n -acetyltransferase polymorphism in patients with behçet's disease

4
PHARMACOKINETICS AND DISPOSITION A. SuÈkruÈ Aynacioglu á Atila Bozkurt Muradiye Nacak á Selim Kortunay Recep Tunc á Aysun Dincel á S. Oguz Kayaalp N -acetyltransferase polymorphism in patients with Behc Ë et's disease Received: 17 April 2001 / Accepted in revised form: 12 July 2001 / Published online: 2 October 2001 Ó Springer-Verlag 2001 Abstract Objectives: The objective of our study was to investigate the possible role of human arylamine N-acetyltransferase 2 NAT2) polymorphism in suscep- tibility to BehcËet's disease. Methods: Eighty-®ve patients with BehcËet's disease gave their written informed consent to participate in the study. Seven point mutations G191A, C282T, T341C, C481T, A803G, G590A, G857A) in the NAT2 gene were analysed using polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism techniques. In addition, each patient received 100 mg dapsone orally to deter- mine their NAT2 phenotype. Dapsone and its metabo- lite monoacetyl-dapsone were measured in 3-h plasma samples using high-performance liquid chromatography. Subjects with an acetylation ratio monoacetyl-dapsone/ dapsone) less than 0.4 were de®ned as slow acetylators. Results: Of 85 patients with BehcËet's disease, 54 63.5%) were identi®ed as genotypically slow acetylators. How- ever, 60% 51 of 85) of patients were diagnosed as slow acetylators according to monoacetyl-dapsone/dapsone ratio. Thus, a low incidence of genotype/phenotype discrepancy 3.5%) was observed in Turkish patients with BehcËet's disease. When we compared our results with previous phenotyping and genotyping studies in the Turkish population, frequencies of slow and rapid acetylators were not statistically dierent in patients with BehcËet's disease. The frequency of the *5B allele was found to be slightly higher in patients with BehcËet's disease than historic controls 44.7 vs 35.6%, P=0.039). However, there was no signi®cant dierence in the fre- quency of the overall genotypes and alleles of NAT2 between patients and controls. Conclusion: Although the frequency of the NAT2*5B allele, responsible for slow acetylation, was slightly higher in patients than historic controls, our results failed to show an association between NAT2-acetylator status and risk for developing BehcËet's disease. Keywords N-acetyltransferase á BehcË et's disease Dapsone Introduction Acetylation is an important step in the biotransforma- tion of many drugs and other arylamine xenobiotics [1]. One of the well described and genetically determined polymorphic drug metabolisms is the N-acetyltransfer- ase 2 NAT2) acetylation polymorphism. At least seven point-mutation sites were described for NAT2 [2]. Rapid acetylators are homozygotes or heterozygotes for the dominant NAT2*4 wild-type allele, whereas slow acetylators carry dierent combinations of the multiple recessive alleles. There are marked dierences in geno- types and allele frequencies of the NAT2 gene in dierent populations [3]. Certain NAT2 traits may contribute to the occurrence of adverse drug eects [4] and, moreover, are susceptibility factors for certain malignancies such as bladder or lung cancer [5, 6, 7]. In addition, NAT2-acetylation polymorphism has been linked to susceptibility to certain autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus SLE) [8, 9] and scleroderma [10]. Eur J Clin Pharmacol 2001) 57: 659±662 DOI 10.1007/s002280100365 A.S. Aynacioglu &) á M. Nacak Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, Gaziantep University, 27310, Gaziantep, Turkey A. Bozkurt á S. Kortunay á A. Dincel á S.O. Kayaalp Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, Hacettepe University, 06100, Ankara, Turkey R. Tunc Department of Internal Medicine, Cerrahpasa Faculty of Medicine, Istanbul University, Istanbul, Turkey Present address: A.S. Aynacioglu Pamukkale University, Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, Bursa Cad. Kinikli 20020, Denizli, Turkey e-mail: [email protected], Tel.: +90-258-2133105, Fax: +90-258-2132874

Upload: oguz

Post on 25-Aug-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

������������ �� � �� ��

�� ��� ���� ���� ��� � ���� � ������������ ��� � ����� � ��������� ��� � ���� ����� � �� ���� ����

���������������� ����� ���� � ���������� ��������� �������

��������� �� ����� ���� � �������� �� ������� !�"� �� #$�% ���� � �$&���'�� !������ � ���!&�� ����� ����(��)*���+( ����

