manipulación, identificación, y transporte de animales de ...€¦ · región dorsal del cuello o...

Manipulación, Identificación,y Transporte de Animales de

Laboratorio

Conocimiento previo de la especie.

Entrenamiento, capacitación y actualización del personal.

Formar parte del espacio social del animal.

Interactuar físicamente con el animal.

Realizar movimientos predecibles, lentos y suaves.

Programa de entrenamiento y habituación de los animales.

Algunos factores a tener en cuenta:

TECNICAS DE MANIPULACIONCOMUNMENTE UTILIZADAS

Todas las técnicas de manipulación están orientadas a disminuir elriesgo que representan en cada especie sus correspondientes

PUNTOS CRITICOS

Siempre tenga en cuenta el peligro que representan dientes ygarras… ENTRENESE y MANIPULE CORRECTAMENTE

A LOS ANIMALES

TECNICAS UTILIZADAS

EN LA RATÓN

TECNICAS UTILIZADAS EN EL RATON

Para retirarlo de la jaula

Sujete al ratón desde elextremo proximal de la

cola

Nunca sujete al ratón desde el extremodistal de la cola. La cola está

sumamente vascularizada e inervada.Es muy doloroso

NO

TECNICAS UTILIZADAS EN EL RATON


Puede sujetar al ratón utilizandouna mano, conteniéndolo sobre

la palma de la misma

Puede sujetar al ratón utilizando susdos manos, asegurando la cola con

sus dedos

Para sujetarlo e inmovilizarlo

Paso a paso, técnica destinada a inmovilizar al ratón utilizando unasola mano. Note que la otra mano queda completamente libre

Paso a paso, técnica destinada a inmovilizar al ratón utilizando alcomienzo ambas manos. Note que luego la otra mano quedacompletamente libre

Para sujetarlo e inmovilizarlo.

TECNICAS UTILIZADAS

EN LA RATA

TECNICAS UTILIZADAS EN LA RATA

Para retirarla de la jaula

Sujete a la rata desde elextremo proximal de la

cola

Nunca sujete a la rata desde el extremodistal de la cola. La cola está sumamente

vascularizada e inervada. Es muy doloroso.Note el permanente movimiento de la

rata

NO


Para retirarla de la jaula

Puede sujetar a la rata utilizandouna mano, e inmediatamente

tomar el tren posterior con laotra

Puede sujetar a la rata utilizando lasdos manos, brindando adecuada

contención


Para sujetarla e inmovilizarla

Brinde a la rata una adecuadasuperficie de apoyo para que el animal

pueda traccionar. Evite colocarlasobre superficies lisas en donde no

pueda afirmarse. Esto la altera mucho.Tome especiales precauciones cuando

trabaje con ratas de más de 200gramos


Para sujetarla e inmovilizarla

Distintas técnicas para sujetar e inmovilizar a la ratautilizando una o dos manos. Es sumamente importantebrindar sustento al tren posterior para evitar que el

animal pueda traccionar y lesionar al operador con susgarras

NO

TECNICAS UTILIZADAS EN EL COBAYO


Distintas técnicas para retiraral cobayo de su jaula

brindando sustento conambas manos

NO



Técnicas destinadas a sujetar e inmovilizar al cobayo utilizando ambas manos. Es muyimportante brindar adecuado sustento con la mano que no sujeta al animal por la

región anterior



Técnicas para sujetar al animal retrayendolos miembros toráxicos por detrás de la

cabeza y sujetando el pliegue de piel de laregión dorsal

TECNICAS UTILIZADAS EN EL CONEJO


Técnicas destinadas asujetar e inmovilizar alconejo para retirarlo de

la jaula. Observe lasdistintas alternativaspara sujetar el tren

posterior



Técnica para sujetar e inmovilizar alconejo para transportarlo cortas

distancias



Técnica para sujetar einmovilizar al conejo para

transportarlo largasdistancias

NUNCA UTILICE ESTAS TECNICAS PARAMANIPULAR AL CONEJO…

TECNICAS DE SEXADO

Consideraciones generales

– Distancia ano-geital (Aprox. el doble en el machoque en la hembra)

– Bolsa escrotal en los machos.

