MercodiaLp(a) ELISA

Bruksanvisning

10-1106-01REAGENSER FÖR 96 BESTÄMNINGAR

För in vitro diagnostiskt bruk

Tillverkad av

Mercodia AB, Sylveniusgatan 8A,SE-754 50 Uppsala,Sverige

FÖRKLARING AV SYMBOLERNA SOM ANVÄNDS PÅ ETIKETTERNA

∑ = 96

Reagenser för 96 bestämningar

Utgångsdatum

Förvara vid 2–8°C

Lotnr.

För in vitro diagnostiskt bruk

© Mercodia 2009-2015

3

AVSEDD ANVÄNDNINGMercodia Lp(a) ELISA är ett test för kvanitativ bestämning av humant Lp(a) i serum eller plasma.

SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTETApolipoprotein(a), Apo(a), är ett glykoprotein som är bundet till apolipoprotein B i Lp(a)-partikeln genom disulfidbryggor. Apo(a) bildas av tre olika strukturella domäner. En av domänerna, kringla 4, typ 2, finns i flera kopior och antalet varierar och bestäms genetiskt, vilket ger upphov till olika storlekar av Apo(a) och följdaktligen Lp(a). Beroende på vilken metod som har använts har mellan 6 och 23 isoformer av Apo(a) på cirka 300 till 900 kD identifierats (1,2,15,16). De flesta människor har två Apo(a)-isoformer, men hos vissa personer kan inget Apo(a)-band detekteras vid analys med SDS-gel-elektrofores som följs av immunoblotting (3). Den senaste tiden har Lp(a) fått stor uppmärksamhet eftersom det finns många bevis för attcirkulerande halter av Lp(a) utgör en obeoende riskfaktor för kardiovaskulär sjukdom. Lp(a)-halter har visat sig vara en nedärvd riskfaktor för ischemisk hjärtsjukdom (4–8). Höga Lp(a)-halter har påvisats vid ärftlig hyperkolesterolemi och det kan vara kliniskt betydelsefullt attkunna mäta dessa halter, för att förutsäga riskerna hos dessa patienter (9,10). Resultat har även publicerats som visar att Lp(a) är en stark indikator för cerebrovaskulärsjukdom (11,12). Apo(a) är homolog till proteasproenzymet plasminogen (13,14). Lp(a) hämmar plasminogenaktiveringen och nyligen genomförda studier har visat att Apo(a) konkurrerar med plasminogenet om att binda till plasminogenreceptorn. Dessa egenskaper hos Apo(a) skulle kunna förklara sambandet mellan höga Lp(a)-koncentrationer och hjärtinfarkt.

TESTPRINCIPMercodia Lp(a) ELISA är en fast fas enzym immunoassay. Den baserar sig på ”sandwich”-teknik, med två monoklonala antikroppar riktade mot separata antigena determinanter på Apo(a)-molekylen. Under inkubation reagerar Apo(a) i provet med peroxidaskonjugerade Apo(a)-antikroppar och Apo(a)-antikroppar som är bundna till en mikrotiterbrunn. En enkel tvätt avlägsnar obunden enzymmärkt antikropp. Det bundna konjugatet detekteras genom reaktion med 3,3’,5,5’-tetrametylbensidin. Reaktionen avbryts genom att syra tillsätts, för att ge en kolorimetrisk slutpunkt som avläses spektrofotometriskt.

4

VARNINGAR OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER• För in vitro diagnostiskt bruk. • Innehållet i detta kit eller rester därav får inte komma i kontakt med idisslande djur eller svin.• Stop Solution i detta kit innehåller 0,5 M H2SO4. Följ rutinmässiga försiktighetsåtgärder för hantering av farliga kemikalier.• Alla patientprover ska hanteras som om de vore smittbärande.• Varje brunn kan bara användas en gång.

Varning: Detta kit innehåller reagenser som kan vara smittsamma!

