mk. kultur jaringan (biologi sem 6) -...
TRANSCRIPT
![Page 1: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/1.jpg)
TOPIK XI
MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6)
Paramita Cahyaningrum Kuswandi(email : [email protected])
FMIPA UNY2014
![Page 2: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/2.jpg)
Micropropagation
Germplasm preservation
Somaclonal variation
Haploid & dihaploid production
In vitro hybridization – protoplast fusion
2Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 3: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/3.jpg)
Meskipun kultur jaringan bertujuan untuk menghasilkan tanaman true-to-type
Juga bisa untuk menghasilkan tanaman baru Metode yang digunakan :
1. Induksi mutasi
2. Induksi keragaman somaklonal
3. Fusi protoplast
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 3
![Page 4: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/4.jpg)
Transfer materi genetis pada tumbuhan tingkat tinggi biasanya adalah dengan metode hibridisasi konvensional / seksual
Metode lain yang dapat digunakan adalah dengan hibridisasi aseksual
Yaitu antar sel-sel somatik yang sudah tidak mempunyai dinding sel (protoplast)
Disebut dengan hibridisasi somatik
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 4
![Page 5: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/5.jpg)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 5
![Page 6: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/6.jpg)
= manipulasi genetis = mengubah susunan genetis tanaman
Adalah metode transmisi materi genetis antar sel tanaman (bisa beda spesies atau beda genus) tanpa melalui fase generatif
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 6
![Page 7: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/7.jpg)
Manipulasi genetik bisa dilakukan dengan beberapa cara :
Hibridisasi somatik
Hibridisasi sitoplasmik
Transplantasi nukleus/kromosom/organel lain
Transformasi dengan Agrobacterium
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 7
![Page 8: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/8.jpg)
= parasexual hybridization Bergabungnya nukleus dan sitoplasma antar
2 protoplast
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 8
![Page 9: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/9.jpg)
Bergabungnya nukleus dan sitoplasma dari protoplasma A dengan sitoplasma dari protoplasma B
Bisa untuk melihat efek transmisi materi genetis melalui sitoplasma
E.g. cytoplasmic male sterility
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 9
![Page 10: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/10.jpg)
Memasukkan nukleus / kromosom / bagian kromosom / organel lain spt plastida dan mitokondria
Seperti membuat tanaman transgenik tetapi dengan fusi protoplast
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 10
![Page 11: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/11.jpg)
Penambahan gen ke dalam suatu sel atau protoplast memerlukan vektor
Gen perlu diisolasi Vektor biasanya adalah Agrobacterium
tumafaciens Tapi biasanya untuk tanaman dikotil
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 11
![Page 12: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/12.jpg)
Sel hibrid harus stabil secara genetis Harus bisa meregenerasi tanaman dari
protoplast atau kultur sel Tanaman tidak ‘female sterile’ Sifat genetis nya harus bisa diwariskan
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 12
![Page 13: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/13.jpg)
1. Menghasilkan hibrida yang tidak bisa dilakukan dengan persilangan biasa
2. Untuk menghasilkan tnmn poliploid jika tidak bisa dilakukan dengan kolkisin
3. Bisa menghasilkan hybrid cytoplasm (cybrid)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 13
![Page 14: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/14.jpg)
Pemilihan materi tanaman Sterilisasi Perlakuan enzim Fusi dan seleksi hasil fusi / hibrid Kultur protoplast, regenerasi dinding sel,
dan induksi pembelahan sel Regenerasi tanaman Verifikasi dan kontrol produk hasil fusi Uji tanaman baru
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 14
![Page 15: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/15.jpg)
1. isolation of protoplast
2. Fusion of the protoplasts of desired species/varieties
3. Identification and Selection of somatic hybrid cells
4. Culture of the hybrid cells
5. Regeneration of hybrid plants
15Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 16: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/16.jpg)
Bahan tanam dapat diambil dari sumber in vivo atau in vitro
Jika sumber eksplan in vitro ; sudah steril Jika sumber eksplan in vivo ; belum steril
sehingga harus disterilisasi terlebih dahulu Cara sterilisasi tergantung pada eksplan yang
akan digunakan sebagai sumber protoplast
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 16
![Page 17: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/17.jpg)
Isolation of Protoplast
(Separation of protoplasts from plant tissue)
1. Mechanical Method 2. Enzymatic Method
17Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 18: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/18.jpg)
Plant Tissue
Collection of protoplasm
Cells Plasmolysis
Microscope Observation of cells
Cutting cell wall with knifeRelease of protoplasm
18Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 19: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/19.jpg)
Used for vacuolated cells like onion bulb scale,
radish and beet root tissues
Low yield of protoplast
Laborious and tedious process
Low protoplast viability
19Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 20: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/20.jpg)
Leaf sterlization, removal of
epidermis
Plasmolysed
cells
Plasmolysed
cells
Pectinase +cellulase Pectinase
Protoplasm releasedRelease of
isolated cellscellulase
Protoplasm
released
Isolated
Protoplasm20Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 21: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/21.jpg)
• Used for variety of tissues and organs including leaves, petioles, fruits, roots, coleoptiles, hypocotyls, stem, shoot apices, embryo microspores
• Mesophyll tissue - most suitable source • High yield of protoplast• Easy to perform• More protoplast viability
21Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014
![Page 22: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/22.jpg)
Enzim yang digunakan adalah yang dapat mendegradasi dinding sel
Tdpt berbagai macam enzim, biasanya dari mikroba Harus bisa mendegradasi selulosa, pektin, dan
hemiselulose ; komponen pembentuk dinding sel tanaman
