manual microscopio
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Componentes, uso y recomendaciones para el microscopioTRANSCRIPT
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Leeuwenhoek. Su microscopio
BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO
El nombre microscopio deriva del griego: mikrs=pequeo,
skopo=observar. Este trmino designa, en sentido amplio, a todo instrumento
utilizado para amplificar la imagen de objetos que, por su tamao, no son
observables a simple vista. En la prctica, se refiere a un aparato formado por
un sistema de, al menos, dos lentes: un objetivo y un ocular, con el mismo fin.
El descubrim iento del m icroscopio
compuesto tuvo un precedente atribuido a
Galileo (1564-1642).
El verdadero impulsor de la Microscopa
fue, sin duda, el holands Anton Van
Leeuwenhoek, (1632-1723). Construy
microscopios simples, con lentes muy
convexas que l mismo pula y con los
cuales realiz observaciones m uy
diversas: estudi la composicin de la
sangre, fue el primero en observar y
dibujar los protozoos, descubri las
bacterias, etc. Sus trabajos fueron
publicados por la Real Sociedad de
Londres (1683).
Hoy da, hay unanimidad en considerar a
los holandeses Hans y Zacarias Janssen,
padre e hijo, como constructores del
primer microscopio compuesto en 1590.
Desde entonces y hasta nuestros das, el microscopio compuesto no ha cesado
de perfeccionarse, incorporndole mejoras, revolver portaobjetivos, visin
binocular, iluminacin halgena de gran rendimiento, filtros polarizadores, equipo
de contraste de fase, microscopio de contraste interferencial, microscopio de luz
ultravioleta, etc.
Pese a todo, el microscopio ptico presenta una serie de limitaciones que le
impone la naturaleza de la propia LUZ. Por encima de los 1500-2000 aumentos,
las aberraciones que origina la luz impiden hacer observaciones con nitidez.
Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones
en lugar de rayos luminosos y potentes electroimanes, en lugar de lentes. Con
ello naci el microscopio electrnico.
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P A R T E S del M I C R O S C O P I O
Se relacionan en orden, segn la numeracin establecida en la figura adjunta.
1- Ocular: Sistema de lentes que queda prximo al ojo.
2- Anillo de correccin diptrica: Corrige las diferencias de visin entre ambos
ojos. Slo se presenta en los microscopios binoculares y trinoculares.
3- Revolver porta-objetivos: Accesorio que soporta de tres a seis objetivos,
segn los modelos, permitiendo cambiar de uno a otro, rpidamente. Posee un
"clic" que nos avisa cundo est el objetivo en la posicin correcta.
4- Objetivos: Componentes pticos que quedan prximos al objeto, de ah su
nombre. Cada uno contiene un delicado sistema de lentes.
Normalmente, se suministran cuatro objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Los tres
primeros trabajan en seco, el cuarto, que lleva la inscripcin "OIL", y
generalmente se distingue por un anillo negro en su parte baja, requiere
imprescindiblemente el empleo de un aceite especial, disponible en el comercio,
"aceite de inmersin" o aceite de cedro cuyo ndice de refraccin es muy
similar al vidrio de las lentes (n = 1,515). Su funcin se explicar ms adelante.
El 40x y el 100x suelen estar provistos de montura retrctil.
5- Platina: Plataforma que sostiene la preparacin. En casi todos los diseos
actuales, presenta movimiento de elevacin-descenso para el enfoque.
6- Condensador: Conjunto de lentes que concentra la luz sobre la muestra.
7- Diafragma iris: Es un sistema mecnico formado por varias laminillas
dispuestas en forma radial delimitando un orificio de abertura variable, que regula
la cantidad de luz que entra al condensador. Se acciona mediante una palanca
de fcil acceso (en la figura aparece con ~). Su correcto uso es de vital
importancia en la observacin, slo la prctica nos permitir comprobarlo.
8- Portafiltros: Contiene, normalmente, un filtro de vidrio azul, dado que la luz de
longitud de onda corta mejora el poder de resolucin del microscopio.
