mads box - biotec vegetal
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Grupo:Ana Paula MirandaFernanda AzevedoLívia Villela Renata Toledo
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Introdução
A família de genes MADS-box codifica fatores transcricionais que controlam vários processos em angiospermas, da raiz até o desenvolvimento de flores e frutos. Em Arabidopsis, o gene AG (AGAMOUS) codifica fatores transcricionais responsáveis pelo desenvolvimento do 3º e 4º vertilos florais.
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Objetivos
• Demonstração que a Microesporogênese é induzida por AG através da ativação do gene SPL, um regulador da Esporogênese.
• SPL pode induzir a Microesporogênese na ausência da função de AG.
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ag-1 35S::AG-GR
• ag-1-null / 35S::AG-GR• Sem tratamento / DEX contínuo / DEX único
Fenótipo mutante Sépatala- pétala –pétala
Estames e Carpelos funcionais – flores
35S::AG
Pétalas com estruturas
estaminóides
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ag-1 35S::AG-GR • ag-1-null / 35S::AG-GR• A maior parte das pétalas produzidas no 3º verticilo
possuem lóculos nas laterais contendo grãos de pólen aparentemente normais.
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Microarranjo
• Identificação de SPL, que codifica um fator transcricional putativo. Sua atividade implica no padrão de formação de óvulos e nos primórdios da microesporogênese.
• Em mutantes de spl, a diferenciação primária de células esporogênicas, assim como a formação das paredes das anteras, são bloqueadas.
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RT-PCR
• Confirmação da indução de SPL pela atividade de AG.
D - DEXM - MockC - Ciclohexamida
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Indução Direta• O domínio MADS reconhece a sequência especifica
[CC(A/T)6GG], denominada CArG-box, na região regulatória dos seus genes alvo.
• EMSA
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Gene Repórter GUS• Avaliar se o sítio de ligação de AG (detectado na
região 3´) é necessário para indução AG-dependente de SPL.
• Plantas selvagens com SPL-GUS.
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Comparação do padrão de expressão de AG e SPL
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Expressão de SPL em ag-mutants
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SPL e Microesporogênese• Ag-1 mutant / 35S::SPL-GR• Sem tratamento / DEX contínuo
Mesmo padrão de Single DEX ag-1 35S::AG-GR
Fenótipo AG-mutant *
* SPL pode induzir a microesporogênese na ausência da atividade de AG, supondo que SPL age como um mediador central para o funcionamento de AG na esporogênese.
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SPL e Microesporogênese• Com a expressão ectópica de SPL-GR, a formação de
lóculos foi observada em ag1-mutants apenas nas laterais dos orgãos do 3º vertilo. Nunca no 2º das flores tratadas com DEX.
• Outro fator verticilo-específico deve estar envolvido na indução da microesporogênese.
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Conclusões
• Proteínas homeóticas florais controlam genes alvo com diversas funções no desenvolvimento dos órgãos;
• A interação de AG com SPL mostra uma probabilidade de que AG ative outros reguladores que realizam parte de suas funções;
• Evidências diretas de que genes homeóticos de plantas controlam a organogênese como parte de sua hierarquia regulatória.