molecular epidemiology - wiley online library

8
INTERNAL MEDICINE IN THE 21ST CENTURY Molecular epidemiology P. BOFFETTA From the Unit of Environmental Cancer Epidemiology, International Agency for Research on Cancer, Lyon, France Abstract. Boffetta P (Unit of Environmental Cancer Epidemiology, International Agency for Research on Cancer, Lyon, France). Molecular epidemiology (Internal Medicine in the 21st Century). J Intern Med 2000; 248: 447±454. The use of biomarkers in epidemiology is not new, but recent developments in molecular biology and genetics have increased the opportunities for their use. However, epidemiological studies based on biomarkers, which belong to the discipline defined as `molecular epidemiology' are subject to the same problems of design and analysis as `traditional' epidemiological studies. If biomarkers offer new opportunities to overcome some of the limitations of epidemiology, their added value over traditional approaches should be systematically assessed. Bio- markers should be validated though transitional studies; consideration to sources of bias and confounding in molecular epidemiology studies should be no less stringent than in traditional studies. Keywords: bias, biomarkers, confounding, molecu- lar epidemiology, statistical power. Introduction The definition of molecular epidemiology applies to a discipline overlapping with both public health and experimental science. There is no universally accepted definition of which type of research fits into the discipline, and emphasis is given to different aspects that depend to a large extent on the background of the investigators involved. So, for an epidemiologist, molecular epidemiology might include any epidemiological study involving the use of any biologically based measurement (including possibly measurement of blood pressure), whilst for a molecular biologist the search for a new gene in a series of a few dozen patients would qualify as a molecular epidemiological study. This confusion may originate from the growing availability of molecular (and more in general biological) ap- proaches to measure variables that might be relevant in epidemiology, and from the recognition of the need to validate and apply them to carefully defined populations. Despite the ambiguities in the definition of molecular epidemiology [1], the definition has been successful and is now widely used in names of departments, university courses and programmes, scientific meetings and professional societies. Several textbooks have also been published [2, 3]. The use of biologically based approaches to measure variables of interest in epidemiological studies is not new. Two areas in which studies have been conducted for decades that would nowadays be included under the rubric of molecular epidemiology are epidemiology of infectious diseases and cardio- vascular epidemiology. As an example, Fig. 1 shows the results of one of the early study linking elevated serum cholesterol levels ± which today might be classified as a biomarker of exposure ± to risk of ischaemic heart disease in the Framingham cohort [4]. The recent expansion of studies based on Journal of Internal Medicine 2000; 248: 447±454 # 2000 Blackwell Science Ltd 447

Upload: others

Post on 28-Feb-2022

4 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

�������� ������ �� ��� � �� ������

��������� ������� �

�� ������������ ��� �� �� � ������� ����� ����������� ��������� ����� ��� �������� � ������ ���� �����

��������� �������� � ���� �� ������������ ������

������� �� ������������ � ���� ��� �!����" ��

������� #���� ������$� ��������� ������� ���������� ������ � �"� %&!� �������$� � ����

��� %'''( ���� ))*+),)�

�"� �!� �� -����.��! � ������� � ! ��� ��/� -��

������ ����������! � ��������� -��� � ��� �����! "��� �����!�� �"� ��������! ��� �"��

�!�� 0�/����� ������� ��� !����! -�!�� ��

-����.��!� /"�" -���� �� �"� �!���� �������! 1��������� ������� �2 ��� !�-3��� �� �"� !���

��-���! �� ��! � ��� �����!! �! 1���������2

������� ��� !����!� �� -����.��! ����� ��/

��������! �� �������� !��� �� �"� �������!�� ������� �� �"�� ����� ����� ���� ���������

�����"�! !"���� -� !�!���������� �!!�!!��� ��4

���.��! !"���� -� �������� �"�� " ����!�����!����!( ���!������� �� !�����! �� -�! ���

��������� � ��������� ������� � !����!

!"���� -� �� ��!! !��� ��� �"�� � ��������� !����!�

������ �� -�!� -����.��!� ��������� � ������4��� ������� �� !���!���� �/���

�!��� "��#�!

�"� ������� �� ��������� ������� � ���! �� ��!���� ������� /�" -��" �-�� "����" ���

�5�������� !������ �"��� ! �� �����!����

������� ������� �� /"�" ��� �� ��!����" ��!��� �"� �!����� ��� ��"�!! ! ��� �� ��������

�!���! �"�� ����� �� � ��� � �5���� �� �"�

-��. ����� �� �"� ���!� ����! �������� 6�� ����� ������� !�� ��������� ������� � � "�

������ ��� ������� ��� !���� ������ �"� �!�

�� ��� -��� ����� -�!�� ���!������� ������� �!!-�� ���!������� �� -���� ��!!���$� /"�!� ���

� ��������� -��� !� �"� !����" ��� � ��/ ��� � �

!���! �� � ��/ ��7�� �����! /���� 8����� �! ���������� ������� ��� !����� �"! �����!��

��� �� ���� ���� �"� ��/� �����-��� ����������� ���� ���� � ������ -��� ���$ �4

����"�! �� ���!��� ����-��! �"�� � "� -�

�������� � ������� �� ��� ���� �"� ���� ����

�� �"� ���� �� ������� ��� ��� �"�� �� ���������

������ �������!�9�!�� �"� ��- ���! � �"� ������� ��

��������� ������� � :&;� �"� ������� "�! -���

!����!!��� ��� ! ��/ /���� �!�� � ����! �����������!� �����!�� ����!�! ��� �� �����!�

!������ ����� ! ��� ����!!���� !�����!� 6������

��5�-��.! "��� ��!� -��� �-�!"�� :%� <;��"� �!� �� -��� ����� -�!�� �����"�! ��

���!��� ����-��! �� �����!� � ������� ���

!����! ! ��� ��/� �/� ����! � /"�" !����! "���-��� ��������� ��� ������! �"�� /���� ��/����! -�

������� ����� �"� ��-�� �� ��������� ������� �

��� ������� � �� �������! �!��!�! ��� �����4��!����� ������� �� �! �� �5����� � � & !"�/!