Por otra parte, si el foco de luz no es plano o uniforme (bombilla blanca-mate o
luz da) colocaremos en el anillo un filtro de vidrio esmerilado, blanco o azul.
9- Tornillo elevador del condensador: Permite bajar el condensador para
cambio o limpieza del mismo y, a veces, para trabajar con aumentos dbiles.
10- Iluminador: Este modelo presenta a un eficaz equipamiento de iluminacin,
alojado en la base, con lmpara halgena y regulacin de la intensidad luminosa.
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11- Pie o base: Sostiene todo el conjunto del microscopio y puede soportar un
espejo plano-cncavo, un iluminador de subplatina acoplable o un equipo de
iluminacin halgena, como es el caso que describimos aqu.
12- Corrector de la distancia interpupilar: Imprescindible en los modelos
binoculares, ya que la distancia entre nuestros ojos vara de una persona a otra.
13- Cabezal binocular: Equivale al tubo de los modelos con diseo antiguo.
Es la estructura que soporta al ocular u oculares. En este caso contiene un
sistema de prismas que inclinan el rayo luminoso a 45 a la vez que lo dividen en
dos, uno para cada ocular. Existen tambin cabezales monoculares y
trinoculares, estos ltimos con tubo adicional para cmara fotogrfica o de vdeo.
14- Estativo: Columna que soporta al cabezal y sirve como asa de transporte.
15- Tornillo fijador del cabezal: Al aflojarlo, permite el giro de ste, para un
segundo observador, y su desmonte, en caso necesario.
16- Carro mvil porta-preparados: Accesorio que sujeta la preparacin y
permite moverla en direccin frontal y lateral, para su exploracin. Presenta una
pieza fija y otra mvil entre las cuales se ancla el porta. Suele ir provisto de dos
escalas con nonius, perpendiculares entre s para tomar las coordenadas de
zonas interesantes de la preparacin.
17- Enfoque macromtrico: Este mando realiza un enfoque rpido pero con
poca precisin, sobre todo cuando trabajamos con objetivos de gran aumento.
Acta subiendo y bajando la platina, en modelos antiguos mueve el tubo.
18- Enfoque micromtrico: Tornillo de enfoque con precisin, mueve la platina
con extrema lentitud. Es imprescindible para afinar el enfoque de los objetivos
con aumentos fuertes. En este modelo es coaxial con el macromtrico.
19- Mando de movimiento frontal del carro.
20- Mando de movimiento lateral del carro.
21- Regulador de intensidad luminosa.
22- Interruptor de iluminacin.
NOTA 1: Los elementos con n 1, 4, 6, 10 y 13 constituyen la parte ptica del
microscopio, todos los dems forman la parte mecnica.
NOTA 2: El aumento total de trabajo se calcula multiplicando el aumento indicado
en el objetivo por el indicado en el ocular (Ej.- objetivo 40x, ocular 10x, aumento
total = 400x). Esto debe constar en los dibujos que se hagan sobre nuestras
observaciones.
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M A N E J O del M I C R O S C O P I O
L Es muy importante respetar todos los pasos que se detallan acontinuacin.
1- Quitar la funda de plstico (con cuidado de no coger el ocular, al mismo
tiempo), doblarla y guardarla donde no estorbe.
2- Conectar el foco de luz.
3- Separar objetivo y platina, colocar la preparacin en sta y centrar la zona
teida sobre la lente superior del condensador.
4- Abrir poco el diafragma y colocar el condensador en posicin alta.
5- Colocar el objetivo de menor aumento (4x o 10x, segn modelos). Observando
lateralmente el microscopio, aproximar el objetivo a la preparacin (bajando el
tubo o subiendo platina, segn modelos) hasta que queden lo ms juntos posible,
sin llegar a tocarla.
6- Observando a travs del ocular, levantar lentamente el objetivo (o bajar platina)
con el macromtrico, hasta que aparezca un imagen ntida.
Dado el bajo aumento del objetivo, es posible que la iluminacin resulte excesiva.
El deslumbramiento nos impedir obtener una visin satisfactoria, en tal caso,
cerrar el diafragma, o bajar el condensador.