– Presencia del canal inguinal en los machos (dificultala observación de los testículos)

– Presencia de las líneas mamarias en las hembras

– Presencia de una fina línea depilada en lan hembra

Observe la distancia ano-genital en la hembra y en elmacho

Tanto el pene comola vulva pueden serexpuestos mediantesuave presión en laregión genital.Observe la distanciaano-genital en lahembra y en elmacho

Cobayos

Conejos

Tanto el pene como la vulvapueden ser expuestosmediante suave presión en laregión genital. Observe latécnica utilizada para sujetar einmovilizar al conejo

INMOVILIZACIONMediante el uso de cepos podemos limitar casi totalmente losmovimientos del animal con el propósito de realizar diferentesmaniobras experimentales.

Pueden ser inmovilizados durante…

- Períodos cortos

- Períodos prolongados

La implementación de un programa de entrenamiento previo esfundamental para disminuir el estrés durante la práctica delprocedimiento experimental

TIPOS DE CEPOS

Figuras Nº 1 a 6: Distintos tipos de cepos yartefactos comúnmente utilizados para

inmovilizar diferentes especies

METODOS DE IDENTIFICACION• Métodos temporarios

– Marcadores indelebles– Acido pícrico– Depilación, rasurado y afeitado

• Métodos permanentes– Marcado de orejas– Caravanas plásticas o metálicas– Tatuado– Microchips (para ratones y ratas de más de 21 días

de edad)– INACEPTABLE - Amputación de falanges

METODOS TEMPORARIOS• Marcadores indelebles

• Depilación, rasurado y afeitado

METODOS PERMANENTES

• Marcado de orejas

• Colocación de caravanas plásticas o metálicas

METODOS PERMANENTES

• Tatuado

• Implante subcutáneo de microchips

CONTENEDORES PARATRANSPORTE

• Contenedores y cajas de transporte

Figura Nº 1: Caja detransporte convencional

de PVC con materialfiltrante

Figura Nº 2: Caja de cartóncorrugado de alta densidadrecubierta en su interior con

materiales impermeables.También tiene material

filtrante

Figura Nº 3: Caja plásticacon gel hidratante

CONTENEDORES PARATRANSPORTE

• Otros modelos de contenedores y cajas para transporte

Figura Nº 4: “Doble” caja detransporte para roedores

inmunodeficientes o libres degérmenes con gel hidratante estéril

Figura Nº 5: Caja de transporte pararoedores que deben viajar por separado pero

en el mismo contenedor (Ej.: Diferentecalidad sanitaria)

ADMINISTRACIÓN DE SUSTANCIASDESCRIPCIÓN DE LAS TÉCNICAS MÁS

UTILIZADAS

Vía de Administración

La elección de la vía está determinada por:

• Propósito experimental

• Especie animal seleccionada

• Posibles efectos adversos de la técnica deadministración sobre los animales

• Frecuencia de dosificación

• Interacciones con los objetivos del experimento(menos estresante)

Características de las sustancias a administrar

• Propiedades físico-químicas

• Característica de los solventes y preparado desoluciones

• Tasa de absorción

• Factores externos

Recomendaciones Generales

• Utilice siempre antisépticos en cada uno de los procedimientos

• Utilice agujas adecuadas para las diferentes vías

• Cuando sea posible use anestésicos locales (de aplicación tópica)

• No recicle el material

• Busque alternativas

• Es esencial conocer la anatomía de los animales con los quetrabaja para refinar los procedimientos

• Introduzca la aguja/sonda firme pero suavemente

• Introduzca la aguja con el bisel hacia arriba

• Asegúrese de haber ingresado en la vía seleccionada

• Cuidado con el volumen

Volúmenes de Administración de Sustancias

IV(ml)

IP(ml)

IM(ml/sitio)

SC(ml/sitio)

ORAL(ml/Kg)

ID(μ/Kg)

RATON 0.2 2-3 0.05 0.5 * 20 100

RATA 1 5-10 0.1 1-2 * 10 100COBAYO 0.5 10-15 0.3 1-2 ** 5 100

CONEJO 1-10 0.5-1 1-5 ** 5 100

*máximo en 2-4 sitios diferentes**máximo en 2 sitios diferentes

Sitios de Inoculación RecomendadosTamaño de las Agujas

EV IP IM SCRATON Venas

Marginales de27 – 28 G

Abdomen25 – 27 G

Cara Posterior delCuádriceps27 G

Región Dorsal delCuello21 – 25 G

RATA VenasMarginales dela cola25-27G

Abdomen23 – 25 G


Región Dorsal delcuello o flancos21 – 25 G

COBAYO Vena safena25-27G

Abdomen21 – 25 G


Región Dorsal delcuello o flancos23 G

CONEJO VenasMarginales dela oreja23-25G

Cara Posterior delCuádriceps, músculosLumbares 23 – 25 G

Región Dorsal delcuello o flancos21 G

Utilizada habitualmente para la administración parenteral.Proporciona una lenta liberación, evitando el metabolismo delprimer paso

