liver + invitro toxicology

7/24/2019 Liver + invitro toxicology

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L i v e r C e l l

M o d e l s i n i n V i t r o T o x i c o l o g y

A n d r e

G u i l l o u z o

INSERM U 4 5 6 ,

U n i t e

D e t o x i c a t i o n

e t

R e p a r a t i o n

T i s s u l a i r e ,

F a c u l t e

d e

P h a r m a c i e ,

R e n n e s ,

F r a n c e

I n

v i t r o

l i v e r p r e p a r a t i o n s a r e

i n c r e a s i n g l y u s e d

f o r

t h e s t u d y o f h e p a t o t o x i c i t y o f c h e m i c a l s . I n

r e c e n t years t h e i r

a c t u a l a d v a n t a g e s

a n d

l i m i t a t i o n s

h a v e

b e e n

b e t t e r d e f i n e d . T h e c e l l m o d e l s ,

s l i c e s ,

a n d

m a i n l y

p r i m a r y h e p a t o c y t e

c u l t u r e s , appear t o

b e

t h e most

p o w e r f u l

i n

v i t r o s y s t e m s ,

as l i v e r - s p e c i f i c f u n c t i o n s

a n d r e s p o n s i v e n e s s

t o

i n d u c e r s

a r e

r e t a i n e d

e i t h e r f o r

a f e w

d a y s

o r

s e v e r a l w e e k s d e p e n d i n g o n

c u l t u r e c o n d i t i o n s . M a i n t e n a n c e o f p h a s e a n d p h a s e

x e n o b i o t i c

m e t a b o l i z i n g e nz y m e

a c t i v i t i e s a l l o w s

v a r i o u s

c h e m i c a l

i n v e s t i g a t i o n s

t o

b e p e r f o r m e d , i n c l u d i n g

d e t e r m i n a t i o n o f

k i n e t i c

p a r a m e t e r s ,

m e t a b o l i c

p r o f i l e ,

i n t e r s p e c i e s

c o m p a r i s o n , i n h i b i t i o n

a n d

i n d u c t i o n e f f e c t s ,

a n d

d r u g - d r u g i n t e r a c t i o n s .

I n

v i t r o

l i v e r

c e l l m o d e l s

a l s o h a v e

v a r i o u s

a p p l i c a t i o n s

i n t o x i c o l o g y : s c r e e n i n g

o f

c y t o t o x i c

a n d g e n o t o x i c

c o m p o u n d s ,

e v a l u a t i o n o f

c h e m o p r o t e c t i v e

a g e n t s ,

a n d d e t e r m i n a t i o n o f

c h a r a c t e r i s t i c

l i v e r

l e s i o n s a n d

a s s o c i a t e d

b i o c h e m i c a l m e c h a n i s m s

i n d u c e d

b y

t o x i c

c o m p o u n d s .

E x t r a p o l a t i o n

o f

t h e r e s u l t s t o t h e

i n v i v o

s i t u a t i o n r e m a i n s

a

m a t t e r

o f

d e b a t e . P r e s e n t l y , t h e most c o n v i n c i n g a p p l i c a t i o n s o f

l i v e r c e l l

m o d e l s

a r e

t h e

s t u d i e s

o n

d i f f e r e n t

a s p e c t s

o f

m e t a b o l i s m

a n d m e c h a n i s m s

o f

t o x i c i t y .

F o r

t h e

f u t u r e ,

t h e r e

i s

a n e e d

f o r b e t t e r c u l t u r e

c o n d i t i o n s a n d

d i f f e r e n t i a t e d

h e p a t o c y t e

c e l l

l i n e s t o

o v e r c o m e t h e

l i m i t e d

a v a i l a b i l i t y

o f h u m a n l i v e r t i s s u e s .

I n

a d d i t i o n , s t r a t e g i e s

f o r

i n

v i t r o a n a l y s i s

o f

p o t e n t i a l l y

t o x i c c h e m i c a l s m u s t b e

b e t t e r

d e f i n e d .