Kitet innehåller reagenser som är framställda av humana blodkomponenter. Källmaterialet harmed hjälp av immunanalys testats på förekomst av hepatit B-ytantigen, antikroppar mot hepatit C virus och antikroppar mot HIV virus och funnits vara negativt. Alla försiktighetsåtgärder för hantering av blodderivat ska dock iakttas. Information finns i HHS, publikationsnr. (CDC) 88-8395 eller i motsvarande lokala/nationella riktlinjer för säkerhetsprocedurer på laboratorier.

MATERIAL SOM KRÄVS MEN EJ TILLHANDAHÅLLS• Pipetter med lämpliga volymer (repeterbara pipetter är att föredra för tillsats av enzyme conjugate 1X lösning, Substrate TMB och Stop Solution)• Provrör, bägare och mätglas för beredning av reagens• Destillerat vatten• Magnetomrörare• Vortex mixer• Mikrotiterplattläsare (450 nm filter)• Plattskak (700-900 varv per minut, orbital rörelse)• Tvättutrustning för mikrotiterplattor med overflow-funktion (rekommenderas men inget krav)

REAGENSERVarje Mercodia Lp(a) ELISA-kit innehåller reagenser för 96 brunnar som räcker till 43 prover och en kalibratorkurva i duplikat. För större analysserier används sammanslagna reagenser från förpackningar med identiska lotnummer. Utgångsdatum för hela kitet står påytteretiketten. Rekommenderad förvaringstemperatur är 2–8°C.

Coated Plate 1 platta 96 brunnar Färdig att användasMonoklonal mus-anti-Apo(a) Strips med 8 brunnarFör oanvända mikrotiterstrips, återförslut påsen med tejp. Förvara vid 2–8°C och använd inom 2 månader.Calibrators 1, 2, 3, 4 4 flaskor 500 μL FrystorkatHumant Lp(a) Tillsätt 500 μL destilleratGul färgmärkning vatten per flaskaKoncentrationen anges på flaskans etikett. För rekonstituerade Calibrators som ska förvaras i över 1 vecka rekommenderas en förvarings-temperatur på –20°C. Calibrator 0 1 flaska 500 μL Färdig att användasGul färgmärkningEnzyme Conjugate 11X 1 flaska 700 μL Späd enligt nedanPeroxidaskonjugerat monoklonal mus-anti-Apo(a)Enzyme Conjugate Buffer 1 flaska 7 mL Färdig att användasBlå färgmärkningPretreatment Solution 1 flaska 5 mL Färdig att användasSample Buffer 5X 2 flaskor 50 mLRöd färgmärkningSpäd ut varje flaska med 200 mL destillerat vatten för att bereda sample buffer 1X lösning.Obs! Fällning kan förekomma när lösningen förvarats vid 2-8°C. Låt Sample Buffer 5X nå rumstemperatur. Mixa tills fällningen har lösts upp.Wash Buffer 21X 1 flaska 50 mL Späd med 1000 mL destillerat vatten för att bereda wash buffer 1X lösning. Förvaring efter spädning: 2-8°C i 2 månader. Substrate TMB 1 flaska 22 mL Färdig att användasFärglös vätska Observera! Ljuskänslig!Stop solution 1 flaska 7 mL Färdig att användas0.5 M H2SO4

5

PROVTAGNING OCH HANTERINGSerumTa blod genom venpunktion, låt det koagulera och separera serumet genom centrifugering. Pro-ver kan förvaras vid 2-8°C i en vecka. För längre tidsperioder ska proverna förvaras vid -20°C. Undvik upprepad frysning och upptining.

PlasmaTa blod genom venpunktion i rör som innehåller EDTA eller heparin som motverkar koagulation och separera plasmadelen genom centrigfugering. Prover kan förvaras vid 2-8°C i en vecka. För längre tidsperioder ska proverna förvaras vid -20°C. Undvik upprepad frysning och upptining.

