metodologie di embriologia sperimentale luca del giacco [email protected] sezione functional...
TRANSCRIPT
![Page 1: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/1.jpg)
Metodologie di embriologia sperimentale
Luca Del Giacco
http://users.unimi.it/delgi/
sezione Functional and Reproductive
Biology
Torre B, piano 7
![Page 2: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/2.jpg)
biologia dello sviluppo
La biologia dello sviluppo studia tutti i processi che
riguardano lo sviluppo, a partire dalla cellula uovo fecondata
fino alla nascita ed oltre.
![Page 3: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/3.jpg)
differenziamento
Dal singolo uovo fecondato (lo zigote unicellulare) si origina
un n° enorme di diversi tipi cellulari con le più disparate
funzioni. Tutte queste cellule (a parte poche eccezioni)
contengono il medesimo patrimonio genetico.
![Page 4: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/4.jpg)
morfogenesi
Le cellule che man mano si differenziano si organizzano in
tessuti ed organi piuttosto che essere distribuite in modo più
o meno casuale.
![Page 5: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/5.jpg)
accrescimento
Le cellule che si stanno dividendo hanno perfettamente
presente quando smettere di farlo. La divisione cellulare è
strettamente regolata.
![Page 6: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/6.jpg)
riproduzione
L’uovo e lo spermatozoo sono quelle cellule ad alta
specializzazione che garantiscono la trasmissione alla
generazione successiva delle informazioni per costruire un
nuovo organismo.
![Page 7: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/7.jpg)
biologia dello sviluppo
biologiabiologia
dellodello
svilupposviluppo
embriologiaembriologiasperimentalesperimentale
biologiabiologiamolecolaremolecolare
geneticageneticadellodello
svilupposviluppo
![Page 8: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/8.jpg)
embriologia sperimentale
Programmi di ricerca dell’embriologia sperimentale:
1.Come l’ambiente (le ‘forze esterne’) influenza lo sviluppo
dell’embrione
2.Come le ‘forze interne’ all’embrione determinano il
differenziamento delle cellule
3.Come le cellule si organizzano in tessuti ed organi
![Page 9: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/9.jpg)
integrazione ambientaleL’ambiente influenza lo sviluppo
Alcohol
![Page 10: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/10.jpg)
1.Come l’ambiente influenza lo sviluppo dell’embrione:
determinazione del sesso nel verme echiuroideo Bonellia
viridis
integrazione ambientale
![Page 11: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/11.jpg)
integrazione ambientale
1.Come l’ambiente influenza lo sviluppo dell’embrione:
determinazione del sesso nel verme echiuroideo Bonellia
viridis
![Page 12: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/12.jpg)
integrazione ambientale
L’aromatasi è prodotta sia dalle gonadi che dal cervello
dell’embrione. La attività aromatasica nelle gonadi rimane
costante, mentre nel cervello cambia drasticamente aumentando
di molto a temperature ‘femminilizzanti’
![Page 13: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/13.jpg)
embriologia sperimentale
Nei rettili la determinazione primaria del sesso è ormone-
dipendente. Gli estrogeni, essenziali per lo sviluppo
dell’ovario, sono in grado di determinare lo sviluppo di
femmine anche a temperature mascolinizzanti. Viceversa, uova
trattate con inibitori della sintesi degli estrogeni danno
alta percentuale di maschi anche se incubate a temperature
‘femminili’.
La ‘link’ tra sesso, estrogeni e temperatura è l’enzima
aromatasi, che converte il testosterone in estrogeni
![Page 14: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/14.jpg)
genetica dello sviluppoIl controllo esercitato dai geni sullo sviluppo dell’embrione.
La genetica dello sviluppo ha nello studio dei mutanti il suo
punto di forza. I notevoli passi avanti nel campo hanno messo
in evidenza come i geni che controllano le fasi precoci dello
sviluppo embrionale siano evolutivamente conservati
![Page 15: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/15.jpg)
genetica dello sviluppo
mutante
eyeless
twin of
eyeless
Small eye
(Pax6)
Aniridia
![Page 16: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/16.jpg)
genetica dello sviluppo
![Page 17: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/17.jpg)
genetica dello sviluppo
![Page 18: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/18.jpg)
genetica dello sviluppo
N -ethyl- N -nitrosourea (ENU)
![Page 19: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/19.jpg)
mutantiSLC24A5, uno scambiatore di cationi, influenza la pigmentazione in zf e uomo
![Page 20: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/20.jpg)
embriologia sperimentale
• Cutting
• Pasting
• Paintin
g
L’embriologia sperimentale studia i meccanismi alla base dei
processi ontogenetici turbandone il naturale corso mediante
manipolazione degli embrioni
![Page 21: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/21.jpg)
embriologia sperimentale
![Page 22: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/22.jpg)
microiniezione
![Page 23: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/23.jpg)
microiniezione
![Page 24: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/24.jpg)
overespressione genica (pasting)
![Page 25: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/25.jpg)
Agouti-related peptide (AgRP), un neuropeptide prodotto nel
nucleo arcuato dell’ipotalamo, aumenta l’appetito e diminuisce il
metabolismo.
overespressione genica (pasting)
![Page 26: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/26.jpg)
pasting*
![Page 27: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/27.jpg)
knock-DOWN genico (cutting)
•Antisense oligonucleotides•Designed as 25 mers•Resistant to digestion•Not RNAseH mediated
![Page 28: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/28.jpg)
knock-DOWN genico (cutting)
•Antisense oligonucleotides•Designed as 25 mers•Resistant to digestion•Not RNAseH mediated
![Page 29: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/29.jpg)
MO mimano mutazioni
![Page 30: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/30.jpg)
embrioni “chimera”: le cellule di donatore e ricevente sono geneticamente (quindi fenotipicamente) differenti. Trapianto di cellule di quaglia in embrione di pollo.
painting
![Page 31: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/31.jpg)
painting
![Page 32: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/33.jpg)
thymidine kinase
![Page 34: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/34.jpg)
topo knock-out
![Page 35: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/35.jpg)
Differenziamento (espressione genica differenziale)
Dal singolo uovo fecondato (lo zigote unicellulare) si origina
un n° enorme di diversi tipi cellulari con le più disparate
funzioni.
1.tutte le cellule di un organismo (a parte poche eccezioni)
contengono il medesimo patrimonio genetico.
2.i geni non utilizzati vengono comunque conservati e possono
sempre venire espressi.
3.ogni cellula esprime solo una piccola percentuale del genoma
(es. cromosomi politenici di Drosophila).
![Page 36: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/36.jpg)
espressione differenziale Cromosomi politenici.
![Page 37: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/37.jpg)
biologia molecolareLa biologia molecolare studia i processi biologici a livello
dei meccanismi molecolari.
![Page 38: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/38.jpg)
tecniche di biol molec
![Page 39: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/39.jpg)
tecniche di biol molec
![Page 40: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/40.jpg)
tecniche di biol molec
![Page 41: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/41.jpg)
tecniche di biol molec
Ibridazione in situ con al sonda antisenso per Pax6 che mostra l’espressione del gene nell’occhio di topo in sviluppo. Pax6 è espresso sia nell’ectoderma del cristallino presuntivo che nel peduncolo ottico che formerà retina e nervo ottico.
9dd 10dd 15dd
![Page 42: Metodologie di embriologia sperimentale Luca Del Giacco luca.delgiacco@unimi.it sezione Functional and Reproductive Biology](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061618/5542eb4f497959361e8bf16c/html5/thumbnails/42.jpg)
tecniche di biol molec