�"� ��!���! �� ��� �� �"� ����� !���� ��.� ��������

!���� �"���!����� �����! + /"�" ����� � "� -����!!��� �! � -����.�� �� �5�!��� + �� �!. ��

!�"���� "���� �!��!� � �"� ����� "�� ��"���

:);� �"� ������ �5��!�� �� !����! -�!�� ��

������ �� ������ ����� %'''( ���= ))*+),)

� %''' ����./��� 6����� #�� ))*

-����.��! "�! ����!����� � �"�� � � !������

���� � � ��"�� ����! �� �"���� �!��!� ���4���� �� ����-�� � ������ ������� ��

�� ! �!���� �� ���!��� ��������� ������� �

/�"� �"� �����/��. �� ������� ��� !����! � ������� ������� � ��! �� ������ ����������!

�� �!��!� ���"�� �!. ������! �� �������� ������!$

��� �� 8������ �"�� ����� �"! ! ���� /"�!� ��.� ��� ������� ��� �"� �5���� /"�" ! ���!-��$ !�����!

�� ������ ��� !�!������ ����� �-�! ��� ��������4

� $� �! /��� �! ������! �"�� ����� �"� ������ �� �"����������� �� �����!� �� � %$� �! �� �5�����

������� ��� !����! "��� !"�/� �� �����!��

�!. �� ������ �� �"� ���� ����� ���� !� ����"�����.��! :,;� �"! ������� "�! -��� !���!������

! ������ ���� ������ ����� "�! -��� �5������$ �!������ ��� � !����!� ��� � "�! -��� �������� �"��

�� ������ "�/ ����"�� ���.� ��� ���� ������

/��� ���!���� ���� ��������� -�! �� ���� ���� �!���!!������ �� �5�!��� ��� ������� "�!

-��� �5������$ ��� � �������� ���! �� �������4

��� !����! ���� ��!�+������� ��� ��"��� !����!�

�"�! ������ �"� �.��"��� �� -�! ���� !������� ��

!���� !�-3���!$� ����"������� �"� ������� ���4������ ������ �� ��-���� !��.� "�! -���

���������� � �����! !����! ��� � -� ��!����� �"�

�����!! �� ���!��.��!$� ��� �"� !�!���-��� ������"��4������� ���� ������ � �������� ���! ��� �

�!!-�� ������� �� ��"����$ "�! ��!� -��� !������

�� � ��� � �5����� ��������� ������� ���!����! �� � �"� !��� �����/��.= � ��"�� /���!�

�"�� ���!!� �� ������� ��� !����! � /"�"

��"�� �!. ������!� �������!� ����������! �� ������������! ��� ���!���� /�" -����.��!� 6�������

�"� !��� �� �����! !"���� -� ���� �� 3�� �

�"� ��! �� �����!! ��� ����������� �� �"�!�!����! �! � �"� ��!� �� 1���������2 ������� ���

!����!� ��� �5����� ! �"� ���!! �� 1����!�����2

!����!� /"�" ����!��� � ��� �� ���!� ����!���� �� ��������� ������� � �!�� -���/$�

�����.��! "��� -��� ����������� �!�� �!"��

� ���.��! �� �5�!���� �!��!� ��� !�!���-������-�� &$� �"! �!������ !� "�/����� !���/"��

��-������ ��� �5����� �"����!���� �-�������!

"��� -��� �!�� ��� ������! �� ������ �5�!��� �������������� ������ ��! :>;� ���� �"! ��� ��

��/� �"�� ��� -� ���!!��� �! �5�!��� -����.��!�

0�/����� ������ ������� ���! ��/���! � ���� ���"����!���� �-�������! � ������ ������ �!.

:*; � �"�� !�-3���! /�" �� �����!�� ���8����� ������! /�" �-�������! ��� �� �����!�� �!. �� �������

����������� ���� �"� � ��� �"�� /��� �5�!�� ���

�� �"! ��!���� �"�� ��� -� !��� �! ����� ���.��! ���!��!��

����"�#!$ �#�% �#�&��'���

�"� �������� ��� �!� -����.��! �� ���!����5�!��� ��! � �"� ������ �� �����!� �"� ������

))? �� ��������

(#$� �������� �� !�"���� "���� �!��!� ��� !���� �"���!������ �"� ����� "�� ��"��� + &%4���� �����/4� �� ��� :);�

(#$� � ����������� �� �5�!���+�!��!� �������! /�"

������� ��

���)� ���!!�! �� -����.��!