E n v i r o n H e a l t h

P e r s p e c t 1 0 6 ( S u p p l

2 ) : 5 1 1 - 5 3 2

( 1 9 9 8 ) .

h t t p . / / e h p n e t l . n i e h s . n i h . g o v / d o c s / 1 9 9 8 / S u p p l - 2 / 5 1

1 - 5 3 2 g u i l l o u z o / a b s t r a c t . h t m l

K e y

w o r d s :

i n

v i t r o

l i v e r

m o d e l s ,

p r i m a r y

c u l t u r e s ,

i n

v i t r o

t o x i c o l o g y ,

x e n o b i o t i c m e t a b o l i s m ,

h u m a n

h e p a t o c y t e s ,

a n i m a l

h e p a t o c y t e s , c y t o t o x i c i t y , g e n o t o x i c i t y , s c r e e n i n g ,

m e c h a n i s m o f

t o x i c i t y

I n t r o d u c t i o n

B e c a u s e

o f

i t s i n t e r p o s i t i o n

b e t w e e n t h e

d i g e s t i v e

t r a c t a n d

t h e

r e s t o f

t h e

b o d y ,

t h e

l i v e r

o c c u p i e s

a c e n t r a l r o l e

i n

m a j o r

f u n c -

t i o n s o f

t h e

o r g a n i s m .

I t r e c e i v e s

l a r g e

a m o u n t s o f

n u t r i e n t s a n d n o x i o u s c o m -

p o u n d s e n t e r i n g

t h e

b o d y

t h r o u g h

t h e

d i g e s t i v e

t r a c t

a n d

p o r t a l

v e i n .

A m o n g

t h e

m a j o r

h e p a t i c

f u n c t i o n s a r e

u p t a k e

o f

a m i n o

a c i d s , l i p i d s , c a r b o h y d r a t e s ,

a n d

v i t a m i n s ,

a n d t h e i r

s u b s e q u e n t

s t o r a g e ,

m e t a b o l i c

c o n v e r s i o n ,

a n d r e l e a s e

i n t o

t h e b l o o d

a n d

b i l e .

T h e

l i v e r

i s a l s o t h e

p r i n c i p a l o r g a n

i n v o l v e d

i n

t h e

b i o t r a n s f o r m a t i o n

o f

e x o g e -

n o u s s u b s t a n c e s ,

w i t h i t s

c a p a c i t y

t o

c o n v e r t

h y d r o p h o b i c

s u b s t a n c e s i n t o w a t e r - s o l u b l e

p r o d u c t s

t h a t c a n

b e

s e c r e t e d

r e a d i l y

f r o m

t h e

b o d y .

H o w e v e r ,

m o r e

t h a n

a t h o u s a n d

x e n o b i o t i c s a r e

p o t e n t i a l l y h e p a t o t o x i c . T h e

c a p a c i t y

o f

a

c h e m i c a l

t o

p r o d u c e

l i v e r

d a m -

a g e

i n

v i v o

o f t e n r e s u l t s

f r o m t h e

i n t e r a c t i o n

o f

a

s e r i e s

o f

c o m p l e x

c e l l u l a r

p r o c e s s e s t h a t

a r e

i n v o l v e d i n t h e

u p t a k e ,

b i o t r a n s f o r m a -

t i o n ,

a n d e l i m i n a t i o n o f

t h e s e


t o x i c

c o m p o u n d s . H e p a t o t o x i n s m a y

r e a c t

w i t h t h e

b a s i c

c e l l u l a r c o n s t i t u e n t s -

p r o t e i n s , l i p i d s ,

RNA, a n d DNA-and

i n d u c e a l m o s t

a l l

t y p e s o f

l e s i o n s o f t h e

l i v e r ,

m o s t f r e q u e n t l y s t e a t o s i s . W h a t e v e r t h e

a g e n t r e s p o n s i b l e

f o r

i n j u r y ,

t h e

r e a c t i o n o f

t h e l i v e r

i n v o l v e s a

common

s e q u e n c e

o f

e v e n t s t h a t c a n

b e a n a l y z e d

a t t h e

t i s s u l a r ,

c e l l u l a r ,

a n d m o l e c u l a r l e v e l s .