������� ���������� �'� !&,������ ! !$� ��$�% -+� �!�������(+�� �'� �!���&�� �!�� ! '$"+� +�%�+"���)+���%���+�� ��+�� � .���/ �!�%"!��'��" �� �$����)��&����% �! 0�'�1 ��2� ����+��3���� �� ��('�%)4�� �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+�� (+���'��� -������ �� !�"�� �!����� �! �+������+�� �� �'���$�%3 ���� �!��� "$�+��!�� .5�6��7 ��8��7 �9:��7�:8��7 �8�957 5;6��7 58;��/ �� �'� ��� (��� -���+�+�%��� $���( �!�%"��+�� �'+�� ��+���!�����������!� �+("��� ���(�' �!�%"!��'��" ���'��<$��3 � +�����!�7�+�' �+����� �������� ��� "( �+��!�� !�+��% �! �����)"��� �'��� ��� �'��!�%��3 �+��!�� +�� ��� "��+&!)���� "!�!+���%�)�+��!�� -��� "�+�$��� �� 9)' ��+�"+�+"���� $���( '�(')��� !�"+��� ��<$�� �'�!"+�!(�+�'%3 $&,���� -��' +� +���%�+��!� �+��! ."!�!+���%�)�+��!����+��!��/ ���� �'+� �3: -��� ��4��� +� ��!- +���%�+�!��3������ � 8; �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+��7 ;: .=93;>/-��� ������4�� +� (��!�%���+��% ��!- +���%�+�!��3 �!-)����7 =�> .;� ! 8;/ ! �+������ -��� ��+(�!��� +� ��!-+���%�+�!�� +��!����( �! "!�!+���%�)�+��!����+��!���+��!3 �'$�7 + �!- ��������� ! (��!�%����'��!�%���������+��% .93;>/ -+� !&������ �� �$�?��' �+������

-��' 0�'�1 ��2� ����+��3 @'�� -� �!"�+��� !$� ���$���-��' �����!$� �'��!�%���( +�� (��!�%���( ��$���� �� �'��$�?��' �!�$�+��!�7 ��<$������ ! ��!- +�� �+���+���%�+�!�� -��� �!� ��+������+��% ��A����� �� �+������-��' 0�'�1 ��2� ����+��3 �'� ��<$���% ! �'� ��� +�����-+� !$�� �! &� ���('��% '�('�� �� �+������ -��' 0�'�1 ��2�����+�� �'+� '���!��� �!���!�� .::3� �� 9;3=>7 �B�3�96/3�!-����7 �'��� -+� �! ��(��4�+�� ��A������ �� �'� ��)<$���% ! �'� !���+�� (��!�%��� +�� +������ ! ���&��-��� �+������ +�� �!���!��3� ����� �� ���'!$(' �'� ��<$���% ! �'� ������+�����7 ����!���&�� !� ��!- +���%�+��!�7 -+� ���('��%'�('�� �� �+������ �'+� '���!��� �!���!��7 !$� ���$��� +���� �! �'!- +� +��!��+��!� &��-��� ���)+���%�+�!���+�$� +�� ���? !� �����!���( 0�'�1 ��2� ����+��3

��� ��� )+���%���+�� ��+�� � 0�'�1 ��2� ����+���+��!��

���������

����%�+��!� �� +� �"�!��+�� ���� �� �'� &�!��+�� !�"+)��!� ! "+�% ��$(� +�� !�'�� +�%�+"��� C��!&�!���� D�E3��� ! �'� -��� ������&�� +�� (������+��% �����"�����!�%"!��'�� ��$( "��+&!���"� �� �'� )+���%���+�� ��)+�� � .���/ +���%�+��!� �!�%"!��'��"3 �� ��+�� ������!���)"$�+��!� ����� -��� ������&�� !� ��� D�E3�+��� +���%�+�!�� +�� '!"!F%(!��� !� '����!F%(!��� !��'� �!"��+�� ����� -���)�%�� +�����7 -'���+� ��!-+���%�+�!�� �+��% ��A����� �!"&��+��!�� ! �'� "$��������������� +������3 �'��� +�� "+�?�� ��A������� �� (��!)�%��� +�� +����� ��<$������ ! �'� ��� (��� ����A����� �!�$�+��!�� D9E3 ����+�� ��� ��+��� "+%�!����&$�� �! �'� !��$������ ! +������ ��$( �A���� D:E+��7 "!��!���7 +�� �$������&����% +��!�� !� ����+��"+��(�+����� �$�' +� &�+���� !� �$�( �+���� D;7 =7 �E3 �+�����!�7 ���)+���%�+��!� �!�%"!��'��" '+� &������?�� �! �$������&����% �! ����+�� +$�!�""$�� ����+����$�' +� �%���"�� �$�$� ��%�'�"+�!�$� . G�/ D87 6E +�������!���"+ D��E3