���!! �5����! � ������ ������� �

�5�!��� 9@� �� ����� ������

A��� 9@�

������ ����-����9!��!� B��� �������

�"����!���� �-�������

��������!�� �������

6�!���-��� ����-��� ������"!�9@� ���� ������

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

��� �"� ���!�� �� �"� ���!������� �� �"�

-��� ����� �������� �5�!��� ����-��!� �� !���

��!�!� �"� -����.��4-�!�� ���!��� �� �5�!�������!���! �� �-���! ��������� ��/���! � -�����

�!!�!!���� �� �5�!����

������5� ����!���! � ��� �5���� � /"�"�5�!��� -����.��! "��� ����!����� � !�� ���4

/��� � �"� ���������� �� "���� ������ "�7���!�

�"� ��� �! ���������� ��� �� ! � ������ ������4���� �� ����!����!� � �������� ������! ��� ���!�

�!������ � C�!� ����� ��� ��!� �!�� �� ������

!���� � �������!� � ������! � ��5�� ������������5�� /"�" !"�/! !���� "����5� ��� ����4

�� ��� ������! � !������ ����� �����!� B���

�"� ���. �� ������ ������� ��!�� �� !���� �� ������5�� ����!!�� ����� �"��� ! �� !��!-�� /�� ���4

����! ��� .��/ /"��"�� �"� ���� �"�� ���!��� !

������������ 6����! �� �"� ������ ��� ������ ��������5� "��� �"������� -��� ����� -� �"� ��������

� �������� �5�!��� !����! �� �"� �������

������ ���"�� " ����� ��� !���� ����! ��� � ���� �!$� /"�" ����������� /�! ���8���� "�� � " "��

���������� �� ���� ������ �"�� �� "-���� ����!

/�" ��!! ���8���� ������������ �"! !�������"�� �� /�" �"� ���������� �� !���� ��� ����

-����.��! �� ������5� �5�!���� ������ ������

����-����! �� ������5� �!��� ��� �� �! ������!������ /�" 9@�� ��-�� % �����! �"� ��!���! �� �"�

��!� ���!� ���� �"�� �!!�!!�� �"� �!. �� ���������� � !�-3���! /�" !����! ��������� ��� !�����

-����� �"� �!��!� ��������� ��������! /�" ���

������ ���.�� �� �5�!��� "�� � %�)4���� �����!���!. �� ���� ������ ������� �� �������! /�"���

���.��!( �"� ������� �!. /�! �! " " �! )�D

���� !� �������! �!��� ��� �"� ������ �������� ������� ������ ���&4@

* ����� :?;� �� !

����/���"� �"�� ������ !����! � �"! !���� /���

��.�� �� ����� � ���� �/� ����! -����� �����!!� ��� ��� �"�� � "� ��� -� -��� ����� �������� ���

���� ������ ����������� �� ! �"������� �������-��

�"�� ������5� �5�!��� � "� "��� -��� �!���!!4

��� �! ������� /�" �"� -��� ����� ��������

�5�!���� E��� �"� !���� ������ !���� ��������� � ���!�� �!!������ -��/��� ������5� ��� ����

������ � �5�!�� "����!�

*#��

�"��� ��� ���! �� -�! ��� ���� �7�� � ���4���� �� ��� ��� �"��� ��� ������ � -����.��4

-�!�� !����! :D;� 6������� -�! ��!�! ���� ���. ��

������-��� �� ���! ������� � �"� !���� ��� ���!�! ��� �������!$� ��� �5����� �5�!�� ��!�!

� "� -� ���� ��� ��!!$ �.��� �� ������� � �

!���� �"�� �5�!�� �������!� ���������� -�!������! �!���!!������ �� �������! /�" ��4

!��� �� �!��!� �� �5�!��� !����!� �� -����.��4

-�!�� !����!� ��������� -�! ������!!�! �"�!!��! �� ������� �������-��� ��� !��-��� ��

���.��!� ������� ��������� ! � !���� ���� ��

-�!� ��� �� �5�!��� �� �!. ������! ��"�� �"�� �"�!������ !���� �!�� -���/$�

6������� -�! ��� -� ������ -� ������ ������4

� �"� !���� �������� ��� -� ���7� �"���!��!� ����� ����"������� � ��� -� ���������� �

�"� �����!! -� ������� ������! �"�� ��� ������� ��

!������� ��� -� ��������� �"�� �! ����������!��������������� ���� ��������� ������� ���

!����! �� ��������� ����� �������� �� �"� !�������

�� �������!� �"! ! ���������� �"� ��!� ���!����! �� ����� ������!� !��" �! ����-��� ���4

���"!�!� -����!� � ! ���!����� �"�� ���

!������� �� �������! ! ���.��� �� -� ������� ���"� ����� ������! ����� !����� �! �� �5����� ��

�!!������ /�" ��� ������ �!. "�! -��� �������

� ����� !����! �� ������"!� �� �"� �E�%9> ���� #���� !����!� "�/����� "��� ��� ��������

�"� ���� � ��� �"� ����� ��!���! ��� �.��� �� "���

��!�� ���� �"� �!� �� ����� ������� ���! :&';��� ������� ��!����� !����!� ��� �5���� �� �"�

��"��� ��! �� ��� ��!! ���� �� !������� -�! �"��

�����!����� !����!� !��" �! �"�!� -�!�� �� � ��!�+������� �����!���

6�����! �� ������� � -����.��4-�!�� ���!���4

����! � "� ��!� ���� ���� ��� ��� � ��!�! ���!�!�������!$ ����-���= �"! ! �"� "�������� ����4

����� ������� ��� !����! �!����� �� �� �����!!�0�/����� ��"�� !�����! �� ������� �5!� �"��

������� �!���!!������� ������������ ����-���

� "� -� ��� �� ����� �� ������������ ������!