H o w e v e r ,

i t i s

T h i s

p a p e r

wa s

p r e p a r e d

a s

b a c k g r o u n d

f o r t h e

1 3 t h

M e e t i n g

o f t h e

S c i e n t i f i c

G r o u p

o n

M e t h o d o l o g i e s

f o r t h e

S a f e t y

E v a l u a t i o n

o f

C h e m i c a l s

( S G O M S E C ) :

A l t e r n a t i v e

T e s t i n g M e t h o d o l o g i e s

h e l d 2 6 - 3 1

J a n u a r y

1 9 9 7

i n

I s p r a ,

I t a l y . M a n u s c r i p t

r e c e i v e d

a t

EHP9

M a y 1 9 9 7 ;

a c c e p t e d

2

O c t o b e r

1 9 9 7 .

w i s h

t o

t h a n k

A .

V a n n i e r

f o r

t y p i n g

t h e

m a n u s c r i p t .

S t u d i e s

p e r f o r m e d

i n

m y

l a b o r a t o r y

were

s u p p o r t e d

b y

t h e

I n s t i t u t

N a t i o n a l d e

l a

S a n t 6

e t

d e

l a

R e c h e r c h e

M e d i c a l e ,

t h e

M i n i s t e r e

d e

l a

R e c h e r c h e ,

E E C

( B I O M E D

c o n t r a c t

B M H 4 - C T 9 6 - 0 6 5 8 ) ,

t h e A s s o c i a t i o n d e

l a

R e c h e r c h e

c o n t r e l e

C a n c e r ,

t h e

L i g u e

c o n t r e l e

C a n c e r ,

a n d

t h e F o n d a t i o n d e

l a

R e c h e r c h e M 6 d i c a l e .

A d d r e s s

c o r r e s p o n d e n c e

t o

D r . A .

G u i l l o u z o ,

I N S E R M

U 4 5 6 ,

U n i t e

D e t o x i c a t i o n

e t

R e p a r a t i o n

T i s s u l a i r e ,

F a c u l t 6 d e

P h a r m a c i e ,

3 5 0 4 3

R e n n e s

c e d e x F r a n c e .

T e l e p h o n e :

3 3 )

2 9 9

3 3

6 2 4 0 . F a x :

3 3 )

2

9 9 3 3 6 2

4 2 .

E - m a i l :

a n d r 6 . g u i l l o u z o @ u n i v - r e n n e s l . f r

A b b r e v i a t i o n s

u s e d :

A T P ,

a d e n o s i n e

t r i p h o s p h a t e ;

C C I 4 ,

c a r b o n

t e t r a c h l o r i d e ;

C Y P ,

c y t o c h r o m e

P 4 5 0 ; E D T A ,

e t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t a t e ; G S T ,

g l u t a t h i o n e S t r a n s f e r a s e ;

G S H , g l u t a t h i o n e ;

G S S G ,

o x i d i z e d

g l u t a t h i o n e ;

I C ,

i n h i b i t i o n

c o n c e n t r a t i o n ;

L D 5 0 ,

m e d i a n

l e t h a l

d o s e ; L D H ,

l a c t a t e

d e h y d r o g e n a s e ; M T T , 3 - [ 4 , 5 - d i m e t h y l t h i a z o l - 2 - y l l -

2 , 5 - d i p h e n y l - t e t r a z o l i u m

b r o m i d e ;

U D P ,

u r i d i n e

d i p h o s p h a t a s e ;

U D S ,

u n s c h e d u l e d

DN A

s y n t h e s i s .

d i f f i c u l t i n

v i v o

t o d i s t i n g u i s h t h e p r i m a r y

e f f e c t s

o f a c o m p o u n d f r o m

t h o s e

i n d u c e d

s e c o n d a r i l y

b e c a u s e l i v e r f u n c t i o n s a r e

u n d e r

t h e

i n f l u e n c e

o f

v a r i o u s

e n d o g e n o u s

a n d

e x o g e n o u s

f a c t o r s t h a t

r e s u l t i n

c o m p l e x

i n t e r a c t i o n s w i t h

o t h e r

o r g a n s . M o r e o v e r ,

m o s t o f o u r u n d e r s t a n d i n g o f l i v e r i n j u r y

i n d u c e d

b y

c h e m i c a l s r e m a i n s

c o n f i n e d t o

a n i m a l m o d e l s ,

a n d

d a t a o b t a i n e d

i n a n i -

m a l s c a n n o t b e e x t r a p o l a t e d w i t h

c e r t a i n t y

t o

t h e

h u m a n s i t u a t i o n .