BEREDNING AV PROVERAlla prover måste förbehandlas enligt följande:

1 Prov 25 μL2 Pretreatment Solution 25 μL3 Blanda och inkubera i 1 timme vid rumstemperatur4 Tillsätt sample buffer 1X lösning och blanda 5.0 mL

Detta förfarande gör att proverna blir spädda till 1/202. Spädningen är stabil vid 2–8°C i 1vecka. Om koncentrationen av Lp(a) i provet är >1000 U/L späds det förbehandlade och spädda provet (1/202) ytterligare i provbuffert, 1/4 t.ex. ger en slutlig spädning på 1/808.

6

Beredning av enzyme conjugate 1X lösningGör i ordning önskad mängd enzyme conjugat 1X lösning genom att blanda Enzyme Conjugate 11X med Enzyme Conjugate Buffer (1+10) enligt tabellen nedan. Vid beredning av enzyme conjugate 1X lösning till hela plattan, hälls hela innehållet av Enzyme Conjugate Buffer i flaskan med Emzyme Conjugate 11X. Blanda varsamt. Förvaring efter spädning: 2-8°C i 2 veckor.

Antal strips Enzyme Enzyme Conjugate Conjugate 11X Buffer

12 strips 1 flaska 1 flaska6 strips 300 μL 3.0 mL4 strips 200 μL 2.0 mL

TESTFÖRFARANDEBered enzyme conjugat 1X lösning, wash buffer 1X lösning och sample buffer 1X lösning. Utför varje bestämning i duplikat för Calibrators, kontroller och prover. Gör en kalibratorkurva för varje analysomgång. Undvik att pipettera lösningarna på rörväggarna.

7

Tillsätt till anti-Apo(a)-brunnar Calibrators Prov 1 Calibrators 25 μL – 2 Förbehandlade prover/kontroller – 25 μL 3 Enzyme conjugate 1X lösning 50 μL 50μL 4 Inkubera på en plattskak (700-900 rpm) i 1 timme vid rumstemperatur (18–25°C).5 Tvätta 6 gånger med 700 μL wash buffer 1X lösning per brunn, använd en automatisk microtiterplatt-tvätt med overflow-funktion. Efter den sista tvätten vänds plattan upp och ned och knackas med stadig hand mot ett absorberande papper. Använd inte soak- funktion vid tvättproceduren. Eller manuellt, avlägsna reaktionslösningen genom att vända microtiterplattan upp och ner över en slask. Tillsätt 350 μL wash buffer 1X lösning till varje brunn. Avlägsna wash buffer 1X lösning, knacka plattan bestämt flera gånger på absorberande papper för att ta bort överfödig vätska. Upprepa 5 gånger. Undvik långvarig soak under tvättproceduren.6 Tillsätt 200 μL Substrate TMB.7 Inkubera i 15 minuter.8 Tillsätt 50 μL Stop Solution. Placera plattan på plattskaken i 5 sekunder för att säkerställa att Substrate TMB och Stop Solution har blandats.9 Mät absorbansen vid 450 nm och utvärdera. Avläs inom 30 minuter.

Obs! Var särskilt noga med att inte förorena Substrate TMB med enzyme conjugate 1X lösning.

INTERN KVALITETSKONTROLLInterna plasmapooler med låga, medelhöga och höga koncentrationer av Lp(a) bör regelmässigt analyseras som prover och resultaten kartläggas dag för dag. Det tillhör god laboratoriesed att anteckna följande uppgifter vid varje analystillfälle: kitets lotnummer; kitkomponenternas rekonstitueringssdatum samt optiska densitetsvärden för blank och Calibrators. Gällande frekvens av kvalitetskontroller bör laboratorier följa myndighetsregler och ackrediteringskrav.