�@�� @�# ��9���@� �@ �0� %&6� ��@�� E ))D

���)� � ������ �!. �� ���� ������ ��� �5�!��� �� ������5� :?;

�����.�� �� �� D,F ��

@� �� -����.�� D ?* &�' ���

��� �� -����.�� &< ,< %�) &�'+,�D

���&4@*4 ����� > && )�D &�,+&>

��� ������5�( ��� ��!�!( ��� �������!( � ������� �!.( ���

��������� ��������

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

�������� /�" �"� ����-�� ����� !����� �������4

����� ����-��� �����! �� ��������! �� �������

!��" �! ���� ������� � "������� ������ ���������!������� ����� � "� ��!� ���� !���� ���

��-������� �������� ��-�� < �����! !��� �5��4

��! �� !�����! �� ������� ��� !������� -����.��!�!�� � ��������� ������ ������� ��

����� ��������! !"���� -� ��.�� �� ���7�

�"� !�����! �� ������� ��"�� �"�� ���� �������-���� �"� ������� !�����! �� !��" -�! ���

�������!= �"� �����!�����! � /"�" -��� ���

!����! ��� ��.��� ����!!��� !����� ��� �����!��(�"� ���"���� �!���! �� �"� �!!��!� ���� �� !

������� �� ��!��� �"��� � ��� !�����! �� ������������� -� ���������� ��! � ! ����� �"� ��!�$� �"��

!"���� ��� �8����� �� �"� ���! -�� ��������

�"�������� � ��� 4���� !���� � �� !����! � "������� �"� ���!�������� � ! ������� �� ����"

��!�! ��� �������! � �"� !���� -� ������� ��

!���� !���� �� �� !��" � ��!�� �!���!!������ !!�� �� -� 1�������������2 ���� ���� �8����� �� �"�

���! -�� �������$� @��4���������� �!���!!4

������ �����-�� ������! -�! ��/���! �"� ���������� �"�� !� � �-!����! �� �5!�� ���!�� ���

��������$ �!!������� -�� � ���! ��� �������

���!�4�!��� ��!���!� �� �"� ��"�� "���� � �!4���!!������ �"�� ! 1����������2 /�" ��!��� ��

��!�+������� ��� �5�!��+���5�!��$ !����! ����4

���! � -�! � �� ��������-�� �������� ����5����� � �"��� ! !�-!������ ����-���" ���

����������$ ����-��� � �"� ���!�������� �"�

����!�� �� !����! �� ��!�! ��� �������! � ��������-���"�! /���� ������� ���������� �!���!!�������

/"�!� � ���� �5 �� !����! � ���" -���" /����

�� ��!� ��!��� � ������������� �!���!!������

��� � -����!� ��!���! �� !����! ���� ��� -���" ����

�� -� !�!���������� �������� ���� �"�!� �� !����!

���� ����"�� -���"$�

���!�#�#�!�) ��" #��

�"� !!�� �� ������� � -����.��4-�!�� ���!���4

����! �� �! �� �"� ���� �� ������� -����.��!

-����� �"�� ������� � ��� �4!���� !����!� �"! !�"� ����� �� !�4������ ����!����� !����!� /"�"

�� �� �"�������7� �"� -����.�� �!��� ���"�� �"��

�"� �������� -��� ��� "��������� �"� �!���!�!!�!!�� -� ����!����� !����! ������ ����4 ���

����!�-3��� ����-���( ���!-��� �� ������� �� �

-����.�� � ���� �������! ���� ���7���� �� �!�!�$( ����������! ��� ������ ������! ��� �"�

���.��( ��� �������� -��� ��� ���"��!�!

��������� -� �"� ���.�������!����� !����! �!����� ������ "����"� �4

������!� �����! �� !�-3���! /�" !���� �5�!���!

��� � ���! �� /��.��!$� �"��� ���! �� ����!�����!����! "��� -��� ��!��-�� � �"� ��������

-��/��� ���������� �� � ��/ �!!�� ��� �!

������� � "���� �������! ���-�� )$� ��-�� ,��!���! �"� ��!���! �� �� ������-������� �����4

!�� �� ���!�������! �� 9@� ������! �!� �"� <%�4

�!���-���� ���"�8�� � -���� !����! ���� /��.4��! �5�!�� �� �������� ������� "�������-��!

���0!$ � �������! ��� ���5�!�� !�-3���!� �"�

��!���! !� �!� �� ������� ������-������� ����4-��� � �"! �!!��= ���. �� ������� ��� ��-������� ����

� �����!�� �� ��!���! ���� !� �"�!� �5�!�� ������-������� & ��� ���� !� �"�!� ��� �5�!�� ����

��-������� %� �� ��� ���!�$ /���� ��!��� � ��!!��

-�!�� ��!���!� �������������� -����.��! ��� �����

),' �� ��������

���)� + 6�����! �� ������� ��� !������� -����.��! �!�� � ������ ������� � ������� ���� A��!� &DD* :&&;$

�����.��

�����4

������� 6���� #�-�������

0������! G + �+$

�� ����"����� �������! + + G9@� ������! � /"�� -���� ����! G + G

�"����!���� �-�������! H H G

������� ��!��!� G G G

����-��� ������"!� � ������ $ + + H����-��� ������"!� �"������ $ G + G

G� ���� ������� !����� �� ��������+� ��!! ������� !����� �� ��������

H� �� �� ��/ �����

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

���� � �"� ���� /�"��� � ���� �"�������7����

��� ��������� ��� �"������� "���� �"� ��������4��� �� �"� ��!���!�

�!,�"! #!$

��������� �����! �� � ������� � /"�" ��

�-!����� �!!������ -��/��� � !�!����� �!. ��������� � �!��!� ! ��� �� � �������� �!. ������� /"�" !