B e c a u s e

o f t h e

d r a w b a c k s

o f i n v i v o

s t u d i e s o f

d r u g -

a n d

c h e m i c a l - i n d u c e d h e p a t o t o x i c i t y , i n v i t r o

l i v e r

s y s t e m s r e p r e s e n t

a b e t t e r e x p e r i m e n t a l

a p p r o a c h

t o

s c r e e n

p o t e n t i a l

h e p a t o t o x i c

c o m p o u n d s a n d i n v e s t i g a t e

m e c h a n i s m ( s )

b y

w h i c h c h e m i c a l s

i n d u c e

l i v e r

l e s i o n s . T h e

m o s t

f r e q u e n t l y

u s e d i s o l a t e d

l i v e r p r e p a r a -

t i o n s

i n c l u d e

i s o l a t e d

p e r f u s e d

o r g a n ,

t i s s u e

s l i c e s ,

s u b c e l l u l a r

f r a c t i o n s , a n d i s o l a t e d a n d

c u l t u r e d h e p a t o c y t e s . T h e l a t t e r m o d e l i s t h e

m o s t p o p u l a r s y s t e m

a n d i s w i d e l y u s e d f o r

t o x i c i t y

s t u d i e s .

I n

t h i s r e v i e w t h e a d v a n -

t a g e s

a n d

l i m i t a t i o n s o f i n v i t r o m o d e l s

i n

t o x i c i t y s t u d i e s w i l l b e d i s c u s s e d , w i t h

s p e -

c i a l r e f e r e n c e

t o

t h e i s o l a t e d h e p a t o c y t e

m o d e l a n d f u t u r e

d e v e l o p m e n t a l

n e e d s .

I n

V i t r o

L i v e r

M o d e l s

A m ong

t h e

i n v i t r o

l i v e r p r e p a r a t i o n s

r e c o g n i z e d a s

u s e f u l

e x p e r i m e n t a l

m o d e l s i n

t o x i c o l o g y ,

i n t a c t c e l l u l a r

s y s t e m s ,

i . e . , t h e

i s o l a t e d

p e r f u s e d

o r g a n ,

t i s s u e

s l i c e s ,

a n d

t h e

i s o l a t e d h e p a t o c y t e , o f f e r v a r i o u s

a d v a n t a g e s

o v e r

o t h e r

s y s t e m s

s u c h a s

l i v e r

c e l l

l i n e s ,


f r a c t i o n s ,

a n d

g e n e t i c a l l y

e n g i -

n e e r e d c e l l s ( T a b l e

1 ) .

H o w e v e r ,

t h e

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e

i s

t h e

m o s t

w i d e l y

u s e d

m o d e l .

D i f f e r e n t

i n

WVo L i v e r

P r e p a r a t i o n s

T h e I s o l a t e d

P e r f i s e d O r g a n .

T h e i s o l a t e d

p e r f u s e d

l i v e r

r e p r e s e n t s

t h e c l o s e s t i n v i t r o

m o d e l o f t h e

i n

v i v o

s i t u a t i o n . T h e m a j o r

a d v a n t a g e s

a r e t h a t t h e

t h r e e - d i m e n s i o n a l

a r c h i t e c t u r e

i s

p r e s e r v e d

a n d

t h a t

t h e b i l e

f l o w

c a n

b e

c o l l e c t e d a n d

a n a l y z e d s e p a -

r a t e l y .

I t

i s

a l s o

t h e

o n l y

i n

v i t r o

m o d e l

t h a t

a l l o w s c o n s i d e r a t i o n

o f

i s s u e s

r e l a t e d t o

h e m o d y n a m i c s

( 1 ) .

T h i s

m o d e l

h a s b e e n

u s e d

f o r

i n v e s t i g a t i n g

d r u g -

a n d

c h e m i c a l -

i n d u c e d h e p a t o t o x i c i t y ( 2 )

a n d

r e p r e s e n t s

a n

i n t e r e s t i n g

t o o l

i n

s t u d i e s

o f p h y s i o l o g i c a l l y

b a s e d

t o x i c o k i n e t i c

m o d e l i n g .