Características de la técnica:En región escapular, flancos o grupaSe debe tomar un pliegue de piel entre los dedos índice ypulgarIntroducir la totalidad de la aguja en el lugar de inoculaciónRotar la aguja (bisel hacia abajo)Retraiga el émbolo antes de inyectar

Refinamiento de la administración de sustancias

Subcutánea


Subcutánea

Utilizada en estudios de liberación lenta en los que seutilizan implantes o fórmulas oleosas (absorción gradual).Valoración de vacunas.

• Características de la técnica Se recomienda 2 personas para realizarla Realizarla en una masa muscular grande, lejos de vasos y

nerviosGluteus maximus, Semitendinoso, Bíceps femoris, Área del cuadriceps

Se debe sujetar el miembro firmemente Retraiga el émbolo antes de inyectar Inyecte la solución lentamente, retire la aguja y de masajes

en la zona


Intramuscular


Intramuscular

De:http://www.procedureswithcare.org.uk

Semitendinoso

Cuadriceps

Bicepsfemoris

Se utiliza con frecuencia en experimentos farmacológicos ytoxicológicos de biodisponibilidad inmediata

•Características de la técnicaRealice la tricotomía de la zonaRealice una correcta vasodilataciónIngrese casi paralelo al vasoRetraiga el émbolo antes de inocular la sustanciaRetira la aguja y realice una correcta hemostasia


Endovenosa

Problemas potenciales y refinamiento de la técnica

No administre sustancias irritantes

Verifique que en la sustancia no haya presencia deprecipitados Formación de émbolos

Endovenosa



Endovenosa

Staszyk, C. Laboratory Animal 2003

Se utiliza para administrar volúmenes grandes. Muy común enpequeños roedores y peces.

Características de la técnica

Se debe tener cuidado con la profundidad de penetración dela aguja

Introduzca la aguja con un ángulo de 30 – 45º para incidir enel plano subcutáneo, progresar unos mm por el plano y luegoincline la aguja a 90º para incidir en peritoneo visceral


Intraperitoneal

Problemas potenciales y refinamiento de la técnica

Algunas sustancias irritantes pueden resultar fatales

Pueden dañarse grandes vasos sanguíneos (aortaabdominal, vena cava)

Pueden dañarse órganos digestivos


Intraperitoneal


Intraperitoneal

Usada comúnmente para la administración decompuestos irritantes, grandes volúmenes o imposiblesde ser administrados por otra vía.

Características de la técnica¿Ayuno?Debe asegurarse en todo momento de no ingresar en la

vía respiratoria (reflejo gastroesofágico o deglutorio)Mida el tamaño de la sonda.Catéteres flexibles vs. rígidos.Lubrique la sonda (vaselina o parafina médica)


Vía Oral


Vía Oral

FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO y N.CARDILLO

Muy utilizada en estudios inflamatorios, de sensibilización,diagnóstico de flujo sanguíneo cutáneo y en inmunología.Características de la técnica:Se realizan en capas externas de la pielSe debe rasurar la piel en lo posible 1 hora antesDebe situarse la aguja casi en paralelo a la pielPérdida de resistencia = Inoculación subcutáneaRotar la aguja (bisel hacia abajo)Administración correcta = Formación de “Habón”


Intradérmica


IntradérmicaHabón

Toma de Muestras

Toma de muestra potencialmente estresante

Puede desencadenar:

Incremento en los niveles de algunas hormonas ensangre (Ej: Corticoesteroides).Alteración de importantes parámetros sanguíneos(Ej: hematocrito, recuento de glóbulos blancos)

Extracción de grandes volúmenes a intervalos detiempo inadecuados

Respuesta fisiológicas indeseables

VOLUMENES DE SANGRE A EXTRAER

Volemia: Volumen de sangre circulante

Animales obesos y/o de edad muyavanzada aprox. 15% menor

Aproximadamente el 7% del peso corporal

Si de la volemia extraemos:

El 10% del total, se inician mecanismoshomeostáticos colinérgicos

Entre el 15-20% del total, se incrementan el gastocardíaco y la presión sanguínea

Entre el 30-40% del total, se produce shockhipovolémico

El 50% o mas, puede causar la muerte

Signos de Shock Hipovolémico Pulso rápido y débil Mucosas secas y pálidas Descenso de la temperatura corporal Hiperventilación

Una alternativa valida para evitar el shockhipovolémico, es recurrir a una terapia de

reposición de fluidos inmediatamente despuésdel muestreo

Signos de anemia

La extracción de volúmenes seguros pero aintervalos de tiempo demasiado cortos, puede

provocar anemia

Palidez de las mucosas, orejas, almohadillasplantares, etc. Intolerancia al ejercicio, sedentarismoEn casos severos, ritmo respiratorio aumentado

durante el reposo

En animales sanos y bien nutridos, podemosextraer hasta el 10% de la volemia con efectosadversos mínimos

La extracción de este volumen puede repetirsecada 3-4 semanas

Para sangrar a intervalos más cortos (24hs.)podemos extraer hasta el 1% de la volemia

Descripción de Técnicas

PUNCIÓN VENOSA

Y

ARTERIAL

Preparación previa de la zonaPara lograr una buena muestra debemos

lograr una buena antisepsia

1. Tricotomía

•Tijeras y hojas de bisturí

•Rasuradoras

•Afeitadoras

•Cremas depilatorias

Método más aconsejable

Se sugiere usar el mayor calibre de aguja posible en relación aldiámetro del vaso.

1.Muy largas •Favorecen la coagulación•Difíciles de manejar

2. Poco calibre •Favorecen la coagulación•Favorecen la hemólisis

3. Mucho calibre •Formación de hematomas

¿Como elegimos el tamaño y calibre de la aguja?

Exhaustivo estudio de la anatomía del animal

Tricotomía

Vasodilatación

Para esto disponemos de diferentes métodos:

• Obstrucción del retorno venoso (ingurgitación)

• Calor

• Agentes químicos

¿Como localizamos la vena?

Aplicar presión continua en el lugar de punción durante 30-60segundos

Observar a los animales durante aproximadamente 30segundos más

Luego podemos devolver a los animales a su jaulacontrolándolos cada 10-15 minutos.

Hemostasia

ARTERIA CENTRALVENAS MARGINALES

Punción de la vena marginal del conejo

Punción de la arteria central del conejo

Lugar de punción

De: The University of New Mexico &The Office of Animal Care and

Compliance

Punción de la vena Submaxilar

FOTO: M. BRAHAMIAN, C.GATTO

Punción de la vena Safena

FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO

Janet Hoff Lab Animal Vol 29,Nº10, 2000

Sangrado retro orbital

De: The University of New Mexico & The Office of Animal Care andCompliance

FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO

Intracardíaca

•Bajo anestesia

•Técnica terminal

•Sangrado a blanco

Janet Hoff Lab Animal Vol 29,Nº10, 2000 FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO

Hemopericardio Paro cardíaco

Hemotorax por obliteración de un vaso sanguíneo

Fibrilación ventricular con posterior paro cardiaco

Contaminación de la muestra con constituyentespulmonares

Efectos Adversos

Esta técnica, también debe llevarse a cabo SIEMPRE bajoanestesia general.

También, es recomendable usarla como técnica terminal.

Debemos confirmar el deceso del animal luego depracticada la técnica.

Debemos asegurarnos que el largo de la aguja seasuficiente para alcanzar el corazón.

Recuerde

Corte de cola en ratas y ratones

Corte de cola

•Obtención de volúmenes pequeños

•Repetición

•Posibles corte de vértebras

En ratas existe la posibilidad de cortar una vértebra coccígea

Formación de granulomas

Perdida de la capacidad natural del animal para regular sutemperatura corporal y el equilibrio

Esta técnica debe ser realizada comomáximo una o dos veces

Efectos Adversos

Muchas gracias!!!

Santiago VieytesTécnico en Gestion Integral para Bioterios FVet - UBA

Bioterio Central FCEyN [email protected]

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