� ���� ���!� �� �"� �!��!�� �� � ���!!��� �5����� ��

�!!������ -��/��� ��-���� !��.� ��� ������ ���"� ������ ����5 "�! -��� �-!����� � ����

�������� �������!� 0�/����� �"! �!!������ !

�.��� �� -� ���������� -� ������� /�" �"� "���������� ���! �0�A$� /"�" ! � ���!� �� �������

������ ��� ! �!!������ /�" ��-���� !��.� ��

�"� !��!� �"�� � ���� �������! !��.��! ������� ���8������ �!��� ��� 0�A �"�� ���!��.��!$�

�"� �!� �� -����.��! ���! ��� ������ ���������

���� ������� � ��� � ! ������� �� ���!������������ �! �� ���������� �5������� /"��

�!!������! ��� �-!������ �� �"� �5���� �-����

������� /�" 0�A /���� -� � ���������� �� �"��!!������ -��/��� ��-���� !��.� ��� �������

������ �� ������ "�/ !��.� � ������� ���

������� ������ ��� �!!�!!�� ��� 8��!�������!�

������ ������!� -��"����� ���"��! �� ���������

���"�8��!$� ����"������� �!� �� -����.��! � "��������� ����������!� � ��� < ��!���! �"� �5��4

�� �� � !���� �� ���������� �5�!��� �� ��0! ���

��� ������� ��-���� !��.� � "� ����!��� ������������ !����� �� ��0!� �� ������ ��������

�"�� ���������� �5�!���� �� !��" � ��!�� �"�

��!���! �� �"� -����.��4-�!�� ��!� /�� -� ����� -���-���� !��.� ���"�� �"�� ���������� �5�!����

���� � �"� �-!���� �� �� �!!������ -��/���

!��.� ��� ���������� �5�!����

�!������#�!

�����.��! "��� -��� /���� ���� �� !���� ���+���������� ��� ���+ ��� ���������! � �"�

��"� ���!! �� ������ ��� ��"�� �"���� �!��!�!�

�� ������� �� ��������� -��/��� � ����� ��� �������������� ������ ��� -� !����� �!� � )4����

��-�� �! !"�/� � � � )� ��������! /�" �"� ��/4

�!. ����� ���� ��� /�"��� �"� �������������5�!��� ���� �"� ��������� ���� ��� �"� �������

��� �5��!!$ �!. ! �!������ � �������! /�" �"�

" "4�!. ���� /�" �"� ������������ �5�!���

�@�� @�# ��9���@� �@ �0� %&6� ��@�� E ),&

���)� � ���! �� ����!����� !����! ������� ���� 6�"���� I ������� &DD* :&%;$

��� �� !���� ��! �"�������!��!

9����������� 9��������� ��

-����.��!

����! �� �5�������� !����!

��!� �!!�� � "���� !����!

�������� -��� ��� !���� ���������� ����!!� � !���� ��������� �!!�� ��������� ���!��

�"�������7���� A������� �!!�!!���� �� -����.�� ��� � � ����!������� "���� �������!

��������� �� �5������ ��� �������$ �5�!���+-����.�� �������!"�

-����.�� .����!� ��� ������� ����������! ��� ������ ������!���� �!� � ���!!4!��������

����-���� ���� !����!

��������� �� �5�!��� !����! �� �����! �������! ��� ����"��

�������� �� �"� -����.��

(#$� + �5���� �� ��������� �

���)� - A������� !���� �� 9@� ������! � ������� /��.��! ���

�������! �<%�4�!���-���� $ + �����!�� �� �/� ��-�������! :&<;

#�-�������

& %

�5�!�� �� ��� %> J )< D�% J %<���5�!�� � � �� <�& J &�* &�* J '�*

������! ��� �5��!!�� �� ����� ���������!�

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

��� /�" -��" ������!� ��-�� > �����! �� �5������ � !���� �� ��� ������ �"�� �����!!�� -��"

��-���� !��.� ��� ����� ������"!� ��� �"�

��� ������ ��� �"� ��7��� �����"���464����!4����!� �B6�$�&� /"�" � "� -� ������� � �"�

����-��!� �� ��-���� ������ ��!� �"� ������� �!.

�� ��� ������ ! " "�� � "���� !��.��! /�" �"����� ������ �"�� � �������! /�" ���� ��� �!.

������� !� �!�� �� ��������� ���� �� -��"

��-���� !��.� ��� B6��& ������"!�� ����������� �"� ���-��� ������� �!. �&'�%$ !

���������� -��/��� /"�� /���� -� �5�����

������� �� �� ������ ����� �� �����������!!��� �"�� ��-���� !��.� ��� �"� ���4

���"!� ��� �� �������� ������ ��� ��"/��!�

�� � K G � + & K %�, G *�?+& K D�<$ ���� ���������� ����� ��!!��� �"�� �"�� ��� ��

�"� !��� ��"/��� �� � K � � K %�, � *�? K &D�,$� �� !"���� -�

������ "�/����� �"�� �"� /�� D,F ���������

������� �� �"� ������� �!. � �"� ��� /�" -��"������! �)�)+%<�<$ ! �����-�� /�" -��" ������4

��� �����!� /"�" !���!!�! ����"�� ���"����� ���

�!��� �� ��������� ������� ��� !����!� ������

�"� ���� ��� � ��� � !���� !7� �!�� -���/$���������� ������� � !����! �����!!� ��"��

���! �� ��������� -��/��� �/� �� ���� ������! ���

-� �!��!!�� ������� �� �"� !��� ���� � �!����� ���+���������� ���������!� ��� �5����� �

�"� !���� �� ������5� �5�!��� ��� ���� ������

�������� �-���� �"� ���!� ����! �����!!�� �"��!!-�� ��������� �� ������5� /�" "����! �

���! �0�A$� C"�� ������� �� 0�A4�� ����

!�-3���! /�" ������5� �5�!���� �"� ������� �!.� 0�A4�!��� !�-3���! /"� /��� ��!� �!��� ���

������5� ���.��! /�! >'� /"�" /�! ������ �"��

�"� ������ �� �"� ������� �!.! ��� �"� �/� ������!!�������� �)�? ��� 0�A ��� &�D ��� ������5�$�

!� �!�� � !���� !� -��/��� ������5� ��� 0�A

� ���� ������ ���!!� 0�/����� �"� /�� ����4����� ������� � �"� ��� /�" -��" �5�!���!

�>�)+,>'� -�!�� �� ���� !���� ��!�! ��� �/�

�������!$ ���! ��� ����/ �"� ��3����� �� �"�"���"�!! �� �� ��������� ������� �� � ����4

������ ����� �)�? � &�D K D�&$�

��! �& �����

���� !������ �� �"� �5����! 8����� �-��� � ! �����

�"�� � ��3�� ��-��� � -����.��4-�!�� �����4

�� ��� ��!����" ! �"� �!������� ���-�� �� !�-3���!������� � ���" !����� �"� ��� ���!��! ��� � !����

!���� �� /�" �� !���� ��� ������� ���!�����!�

������� ��� -����.��4-�!�� ���!��� ��������� �������� � !"���� -� ������� /�" ���������

�����"�! ��� � �"� �!!�!!���� �� � ��� �5�!���

�!� � -��"����� �� ��������� ���"�� ���!�! �8��!�������$� ��� �"� �!!-�� �� � !��!����

��� !������ �� �"� ���!������� !"���� -�

���!����� � �"� � "� �� �"� �!!-�� ������!� ��"� ���-�� �� !���� !�-3���!�

���� ���"��! "��� ���!�� �������� �� �����4

���� �"� !���� !7� ������ �� ������ ��� ������! ������������! ���� !� �!. ������! :D� &,;� 0�/�����

��!� �-�!"�� !����! �� ��� ������ ���� "

�������!� ��!���� � ��!��-�� ��� ����� �������4� ��!���!� �������� ��� �4!���� !����! "��� !������

�� -� ��������� �!��� ��� �5����� � ������ !���� ������� ������ ��� ������"!� ��� B6��& ���

@��% ���!� -�!�� �� ���� )''' ��!�! ��� �������!

:&>;� ����"�� �����" ! �"� ���� �� �����4

),% �� ��������

(#$� � ���������� -��/��� �� ������������ ������ ��$ ��� �

����� ������ � $� ��� ��������� ���� ���( � ������� �!.�

���)� . ���������� -��/��� ��-���� !��.� ��� �����"���464

����!����!� �B6�$ �& ������"!� � ��� ������ ������� ����

@�.��" �� ��� &DD< :&);$

B6��& ������"!�

��-���� !��.� C�� ��� @���

L)) ��.4����! DM>) %%M><

&�' %�,

�������� ��� &�&+,�*))G ��.4����! %)M%% <'M%&

*�? &'�%

<�<+&?�% )�)+%<�<

�� ���" ����� �"� ��!� ��/ !"�/! �"� ���-�� �� ��!�! ��� �������!�

�"� !����� ��/ �"� ������� �!. ��� �"� �"�� ��/ �"� D,F

��������� ��������

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

������ ��������� !����!� �! "�! -��� �������� ���

!����! �� ����-��� ������"!� ��� ������ :&*;�

/"�)#���#�! �#��

��� �"�������!�� �� ��������� ������� � !����!

! �"� ��������� ��� � ���-�� �� ����-��! ��

�5�!���!� �!��!� ��� ������ ������!� ����� �"�!������!�����!� �"� ��-�-��� �� ������� -�

�"���� !���!������ ! ������ ��!���! �����!�!� ��

"�! -��� !"�/� �"�� �"��� ! � �������� ��!��������� ����� ! ������ ��!���!� � ��������

/"�� �"�� !"�/ �� ������ � �"� �5����� ��������

�"� ��� ��!��� ! � -�!�� ������ �� �!��� ������ ���� �� ���� ��!���!� �! �� �5����� !������

!����! "��� -��� ��������� �� ������"!� ��

�"� �E�%9> ���� /"�" ������! ��� �� ��7����!!-�� ������� � �"� �������� �� ��� ������4

��! ��� ��� ������ �!.� � ��� , !"�/! �"�

��!���! �� �"� &> !����! �����-�� ��� � ������ ����4�����!! :&?;� �!���! ��� ������� � ����! ��

�� ���"� �� �"� ������� �!. ��� " "4�!. �E�%9>

������"!� ��� �� �! !������� ������ ���" !����! ������� -� ��� ���( !����! ��/���! �"� � "� ���

!������ �"�� !����! ��/��� �"� ����� ��� !����!