�$� # ���� �'+�"+�!� .����/ ;�� =;6H==��� ��3����������8����9=;

�3 3 �%�+��!(�$ .�/ � �3 +�+?���+��"��� ! �'+�"+�!�!(%7 I+�$��% ! ��������75+F�+���� J��������%7 ��9��7 5+F�+����7 �$�?�%

�3 0!F?$�� � 3 �!��$�+% � �3 ������ � 3�3 �+%++�����+��"��� ! �'+�"+�!�!(%7 I+�$��% ! ��������7�+������� J��������%7 �=���7 ��?+�+7 �$�?�%

�3 �$�����+��"��� ! �����+� ��������7����+'�+�+ I+�$��% ! ��������7��+�&$� J��������%7 ��+�&$�7 �$�?�%

������ ������ �3 3 �%�+��!(�$�+"$??+�� J��������%7���+��"��� ! �'+�"+�!�!(%7I+�$��% ! ��������70$��+ �+�3 ����?�� �����7 ����F��7 �$�?�%�)"+��� +%�+��!(�$K'!�"+��3�!"7���3� L6�)�;8)��99��;7I+C� L6�)�;8)��9�8�:

0�'�1 ��2� ����+�� �� �$((����� +� + �%���"����M+""+�!�% ���!���� ��?� G� -��' �+�? ! + ?�!-��+�'!(������ D��E3 ���'!$(' �'� "!�� �!""!� �+�$���+�� ���$����� !�+� +���!� (����+� $����+��!��7 "+�% !�'���%���"� �$�' +� �'� (+���!��������+� ��+��7 �'� �����+�����!$� �%���"7 �'� �?�� +�� ������� "+% &� +A�����3 �'�����+����� +�� ��������� ! �'� �!�����!� +�� ��� �!�)����$��� "+�� ���+��!�� �'!- "+�?�� �+��+&����% +"!�(��A����� �!�$�+��!�� D��E3 �'��� !�� �� �� �!���&�� �'+�����+�%7 �����!�"���+� +��!�� +���!� (������ �!�%"!�)�'��"� �� C��!&�!���)"��+&!�����( ��F%"�� "+% �!�)���&$�� �! �'� �����!�"��� ! �'� ����+��3 �� ��� �� +��"�!��+�� C��!&�!���)"��+&!�����( ��F%"� +�� �'�!����)�+��% �'� �!�)+���%�+��� C��!&�!���� "+% ���$��+$�!�""$���% "��'+���"�7 �'� +�" ! �'� ������� ��$�%-+� �! �������(+�� -'��'�� �'� (������ �!�%"!��'��" ! ��� ��+%� + �!�� �� �'� �$������&����% �! 0�'�1 ��2� ����+��3

�������� �� �������

�$�% �!�$�+��!�

��('�%)4�� �+������ .;= "+�� +�� �6 �"+��N :� �"!?���7 :9�!�)�"!?���N 9�3=O83� %�+��N =�3=O��36 ?(/ -��' 0�'�1 ��2�����+�� -��� ����$���� �!" �'� �'�$"+�!�!(% !$��+������ $���! �'� ��+�&$� J��������% �!����+�3 ��� �+������ -��� "+��)�+���� !� �'��� !�(!��( "����+��!� �$���( �'� ��$�%3 !�� -+��+?��( + "����+��!� ?�!-� �! &� "��+&!����� &% �'� ���)+���%�+��!� �+�'-+%3 �'� ��$�% -+� +���!��� &% �'� ��'����!""����� ! ��+�&$� J��������%7 ����+'�+�+ �����+� �'!!�7+�� +�� �+������ (+�� -������ �� !�"�� �!�����3 �$� �����!$��+�+ �!" ��� (��!�%���( +�� �'��!�%���( ��$���� �� '�+��'%�$�?��' �!�$������ -��� $��� +� '���!��� �!���!�� D��7 �9E3 �'���"!(�+�'�� �+�$��� ! �'��� '�+��'% �!�$������ -��� �!�

��(��4�+���% ��A����� �!" �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+�� .�+�+�!� �'!-�/3