H o w e v e r ,

t h e

i s o l a t e d

p e r f u s e d

l i v e r m o d e l i s d i f f i c u l t

t o

h a n d l e

a n d i t s f u n c t i o n a l

i n t e g r i t y

i s n o t

m a i n t a i n e d

b e y o n d

a

f e w h o u r s .

A l t h o u g h

m o r e

t h a n o n e t e s t

c o m p o u n d

w a s a d d e d

t o

t h e

p e r f u s e d

m e d i u m

i n

s o m e

s t u d i e s ,

a n d

c o n c e n t r a t i o n - r e s p o n s e r e l a t i o n s h i p s

h a v e

E n v i r o n m e n t a l

H e a l t h

P e r s p e c t i v e s

*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

5 1 1



GUILLOUZO

T a b l e

1 .

A d v a n t a g e s a n d


o f

i n

v i t r o l i v e r

p r e p a r a t i o n s .

M o d e l

I s o l a t e d p e r f u s e d l i v e r

L i v e r

s l i c e s

I s o l a t e d

h e p a t o c y t e s a

P r i m a r y h e p a t o c y t e

c u l t u r e s a

L i v e r

c e l l

l i n e s

S u b c e l l u l a r

f r a c t i o n s

S 9 0 0 0

x

g

f r a c t i o n

M i c r o s o m e s

G e n e t i c a l l y

e n g i n e e r e d

c e l l s

A d v a n t a g e s

F u n c t i o n s c l o s e

t o t h o s e

o f

t h e

i n

v i v o

o r g a n

a l l e n z y m e

e q u i p m e n t

p r e s e r v e d )

l o b u l a r

s t r u c t u r e

p r e s e r v e d

F u n c t i o n a l b i l e

c a n a l i c u l i

C o l l e c t i o n o f

b i l e

p o s s i b l e

S h o r t - t e r m

k i n e t i c

s t u d i e s

e x t r a c t i o n )

l o b u l a r s t r u c t u r e p r e s e r v e d a l l

e n z y m e e q u i p m e n t p r e s e r v e d )

S e l e c t i v e

i n t r a l o b u l a r e f f e c t s d e t e c t a b l e

S t u d i e s o n

h u m a n

l i v e r

p o s s i b l e

S t u d i e s o n s e v e r a l

c o m p o u n d s

a t

d i f f e r e n t

c o n c e n t r a t i o n s

O b t a i n e d

f r o m w h o l e l i v e r s o r

w e d g e b i o p s i e s

F u n c t i o n s c l o s e

t o

t h o s e

o f

i n

v i v o

h e p a t o c y t e s

S t u d i e s o n s e v e r a l

c o m p o u n d s

a t d i f f e r e n t


I n t e r s p e c i e s

s t u d i e s

R e p r e s e n t a t i v e

o f

d i f f e r e n t l o b u l a r s u b p o p u l a t i o n s

C r y o p r e s e r v a t i o n

F u n c t i o n s e x p r e s s e d

f o r s e v e r a l

d a y s

i n

c e r t a i n

c o n d i t i o n s

I n d u c t i o n / i n h i b i t i o n

o f

d r u g

m e t a b o l i z i n g e n z y m e s

I n t e r s p e c i e s

s t u d i e s

U n l i m i t e d

c e l l

n u m b e r

S o m e

f u n c t i o n s

p r e s e r v e d

D r u g

e n z y m e

a c t i v i t i e s

p r e s e r v e d

D r u g

e n z y m e

a c t i v i t i e s

p r e s e r v e d

P r o d u c t i o n

o f m e t a b o l i t e s

f o r s t r u c t u r a l a n a l y s i s

O n e

o r m o r e h u m a n

e n z y m e s e x p r e s s e d

A v a i l a b l e m a i n l y f o r C Y P s

U n l i m i t e d

c e l l

n u m b e r

L i m i t a t i o n s

S h o r t - t e r m

v i a b i l i t y

2 - 3

h r )

S t u d y

o f o n e o r

a

f e w

c o m p o u n d s

o n l y

B i l e e x c r e t i o n d e c r e a s e d

a f t e r

1

t o

3 h r

No

s t u d y o n

h u m a n

l i v e r

S u i t a b l e o n l y

f o r

l i v e r

o f s m a l l

a n i m a l s

N o

s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n i n

t h e n u m b e r

o f

a n i m a l s

u s e d

V i a b i l i t y :

