new nebuilder hifi dna アッセンブリーnebuilder hifi dna アッセンブリーはdna...
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NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーアッセンブリー
Gibson Assembly のアップグレード製品
DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！
NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーは DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすことができるシステムです。末端に 15 塩基の相同配列がある DNA 断片とマスターミックスを混合し、15 - 60 分間インキュベーションするだけの 1 ステップ反応で複数の DNA 断片をアッセンブルすることができます。従来品の Gibson Assembly と比較してアッセンブル効率と正確性が向上しているので、長鎖 DNA、微量 DNA、複数 DNA 断片をより正確かつ高効率でアッセンブルすることができます。
特長 Gibsonをアップグレード
• わずか 15 - 60 分間のインキュベーションで終了
• 5' / 3' 末端のミスマッチ配列を除去してアッセンブル
• PCR クローニングに最適（3'-A / 平滑末端産物に対応）
• 6 本以上の複数 DNA 断片の一括アッセンブル
• 一本鎖オリゴ DNA と二本鎖 DNA をアッセンブル
• 数百 kb の長鎖 DNA 合成
• Gibson Assembly のアップグレード製品
• より正確かつ高効率で DNA をアッセンブル
• より微量の DNA（fmol）をアッセンブル
• 5' 末端だけでなく 3' 末端のミスマッチ配列を除去してアッセンブル
NEW
500
450
400
350
300
250
200
150
100
50
02-Fragment Assembly 6-Fragment Assembly
NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix
Gibson Assembly Master Mix
Num
ber o
f Col
onie
s
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
Num
ber o
f Col
onie
s
Length in overlap (bp)Amount used (fmol)
1540
1540
2013
2013
2513
2513
3013
3013
NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix
Gibson Assembly Master Mix
NEBuilder アッセンブリーを使用すれば、Gibson より正確かつ高効率で 2 - 6 本の DNA 断片を一括アッセンブルすることができる。
共通配列を長く設定することにより、4 本の微量 DNA 断片（mol）を Gibson アッセンブリーより正確かつ高効率で一括アッセンブルすることができる。
6 本の DNA 断片を一括アッセンブル
微量 DNA をアッセンブル
NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix• 2X マスターミックス、コントロール用 DNA が含まれています。
NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit• 2X マスターミックス、NEB 5-alpha コンピテントセル、SOC 培地、コントロール用 DNA が含まれています。
製品名 製品番号 容量 希望小売価格
NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit E5520S 10 reactions ¥ 21,600
製品名 製品番号 容量 希望小売価格
NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix
E2621S 10 reactions ¥ 18,000
E2621L 50 reactions ¥ 72,000
E2621X 250 reactions ¥ 288,000
A 実験手順
1. 15 - 20 bp の相同配列を含む DNA 断片とマスターミックスを混合
2. 50 ℃ で 15 - 60 分間インキュベートしてアッセンブル
3. 必要に応じて産物を大腸菌に形質転換
B 原理
1. エキソヌクレアーゼが 3' オーバーハングを産生
2. 1本鎖の相同配列同士がアニーリング （3' 末端のミスマッチ配列はエキソヌクレアーゼが除去）
3. ポリメラーゼが 3' 方向に DNA を伸長してギャップを埋める
4. DNA リガーゼがニックをシール
NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーNEW
実験手順
Gibson Assembly より正確かつ高効率
DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！
NEBuilder HiFi Workfl ow
A
Add fragments to NEBuilder HiFiDNA Assembly
Master Mix.
dsDNA fragments with overlapping ends.
5´3´
5´ Exonuclease chews back 5´ ends
3´5´
3´ 5´5´ 3´
Annealing
DNA polymerase extends 3´ ends
DNA ligase seals nicks
3´5´
5´3´
3´5´
5´3´
B
Fully Assembled DNA
A + B
Incubate at 50°C for 15–60 minutes.
NEBuilder HiFi DNA Assembly
A
B
プライマーの設計にはオンラインツールが便利です！
ご質問は弊社テクニカルサポート（Tel：0120-963-650、E-mail：[email protected]）までお問い合わせください。
ニュー・イングランド・バイオラボ・ジャパン株式会社
〒１３０-００２２東京都墨田区江東橋２-２-３倉持ビル第２カスタマーサービス電話：03-5669-6193 FAX：03-5669-6194テクニカルサポート電話：0120-963-650 FAX：03-5669-6194Email: [email protected] Web-site: www.nebj.jp