�+��!�� .��� "( �3!3/ -+� (���� �! �+������ -��' 0�'�1 ��2�����+��7 +�� + ��)"� &�!!� �+"��� -+� ��+-� +� 9 '3 �� �'� �+"���"�7 +� �C��+ ��)"� &�!!� �+"��� -+� ��+-� !� (��!�%��� +��+%7+�� &�!!� �+"���� -��� ?��� �!F�� +� H����3

5��!�%���( ! ���

5��!"�� �� -+� �C��+���� �!" ��$?!�%���3 I�+("���� ! ���� &� �!��+����( �'� �!���( ��(�!� ! �'� ��� (��� -���+"���4�� $���( �!�%"��+�� �'+�� ��+���!� .���/3 ��� ����� �!���"$�+��!�� .�+&�� � +�� �+&�� �/ -��� +�+�%��� $���( ���)��)�������!� �+("��� ���(�' �!�%"!��'��" +� ������&�� �����!$��%D�:E3 ������� -��� ��+���4�� +��!����( �! *+���� �� +�3 D�E3 �C)������ (��!�%�� ��<$������ -��� ������� $���( �'� �+��%)@���&��( �+- �!" ���(�� +����� ��<$������3

�'��!�%���( ! ���

�'� ��+�"+ �!������+��!�� ! �+��!�� +�� ��� "��+&!���� "!�!)+���%�)�+��!�� -��� �����"���� $���( '�(')��� !�"+��� ��<$���'�!"+�!(�+�'% -��' $���+��!���H����&�� �������!� D�;E3 �'� ��"���! <$+���4�+��!� !� &!�' �+��!�� +�� "!�!+���%�)�+��!�� -����� �(�"�3 �'� �����)+��+% +�� ����+)+��+% �!�P������ ! �+��+��!�-��� ���� �'+� ��>3 $&,���� -��' +� +���%�+��!� �+��! ."!�!+���%�)�+��!����+��!��/ ���� �'+� �3: -��� ��4��� +� ��!- +���%�+�!�� D�;E3

�+�������

�+������+� +�+�%��� ����$��� 6;> �!�4����� ������+� ! ��!�!���!��7I���'��2� �C+�� ���� !� �!"�+���!� ! (��!�%��� +�� �'��!�%�����A������� &��-��� �!�$�+��!�� +�� �$����2� �)���� !� �!"�+���!�! �'� "��+&!��� �+��!� &��-��� ��!- +���%�+�!�� +�� �+��� +���%)�+�!�� $���( �'� �!"�$��� ��!(�+" 5�+�'�+� ���+�3 �'� ����� ! ��+������+� ��(��4�+��� -+� ��� +� �B�3�; -��' �-!)����� +�+�%���3

���� ! �!"�+���!� ! (��!)�%��� �� �+������ -��' 0�'�1 ��2�����+�� +�� �� �!���!��3�C������ (��!�%�� ��<$������-��� �+��$�+��� �!" �'� ��<$������ ! ���(�� +������(���� �� �+&�� 93 5��!�%���-��'!$� �C������ �+�$�� �����)���� �3;> ! �'� �!�+� �+�����(�!$�3 �� �!�4����� ������+�

�+������ .�B8;/ �C������>

�!���!��+ .�B9�9/ �C������>

� > 6;> � � > 6;> �

�+����� �� ; ;38 �38H��3� :3: �� :3� �3�H=38 ;39�� ��� � � � �39 �3�H�38 �3=�� ��� �: �=3: 838H9�3� �836 =9 ��38 �=3:H�;38 �=3;�� ��� � � � �39 �3�H�38 �3��� �!� �� �:3� =3:H�83� �93: :; �:36 ��3�H�63: �:3��� �"� � � = �3� �3�H:39 �3��!� �#�� � � � �39 �3�H�38 �3�

$" �+��� 9� 9=3: ��3�H:�3; 9=3� ��6 :�3= 9=36H:83: :�3�

�!-��� ��� � � � �3� �3�H�3: �3���� ��� � � � �39 �3�H�38 �3���� �!� � � � �3� �3�H�3: �36��� ��� �8 ��3� ��38H993� �636 9: ��3� �36H�;39 ��3���� ��� � � � �39 �36H:3� 93:��� �!� �: �83� �83�H:�3: �83: =� ��3� ��3=H��3� ��38��� �"� � �39 �39H�636 �3� �� 93= �38H=3: 93���� ��� � � 9 �3� �3�H�36 �3���� �!� � � �� :3� �3�H=38 �36��� �"� � � � �3� �3�H�3: �3:�!� �!� 8 63: ;3�H��3� ��3� �; 83� ;3:H��3� 639�!� �"� � �39 �39H�636 �3: 8 �3= �3�H;3� �3�

$" ��!- ;: =93; ;�3:H�:3= =�38 ��: ;�3: ;�3=H=93� ;836

�!�+� 8; ���3� 9�9 ���3�

+�%�+��!(�$ �� +�3 D��E

==�

�������

� 8; �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+��7 ;: .=93;>/ -���������4�� +� (��!�%���+��% ��!- +���%�+�!�� .�+&�� �/3�'��� -+� �! ��(��4�+�� ��A������ �� ��<$���% ������)&$��!� ! �'� !���+�� +������ .�C���� ������/ +��(��!�%��� ! ��� &��-��� �+������ +�� '���!��� �!�)��!�� .�+&�� �/3 �'� ��<$���% ! �'� ������ +�����-+� ���('��% '�('�� �� �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+�� �'+��'� '���!��� �!���!�� D::3�> �� 9;3=>N I��'��2� �C+�� ����.�-!)�+����/ �B�3�967 �+&�� 9E3

�'� "��+&!��� �+��! ! "!�!+���%�)�+��!�� �!�+��!�� �+�(�� �!" �3�� �! �3=8 �� �+������ -��'0�'�1 ��2� ����+��3 �'� ��<$���% ������&$��!� ��!4��� +����!&�� ��!�� !� ��+�"+ "!�!+���%�)�+��!����+��!���+��!� +�� �'!-� �� I�(3 �3 �'� '���!(�+" -+� ���$+��%�$((������ ! + ���"!�+� �+�'�� �'+� + &�"!�+� ������&$)��!�3 �!- +���%�+�!� �'��!�%�� -+� !$�� �� =�> .;� ! 8;/ ! �+������3 �'� (��!�%��� ! �'��� �+������ -'! -���������4�� +� �'��!�%���+��% �+��� +���%�+�!�� ."!�!)+���%�)�+��!����+��!�� �+��!�� �3:�7 �3;� +�� �3:;/ -������ ���7 ��� �!� +�� �!� �"�7 �����������%3 �'��� -+��! ��(��4�+�� ��A������ �� �'� ��<$���% ������&$��!� ! ��!- +���%�+�!� �'��!�%�� &��-��� �+������ -��'0�'�1 ��2� ����+�� +�� '���!��� �!���!�� D�9E .�+&�� �/3

�'� "�+� "��+&!��� �+��! ! "!�!+���%�)�+��!�� �!�+��!�� -+� ��(��4�+���% '�('�� �� �+��� .'!"!F%(!$���$� '����!F%(!$�/ +���%�+�!�� .�3�;O�3��/ �'+� ��!-.'!"!F%(!$� ��$� '����!F%(!$�/ +���%�+�!�� .�3��O�3��/7 + ��� �C��$��!� ! �'� �'��� �+������ -��' (��!�%����'��!�%�� �������+��% . �$����2� �)����7 �Q�3����/3

���������

�'�� �� �'� 4��� ��$�% �� -'��' �'� ��� (��!�%�� +���'��!�%�� '+�� &��� ��+�$+��� �� 0�'�1 ��2� ����+��3 @� !$�� �! +��!��+��!� &��-��� &!�' �'��!�%���+��% +��(��!�%���+��% �����"���� ���)+���%�+�!� ��+�$� +���$������&����% �! 0�'�1 ��2� ����+��3 �'� ��<$���% ! �'������� +�����7 ����!���&�� !� ��!- +���%�+��!�7 -+� !$�� �! &� '�('�� �� �+������ �'+� '���!��� �!���!��$&,����7 &$� �'� ��(��4�+��� ! �'�� 4����( ��<$���� $��'�� ��+�$+��!�3 ���'!$(' �!�� ! �'� �+������ -+��+?��( + "����+��!� ?�!-� �! &� "��+&!����� &% �'����)+���%�+��!� �+�'-+%7 -� !&������ + �!-��������� ! (��!�%����'��!�%�� �������+��% .93;>/ ��

"��� ! I��<$���% ������&$��!� ! �'� ��+�"+ "!�!+���%�)�+��!����+��!�� .�����/ +���%�+��!� �+��! �� 8; �+������ -��' 0�'�1 ��2�����+�� .�� �� ��� ��������� ��!- +���%�+�!��7 $�� ��� �+���+���%�+�!��/

