nespecifické složky buněčné imunity - Ústav...
TRANSCRIPT
![Page 1: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/1.jpg)
Nespecifické složky buněčné
imunity
RNDr. Jan Lašťovička, CSc.
Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol
![Page 2: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/2.jpg)
![Page 3: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/3.jpg)
- Mechanizmy vrozené imunity fungují okamžitě
- Ihned následuje časná indukovaná odpověď
- Nevytvoří se imunologická paměť
- Specifická reakce je zahájena jen v případě, že infekce
překoná tyto nespecifické mechanizmy
![Page 4: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/4.jpg)
Patogeny
- Viry, bakterie, houby, prvoci, červi
- Pronikají do těla různými cestami, množí se
a působí onemocnění různým způsobem
- Imunitní systém používá k jejich eliminaci
odlišné mechanizmy
![Page 5: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/6.jpg)
Možné cesty průniku infekce
• Naše tělo je neustále vystaveno
mikroorganizmům přítomným v prostředí
• Kontakt na epiteliálních površích
• Na sliznicích dýchacích cest
• Na střevních sliznicích
• Na sliznicích genitálií
• Při poranění kůže (kousnutí hmyzem)
![Page 7: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/7.jpg)
Antimikrobiální peptidy
Lysozym, fosfolipáza A (sliny)
Histatiny
Trávící enzymy
Lysolipidy
α a β-defensiny (intestinální)
Surfaktanty SP-A, SP-D
opsonizace
![Page 8: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/8.jpg)
Odpověď na průnik mikroorganizmu je rozdělena na několik stádií:
- Lokální nespecifická odpověď se pokusí infekci zlikvidovat
- pokud se to nepodaří, je antigen transportován do lymfatických uzlin
- aktivují se specifické mechanizmy
![Page 9: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/9.jpg)
Mechanizmy nespecifické imunity:
• Jsou založeny na rozpoznání chemických
struktur (hlavně sacharidů), na povrchu
mnoha různých mikroorganizmů, ale
nepřítomných na povrchu vlastních buněk
organizmu
![Page 10: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/11.jpg)
Rozpoznávací mechanizmy fagocytů
• Struktury, které se nacházejí na povrchu mikroorganizmů, ale ne na vlastních nepoškozených buňkách
• Evolučně velmi konzervované antigeny nezbytné pro život mikroorganizmů – PAMP (pathogen associated molecular patterns)
• Endotoxiny (LPS) gramnegativních bakterií
• Peptidoglykany grampozitivních bakterií
• Glukany a manany kvasinek a plísní
• Povrchové fosfolipidy apoptotických buněk
• Tyto struktury jsou rovněž rozpoznávány humorálními složkami nespecifické imunity
![Page 12: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/12.jpg)
Rozpoznávací mechanizmy fagocytů
Receptory, které tyto struktury rozpoznávají, se
označují jako pattern recognition receptors
(PRR):
• Manózový receptor
• Galaktózový receptor
• CD14
• TLR (Toll-like receptory)
• Scavangerové (uklízecí) receptory
• FC receptory
![Page 13: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/14.jpg)
Nespecifické
rozpoznávání
pomocí Toll-like
receptorů: každý z
TLR receptorů
rozpoznává jeden
či více
mikrobiálních
antigenů přímou
interakcí s
molekulami na
jejich povrchu
![Page 15: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/15.jpg)
Bakteriální LPS
poskytuje signál přes
TLR -4 a aktivuje
transkripční faktor
NFκB, který pak
aktivuje geny kódující
proteiny sloužící k
obraně proti infekci
(TNFα)
![Page 16: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/16.jpg)
• Bakteriální
proteoglykany mohou
být rozpoznány buď
TLR receptory na
povrchu buněk nebo
NOD proteiny v
cytoplazmě
• Obě cesty vedou k
aktivaci transkripčního
faktoru NFκB a k
expresi prozánětlivých
genů
![Page 17: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/17.jpg)
Opsonizace
• Působení složek humorální imunity
• Fc receptory fagocytů
• Komplementové receptory
• Proteiny akutní fáze:
• Lektin vážící manózu (MBL)
• C reaktivní protein (CRP)
• Sérový amyloid P
![Page 18: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/18.jpg)
Salmonella typhi – její dlouhý bičík je rozpoznán Toll-like receptory
![Page 19: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/19.jpg)
Fagocyty a fagocytóza
• Evolučně velmi starý proces
• Dva hlavní typy buněk - profesionální
fagocyty: neutrofilní a eozinofilní
granulocyty a monocyty (makrofágy)
![Page 20: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/21.jpg)
Makrofágy jsou aktivované patogenními
mikroorganizmy, pohltí je a zahájí zánětlivou
odpověď
Makrofágy exprimují řadu receptorů pro
bakterální komponenty včetně receptorů pro
karbohydráty (manózový a glukanový
receptor), lipidy (LPS receptor) nebo jiné
bakteriální komponenty (Toll-like receptory).
