neisseria gonorrhoeae prin real time pcr, la paciente cu ... · discuții nr. crt prevalenta...
TRANSCRIPT
Screening-ul pentru detecția Neisseria gonorrhoeae prin
Real Time PCR, la paciente cu
sindrom inflamator pelvin
Drd. Silvia Filipiuc
Conducător științific: Prof. Univ. Dr.
Luminița Smaranda Iancu
Lotul de studiu
• În perioada februarie – martie 2011 au fost
testate 100 de paciente cu sindrom inflamator
pelvin
• Repartiția pacientelor pe grupe de vârstă:
Grupa de vârstă Număr paciente
20 – 30 37
30 – 40 29
40 – 50 19
> 50 15
Cuantificarea absolută utilizând
tehnica Real Time PCR
Diluții seriate din controlul pozitivCuantificarea absolută realizată pe baza
curbei standard
Etapele detecției N. gonorrhoeae
prin Real Time PCR
• recoltarea și transportul probelor;
• purificarea ADN / N. gonorrhoeae;
• cuantificarea absolută utilizând tehnica Real
Time PCR.
Recoltarea și transportul probelor
• Probele au fost recolatate de la nivelul endocolului cu ajutorul tampoanelor E - Swab / Copan Innovation;
• Cele 100 de probe au fost testate în 5 sesiuni diferite de lucru:– I. probele 1 – 10;
– II. probele 11 – 40;
– III. probele 41 – 50;
– IV. probele 51 – 70;
– V. probele 71 – 100.
Purificarea ADN / N. gonorrhoeae
Kitul PrimerDesign PrecisionTM Gram Negative Bacterial DNA extraction
Cuantificarea absolută utilizând
tehnica Real Time PCR
• ETAPE:
– Setarea plăcuțelor;
– Setarea profilului termic;
– Pipetarea mixurilor de reacție RT PCR;
– “Run”;
– Validarea experimentelor;
– Analiza rezultatelor obținute.
Setarea profilului termic
Profilul termic prezintă 1 segment cu 1 ciclu de amplificare
și un al doilea segment cu 50 de cicluri.
Curbele de amplificare obținute în
cele 5 sesiuni de lucru
Sesiunea I Sesiunea II
Sesiunea IIISesiunea IV
Sesiunea V
Validarea experimentelor: verificarea
parametrilor curbelor standard
Sesiunea I Sesiunea II
Sesiunea III
Sesiunea I
Sesiunea IV
Sesiunea V
Analiza rezultatelor obținute: numărul
de cópii ADN / gonococ detectate
Sesiunea I Sesiunea II
Sesiunea III Sesiunea IV
Sesiunea V
Numărul probelor pozitive pentru
N. gonorrhoeae:
Sesiune de
lucru
Număr probe
cu Ct ≤ 40
I 0
II 9
III 0
IV 0
V 2
TOTAL 11/ 100 probe
pozitive
Discuții
Nr.
crt
Prevalenta gonococ An publicare Tara Autor Sistemul RT PCR
utilizat
1 0,006 2011 Elvetia Sakem B Abbott Diagnostics
2 0,2 2011 Spania Corbeto EL in house
3 16,7 2010 USA Gaydos CA Abbott RealTime
CT/NG
4 1.7 2010 Anglia Hopkins MJ Roche COBAS
Taqman CT
5 17, 2008 Norvegia Hjelmevoll SO in house
6 0,84 2008 Austria Schabereiter-
Gurtner C
COBAS
AMPLICOR
7 38 2007 USA Mangold KA COBAS Amplicor
8 16 2007 Rusia Shipitsyna E Real-time nucleic
+ (NASBA)
9 30 2005 Olanda Geraats-Peters CW COBAS
AMPLICOR
10 3 2004 Australia Whiley DM TaqMan-ABI7500
11 19 2004 Australia Whiley DM in house
Concluzii
• studiul nostru utilizează pentru prima dată în ţară o metodă RT-PCR pentru detectarea infecţiilor asimptomatice de N. gonorhoeae;
• prevalenţa infecţiilor asimptomatice, diagnosticate printr-o metodă înalt sensibilă şi specifică este de 11%;
• prevalenţa de 11% se încadrează în datele din literatură, care semnlează valori cuprinse între 0.006% şi 19 %;
• detectarea infecţiilor asimptomatice prin tehnici de biologie moleculară, deşi mai scumpă, comparativ cu metodele clasice de izolare şi identificare, are o eficienţă superioară, ceea ce justifică utilizarea ei pentru femeile cu infecţie pelvină cronică, în vederea instituirii unei terapii specifice, cunoscând profilul de rezistenţă la antibiotice în zona studiată, determinată prin metode fenotipice sau/şi genotipice.