BERÄKNING AV RESULTATDatorberäkningKalibreringskurva kan konstrueras genom att använda ”cubic spline regression”med absorbansvärdena för Calibrators, förutom Calibrator 0, mot Lp(a)-koncentrationen.Multiplicera koncentrationen för proverna med spädningsfaktorn (t.ex. × 202).

Exempel på resultatVärden som erhållits med ett 8 veckor gammalt kit.

Brunnar Identitet A450 Medelvärde konc. U/l*

1A–B Calibrator 0 0,061/0,0641C–D Calibrator 0,31 U/l 0,194/0,197 62,61E–F Calibrator 1,11 U/l 0,535/0,537 224,21G–H Calibrator 2,8 U/l 1,129/1,131 565,62A–B Calibrator 5,6 U/l 1,835/1,837 1131,22C–D Control L 0,239/0,242 83,82E–F Control H 0,515/0,515 215,42G–H Okänd 1 0,286/0,286 104,53A–B Okänd 2 0,562/0,563 238,43C–D Okänd 3 1,070/1,073 525,4

* Resultaten har multiplicerats med spädningsfaktorn (× 202).

KalibratorkurvaNedan visas en representativ kalibratorkurva. Använd inte denna kurva för att bestämmariktiga analysresultat.

PROCEDURENS BEGRÄNSNINGARI likhet med andra diagnostiska tester ska inte en slutgiltig klinisk diagnos baseras på resultatfrån ett enstaka test. Diagnos ska ställas av läkare när alla kliniska resultat har utvärderats.

82

0

0.5

1

1.5

2

0 1 2 3 4 5 6

U/l

O.D

. 450

nm

8

Manuell beräkning1. Märk ut absorbansvärdena som erhålls för Calibrators, förutom Calibrator 0, mot Lp(a)- koncentrationen på ett lin-linpapper och gör en kalibratorkurva.2. Avläs koncentrationen för prover på kalibratorkurvan.3. Multiplicera koncentrationen för prover med spädningsfaktorn (t.ex. × 202).

Exempel på resultat

Brunnar Identitet A450 Medelvärde konc. U/L*

1A–B Calibrator 0 0.061/0.0641C–D Calibrator 1** 0.194/0.197 1E–F Calibrator 2** 0.535/0.537 1G–H Calibrator 3** 1.129/1.131 2A–B Calibrator 4** 1.835/1.837 2C–D Prov 1 0.286/0.286 104.52E–F Prov 2 0.562/0.563 238.42G–H Prov 3 1.070/1.073 525.4

* Resultaten har multiplicerats med spädningsfaktorn (× 202).** Koncentrationen anges på flaskans etikett.

KalibratorkurvaNedan visas en representativ kalibratorkurva. Använd inte denna kurva för att bestämma riktiga analysresultat.

U/L

OD

450

nm

PROCEDURENS BEGRÄNSNINGARI likhet med andra diagnostiska tester ska inte en slutgiltig klinisk diagnos baseras på resultatfrån ett enstaka test. Diagnos ska ställas av läkare när alla kliniska resultat har utvärderats. Starkt lipemiska, ikteriska eller hemolyserade prover påverkar inte testresultatet.

JÄMFÖRELSE MED MERCODIA APO(a) RIAJämförelsestudier mellan Mercodia Lp(a) ELISA och Mercodia Apo(a) RIA har utförts med 45 prover som analyserades i två replikat vid två tillfällen. Värdena som erhölls visar på en godkorrelation mellan de två teknikerna, r= 1,00 (se figur). De förväntade värdena för Mercodia Apo(a) RIA kan därmed användas även för Mercodia Lp(a) ELISA.

JÄMFÖRELSE MED MERCODIA APO(a) RIAJämförelsestudier mellan Mercodia Apo(a) ELISA och Mercodia Apo(a) RIA har utförts med 45prover som analyserades i två replikat vid två tillfällen. Värdena som erhölls visar på en godkorrelation mellan de två teknikerna, r= 1,00 (se figur).

