Το Μοντέρνο εργαστήριο IVF

Giles Palmer – Επικεφαλής εμβρυολόγος ΜΗΤΕΡΑ IVF

Στόχοι……όπως πάντα

• Διατήρηση άριστων συνθηκών για τους ανθρώπινους γαμέτες στην θεραπεία υπογονιμότητας.

Υψηλό ποσοστό γονιμοποίησης/ ποσοστό εμφύτευσης/Υγιής εγκυμοσύνη

• Παροχή μεγάλης ποικιλίας υπηρεσιών και τεχνικών για να βοηθηθούν οι γιατροί έτσι ώστε να θεραπεύσουν τα υπογόνιμα ζευγάρια.

Κάθε μέρα

Η καρδιά της μονάδας εξωσωματικής

Εργαστήριο Εμβρυολογίας• Ωοληψία

• Γονιμοποίηση

• Καλλιέργεια εμβρύων

• Επιλογή εμβρύων

• Κρυοσυντήρηση γαμετών

• Διατήρηση γονιμότητας

• Κρυοσυντήρηση και φύλαξη

Ανδρολογικό εργαστήριο

• Ανάλυση σπέρματος

• Μορφολογία, κινητικότητα και συγκέντρωση

• Επεξεργασία σπέρματος-IVF/IUI

• Γενετικό υπόβαθρο

“ Your IVF program is only as good as the lab which supports it “

Εξελίξεις στο εργαστήριο IVF

• Εξελίξεις στον εργαστηριακό σχεδιασμό και τον εξοπλισμό

• Εξελίξεις στις τεχνικές

• Εξελίξεις στην καλλιέργεια εμβρύων.

• Εξελίξεις στην επιλογή εμβρύων.

• Χρήση του Ελέγχου Ποιότητας.

• Έμπειροι κλινικοί εμβρυολόγοι.

Σχεδιασμός εργαστηρίου

EU Directive 2004/23/EC: Θέτει τα πρότυπα ποιότητας και ασφάλειας για την συλλογή, δωρεά , επεξεργασία, διατήρηση, αποθήκευση και διακίνηση ιστού και κυττάρων.

Clean Room

• Κατασκευή με μη-πτητικά χημικά

• Clean room κατηγορίας C• HEPA φίλτρα• Airlock, ασφαλής είσοδος• Θετική πίεση• Επίπλωση Inox , Τοίχοι

Corian© • Σταθερή θερμοκρασία• UPS• Ειδικός ρουχισμός

Συνθήκες καλλιέργειας• Μίμηση των in vivo συνθηκών

• Υψηλή ευαισθησία σε αλλαγές pH,θερμοκρασίας και όσμωσης

• Η καλλιέργεια απαιτεί:

ειδικό μίγμα αερίων, pH 7.2-7.4, 280-290 mOSM/kg, 37oC

• Καλλιεργητικό υλικό- διαδοχικό

Gardner (1999)., Lane, Pool, Quinn

Ανδρική υπογονιμότητα & ICSI

Palermo et al. 1992, Devroey et al 1995

IMSI/MSOME-Super ICSI!• ICSI 200-400X vs. IMSI 6000X

• Μελέτη της μορφολογίας του πυρήνα των σπερματοζωαρίων

• Bartoov (2003) ποσοστό κύησης 66% vs. 30%

• «ποσοστό κύησης που σχετίζεται με το ICSI επηρεάζεται από μορφολογικές ανωμαλίες»

• Τα σπερματοζωάρια με ανώμαλο πυρήνα έχουν μικρότερη γονιμοποιητική ικανότητα

Επιλέγοντας το καλύτερο έμβρυο

Επεμβατικές τεχνικές

• Vrettou, Palmer et. Prenat. Diag.19. (1999)• Palmer at al. Hum. Repro.17.1.(2002)

• Επιλογή εμβρύου μέσω βιοψίας εμβρύου και DNA ανάλυσης

• ΜΗΤΕΡΑ/Τμήμα Ιατρικής Γενετικής. Ιατρική Σχολή Πανεπιστημίου Αθηνών Παιδιατρικό Νοσοκομείο Αγία Σοφία

Προεμφυτευτική γενετική διάγνωση β-μεσογειακής αναιμίας

• 2010 Ευρύ φάσμα Γενετικών ανωμαλιών

Επεμβατικές τεχνικές

Επιλογή εμβρύου, βελτίωση του IVF αποτελέσματος-PGS?

• Έλεγχος ανευπλοειδίας-Μειώνει τα ποσοστά αποβολών/Αυξάνει τα ποσοστά εγκυμοσύνης

• Η αποτελεσματικότητα αμφισβητείται

Staessen, Hum. Repro 13.1.(2007). Twist, 2006.