NOTA: Tngase en cuenta que antes de enfocar la preparacin, observaremos
la posible suciedad que haya sobre la lente superior del condensador y sobre la
cara inferior del porta. Saldremos de dudas moviendo el condensador o el carro.
Tambin se puede dar el caso de que veamos puntos o manchas que no
desaparecen al mover los elementos antes citados. Sin duda, se trata de
suciedad depositada en el ocular, lo que comprobaremos haciendo girar ste.
Una vez enfocada la preparacin, rara vez necesitaremos volver a tocar el tornillo
macromtrico, incluso al cambiar de objetivos.
7- Explorar la preparacin, utilizando los
mandos del carro, lentamente de izquierda
a derecha y de arriba a abajo, procurando
no pasar varias veces por la misma zona.
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Dependiendo del material que se estudie, el aumento puede ser insuficiente para
obtener una imagen significativa (el profesor debe dar indicaciones al respecto),
en cuyo caso pasaremos al objetivo siguiente, 10x, El "clic" nos avisar la
correcta colocacin del objetivo.
Si el anterior estaba bien enfocado, podemos cambiar de objetivo directamente,
sin modificar el enfoque, aunque luego habr que afinar con el micromtrico.
Continuar la exploracin.
8- Puede ser conveniente tomar las coordenadas de las zonas ms interesantes.
Para ello, nos ayudaremos de los nonius, que estn dispuestos
perpendicularmente entre s, sobre la platina. Pedir indicaciones al profesor.
9- Pasar al objetivo siguiente (40x), reenfocar con el micromtrico, ser
conveniente modificar la altura del condensador hasta su posicin ms alta as
como la abertura del diafragma.
NOTA: Es muy importante que los objetivos no toquen la preparacin, el
10x y 40x tienen ese riesgo, al igual que el 100x.
10- Slo si est previsto en el guin de prcticas, pasaremos al objetivo de 100x-
inmersin. En tal caso, depositaremos una gota de aceite, que nos proporcionar
el profesor, sobre la preparacin.
Bajar el objetivo de 100x, mirando lateralmente el
microscopio, hasta tocar la gota de aceite,
observaremos la formacin de un menisco.
El aceite impide la dispersin de los rayos de luz,
mejorando notablemente la nitidez de la imagen y la
luminosidad del objetivo.
Mirando a travs del ocular, enfocaremos con el
micromtrico. Debemos explorar la preparacin muy
lentamente.
11- Terminada la observacin, levantar el objetivo (o bajar platina). Retirar la
preparacin y apagar el foco. No olvidar limpiar el objetivo 100x, si se ha usado
aceite de inmersin (ver MANTENIMIENTO).
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RECOMENDACIONES
* Aunque los objetivos de 40x y 100x, en los microscopios modernos, suelen ser
retrctiles, es decir, retroceden parcialmente al tocar la preparacin para no
daarla, corremos el riesgo de rayar y ensuciar el objetivo, es preferible evitar el
contacto entre ste y el preparado, salvo en el caso de objetivo inmersin.
* Con cada objetivo deberemos ajustar la abertura del diafragma y, a veces, la
posicin del condensador, hasta obtener una visin satisfactoria.
En teora, el condensador debe estar siempre en su posicin ms alta.
* Los microscopios modernos, suelen venir equipados con oculares de punto focal
alto, es decir, si nos acercamos demasiado a l, la visin ser defectuosa.
Debemos, por tanto, buscar la altura adecuada.
* En los microscopios de formato antiguo, sin inclinacin en el cabezal, se pueden
inclinar estativo y platina, para mayor comodidad. Esto no se podr hacer si
estamos utilizando inmersin o preparaciones con lquido entre porta y cubre.
* En los microscopios binoculares, debemos tener en cuenta que la distancia
entre los ojos vara de una persona a otra. Habr que ajustar la separacin entre
los oculares.
MANTENIMIENTO
1- El microscopio es un instrumento de precisin, debe ser manipulado con
suavidad, despacio, nunca intentar forzar ningn mecanismo.