De förväntade värdena för Mercodia Apo(a) RIA kan därmed användas även för MercodiaApo(a) ELISA.

FÖRVÄNTADE VÄRDENDet tillhör god laboratoriesed att varje laboratorium fastställer sina egna förväntade värden.Följande resultat som erhållits med Mercodia Apo(a) RIA kan tjäna som en vägledning till dessatt laboratoriet har samlat tillräckligt med egna uppgifter.

Apolipoprotein(a)-halterna har studerats i tre olika material:A Normala1, n=171, Sverige (kaukasiska)B Normala1, n=203, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena)C Patienter med familjär hyperkolesterolemi (FH), n=113, Kanada (kaukasiska-asiatiska,

heterogena)

Normalgrupperna bestod av individer som valts från den allmänna befolkningen och som intehade någon uppenbar kardiovaskulär och/eller cerebrovaskulär sjukdom.

Fördelningen visas i figurerna nedan.De tre grupperna som undersöktes uppvisade inga ålders- eller könsrelaterade skillnader vad

gäller halterna av apolipoprotein(a).Det fanns inte någon signifikant skillnad mellan apolipoprotein(a)-halterna hos

normalgruppen från Sverige och normalgruppen från Kanada.Gruppen med FH-patienter hade avsevärt högre apolipoprotein(a)-halter än normalgruppen

från samma region (p<0,001, Wilcoxons rangsummetest).Följande apolipoprotein(a)-koncentrationer för median, 75:e, 85:e och 95:e percentilen

erhölls för de olika grupperna.

83

Svenska

0

250

500

750

1000

1250

Mer

cod

ia A

po

(a)

ELIS

A (

U/l

)

0 250 500 750 1000 1250

Mercodia Apo(a) RIA (U/l)

9

Mercodia Apo(a) RIA (U/L)

Mer

codi

a Lp

(a) E

LISA

(U/L

)

Median 75:e perc. 85:e perc. 95:e perc.U/l U/l U/l U/l

Normala, Sverige 131 448 612 795Normala, Kanada 117 379 525 1044FH, Kanada 294 660 863 1544

Apo(a)-fördelningen för normala patienter och FH-patienter (Kanada)

84

0

25

50

75

100

Cu

mu

lati

ve f

req

uen

cy (

%)

10 100 1000Apo(a) U/l

Normals

FH patients

10

FÖRVÄNTADE VÄRDENDet tillhör god laboratoriesed att varje laboratorium fastställer sina egna förväntade värden.Följande resultat som erhållits med Mercodia Apo(a) RIA kan tjäna som en vägledning till dess att laboratoriet har samlat tillräckligt med egna uppgifter.

Lp(a)-halterna har studerats i tre olika material:A Normala, n=171, Sverige (kaukasiska)B Normala, n=203, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena)C Patienter med familjär hyperkolesterolemi (FH), n=113, Kanada (kaukasiska-asiatiska, heterogena)

Normalgrupperna bestod av individer som valts från den allmänna befolkningen och som intehade någon uppenbar kardiovaskulär och/eller cerebrovaskulär sjukdom. Fördelningen visas i figurerna nedan. De tre grupperna som undersöktes uppvisade inga ålders- eller könsrelaterade skillnader vad gäller halterna a Lp(a). Det fanns inte någon signifikant skillnad mellan Lp(a)-halterna hos normalgruppen från Sverige och normalgruppen från Kanada. Gruppen med FH-patienter hade avsevärt högre Lp(a)-halter än normalgruppen från samma region (p<0,001, Wilcoxons rangsummetest). Följande Lp(a)-koncentrationer för median, 75:e, 85:e och 95:e percentilen erhölls för de olika grupperna.