Cochrane review

Micro-array Analysis• Τα τελευταία δεδομένα είναι αξιόπιστα

Treff ( 2009),Munne, Mateo (2010)

PCR-μονογονιδιακές διαταραχές/ μοριακό επίπεδο

FISH-Χρωμοσωμικές ανωμαλίες

CGH-Μελέτη όλων των χρωμοσωμάτων

Metabolomics

• Συστηματική μελέτη του μοναδικού χημικού αποτυπώματος που το αναπτυσσόμενο in vitro έμβρυο παράγει.

• Leese & Conaghan - τέλος 1980’s- πρόσληψη πυροσταφυλικού και ζωτικότητα εμβρύου.

Leese & Conaghan- Bioessays 15 ( 1993 )

Metabolomics

• Η μορφολογία του εμβρύου δεν σχετίζεται πάντα με την ζωτικότητα του εμβρύου και την εγκυμοσύνη

• Sakkas- αντιπροσωπευτικοί βιοχημικοί παράγοντες των εμβρύων που δίνουν εγκυμοσύνη ή όχι

• Βιο-φασματοσκοπία- μεταβολικό προφίλ/ με βιο-πληροφορική ανάλυση = Viability scores

• Προβλεψιμότητα 80%

• Μη επεμβατική, Γρήγορη

•Sakkas. Fertil Steril 90.6.(2008 )

Προβλήματα με την κρυοσυντήρηση• Χαμηλή θερμοκρασία – Μετουσίωση

πρωτεϊνών• Άμεσος ενδοκυττάριος σχηματισμός

πάγου • Έμμεση – αλλαγή στην

αλληλεπίδραση των ιόντων

• ‘• hgh

Αργή κρυοσυντήρηση

• Χαμηλές συγκεντρώσεις

κρύο-προστατευτικού• Ρυθμός ψύξης -0.3oC/λεπτό• Ελεγχόμενος σχηματισμός πάγου

Υαλοποίηση• Υψηλές συγκεντρώσεις

κρύο-προστατευτικού• Ρυθμός ψύξης -2000 to 20000oC/λεπτό

Τεχνικές κρυοσυντήρησης

Τεχνικές κρυοσυντήρησης

• Γρήγορη μέθοδος

• Ιδανική για κρυοσυντήρηση ωαρίων και βλαστοκύστεων

• καλύτερα αποτελέσματα για την κρυοσυντήρηση ωαρίων ;;;

• Πολλές έρευνες δείχνουν πλεονεκτήματα

• Φαίνεται ότι η υαλοποίηση είναι καλύτερη από την αργή κατάψυξη σε σχέση με την βιωσιμότητα του εμβρύου μετά την απόψυξη

Kuwayama (2005), Al-Hasani (2007), Loutradi (2008).

Η διαδικασία περιλαμβάνει τη σταθεροποίηση των υγρών χωρίς κρυστάλλωση για να δημιουργηθεί μια κολλοειδής μορφή

Παράγοντες που επηρεάζουν την επιτυχία στην IVF

Ιστορικό, Πρωτόκολλο, Διέγερση Υποδεκτικότητα ενδομητρίου

Εμβρυομεταφορά

Εξοπλισμός Προσωπικό Σχεδιασμός εργαστηρίου

Προσφερόμενες τεχνικές

Καλλιεργητικά Συνθήκες καλλιέργειαςΠοιότητα αέρα

Ευελιξία Μελλοντικές εξελίξεις

IVF Εργαστήριο

Έλεγχος ποιότητας στο εργαστήριο

Ιστορικό, Πρωτόκολλο, Διέγερση

Τα θεμέλια της κλινικής εμβρυολογίας

Υποδεκτικότητα ενδομητρίου

Προσωπικό

Καλλιεργητικά

Εξοπλισμός

Προσφερόμενες τεχνικές

Ποιότητα αέρα

Ευελιξία

Σχεδιασμός εργαστηρίου

Συνθήκες καλλιέργειας

Μελλοντικές εξελίξεις

Εμβρυομεταφορά

Έλεγχος θερμοκρασίας – έλεγχος pH –έλεγχος παρτίδων-ασφάλεια

Έλεγχος ποιότητας στο εργαστήριο

Total Monitoring System

Εμβρυολόγοι

Εμβρυολόγοι του ΜΗΤΕΡΑ

Βρέκα Μαλαματή

Κουρή Aγγιολίνα

Mαζοκοπάκη Kατερίνα

Μποτζάκη Μητροδώρα

Παπαδόπουλος Δημήτρης

Σιαλακούμα Aφροδίτη