Jika sumber protoplast adalah suspensi sel, maka diambil pada saat fase eksponensial karena dinding sel masih tipis
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 22
![Page 23: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/23.jpg)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 23
![Page 24: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/24.jpg)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 24
![Page 25: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/25.jpg)
Tekanan osmotik yang cukup diperlukan supaya protoplast tidak rusak
Dapat digunakan bahan kimia seperti mannitol untuk menjaga tekanan osmotik
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 25
![Page 26: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/26.jpg)
1. Spontaneous fusion :During enzyme treatment, protoplasts sometimes join to form multinucleate protoplasts
2. Induced fusion :
a) Mechanical fusion
b) Chemofusion
c) Electrofusion
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 26
![Page 27: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/27.jpg)
Di bawah mikroskop Dengan micromanipulator atau perfusion
micropipette Protoplast didekatkan/difusikan secara
manual
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 27
![Page 28: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/28.jpg)
Menggunakan chemical fusogen seperti sodium nitrate, polyethylene glycol (PEG), calcium ions (Ca2+ )
Menyebabkan protoplast saling mendekat dan terjadi fusi
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 28
![Page 29: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/29.jpg)
Mild electric stimulation is used Aliran listrik menyebabkan protoplast saling
mendekat, membentuk struktur seperti rantai
Aliran listrik yang lebih tinggi selama bbrp detik menyebabkan membran terbuka dan terjadi fusi
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 29
![Page 30: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/30.jpg)
Heterokaryon : jika 2 protoplast berbeda (beda genus atau spesies) berhasil menyatu
Homokaryon : jika 2 protoplast yang menyatu dari jenis/spesies sama
Dalam suatu hasil percobaan dari dua macam protoplast (A dan B) akan diperoleh :
Protoplast yang tidak berhasil menyatu
Homokaryon AA dan Bb
Heterokaryon AB
Multiple karyons
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 30
![Page 31: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/31.jpg)
1. Seleksi hibrid somatik
a) Negative selection : sel yang tumbuh dimatikan, dan sel yang tidak tumbuh dibiarkan hidup
b) Positive selection : yang dibiarkan hidup adalah sel yang hidup
2. Seleksi mutan
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 31
![Page 32: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/32.jpg)
Direct isolation hibrida dipilih langsung menggunakan mikropipet/mikrokapiler/mikromanipulator
Visual penggunaan protoplast dengan dan tanpa kloroplast, dan pewarnaan
Pemisahan berdasar sifat fisik dengan perbedaan tegangan listrik,hasil sentrifuse
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 32
![Page 33: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/33.jpg)
Genetic complementationHibrida yang dihasilkan bisa mempunyai sifat yang berbeda dari tetuanya. Jika masing2 tetua sensitif/resistan terhadap senyawa tertentu maka hibridnya bisa menjadi sensitif/resistan terhadap kedua senyawa
Efek heterosisPertumbuhan hibrida lebih baik daripada tetua
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 33
![Page 34: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/34.jpg)
Mutasi dapat diinduksi pada protoplast dengan bahan kimia (e.g. EMS), metode fisik (e.g.sinar gamma), atau transformasi dengan Agrobacterium
Seleksi sel mutan dilakukan secara langsung (misal mutan yang lebih tahan terhadap faktor tertentu) atau tidak langsung (sel non-mutan dibunuh dan sel mutan dipindah ke media dengan nutrisi yang lebih baik)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 34
![Page 35: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/35.jpg)
Regenerasi dinding sel Pembelahan sel Pembentukan kalus Diferensiasi / pembentukan jaringan dan
organ Kultur protoplast biasanya dilakukan di
tempat gelap, dan sub kultur dilakukan untuk regenerasi
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 35
![Page 36: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/36.jpg)
1. Menggunakan media cair di cawan petri2. Media padat 3. Di dalam micro-chambers 4. Micro-drop method5. Nurse culture/feeder layer technique6. Media cair diatas media padat7. Kultur menggunakan agarose-
bead/agarose-disc
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 36
![Page 37: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/37.jpg)
Regenerasi kultur protoplast membentuk tanaman baru ditentukan oleh bbp faktor :
Genotipe eksplan
Jaringan asal
Kondisi pertumbuhan tanaman eksplan
Media
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 37
![Page 38: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/38.jpg)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 38
![Page 39: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/39.jpg)
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 39
![Page 40: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/40.jpg)
Cybrid = cytoplasmic hybrid Diperoleh saat salah satu protoplasma yang
berfusi kehilangan nukleusnya Salah satu inti sel bisa mati karena waktu
pembelahan dengan inti sel yang lain tidak sama
Biasanya hasilnya lebih bisa diregenerasi menjadi bibit
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 40
![Page 41: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/41.jpg)
Nukleus dapat dihilangkan dengan tujuan membuat cybrid
Disebut dengan di-enukleasi / denucleated (nukleus dihilangkan)
Dengan metode :
Fisik (dengan sinar gamma)
Kimia (penambahan zat cytochalasin B)
Sentrifugasi
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 41
![Page 42: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/42.jpg)
Metode seleksi yang efisien sulit dilakukan Hasilnya bisa steril Muncul chimer Jenis ploidi yang tidak diinginkan Banyak variasi ditemukan pada hasil
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 42
![Page 43: MK. Kultur Jaringan (Biologi Sem 6) - staffnew.uny.ac.idstaffnew.uny.ac.id/upload/197810222010122001/pendidikan/mita-1... · Vektor biasanya adalah Agrobacterium tumafaciens ... Diferensiasi](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022021712/5b899aa67f8b9abe1e8e0525/html5/thumbnails/43.jpg)
Dengan prosedur co-cultivation : protoplast ditumbuhkan dengan kultur bakteri Agrobacter
Fusi antara protoplast normal dengan protoplast dari jaringan tumor
Paramita C. Kuswandi/FMIPA UNY/2014 43