���� # �'� ������&$��!� ! ��!- +���%�+�!� D+�%�+"���)+���%���+�� ��+�� � .���/E(��!�%�� +�� �'��!�%�� ���+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+��+�� ���$��� �!" '���!����!���!� (�!$��

I��<$���% ! ��!- +���%�+�!�� .>/

5��!�%�� �'��!�%��

�+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+�� =93; .;:�8;/ =�3� .;��8;/�!���!� (�!$�� ;�3: .��:�9�9/+ =�3� .�:8��::/&

+�%�+��!(�$ �� +�3 D��E&0!F?$�� �� +�3 D�9E $��� �$��'+��"����� +� + ��!&� ��$(

���� $ ������ ��<$������ �� �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+�� +�� '���!��� �!���!��3 ��� +�%�+"��� )+���%���+�� ��+�� �7 %� -��� �%��7 &�!� ��(��4�+��7 ' ($+����7 � �%�!����7 � �'%"���7 � +������

��� +������ �!����!�� �+������+

.�B���/�!���!��&

.�B=�=/� �+�$�

�6� �8� 9:� :8� ;6� 8�9 8;� � > � >

�� .-�/ 5 � � � 5 � 5 9= ��3� �:� �93� ��� 5 � � � 5 5 5 �= ::3� ��= 9;3= �3�96�!� 5 � � � � � 5 ;: 9�38 �8; 9�3; �"� 5 � � � 5 � � : �39 �� :3;

�!�+� ��� ���3� ;=8 693�

+� �+������7 ���7 ��� +�� �#�� +������ -��� �!� !$��&�%�+��!(�$ �� +�3 D��E

==�

�$�?��' �+������ -��' 0�'�1 ��2� ����+��3 �'�� "+% &� �$��! �!"� $�?�!-� �+�'!�'%��!�!(��+� �!�����!�� ! �'�����+�� !� "�+�$��"��� ���!��3 $�' 4����(� -��� +��!���!���� �� !�'�� ��$����3 �+��!�&� �� +�3 !$�� + =3�>����+��!� �� ��� (��!�%�� +�� �'��!�%�� +"!�( ;=9$����+��� 5��"+� �$&,���� $���( �+A���� +� + ���� ��$(D�:E3 �������%7 �'� �+�� ! (��!�%����'��!�%�� �������)+��% -+� ���!���� +� �3;> +"!�( �'����� -!"�� D�=E3

0��+$�� ! �'� ��"��+���% ! ��!- +���%�+�!� ��<$��)���� ���!���� �� ���!� �'+�"+�!�����"�!�!(��+� ��$������ �'� �$�?��' �!�$�+��!� D��7 �8E7 �������� '���!����!���!� (�!$�� ���" �! &� ���������+����3 � "+% &� +�)�$"�� �'+� + �������� �+����� �!�$�+��!� -��' ����������+�� '+� &��� �������(+��� &��+$�� ! �'� ����$��"��� �!" + �����+�%)�+�� �� ������ '!����+�3 �'�� �� ��M�����&% �'� '�(' ��!�!���!� ! �+������ -��' �%���"�� ������+� �+�$��� +�� �'��� "����+��!� ����$���( ����+��)"!�� %)��( ��$(�3 �'$� ��A������� �!" + �!���!� �!�$�+��!��'!$�� '+�� &��� �������� �+���%3

���'!$(' �'��� +�� �!�M�����( ���$��� -��' ������� �!�'� +��!��+��!� ! ���)+���%�+��!� ��+�$� +�� ���? ! �����!���( G� D67 �6E7 �'��� �� �!"� �������� �'+����)+���%�+��!� �!�%"!��'��" '+� &��� ���?�� �!�$������&����% �! ����+�� +$�!�""$�� ����+��� D87 67 ��E3�� !������������+��!� ! ��� ��!- +���%�+�!�� -+� !$�� +"!�( �+������ -��' G� D87 6E3 � '+� &��� �$()(����� �'+� �!�)+���%�+��� C��!&�!���� "+% +��$"$�+���� ��!- +���%�+�!�� +�� +�� �$&��<$����% "��+&!����� &%!�'�� ��F%"�� ���! ��+����� �����"���+���3 �'��� ��+����������"���+��� �!$�� +���� ��� )��!����� ��������� �! �'��""$�� �%���" +�� ���"$�+�� � �����7 -'��' �� �$�� ���)��+�� �+�'!�!(��+� +�� ������+� ��(�� ! +$�!�""$���% D��7��E3 �!-����7 �C���� !� �'� ���+�����% '�('�� ��<$���%! �'� ������ +�����7 -� +���� �! ������ + ���+��!��'��&��-��� ��!- +���%�+��!� +�� �$������&����% �! 0�'�1 ��2�����+��7 �$((�����( !�'�� +��!�.�/ ��+% + �!�� �� �'� ��)���!�"��� ! 0�'�1 ��2� ����+��7 �$�' +� + 5�� �:� �!�%)"!��'��" ! ���������$�+� +�'���!� "!���$�� � D��E3