Lp(a)- fördelningen för normala patienter och FH-patienter (Kanada)

U/L U/L U/L U/L

Lp(a) U/L

Kum

ulta

tiv fr

ekve

ns(%

)

Normala

FH-patienter

11

Distribution of normals (Canada)

Distribution of normals (Sweden)

Distribution of FH patients (Canada)

13

English

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

2000

2100

0

10

20

30

40

U/l

Rel

ativ

e fr

equ

ency

(%

)

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

2000

2100

0

10

20

30

40

U/l

Rel

ativ

e fr

equ

ency

(%

)

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

2000

2100

0

10

20

30

40

U/l

Rel

ativ

e fr

equ

ency

(%

)

Lp(a) U/L

Lp(a) U/L

Lp(a)U/L

Fördelningen för normala patienter (Kanada)

Fördelningen för normala patienter (Sverige)

Fördelningen för FH-patienter (Kanada)

ANALYTISKA PRESTANDAEGENSKAPERGräns för påvisbarhetDetektionsförmåga ska ses som en del av metodvalideringen snarare än den lägsta mätbarakoncentrationen. Detektionsgränsen är 0,07 U/L enligt den metod som beskrivs i ISO11843-Part 4. Koncentrationen för prover med absorbansvärden som är lägre än Calibrator 1 ska inte beräknas, istället ska de uttryckas som mindre än eller lika med (≤) koncentrationen som anges på Calibrator 1-flaskan.

RecoveryRecovery vid tillsats är 96–111 % (i genomsnitt 102 %).

Hook-effektProver med en Lp(a) koncentration på upp till 9600 U/L kan mätas utan att de visar felaktigt låga resultat, om de förbehandlas och späds till 1/202 enligt beskrivningen ovan.

PrecisionProverna förbehandlades och späddes till 1/202 vid ett tillfälle och förvarades vid –20°C tillsanalyserna genomfördes. Varje prov analyserades i 4 replikat vid 9 olika tillfällen.

12

Proverna förbehandlades och späddes till 1/202 vid varje testtillfälle. Varje prov analyseradesi 5 replikat vid 5 olika tillfällen.

Coefficient of variation

ProvErhållet värdeU/L

inomtestet %

mellan testet%

totalt testet %

123

83196485

3.32.92.4

4.03.61.8

5.24.73.0

Coefficient of variation

ProvErhållet värde U/L

inom testet%

mellantestet %

totalt testet %

123

103251744

3.13.62.4

4.23.75.2

5.25.25.7

SpecificitetEn koncentration på upp till 10 g/L plasminogen ger ingen mätbar korsreaktivitet i analysen. (Den kliniska koncentrationen av plasminogen ligger under 2.1 g/L).

Apolipoprotein B har ingen mätbar korsreaktivitet.

KALIBRERINGKitet Mercodia Lp(a) ELISA kalibreras mot en mycket ren, validerad, kommersiell Lp(a)-beredning. Koncentrationen av Mercodia Lp(a) ELISA uttrycks i enheter per liter (U/L). GARANTIDe uppgifter som presenteras här erhölls med användning av påvisat förfarande. Förändringar eller modifieringar av förfarandet som inte rekommenderas av Mercodia AB kan påverka resul-taten. I dessa fall frånsäger sig Mercodia AB allt ansvar, underförstått lagstadgat så väl som säljbarhets-och användbarhetsgaranti. Mercodia AB och deras auktoriserade distributörer skall i dessa fall inte hållas ansvariga för skador som orsakats indirekt eller som en konsekvens.