��/���! �"� �� ��� ���� �!��� �"�� !����!��/���! �"� -������ �� �� �-������ -�! �5!�!� �"�

������ �� !��" ��!���! !"���� ��!��-�� � ���� �� ���� ������$� /�" ��� �� !����! ������ � �� �"� ����

!�� ������ �"� ������� �1����2$ ������ ��� !������

!����! !����������� �!��!�� �� �"� � "� !���0�/����� �"� ���� !�� �� �"� -����� � "� ������

�� �"� ��" !� �!�! �"�� !������ !����! /��� ����

�.��� �� -� ������� � �"�� !"�/�� � �!��� �������

� ������ ��!� ������! �"� ��!���� �� �� �!����4

����� �!��-���� �� ��!���!�

�� ��� -� �� ��� �"�� !��" �� ���� ����� �����!�4�!��� ��!���! !"���� ��� -� ���!����� �

��3�� !������ ��-���� !��� !�-!�8���� !����!�

���� �� ������� �"� ����� �!��� ��!���!� /������������ �!��-�!" �"� ����"� 0�/����� �"! �4

����" ! �������� ��� ����!���! �� �������

/�!�� �� ��!�����! � �������� � �"� ��!� �� !����!-�!�� �� �5��!�� �����"�!� !��" �! ���������

������� ��� !����!� ��� �5����� � !���� ��

����-��� !�!���-��� ������� �"�� �!�������4!��� !��.� /���� /�" !��/ ���������� ������

��� �"� @4������4����!����!� % ��� "�� �� �����!��

�!. �� -���!� ������� /"�!� �"! ������ /�! ��� !���� ���!��.� /���� �� � /���� /�" ���

���������� ������ :&D;� B��� �"� �-!���� �� ��

������� �����!�� �!. �� -���!� ������ ���� ��-����!��.� � �"� ��!���! /��� ��� ���� ���!-���

0�/����� ���� !�-!�8���� !����! /��� �-�!"��

�� �"! ��� �"�� ����� �� ������ �"� �!!�������� ������-�� �����" ���!!�! �� �������� ����4

���� ��� ������ ��!���! �� �"� -�!! �� ������

��"�� �"�� ��� ������ -�� ��� ����� ��$!���!���� ! �������� ���� ��� ���!-���� �!!4

-�� !�����! �� -�! ��� ��������� � ��� ���-�� ��

��!��� �!!������! ��� ���� !� !��" ��"�� ������� �������� !���!���� �����"�! "��� -��� ���!��

�� ��.� ��� ������� �"� �!!-��� �"�� ! ��������!���! ��� �������� -� �"���� /"�� ����

�����!��! ��� ���� :%';�

�!�)"�#�!�

����!� %' ����! "��� �!!�� !��� �"� ����

1��������� ������� �2 /�! ���!�� :%&;� �� !����� �"�� ��������� ���"�8��! "��� ����� ��

������� ���� ��/� $ ���� � ������� ���

!����!� 6� ���� "�/����� �"��� ��� ��� ���� ��!�! �/"�" �"� ������� �� � ����������� �� ���� �

������ -��� ����� -�!�� �����" "�! ����!�����

�� �������! ��� � �"� ������� -��� "� -���������� ������� ��� ���"��!� �!!�!!���� ��

�5�!��� �� ������5�!� ��"����� !��!���� ���

!������ �� �!!�!!���� �� �!� ���� ���������������� �� ����� ��� 9@� ������! � /��.��!

�5�!�� �� ������� �"�����! �!��" �! ��"������5��$ ��� ���� !� �"� �5����! � /"�" ����4

����� ������� � "�! ������ �����-���� �� �"�

�����!����� �� "���� ������� �� ���� ��"��

�@�� @�# ��9���@� �@ �0� %&6� ��@�� E ),<

(#$� - ������ ��� �� !����! �� �E�%9> ������"!� ��� ���

�������

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)

��!�!� "�/����� ����� ���!� ��!���! "��� ���

-��� �������� -� !�-!�8����� �!����� ���"�����4

����� ���� !����� ���!� ����!� �"�� ������� ���������� �"� !����" ��� !�!���-��� �� ������4

������ ������ ��! -� ���.� �� ������"!� ���

����-��� ��7���! :%%;��� -����.��! ����� ��/ ��������! �� ��������

!��� �� �"� �������! �� ������� �� �"�� �����

����� ���� ��������� �����"�! !"���� -� !�!���4������� �!!�!!��� �����.��! !"���� -� ��������(

���!������� �� !�����! �� -�! ��� ��������� �

��������� ������� � !����! !"���� -� �� ��!!!��� ��� �"�� � ��"�� ���! �� ������� ���

!����!� 6������� ��"�� �!���! �� �"� !���� ��� �

����������� �� ��8���� !���� !7�� !���!���������!!� ������ ��� ����������� �� ��!���!$

!"���� -� �����"�� /�" �"� !��� � �� �! �"��

�!�� � ������� � � ������� C"�� ���������������� ��� !����! /�� -� ��������� �������

�� !����4��4�"�4��� ��! �� �����!! ��� ��������4

���� �"� �!���� /�� "��� ����"�� �! ��������

��,���!���

& ��"��� @� ��� ��� ��= 6�"���� ��� ������ ��� ��!�

��������� ����������� ������ �� �������� 6�� 9� �=

������� ���!!� &DD<= � ,>,+D�% 6�"���� ��� ������ ��� ��!���������� ����������� ������

�� �������� 6�� 9� �� ������� ���!!� &DD<�

< ������ �� �������� �� 6"�.�� 9�B� ��"��� @� 0��.� ��

������ @� ��!� �������� �� !����"��� ����� �������#��� ��� � 6������ ��-������! ��� &)%$� #���= �������4

����� � ���� ��� �!����" �� ������� &DD*�

) ������ N� �������� N� O����� C� � ���������� �����!! ��

�"� �!. �� �������� "���� �!��!� � ����� "��� � ����$� &D>*( �0= ,&&+%)�

, ���� CN� ��#�� "�� NO� 9���!� 66� ������� N� N�� ������!