Navázání bakterie na receptory stimuluje
fagocytózu a pohlcení bakterie do
intracelulárních váčků zvaných fagozómy,
kde jsou zničeny.
Signál přes některé receptory, jako např.
TLR, způsobí sekreci prozánětlivých
cytokinů jako IL-1β, IL-6 a TNF-α a lipidové
mediátory zánětu.
![Page 22: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/22.jpg)
Proces fagocytózy
![Page 23: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/23.jpg)
Likvidace pohlceného mikroorganizmu
• Baktericidní látky (bazické peptidy
defensiny)
• Hydrolytické enzymy (proteázy katepsiny,
lysozym, kyselé hydrolázy)
• Nízké pH (3,5 - 5)
• BPI (bactericidal permeability-increasing
protein)
![Page 24: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/24.jpg)
Likvidace pohlceného mikroorganizmu
• Aktivace enzymů: NADPH-oxidáza, myeloperoxidáza, superoxid dismutáza
• Reaktivní kyslíkové intermediáty (ROI):
- superoxidový radikál O2- (molekula kyslíku
s připojeným elektronem)
- Singletový kyslík, H2O2 , hydroxylový radikál a chlornanové anionty Cl-
- ROI jsou používány hlavně pro likvidaci pohlcených extracelulárních patogenů
![Page 25: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/25.jpg)
Likvidace pohlceného mikroorganizmu
• Oxid dusnatý (NO), produkovaný NO
syntázou
• Je hlavním nástrojem zabíjení
intracelulárních parazitů
• Baktericidní látky a ROI se mohou
uvolňovat i do okolních tkání
![Page 26: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/26.jpg)
Oxidační vzplanutí je způsobeno přechodným zvýšením
spotřeby kyslíku během produkce mikrobicidních kyslíkových
metabolitů
![Page 27: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/27.jpg)
Neutrofily tvoří první vlnu buněk, které
opouští cévy a vstupují do místa infekce
• V místě infekce jsou cévy rozšířené
• Leukocyty mohou být v kontaktu s
endotelem
• Endotel v místě infekce exprimuje pod
vlivem TNF-α a IL-8 selektiny, molekuly
ICAM-1 a ICAM-2
• Dochází k extravazaci (diapedéze)
neutrofilů
![Page 28: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/32.jpg)
Infekce stimuluje makrofágy k produkci
cytokinů a chemokinů, které spouštějí
zánětlivou reakci
![Page 33: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/33.jpg)
Bakteriální LPS
poskytuje signál přes
TLR -4 a aktivuje
transkripční faktor
NFκB, který pak
aktivuje geny kódující
proteiny sloužící k
obraně proti infekci
(TNF-α)
![Page 34: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/35.jpg)
Aktivace Toll-like receptorů spouští produkci
prozánětlivých cytokinů a chemokinů a expresi
kostimulačních molekul
• Toll signalizační dráha vede také k
povrchové expresi kostimulačních molekul
• Tyto molekuly, nazývané B7.1 (CD80) a
B7.2 (CD86), jsou povrchové proteiny
exprimované makrofágy a DC v odpověď
na signál z TLR-4. Tyto molekuly pak
spolu s MHC II aktivují naivní T buňky
![Page 36: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/36.jpg)
Bakteriální LPS přes Toll signální cestu
indukuje změny v Langerhansových
buňkách (nezralé dendritické bb).