6 h r t o

2 d a y s

No c o l l e c t i o n o f b i l e p o s s i b l e

N o t a l l t h e

c e l l s

p r e s e r v e d

s i m i l a r l y

i n t e r a s s a y

v a r i a b i l i t y )

S h o r t - t e r m

v i a b i l i t y

( 2 - 4 h r )

No b i l e

c a n a l i c u l u s

E a r l y p h e n o t y p i c c h a n g e s

A l t e r e d b i l e c a n a l i c u l i

V a r i o u s d r u g

e n z y m e

a c t i v i t i e s l o s t

o r

d e c r e a s e d

G e n o t y p e i n s t a b i l i t y

S h o r t - t e r m s t u d i e s

S h o r t - t e r m

s t u d i e s

N o

c y t o s o l i c p h a s e e n z y m e

r e a c t i o n s

C o f a c t o r s r e q u i r e d f o r

a c t i v i t y

U s e f o r

s p e c i f i c

p u r p o s e s

o n l y

N o p h y s i o l o g i c l e v e l s o f

e n z y m e s

O t h e r

c e l l

t y p e s , e . g . ,

K u p f f e r , e n d o t h e l i a l ,

s t e l l a t e ,

a n d b i l e d u c t

c e l l s ,

c a n a l s o b e

i s o l a t e d , c u l t u r e d ,

a n d e v e n c o c u l t u r e d w i t h

h e p a t o c y t e s .

b e e n

e s t a b l i s h e d

i n

a

s i n g l e

o r g a n

3 ) ,

t h i s

m o d e l

i s

n o t

a p p r o p r i a t e

f o r t h e

a n a l y s i s

o f

v a r i o u s


c o n d i t i o n s

f r o m

a

s i n -

g l e o r g a n .

I n

a d d i t i o n ,

r e l a t i v e

t o

o t h e r

i n

v i t r o

m o d e l s ,

i t

d o e s

n o t

s i g n i f i c a n t l y

r e d u c e

t h e n u m b e r o f a n i m a l s

u s e d

a n d h u m a n

o r g a n s

a r e

n o t a v a i l a b l e .

L i v e r

S l i c e s .

T h e t i s s u e s l i c e m o d e l

a l s o

r e t a i n s

t i s s u e

o r g a n i z a t i o n a n d c e l l - c e l l a n d

c e l l - m a t r i x

i n t e r a c t i o n s .

H o w e v e r ,

b i l e f l o w

c a n n o t

b e

a n a l y z e d

s e p a r a t e l y .

F o r s o m e

t i m e ,

t i s s u e

s l i c e s

h a v e h a d

m a j o r

l i m i t a -

t i o n s , p r i m a r i l y

b e c a u s e

o f

p o o r

d i f f u s i o n

o f

o x y g e n

a n d n u t r i e n t s

f r o m t h e

i n c u b a t i o n

m e d i u m . T h e

d e v e l o p m e n t

o f a

n e w l y

d e s i g n e d

t i s s u e

s l i c e r r e s u l t e d

i n r e n e w e d

i n t e r e s t

f o r

t h i s

m o d e l .

L i v e r

s l i c e s

o f

n e a r l y

i d e n t i c a l

d i m e n s i o n s ( a p p r o x i m a t e l y

2 5 0

pm

t h i c k )

c a n b e

p r e p a r e d

w i t h m i n i m a l

t i s s u e t r a u m a

( 4 , 5 ) .

T h i s

s y s t e m a p p e a r s


f o r s h o r t - t e r m

s t u d i e s

o n

h u m a n

l i v e r ,

a s

t i s s u e s l i c e s

c a n b e

o b t a i n e d

f r o m b o t h

l i v e r

f r a g m e n t s a n d n e e d l e

b i o p -

s i e s .

H i s t o l o g i c

e x a m i na t i o n c a n b e c o n -

d u c t e d .

R e c e n t

s t u d i e s

h a v e

s h o w n t h a t

t i s s u e s l i c e s c a n r e m a i n

m e t a b o l i c a l l y

a c t i v e

f o r

2

t o

3 d a y s ( 6 , 7 ) . H o w e v e r , d i s c r e p a n -

c i e s

e x i s t i n c e l l

v i a b i l i t y a n d f u n c t i o n a l

c a p a c i t y o f t i s s u e s l i c e s , p r o b a b l y r e l a t e d

t o

t h e

d i f f e r e n t


c o n d i t i o n s .

