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Módulo - Bacteriologia

Condições essenciais para o crescimento

e a identificação Bacteriana

Estruturas CelularesEstruturas CelularesEssenciais x FacultativasEssenciais x Facultativas

Crescimento bacteriano

O crescimento é um somatório dos processos

metabólicos progressivos, que normalmente

conduz à divisão com concomitante produção

de células-filhas a partir de uma bactéria

U.F.C. ("unidades formadoras de colônias“)

C.F.U. ("colony forming units“)

U.F.C. ("unidades formadoras de colônias“)

C.F.U. ("colony forming units“)

Tempo para 1 ciclo completo

E. coli => 20 min

Micobactérias => 13 – 15 hs

CrescimentoTensão de Oxigênio atmosférico

Aeróbias estritas

Mycobacterium sp

Anaeróbias estritas

Clostridium sp

Anaeróbias facultativos

Streptococcus sp

Microaerófilas

Neisseria sp

Anaeróbias não estritas

Lactobacillus sp

Tensão de Oxigênio atmosférico

Cultivo em Anaerobiose

Crescimento

Temperatura

Crescimento

PH

Crescimento

Salinidade

Crescimento bacteriano

Meios de cultivo

Curva de crescimento bacteriano

Meios de Cultura

Aspectos gerais

Cultivar e manter microrganismos viáveis no

laboratório

Substâncias essenciais para o crescimento das

bactérias

Crescimento seletivo

Demonstração de propriedades biológicas (hemólise

produção de pigmentos e enzimas, fermentação etc...

Isolamento

Meio de Cultura

Principais produtos e compostos utilizados

Hidrolizados de proteínas peptonas, infusão de carne, triptona, caseína

Carboidratos Dissacarídeos (lactose, sacarose e maltose)

Hexoses (glicose)

Pentoses (xilose)

Tampões Fosfatos monossódicos e dissódicos ou potássicos

Enriquecimento Sangue, soro, vitaminas, extratos de levedura

Inibidores Corantes de anilina (eosina, verde brilhante etc...)

Metais pesados (bismuto)

Produtos químicos (azida de sódio, citrato, desoxicolato, álcool feniletílico)

Agentes antimicrobianos (oxacilina, vancomicina, novobiocina....)

Meio de Cultura

Principais produtos e compostos utilizados

Indicadores de pH Vermelho de fenol

Vermelho neutro

Púrpura de bromocrezol

Azul de bromotimol etc...

Outros indicadores Íons férrico e ferroso – H2S (sulfeto ferroso)

Ágar Extrato gelatinoso extraído de algas vermelhas

Substratos para a ação de enzimas Uréia, tiossulfato de sódio, triptofano, lisina etc....

Composição

Nutrientes indispensáveis ao crescimento do organismo

Concentração não inibitória

Meio deve ser submetido a esterilização, eliminando contaminantes

Classificação:

Formulação

Finalidade Funcional

Meios de Cultura

Principais características-continuar

Classificação

Formulação

Sólidos (ágar) 1 a 2,0 %

Caldos Ativação das culturas, repiques de microrganismos,

provas bioquímicas

Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 %

Meios de Transporte e Conservação

Meios para Crescimento e isolamento

Meios comerciais para provas de

identificação

Meios para teste de sensibilidade aos

antimicrobianos

ClassificaçãoClassificação

FunçãoFunção


Meio Stuart

Caldo Lactosado

Cary Blair

Salina Tamponada

Ágar Nutriente


Meio Stuart

Impede a multiplicação do microrganismos e garante

apenas sua sobrevivência.

Haemophilus sp., Pneumococcus,Salmonella sp., Shigella

sp.

Cor original do meio: Branco opalescente.

Não há evidência de crescimento bacteriano.

Microrganismos (MO) injuriados Ex: Água peptonada, Caldo lactosado -Salmonella sp


Caldo Lactosado


Ágar Nutriente

Análise de água, alimentos e leite, cultivo e isolamento

preliminar das amostras

Cor original do meio: branco opalescente.