� �!���$��!�7 !$� ���$��� �$((��� �'+� �'� ���)+���%�+�!� ��+�$� �� �!� + "+,!� �����"��+�� ���$������&����% �! 0�'�1 ��2� ����+�� �� �'�� �$�?��' �+������!�$�+��!�3 ���'!$(' �'� ��<$���% ! �'� ������+����� -+� !$�� �! &� '�('�� �� 0�'�1 ��2� �+������7 $��'����$���� +�� ������+�% �! ��+�� % �'� �+�'!�'%��!�!(��+�+�� ������+� �"�!��+��� ! �'�� 4����( �� �+�(�� �+������(�!$�� +�� +��! �� ��A����� �!�$�+��!��3

��� ��������� �'�� -!�? -+� �$��!���� &% + (�+�� �!" �'� ������4� +�� ���'���+� ����+��' �!$���� ! �$�?�% . 0�5)�6:=/3@� -!$�� ��?� �! �'+�? ��! ���!� �+�+� R+F��� ! �'� ���+��"���! �����+� ��������7 J��������% ! ��+�&$� !� �+����� ����$��"���+�� !� '��� $� �!""����3

��������

�3 @�&�� @@7 ���� �@ .�68;/ )+���%�+��!� �'+�"+�!(����)���3 �'+�"+�!� ��� 9���;H�6

�3 *+���� ��7 @�&�� @@7 0��� ��7 �$���� #�7 ��+�� ���75�+�� ��7 ���� �@7 G�� �#7 ��%�� J�7 ������( �*7 �"

�7 $F$?� �7 R+"+F!� R .�66;/ !"����+�$�� !� )+���%)���+�� ��+���3 �'+�"+�!(������� ;��H��

93 5�+�� ��7 �$('�� �7 #+��F�� �7 5!!� ���!- 5�7 �'���#7 5+���(? �7 R$ *G7 5��-+� � .�66�/ �$"+� +���%�)��+�� ��+�� �!�%"!��'��"�3 �$�+� ��� 9�=�=�H��

:3 0�!�?"!S ���� #7 �!!�� .�66:/ ������"��� ! ����� $����!�3������+� �"����+��!��3 ���� �'+�"+�!?���� �����=H�:8

;3 ����' �7 @+��+�� ���7 0+�'��� 7 �" � .�66;/ �!- )+���%�+��!� (��!�%�� �� + �$������&����% +��!� �� !��$�+��!�+�+�� �"!?��( ���+��� &�+���� �+����3�$" �!�5���� :��9�H�9=

=3 0�!�?"!S ���� #7 �+��!�&� 7 ���& �7 �!!�� .�66=/ �!"&����+�+�%��� ! ��'������ �!�%"!��'��"� �� +�%�+"��� )+���%�)��+�� ��+��7 (�$�+�'�!�� )��+�� ��+��� �� +�� ��7 "���!�!"+���!C��� '%��!�+��7 +�� �%�!�'�!"� �:;� ��F%"�� +� "!�$)�+�!�� ! &�+���� �+���� ���?3 �+���� ��� ;=�96�;H96�;

�3 �+��!�&� 7 0�!�?"!S ���� # .�66=/ �!"!F%(!$� �+��� +�%�)+"��� )+���%���+�� ��+�� .���/ (��!�%�� +� �$������&����% +��!� !� �$�( �+����3 �+���� ��� ;=�96=�H96==

83 �!� �'"����&��( 7 I�����'� �7 �!S ��+$ ��7 5!�?+ �7 ���?�� �7 �'$��� �)�7 �!S '� �7 +�'� 07 0!�� ��7 G��')"+�� �7 �$F%T �?+ �7 ����� �7 �&�� #7 5����'"+�� � .�66=/�!�%"!��'��"� ! ��$()"��+&!��F��( ��F%"�� �� �+������ -��'���!�+�'�� �%���"�� +$�!�""$�� ����+���3 �C� �!C��!� �+�'!�:8�9:6H9;9