�� �"� ���� ����� ��� "����5� ��= 6�"��������� 9� �������N� N�� ��!� ����� ���������� �� �� ���� @�/ E��.=

�5���� �����!�� ���!!� &DD>= � >>>+?'�

> ���.�� N9� ��!����� 9� �� ��% ���� ����� ���4���! �!

-��� ��� ��!�����! ��� �������! �� �!. � ������� 4��� !����!� ��= ������ �� �������� �� 6"�.�� 9�B� ��"���

@� 0��.� �� ������ @� ��!� �������� �� !����"��� �����

���������� ��� � 6������ ��-������! ��� &)%$� #���=

������������ � ���� ��� �!����" �� ������� &DD*= �&?,+%''�

* ����!! 6� 0� ��� #� 6����-�� � �� ��% �"����!����

�-�������! � ���"�����! ����� "���� ������ �����4

������ �� �5�!��� �� ������ ��!� ����� ��� %'''( .0=&>&D+%,�

? �!! O� E��� N4�� E� �� �� ��% ������ ������5�

-����.��! ��� �!. �� "������������ ��������� �����&DD%( ++1= D)<+>�

D ��"��� ON� B�������� 6� ����� ����������� %�� ����

�"�����"�= #�����+ ���� ��-�!"��!� &DD>�

&' 6��" B� C��� � � �����"���� �),' �E�%9>� ��= �����! @�

#�� �� �2����� �� �����!� @� ��7�. N� �������� �� ��!�

����&��� ����������� �� '������&��� �� ����� ��� �

6������ ��-������! ��� &)?$� #���= ������������ � ������� �!����" �� ������� &DDD= � %'D+%D�

&& A��! �� 6�����! �� ������� � -����.��!� ��= 6"�.�� 9�B�

��"��� @� 0��.� �� ������ @� ��!� �������� ��

!����"��� ����� ���������� ��� � 6������ ��-���4���! ��� &)%$� #���= ������������ � ���� ��� �!����" ��

������� &DD*= � ,D+*&�

&% 6�"���� ��� ������ ��� ����!����� 6����!� ��= �������� ��

6"�.�� 9�B� ��"��� @� 0��.� �� ������ @� ��!� ��������

�� !����"��� ����� ���������� ��� � 6������ ��-4������! ��� &)%$� #���= ������������ � ���� ��� �!����"

�� ������� &DD*= � &D+%D�

&< 6������� �� C�!��� �� ������ �� �� ��% �������-�������

�����!�� �� ���!��� ��� ������!!��! ��� -��7�:�;��4

���4���4��5��4�4������ 9@�� ���������� &D??( 1=&%>,+D�

&) @�.��" O� ��� O� 0���!" 6� O�/�3� O� �������"!�! ��

�"� �( )�) ��� �����"��� '4����!����!� ���! �!!������

/�" !�!���-��� �� ��� ������ � ������� �� � ������ ��!�� � N����!� �������� ����� ��� &DD<( -+= %DD)+D�

&, E�� P� O"���� �N� ������ ���"��! � ����� ������4

� � ���� B���+���������� ��������� � ������� �

��!����"� ������� �� &DD*( 1= <<+)<�

&> 6������� �#� ������ N9� 6���/�7 C� � ��� N� ���� �� #����

�� @��%� B6��4&� � ������ !��.� � ��� �!. �� ������������ ����� ������� !����"��� �� &DD?( 2= &'D*+?)�

&* ���� �� ������������ �����-������ !���� �� �����

!�!���-��� �� ������������ ������ ��!� ����� ����#

��� !����"��� �� &DDD( �= *%*+?�#�����$�

&? 92����� �� �����! @� A��! � �� ��% ���/ �� !����! ��!������� ����-��� ������"!�! ��� ������� ��= A��! ��

�����! @� #�� �� �2����� �� �����!� @� ��7�. N� ��������

�� ��!� ����&��� ����������� �� '������&��� �� �����

��� � 6������ ��-������! ��� &)?$� #���= ������������� ���� ��� �!����" �� ������� &DDD= � <%<+D<�

&D ��-��!��� ��� �������"�� N� B��"�� 6 �� ��% � ������

!��.� � @4����������!����!� % ����� ������"!�!� ���

-���!� ������ �!.� ���� &DD>( �2.= &)D)+,'&�

%' B�������� 6� 0�����"��� �� ��!!�� ��� ������� �

�����!�! �� ������ �5�!���!� � �� *����� �������&DD)( 0��6��� ?$= <<+D�

%& ������ ��� C��!��� ��� ��������� ������� � ���

������ ��49@� ������ ��������= ��/ �����"�! ��

!����! �� "���� ������ ���!����� � ����� $� &D?%(+-= ,?&+>''�

%% A��! �� �����! @� #�� � �� ��% ��!� ����&��� ��������#

��� �� '������&��� �� ����� ��� � 6������ ��-������!

��� &)?$� #���= ������������ � ���� ��� �!����" ��

������� &DDD�

������ && ����-�� %'''( ������� &* ����-�� %'''�

������������� ����� ��������� �"��� ��� �� ������������

������ ������� �� ������������ � ���� ��� �!����" ��������� &,' ����! ��-���4�"���!� >D''? #���� ������ ���5=

G<< )4*%*<?,*,( �4���= -�������Q������$�

),) �� ��������

� %''' ����./��� 6����� #�� ������ �� ������ ����� ���= ))*+),)