Positivo: Crescimento na superfície do ágar.

Negativo: Ausência de crescimento.

Meios para Crescimento e IsolamentoMeios para Crescimento e Isolamento

Ágar Chocolate

Ágar Thayer-Martin - Chocolate

Ágar Salmonella-Shigella (ss)

Caldo Selenito

Caldo Tetrationato

Caldo Tioglicolato com indicador

Caldo Tioglicolato sem indicador

Ágar MacConkey

Ágar Sangue

Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient

Caldo BHI – infusão de cérebro e coração

Löwenstein Jensen

Meios para Crescimento e Meios para Crescimento e IsolamentoIsolamento

Ágar Chocolate

Microrganismos exigentes

Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina)

Haemophilus sp., Neisseria sp.,

Cor original do meio: castanho escuro (chocolate).

Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Haemophilusa sp.

Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Neisseria sp.

Meios para Crescimento e Isolamento

Ágar Chocolate

Haemophilus sp.

Neisseria sp.


Thayer Martin

Ágar Chocolate – Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f)

e Trimethoprim (PM)

Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos(bolores) e leveduras

Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)

Verificação de hemólise dos Streptococcus eStaphylococcus

Prova de satelitismo (para identificação presuntiva deHaemophilus spp.).

Cor original do meio: vermelho.

Beta hemólise

Alfa hemólise

Gama hemólise


Ágar Sangue

S. aureus - colônias -hemolíticas


Ágar Sangue


Ágar MacConkey

Isolamento de bacilos Gram negativo (seletivo)

Inibe Gram positiva (cristal violeta)

Utilização de lactose (diferencial)

Lactose positiva – coloração avermelhada

Lactose negativa – coloração inalterada

Eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e Bacillus

Salmonella. E.coli


Ágar MacConkey


Ágar MacConkey

Klebsiella sp


Ágar Salmonella-Shigella (SS)

Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde

brilhante e citrato de sódio)

Tiossulfato de sódio e o citrato férrico

Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.

Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.

Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.

As bactérias não fermentadoras de lactose cor inalterada.

As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.

Salmonella Escherichia coli

Klebsiella sp

Salmonella e Shigella


Ágar Salmonella-Shigella (SS)

Amostras de Urina.

Deficiência de eletrólitos inibem o crescimento de Proteus.

Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram

negativos e leveduras.

Cor original do meio: azul claro.

Colônias lactose positiva: cor amarela.

Colônias lactose negativa: cor azul.




Löwenstein Jensen

Base ovos integrais

Teste de niacina (positivo para Mycobacterium

tuberculosis).

Isolamento primário de micobactérias.

Cor original do meio: verde claro

Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas

Negativo: ausência de crescimento.


Löwenstein Jensen

Brometo Brometo cianogêniocianogênio + + benzidinabenzidina

Meios Comerciais para Provas de

Identificação e Classificação

Ágar Citrato Simmons

Ágar Bile-Esculina

Ágar Sangue

Caldo base de Moeller

Ágar DNAse

Ágar Esculina

Ágar Fenilalanina

CTA – Cystine Tryticase

Ágar Caldo Triptona

Caldo Malonato

Caldo Nitrato

Ágar Müeller - Hinton

Ágar TSI – Triplo Açúcar Ferro

Ágar base Uréia (Christensen)

Vermelho de Metila, Voges-Proskauer

Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos(bolores) e leveduras

Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)

Verificação de hemólise dos Streptococcus eStaphylococcus

Prova de satelitismo (para identificação presuntiva deHaemophilus spp.).

Cor original do meio: vermelho.

Beta hemólise

Alfa hemólise

Gama hemólise

Identificação e classificação

Ágar Sangue

esverdeado


Ágar Sangue

S. aureus - colônias -hemolíticas

Alpha-hemólise

(Streptococcus pneumoniae)

Beta-hemólise

(Streptococcus pyogenes)

Gama-hemólise

(Enterococcus faecalis)


Ágar Sangue

Teste de Camp

Staphylococcus aureus

Streptococcus a ser identificado

Streptococcus agalactiae


Ágar Sangue

H.parainfluenzae, H.parahaemolyticus...