2- Terminada la prctica, separar objetivo y platina, retirar la preparacin y apagar
el foco.
3- Si se ha empleado aceite de inmersin, debe limpiarse el objetivo 100x con un
pauelo suave de celulosa, y papel siliconado para limpieza de lentes. Si esto
resulta insuficiente, se utilizar xilol o mezcla alcohol-ter, impregnando
levemente el pauelo o papel limpia-gafas.
4- Cubrir bien el microscopio con su funda y, si no se va a usar en un cierto
tiempo, guardarlo en su estuche o armario.
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OBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADAS
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INSTRUMENTOS MS USUALES EN MICROSCOPA
1- PORTAOBJETOS.- Vidrio rectangular de 75mm.x 25mm.(aprox.) sobre el que
se deposita la muestra que pretendemos observar. Se expenden en el comercio
en cajas de 50 unidades, generalmente. Existen modelos excavados para el
examen "en gota pendiente" de infusorios, por ejemplo
2- CUBREOBJETOS.- Vidrio cuadrado extremadamente delgado, de
dimensiones variables (20x20mm, 22x22mm, 22x50mm.,etc.) con el que se cubre
la muestra. El tamao 20x20 mm. es el ms usual. Se suelen vender en cajas
de100 unidades.
3- AGUJA ENMANGADA DE DISECCIN.- Aguja, ms o menos larga, con
mango, de usos mltiples. No suele ser cara, pero se puede hacer de fabricacin
casera.
4- LANCETA.- Similar a la anterior pero con la punta aplanada en forma de lanza
y bordes cortantes. Presenta usos mltiples: diseccin, montar preparaciones...
5- ESCALPELO .- Instrumento cortante de uso en ciruga. Se aconseja utilizar
modelos de un solo uso, su precio es ms asequible y su afilado, excelente . En
determinados casos, se podr sustituir por una hoja de afeitar o un cter.
6- ASA DE PLATINO .- Consta de un mango provisto en su extremo de un fino
alambre, de aleacin nquel-cromo generalmente, con un anillo terminal. Se
utiliza normalmente para manipular los cultivos de bacterias.
7- PINZAS.- Se aconsejan de presin suave. La hay puntiagudas, de puntas
redondeadas, curvas, etc.
8- TIJERAS DE DISECCIN.- Deben ser de acero inoxidable. Existen en el
comercio modelos desmontables que permiten una fcil limpieza y secado. Las
hay de punta roma, fina, curva, etc.
9- CUENTAGOTAS.- Para dosificar colorantes y otros reactivos.
10- PINCEL DE PELO FINO .- Para manipular cortes histolgicos. Tambin es
conveniente disponer de otro destinado exclusivamente a la limpieza de lentes.
Los hay muy decentes en los "Todo a 100".
11- CUCHARILLA ESPTULA: Muy til para manipular sustancias slidas, sobre
todo al pesar en la balanza.
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12- VIDRIOS DE RELOJ.- Vidrios cncavos de distintos dimetros y usos
mltiples: para calentar suavemente, para teir cortes etc.
13-CAPSULA DE PORCELANA.- Recipiente cncavo de porcelana, utilizado
para calentar.
14- CPSULA DE PETRI.- Tambin llamada placa de Petri o caja de Petri. Es
un recipiente cilndrico, de fondo plano cuya altura es notablemente menor que
su dimetro. Consta de dos partes de igual forma, una mayor que la otra, que
encajan entre s. Se emplea para cultivos de bacterias y otros usos.
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15- MECHERO DE ALCOHOL.- Es conveniente que las fibras de la mecha no
estn muy apretadas y que sta no sobresalga demasiado de la boca del
mechero, para tener una llama estable. Es imprescindible.
16- CUBETA DE TINCIONES.- Recipiente de forma rectangular o cuadrada,
generalmente de plstico, de dimensiones opcionales (por ejemplo 25x25 cm.),
sobre el que se deposita una varilla de vidrio o metlica, doblada en "U" que
sujetar el porta durante la tincin. Se puede hacer con una cubeta de un "Todo
a 100" y un par de varillas de los zapatos o dos agujas de hacer punto, de
aluminio. Es imprescindible.