13

REFERENSER 1 Utermann G. (1989) The mysteries of lipoprotein (a). Science 17 Nov:904–910 2 MBewu AD and Durrington PN (1990) Lipoprotein (a): structure, properties and possible involvement in trombogenesis and atherogenesis. Atherosclerosis 85:1–14 3 Albers JJ, Marcovina SM and Lodge MS (1990) The unique lipoprotein(a): properties and immunochemical measurement. Clin Chem 36: 2019–2026 4 Rosengren A, Wilhelmsen L, Eriksson E, Risberg B and Wendel H (1990) Lipoprotein(a) and coronary heart disease: a prospective case control study in a general population sample of middle aged men. Br Med J 301:1248–1251 5 Rhoads GG, Dahlén G, Berg K, Morton NE and Danneberg AL (1986) Lp(a) Lipoprotein as a risk factor for myocardial infarction. JAMA 256:2540–2544 6 Dahlen GH, Guyton JR, Attar M, Farmer JA, Kautz JA and Gotto AM Jr (1986) Association levels of lipoprotein Lp(a), plasma lipids and other lipoproteins with coronary artery disease documented by angiography. Circulation 74:758–765 7 Dembinski T, Nixon P, Shen G, Mymin D and Choy PC. (2000) Evaluation of a new apolipoprotein(a) isoform-independent assay for serum Lipoprotein(a). Mol Cell Biochem 207:149–155 8 Houlston R and Friedl W (1988) Biochemistry and clinical significance of lipoprotein (a). Ann Clin Biochem 25:499–503 9 Wiklund O, Angelin B, Olofsson SO, Eriksson M, Fager G, Berglund L and Bondjers G(1990) Apolipoprotein (a) and ischaemic heart disease in familial hypercholesterolaemia. Lancet 335:1360–136310 Seed M, Hoppichler F, Reaveley D, McCarthy S, Thopmson GR, Boerwinkel E and Utermann G (1990) Relation of serum lipoprotein(a) concentration and apolipoprotein(a) phenotype to coronary heart disease in patients with familial hypercholesterolemia. New En J of Med 322:1494–149911 Zenker G, Költringer P, Boné G, Niederkorn K, Pfeiffer K and Jürgens G (1986) Lipoprotein (a) as a strong indicator for cerebrovascular disease. Stroke 17:942–94512 Murai A, Miyahara T, Fujimoto N, Matsuda M and Kameyama M (1986) Lp(a) lipoprotein as a riskfactor for coronary heart disease and cerebral infarction. Atherosclerosis 59:199–20413 McLean JW, Tomlinson JE, Kuang WJ, Eaton DL, Chen EY, Fless GM, Scanu AM and Lawn RM (1987) cDNA sequence of human apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen. Nature 330: 132–13714 Eaton DL, Fless GM, Kohr WJ, McLean JW, Xu QT, Miller CG, Lawn RM and Scanu AM (1987) Partial amino acid sequence of apolipoprotein (a) shows that it is homologous to plasminogen Biochemistry 84:3224–322815 Lackner C, Boerwinkle E, Leffert CC, Rahmig T and Hobbs HH (1991) Molecular basis of apolipoprotein(a) isoform size heterogenity as revealed by pulsed-field gel electrophoresis. J Clin Invest 87:2153–216116 Kamboh MI, Ferrell RE and Kottke BA (1991) Expressed hypervariable polymorphism of apolipoprotein (a). Am J Hum Genet 49:1063–107417 Solymoss BC, Marcil M, Wesolowska E, Gilfix BM, Lespérance J and Campeau L (1993) Relation of coronary artery disease in women <60 years of age to the combined elevation of serum lipoprotein(a) and total cholesterol to high-density cholestrolratio. Am J Cardiol 72:1215–19.

X-O

Gra

f Try

cker

i AB

Tillsätt Calibrators och förbehandlade kontroller* och prover

25 μL

Tillsätt enzyme conjugate 1X lösning 50 μL

Inkubera 1 timme vid 18–25°C på en plattskak700-900 rpm

Tvätta med wash buffer 1X-lösning 700 μL, 6 gånger

Tillsätt Substrate TMB 200 μL

Inkubera 15 minuter

Tillsätt Stop Solution 50 μL Skaka i 5 sekunder för att setill att lösningen blandas

Mät vid A450

Utvärdera resultaten

SAMMANFATTNINGSPROTOKOLLMercodia Lp(a) ELISA

31-3104 Version 8.0

* Medföljer ej För fullständig information se sida 7