Ágar Sangue

Provas de Identificação

ÁgarÁgar DNAseDNAse

Hidrólise de ácido desoxirribonucléico (DNA)

DNase positivos: Staphylococcus aureus , Serratia sp. e Proteus sp....

DNase negativos: Staphylococcus coagulase negativa, enterobactérias....

Revelação com HCl 1 N:

Cor original do meio: amarelo claro

Positivo: Presença de halo claro na parte inferior e em volta da colônia.

Negativo: Ausência de halo claro em volta da colônia.

Revelação com azul de toluidina :

Cor original do meio: azul claro

Positivo: Coloração rosa na parte inferior e em volta da colônia.

Negativo: Ausência de cor rosa. O meio permanece com a cor original, azul.


ÁgarÁgar DNAseDNAse


Caldo Caldo MalonatoMalonato

Malonato de sódio como única fonte de carbono,

resultando em alcalinização do meio.

Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não

fermentadores.

Cor original do meio: verde.

Positivo: azul.

Negativo: inalterado (verde).

• Hidrolise da esculina.

• Identificação de Streptococcus x Enterococcus

• Esculina > glicose + esculetina

• esculetina + íons férricos


Ágar Bile Esculina

Identificação

Ágar base Uréia (Christensen) Ação da enzima urease - resultando na alcalinização do meio.

Bacilos Gram negativos fermentadores e não fermentadores, Staphylococcus e Haemophilus.

Cor original do meio: amarelo palha.

Positivo: alteração do meio para cor de rosa, pink.

Negativo: sem alteração de cor do meio.

Identificação

CTA (Cystine-tryptic-agar )

•Semi-sólido – fermentação de carboidratos

•Usado para diferenciar espécies de Haemophilus sp., Branhamella catarrhalis

e Corynebacterium spp. Neisseria sp.

Identificação

Ágar Manitol

Crescimento e fermentação do Manitol em meio hipertônico

S. aureus +, S. saprophyticus +/-, S. epidermidis -

Identificação

Ágar Müeller - Hinton

H.influenzaeH.influenzae

Fastidiosas

Requerem hemina (Fator X)

Nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD ou Fator V)

Identificação

TSI (Tríplice açucar e ferro)

Teste bioquímico para identificação Família Enterobacteriaceae

•Fermentação de glicose, lactose e sacarose; produçaõ de gás e H2S

Família Enterobacteriaceae

VM : Fermenta glicose - via de ácida-mista ( ác. Acético;

láctico; fórmico)

Ex E. coli +; Klebsiella sp –

VP : Fermenta glicose – via butilenoglicólica ( acetoína,

butilenoglicol e poucos ácidos ) + KOH e O2 a acetoína é

convertida em diacetila + alfa-naftol - vermelho ( indicador

Vermelho de metila)

Ex Klebsiella sp +; E. coli –

Identificação

Vermelho de Metila, Voges-Proskauer

Família Família EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae

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Meios para Teste de Sensibilidade

aos Antimicrobianos

Ágar Mueller Hinton

Ágar Sangue

Kirby e Bauer e pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory

Standards ) - condições de crescimento das principais bactérias.

Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco

e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus,

Enterococcus sp.

A zona do diâmetro é particular para cada droga e organismo, sendo

comparado com diâmetros padronizados pelo NCCLS, que determina

cada microrganismo sendo sensível, intermediário ou resistente.

Sensibilidade aos Antimicrobianos


Sensível - S. epidermidis

Zona de inibição > 16mm

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos


Detecção da resistência à oxaclina ( meticilina)

E-test

Susceptibilidade à oxacilina




Caldo Mueller Hinton

Teste de Bacitracina

Streptococcus pneumoniae – optoquina (s)


Ágar Sangue

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