17- VASO DE PRECIPITADOS.- Vaso de vidrio con pico en el borde para verter
su contenido. Tiene usos diversos como calentar, por ejemplo.
18- PIPETA.- Tubo graduado para medir volmenes de lquidos, con precisin.
Como solucin casera, se puede sustituir por una jeringuilla de plstico.
19- MICRTOMO.- Instrumento para hacer cortes suficientemente delgados,
como para ser observados por transparencia. El ms asequible es el micrtomo
de mano, pero, incluso ste modelo, es un instrumento caro.
20- NAVAJA HISTOLGICA.- Es la clsica navaja barbera. Se usa para cortes
con microtomo y su perfecto afilado es esencial. (Es peligrosa de manejo se puede
sustituir por una hoja de afeitar y slo se necesita si se piensan hacer cortes histolgicos).
21- FRASCOS CUENTAGOTAS.- Muy tiles para dosificar los diversos
colorantes que se utilizan. Dependiendo de su contenido, se usarn de vidrio o
plstico. Se recomiendan los de vidrio color topacio. Para lquidos muy voltiles,
se aconsejan de tapn esmerilado, algo ms caros.
22- FRASCO LAVADOR.- Frasco de plstico con un tubo curvo de salida, muy
til para lavar las preparaciones. Los de 0,5 l. tienen un tamao manejable.
23- TUBOS DE ENSAYO .- De usos mltiples, por ejemplo, para cultivos de
bacterias.
24- ESTUCHE PARA PREPARACIONES.- Todas las preparaciones definitivas
deben ser almacenadas en estuches adecuados, disponibles en el comercio a
precio asequible.
25- ETIQUETAS.- Antes de almacenar las preparaciones debemos etiquetarlas
en los extremos del porta. La etiqueta debe indicar cuantos datos sean de inters
(muestra, tincin, quin realiz la preparacin, fecha, lugar, etc.). Pueden ser
apropiadas las adhesivas de 16x22 mm. (aprox.).
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26- PERA DE GOMA.- Se adquiere en el comercio para lavados nasales. En
nuestro caso, ser de gran utilidad para eliminar polvo o pelusas de los oculares,
a los cuales no debemos soplar nunca, pues una diminuta gota de saliva puede
formar una mancha de tamao considerable, a la hora de mirar a travs del
ocular.
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OBSERVACIONES GENERALES SOBRE EL MONTAJE DE PREPARACIONES
1) Para la observacin la luz debe atravesar la preparacin, luego sta debe ser
fina, bien extendida y capaz de ser traspasada por la luz.
2) La LIMPIEZA del material es IMPRESCINDIBLE y debe evitarse siempre la
grasa, huellas, pelusas, rayados, polvo, etc., tanto en las lentes del microscopio
como en el porta y el cubreobjetos.
3) Los portaobjetos deben sujetarse con los dedos por los bordes, Los
cubreobjetos se manipulan de igual manera y/o con ayuda de un instrumento fino
(aguja enmangada) para evitar huellas y
suciedad.
4) Las gotas de agua, colorantes u otros
productos, deben colocarse con cuidado,
utilizando el cuentagotas o una pipeta fina.
Si es preciso se extendern sobre el porta de
forma homognea con ayuda de una aguja
enmangada o lanceta, con cuidado de no rayar.
5) Cuando se coloca el cubreobjetos sobre una gota previamente situada en el
porta, se debe proceder como indica la figura. Rozando el lquido en la unin
porta-cubre hasta que se situ a lo largo de toda la linea de contacto. Despus se
deja caer "de golpe", como al cerrar un libro, para evitar que queden burbujas de
aire entre cubre y porta..
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OBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADAS
BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIOP A R T E S del M I C R O S C O P I O M A N E J O del M I C R O S C O P I OOBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADASINSTRUMENTOS MS USUALES EN MICROSCOPAOBSERVACIN DE PREPARACIONES MONTADAS