63 �!� �'"����&��( 7 I�����'� �7 �!��+$ ��7 ���?�� �75!�?+ �7 ���'���)����F �7 �'$��� ��7 G�'"+�� �7 �$F�)�?+ �7 ����� �7 �&�� #7 5����'"+�� � .�666/ �!�%"!��'��"�! �'� C��!&�!���)"��+&!��F��( ��F%"�� �R���� +�� ��)��� �%���"�� �����!��� +�� �$�$� ��%�'�"+�!�$�3 ��� �C� ���0�!� :;;��:�H�;�

��3 �+% �57 0�+�? ��7 ����� #7 ��$?+ ��7 �+���� 07 0��)���! G7 �!���� #� .�66�/ ����!���"+ �� +��!��+��� -��' �� ) ������� �� �������$+� �!$��� ! ��$( "��+&!���"� + ��$�% -��'�+��!��7 ��&���!<$���7 +�� "��'��%�!��3 ���� �'+�"+�!��'�� :8��8=H�6;

��3 0+���� �57 R+F��� � .�666/ 0�'���2� �%���!"�3 �'�$"+�!�)!(% .�C !��/ 98�����H���:

��3 �%�+��!(�$ � 7 �+��!�&� 7 ��!F�?��-��F ��7 �!!�� .�66�/��%�+"��� )+���%���+�� ��+�� .���/ (��!�%��� �� + �$�?��'�!�$�+��!�3 �'+�"+�!(������� ��9��H99�

�93 0!F?$�� �7 0+��� �7 �+�+� 7 �$���� �7 �+%++�� � .�66�/)+���%�+��!� �'��!�%���( -��' �$��'+��"����� �� + �$�?��'�!�$�+��!�3 �$� # ���� �'+�"+�!� 98�;9H;=

�:3 �+��!�&� 7 ��+?!$��� 7 0�!�?"!S ���� #7 �+$��� �7 ������( �7�!!�� .�66;/ ��%�+"��� )+���%���+�� ��+�� "$�+��!�� +���'��� +������ ���?+(� �� $����+��� �+$�+��+� �������$+��� �!���)�+��!� -��' �'��!�%��� +������%3 �" # �$" 5���� ;��;8�H;6�

�;3 �+% �57 �!���� #�7 J�����'� #� .�66�/ �'� �!����&$��!� ! )'%��!C%�+��!� +�� +���%�+��!� �! �+��!�� �'+�"+�!?��������� �!�"+� �$&,����3 ���� �'+�"+�!� �'�� :8�=�6H=��

�=3 U'+$ 0��7 �!- �7 G�� �#�7 G�� � .����/ �!����+��!� &�)�-��� +���%�+��!� �'��!�%�� +�� (��!�%�� �� �'����� -!"��3�$� # ���� �'+�"+�!� ;=�=86H=6�

��3 �$�$ .�6�6/ �!���� �$S &��?$S �!F ���+������� &���%�����+�����+�%!� '�F�+����� �+��+�"+����� !S ��"�3 ��?�!&�%!� 0$��9�;9H=�

�83 �+�+?+%+ ��7 �!? 7 +��+� 7 5!($� �7 +��+� � .�68=/)+���%���+�� ��+�� �'��!�%�� ! �+������ -��' &�+���� �+����3�$" �!C��!� ;�999H99;

�63 0+�� �7 @!!���% �G7 ����$� � .�68=/ I$��'�� �������� !��'� �+�? ! +��!��+��!� &��-��� +���%�+�!� �'��!�%�� +���%���"�� �$�$� ��%�'�"+�!�$�3 ���'����� �'�$" �6�;�8H;�:

��3 �!� �'"����&��( 7 5����'"+�� �7 J�����'� #� .�66;/�$��!�'��� +�� ��$( "��+&!���"3 ������ �=8�;8;H;8=

��3 J�����'� #� .�66�/ �'� �!�� ! ��$�!�%��)(����+��� ��+�����"��+&!����� �� �'� �+�'!(������ ! ���!�%���+��� ��$( ��+���!��3��$( ���+& ��� �:��66H9==

��3 0!�+��� G7 +��+�+�� �7 �+�+�� 07 �������� 7 ��+���! 57 �+�����I7 +��� I7 �+�+����+ �7 5!�!�� �7 ��!��+ I7 I�������� �7�+!�+FF� 57 ��!�� �7 I+������ �7 �+��'�!�� G .����/��������$�+� +�'���!� "!���$��)� (��� �!�%"!��'��"� ��0�'���2� ����+��3 # �'�$"+�!� �8���89H��8�

==