carbornate 4 mL
ตวอยาง 50 μL + นากลน 0.95 mL
Spectrophotometer
Singleton and Rossi, 1965
2 hr 30 min 760 nm
เทยบผลกบกราฟของสารละลายมาตรฐาน gallic acid
High‐performance liquid chromatography (HPLC)
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
15
การวเคราะหสาร resveratrol, catechin และ epicatechin
resveratrol catechin และ epicatechin
mobile phase A คอ glacial acetic acid inwater 52.6:900 (v/v) และ mobile phase B คอ 20%phase A และ 80%acetonitile (ACN) โดยอตราสวนของ A:B คอ 0 min, 83.5% A, 16.5%B; 13 min, 82.0% A, 18.0% B; 15 min, 82.0%A, 18.0 B; 17 min 77.0% A, 23.0% B flow rate0.5 ml/min นาน 50 นาท ใชตวอยางปรมาณ
mobile phase A คอ 100%acetonitile (ACN) mobile phase B คอ 0.05% PPA อตราสวน A:B คอ 13%:87% flow rate 0.5 ml/min ใชตวอยางปรมาณ 20 μl ใช UV-visible diode-array ความยาวคลน 231 nm วเคราะหปรมาณเทยบกบกราฟมาตรฐาน catechin,
100 μl ใช UV-visible diode-array ความยาวคลน 306 nm วเคราะหปรมาณเทยบกบกราฟมาตรฐานเรสเวอราทรอล
ฐepicatechin
วเคราะหประสทธภาพการเปนสารตานอนมลอสระดวยวธ DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)
ตวอยาง 50 μL 0.1 mM DPPH 3.95 mL
Spectrophotometer30 min
517 nm
เทยบผลกบกราฟของสารละลายมาตรฐาน Trolox
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
16
วเคราะหประสทธภาพการเปนสารตานอนมลอสระดวยวธ ABTS 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)
ตวอยาง 50 μL ABTS•+ 3.95 mL
Spectrophotometer6 min
734 nm
เทยบผลกบกราฟของสารละลายมาตรฐาน Trolox
ผลการทดลอง
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
17
ปรมาณ total phenolic
120 116.4 mg GAE/g DW
Seed ; 67‐87 mg GAE/g DWPeel ; 9‐14 mg GAE/g DW
20
40
60
80
100
Phen
olicconten
ts (m
g GAE
/g DW)
seedpeel
<0.01 mg GAE/g DW
0
20
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
water ethanol petroleum etherRe
sveratrol
seedpeel
ResveratrolResveratrol
p
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
18
ปรมาณ resveratrol
250
300 268.31μg/g DWSeed ; 243.32 μg/g DW peel; 207.95 μg/g DW
100
150
200
resveratrol con
tents(μg
/g DW)
seedpeel
0
50
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
water ethanol petroleum ether
catechin
epicatechin
seed peel
catechin
epicatechin
catechin
catechin
epic
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
19
ปรมาณ catechin
450
500
150
200
250
300
350
400
catechin con
tents (mg/10
0g DW)
seedpeel
0
50
100
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
water ethanol petroleum ether
ปรมาณ epicatechin
300250.89 mg/100gDW
100
150
200
250
picatechin con
tents (mg/10
0g DW)
seedpeel
<0.01 mg /100g DW
0
50
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
ep
water
/100g DW
ethanol petroleum ether
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
20
ประสทธภาพการตานอนมลอสระ (DPPH)
60
54.58 mM TE/g DW Seed ; 33‐48 mM TE/g DWPeel ; 1‐3 mM TE/g DW
20
30
40
50
mM
TE/g DW
seed
peel
<0.01 mMTE/g DW
0
10
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
water ethanol petroleum ether
ประสทธภาพการตานอนมลอสระ(ABTS)
45.33 mM TE/g DW 37.36 mM TE/g DW
15
20
25
30
35
40
45
50
mM
TE/g DW
seed
peel
<0.01 mM
0
5
10
15
1hrs 30°C
1hrs 40°C
1hrs 50°C
12hrs 30°C
12hrs 40°C
12hrs 50°C
24hrs 30°C
24hrs 40°C
24hrs 50°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
1hrs 30°C
12hrs 30°C
24hrs 30°C
water ethanol petroleum ether
TE/g DW
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
21
สรปผล
1 สารสกดจากเมลดขององนพนธปอกดามปรมาณ 1. สารสกดจากเมลดขององนพนธปอกดามปรมาณ total phenolic, resveratrol, catechin, epicatechin และประสทธภาพการตานอนมลอสระสงกวาสารสกดจากเปลอก
โ ป ไ 2. การสกดดวยเอทานอลนาน 24 ชวโมง เปนสภาวะทไดปรมาณ resveratrol, catechin, epicatechin และมประสทธภาพการตานอนมลอสระสงทสด
สรปผล
3 รส 40°C 1 ช โ ไ 3. การสกดดวยนาอณหภม 40°C นาน 1 ชวโมง ไดปรมาณสารฟนอลค resveratrol, catechin, epicatechinและประสทธภาพการตานอนมลอสระสง
Oral Presentation CRDC 5 22/07/54
22
ขอขอบคณ
The endAcknowledgement :
Assoc. Prof. Dr. Orapin KerdchoechuenAssist. Prof. Dr. Natta Laohakunjit