medicina celulara lp 05 anticorpi
TRANSCRIPT
![Page 1: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/1.jpg)
Procedee microscopice de
investigare celulară
prin folosirea
anticorpilor
Dr. Cătălin Gabriel MANOLE
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 2: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/2.jpg)
Definiţia noţiunii de anticorp
• ANTICÓRP s. m. proteină specifică elaborată de organism ca răspuns la pătrunderea unui antigen. (< fr. anticorps) (DEX)
N.B. Prin antigen înţelegem orice proteină străină de organismul care produce anticorpul.
O imunoglobulină, în forma literei “Y”, produsă de limfocitele B, folosită de sistemul imun pentru identificarea și neutralizarea particulelor străine.
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Epitop
Paratop
![Page 3: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/3.jpg)
Definiţia noţiunii de anticorp
Interacționează specific cu o
secvență de aminoacizi
(EPITOP) din structura unei
proteine (ANTIGEN)
Fiecare braț al anticorpului
conține un paratop, care este
specific pentru un singur
epitop.
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Epitop
Paratop
![Page 4: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/4.jpg)
1. Regiunea Fab
2. Regiunea Fc
3. Lanț greu
4. Lanțurile ușoare
5. Paratop
6. Regiune balama
Structura generală
a anticorpilor
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 5: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/5.jpg)
• Imunomarcare pentru microscopia optică
– Imunohistochimia
– Imunofluorescența
• Imunomarcare pentru microscopia electronică
– Imuno-electrono-microscopia
Metode de utilizare a
anticorpilor în microscopie
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 6: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/6.jpg)
Metode de
imunomarcare pentru microscopie
• Metoda directă
• Metoda indirectă
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 7: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/7.jpg)
• Reprezintă totalitatea tehnicilor care folosesc
anticorpi pentru localizarea antigenelor
corespunzătoare
– pe secțiuni tisulare
• Criosecțiuni
• Secțiuni la parafină
– pe celule în cultură
• Face posibilă vizualizarea distribuției și localizării
componentelor celulare în microscopie optică
Imunomarcarea
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 8: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/8.jpg)
Principiul metodei
• Recunoașterea specifică a unui antigen (Ag) de către un un
anticorp (Ac)
• Ac sunt purificați din serul animalelor de laborator
• Ac vor fi cuplați cu un sistem de detecție
– ENZIMĂ căreia i se furnizează un SUBSTRAT care va fi
transformat într-un compus colorat (IMUNOHISTOCHIMIE)
• Vizualizare în microscopie optică, cu lumină directă
– MOLECULE FLUORESCENTE (IMUNOFLUORESCENȚĂ)
• Vizualizare în microscopie de fluorescență
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 9: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/9.jpg)
Metoda directă
- anticorp primar marcat -
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 10: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/10.jpg)
Metoda indirectă
anticorp primar nativ și anticorp
secundar marcat
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 11: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/11.jpg)
{ IMUNOHISTOCHIMIA
![Page 12: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/12.jpg)
Imunohistochimia
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Enzimă Substrat Culoare
Proxidaza de hrean Horseradish peroxidase
(HRP)
3,3'-diaminobenzidină (DAB) Brun-negru
Forfataza alcalină Alkaline phosphatase (AP)
Combinație de clorură de
tetrazoliu (nitro blue tetrazolium
chloride NBT) și 5-bromo-4-cloro-
3-indolil-fosfat (BCIP)
Negru – violet
http://www.ihcworld.com/products/ihc-detection-system/Chromogen.htm
DAB+ kit
BCIP/NBT
![Page 13: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/13.jpg)
• Structuri membranare
• Organite celulare
• Componente nucleare
Ce structuri celulare pot fi
marcate ?
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 14: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/14.jpg)
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Ac pentru ribozomi
ovar
Ac pentru mitocondrii
colon
Ac pentru
componente ale membranei plasmatice
ficat ficat
Ac pentru
componente ale invelișului nuclear
![Page 15: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/15.jpg)
Evaluarea proliferării celulare
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 16: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/16.jpg)
Evaluarea apoptozei
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 17: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/17.jpg)
IMUNOFLUORESCENȚA
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 18: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/18.jpg)
• O variantă de luminiscență
• O moleculă capabilă de fluorescenţă (fluorofor,
sau fluorocrom) excitată cu lumină de o anumită
lungime de undă, va emite o radiație
electomagne-tică cu o lungime de undă
superioară, în spectrul vizibil
• Parametrii:
– Spectru de absorbție/excitație
– Spectru de emisie
– Intensitate
– Durată
Fluorescența
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 19: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/19.jpg)
Spectrul
electromagnetic
![Page 20: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/20.jpg)
Microtubuli
ADN
![Page 21: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/21.jpg)
Ribozomi
Filamente de actină
ADN
![Page 22: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/22.jpg)
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
ADN (cromozomi)
Microtubuli (fus de diviziune)
![Page 23: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/23.jpg)
Imuno-electrono
microscopia
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 24: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/24.jpg)
• Metoda a fost introdusă pentru prima oară în
1971 de către Faulk & Taylor
• Folosește anticorpi adsorbiţi pe particule de aur
(5-30 nm)
• După caracteristicile anticorpului primar şi
structura celulară căreia se adresează
marcarea se poate realiza:
– pre-includere
– post-includere
• Metoda mai scumpă și mai laborioasă
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Date generale
![Page 25: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/25.jpg)
- Cea mai bună metodă pentru detectarea și
localizarea proteinelor în diferite
compartimente celulare datorită puterilor de
mărire și de rezoluție superioare
Scop
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
![Page 26: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/26.jpg)
℗2013 Disciplina de medicină celulară și moleculară - medicina dezvoltării umane, UMF „Carol Davila” București
Prolactină în
granule de secreţie
![Page 27: Medicina Celulara LP 05 Anticorpi](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081416/55cf9dca550346d033af3365/html5/thumbnails/27.jpg)
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0968432811001417
http://openi.nlm.nih.gov/detailedresult.php?img=2800001_jkms-25-16-g005&req=4
http://www.bio.davidson.edu/people/kabernd/BerndCV/Lab/EpithelialInfoWe
b/Transcytosis.html
În celule endoteliale din ficat
În endoteliul
aortic
IMUNOHISTOCHIMIE
IMUNOELECTRONOMICROSCOPIE
Evidenţieri
pentru
caveolină 1