- Stimuluje je k migraci do lymfatických uzlin
- Působí změny v expresi povrchových molekul
(CD80 , CD86 a MHC )
Tím je zahájena specifická imunitní reakce (stimulace
CD4 T-buněk).
![Page 37: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/38.jpg)
Cytokiny uvolňované fagocyty
aktivují akutní fázi odpovědi
• TNF-α, IL-1β a IL-6: endogenní pyrogeny
• Zvýšení tělěsné teploty
• Syntéza proteinů akutní fáze
• C-reaktivní protein se váže na fosfocholin
na bakterální stěně, opsonizuje a spouští
komplementovou kaskádu
• Konečný efekt prozánětlivých cytokinů je
leukocytóza
![Page 39: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/39.jpg)
TNF-α je důležitým cytokinem, který
kontroluje lokální obranu proti infekci, ale
pokud je uvolňován systémově, má
destruktivní účinky.
![Page 40: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/40.jpg)
Cytokiny TNF-α, IL-1β a IL-6 mají široké spektrum biologických aktivit,
které pomáhají koordinovat odpověď organizmu na infekci
![Page 41: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/41.jpg)
Interferony jsou antivirové proteiny produkované buňkami jako odpověď na virovou infekci.
Vážou se na interferonové receptory na buňkách a indukují syntézu proteinů inhibujících replikaci virů (oligoadenylát syntetáza, PKR kináza)
![Page 42: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/42.jpg)
Poruchy fagocytózy
Chybějící nebo snížená tvorba oxidativních produktů fagocytujících buněk je příčinou závažného onemocnění chronické granulomatosy(chronic granulomatous disease, CGD).
Onemocnění se projevuje opakujícími se těžkými infekcemi, které způsobují bakterie, kvasinky i plísně. Obyčejně probíhají formou zápalu plic nebo abscesů kůže, tkání a orgánů.
Onemocnění je nejčastěji způsobené mutací genu kódujícího enzym fagocytární NADPH-oxidasu na chromozomu X, kdy tento enzym má sníženou nebo nulovou aktivitu.
Aktivovaná NADPH-oxidasa zdravých jedinců katalyzuje reakci, při níž NADPH* reaguje s kyslíkem za vzniku NADP+ a superoxidového radikálu O2-, ze kterého následnými reakcemi vzniká singletový kyslík, peroxid vodíku, hydroxylový radikál a chlornan. Tyto reaktivní oxidační meziprodukty jsou zodpovědné za ničení patogenů uvnitř fagocytů po jejich ingesci
![Page 43: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/43.jpg)
Testování fagocytózy
• Testy ingesce
• Baktericidní test
• Testy oxidačního metabolizmu
• Chemiluminiscence
![Page 44: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/44.jpg)
Testy ingesce
• Testují schopnost fagocytů pohltit cizorodý materiál
• Používané substráty: bakterie nebo kvasinky, mikrosférické hydrofilní partikule (MSHP), velikost 1μM
• Suspenze částic se inkubuje s krví pacienta, pak se zhotoví nátěr na sklíčko
• Fagocytární aktivita = podíl fagocytujících neutrofilů ze 100
• Fagocytární index = počet pohlcených částic na buňku
![Page 45: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/45.jpg)
![Page 46: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/47.jpg)
• Výpovědní hodnota testů ingesce v rutinní diagnostice je velmi malá – primární porucha fagocytózy neexistuje
• K výraznému snížení fagocytózy dochází jen u velmi těžkých klinických stavů
• Použití spíše pro výzkumné účely
• Pokud se použijí inertní partikule, testuje se nereceptorově zprostředkovaná fagocytóza
• Nezralé neutrofily nejsou schopny partikule pohltit
• Stafylokoky vyžadují opsonizaci sérovými Ig
• Kvasinky vyžadují opsonizaci komplementem C3b
• Patologické výsledky mohou odrážet i poruchy opsonizace
Testy ingesce
![Page 48: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/48.jpg)
Baktericidní test
• Testuje všechny fáze fagocytózy včetně
usmrcení pohlceného mikroorganizmu
• Substrátem je živý mikroorganizmus: C.
albicans, S. aureus, Pseudomonas
• Hodnocení se provádí různými způsoby:
mikroskopicky, cytometricky
![Page 49: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/49.jpg)
Testy oxidačního metabolizmu
• Nitroblue tetrazolium chlorid (NBT)
• iod nitroblue tetrazolium (INT)
• Testuje se kyslíkový metabolizmus granulocytů
(schopnost tvořit kyslíkové radikály) pomocí
schopnosti redukovat bezbarvé tetrazoliové soli
na tmavě modré formazány
• Odečítá se na sklíčku (mikroskopicky) nebo na
destičkách (fotometricky)
![Page 50: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/51.jpg)
Chemiluminiscence
• Kvantitativní sledování oxidačního vzplanutí
• Fagocyty při oxidačním vzplanutí vytvářejí vysoce reaktivní kyslíkové metabolity. Během těchto procesů vznikají emise fotonů a to se projevuje chemiluminiscencí fagocytů. Toto chemické světlo se zesiluje luminolem a detekuje na chemiluminometru
![Page 52: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/52.jpg)
Měření oxidačního vzplanutí
průtokovou cytometrií (FagoFlow)• Princip
• Test je založen na měření respiračního (oxidačního) vzplanutí granulocytů po jejich stimulaci inaktivovanými bakteriemi E. coli.
• Po ingesci bakterií je ve fagocytech aktivována NADP-oxidáza,která spustí respirační (oxidační) vzplanutí.
• Vznikající reaktivní meziprodukty uvnitř fagocytů oxidují dihydrorhodamin 123(DHR123) na fluorescenční produkt rhodamin 123, který je detekován průtokovým cytometrem.
![Page 53: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/53.jpg)
Histogram populace stimulovaných granulocytů.
Vzorek byl inkubován s bakteriemi E. coli a DHR123.
Histogram populace kontrolních nestimulovaných
granulocytů po inkubaci s DHR123.
![Page 54: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/54.jpg)
O2 NEZÁVISLÉ MECHANIZMY:
imunochemické stanovení defensinů
stanovení lysozymu
deficience specifických granul
![Page 55: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/55.jpg)
Další testy nespecifické imunity
- adherence
- chemotaxe:
Rebuckovo kožní okénko (in vivo)
agarózový test (formylmethionylleucylfenylalanin)
Boydenova komůrka
(nitrocelulózový filtr)
![Page 56: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/56.jpg)
AKTIVACE A ADHERENCE FAGOCYTUJÍCÍCH BUNĚK:
je testována schopnost adherovat k pevným povrchům
je testována přítomnost a denzita exprese adhezivních molekul
imunofluorescencí
LAD-I syndrom: - absence řetězce (CD18) integrinového heterodimeru LFA-1
![Page 57: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/57.jpg)
CHEMOTAXE:orientovaný pohyb granulocytů v chemoatraktivním gradientu
migrace granulocytů pod agarózou
poruchy chemotaxe: - primární defekty: syndrom líných leukocytů- sekundární defekty: diabetes, popáleniny
![Page 58: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/58.jpg)
Další testy nespecifické imunity
Test aktivace bazofilů:Bazofily společně s mastocyty jsou klíčovými
buňkami časné fáze alergické reakce
(vysokoafinitní receptor pro Fc fragment IgE)
Dochází k degranulaci a k expresi CD63
Možno měřit cytometricky
![Page 59: Nespecifické složky buněčné imunity - Ústav imunologieimunologie.lf2.cuni.cz/soubory_vyuka/Nespecificke slozky bunecne... · překoná tyto nespecifické mechanizmy. Patogeny](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022021715/5c77226309d3f2322f8bc362/html5/thumbnails/59.jpg)
Další testy nespecifické imunity
Eozinofilní kationický protein (ECP)ECP patří mezi preformované granulární proteiny
eozinofilů, uvolňují se při aktivaci
Stanovujeme chemiluminiscencí