M o r e o v e r

s o m e

a u t h o r s

c l a i m

t h a t s l i c e s

c a n

b e c r y o p r e s e r v e d .

H o w e v e r ,

t o

o u r

k n o w l e d g e , v i a b i l i t y

o f

p a r e n c h y m a l

c e l l s

a f t e r

t h a w i n g

h a s n o t b e e n

d e m o n s t r a t e d .

I s o l a t e d

L i v e r C e l l s .

I S O L A T I O N

A N D

C U L T U R E

O F H E P A T O C Y T E S . P r e p a r a t i o n

o f

r a t


A

c o n s i d e r a b l e

s t e p

f o r w a r d

i n

o b t a i n i n g

i n t a c t

a d u l t r a t


w a s m a d e

b y

t h e i n t r o d u c t i o n

o f

c o l l a g e n -

a s e

a n d

h y a l u r o n i d a s e

a s

d i s s o c i a t i n g

a g e n t s ( 8 ) .

T h e l i v e r

i s

q u i c k l y p e r f u s e d

w i t h

c o l d

C a 2 + - f r e e H a n k s

b u f f e r c o n t a i n -

i n g

t h e t w o e nz y m e s , r em o v e d , c u t

i n

s m a l l

p i e c e s ,

a n d i n c u b a t e d

w i t h

t h e

e n z y -

m a t i c s o l u t i o n

i n

a

s h a k i n g

w a t e r b a t h .

B e r r y a n d F r i e n d ( 9 ) f u r t h e r i m p r o v e d

t h e

t e c h n i q u e

b y

p e r f u s i n g

t h e

l i v e r i n s i t u

w i t h a £ C a 2 + - f r e e

H a n k s

b u f f e r

c o n t a i n i n g

c o l l a g e n a s e

a n d

h y a l u r o n i d a s e

a n d

o b t a i n e d

h i g h

c e l l

y i e l d s a n d

v i a b i l i t y .

T h i s

t e c h n i q u e w a s m o d i f i e d

a n d

s i m p l i f i e d

b y

S e g l e n

( 1 0 ) , w h o

d e v e l o p e d

t h e

t w o - s t e p

c o l l a g e n a s e p e r f u s i o n

m e t h o d

n o w

w i d e l y

u s e d .

T h e

f i r s t

s t e p

i n v o l v e s

t h e

p e r f u s i o n

o f a

c a l c i u m - f r e e

b u f f e r . T h e s e c o n d s t e p i s

c i r c u l a t i o n o f

a

c a l c i u m - s u p p l e m e n t e d

b u f f e r

c o n t a i n i n g

c o l l a g e n a s e . H e p e s i s t h e

m o s t

f r e q u e n t l y

u s e d

b u f f e r .

T h e i n i t i a l

p e r f u s i o n f a c i l i t a t e s

d e s m o s o m a l

c l e a v a g e

a n d

f u r t h e r

d i s p e r s i o n o f

l i v e r

c e l l s . T h e

a d d i t i o n

o f

C a 2 +

t o

t h e

e n z y m e

s o l u t i o n

e n s u r e s

a d e q u a t e

c o l l a g e n a s e a c t i v i t y .

T h e

t w o - s t e p

c o l l a g e n a s e p e r f u s i o n

m e t h o d

y i e l d s l a r g e

n u m b e r s o f v i a b l e


c e l l s . A b o u t

4 0

t o 6 0

x

1 0 6

h e p a t o c y t e s / g

o f t i s s u e a r e

u s u a l l y o b t a i n e d

f r o m

a

y o u n g r a t l i v e r ; c e l l

v i a b i l i t y

r a n g e s

b e t w e e n

8 5

a n d

9 5

a s d e t e r m i n e d

b y

t h e

t r y p a n

b l u e

e x c l u s i o n

t e s t ;

t h e

p r e p a r a t i o n

c o n t a i n s

l e s s

t h a n

5 c o n t a m i n a t i n g

n o n -


c e l l s .

O r g a n s

c a n b e

h y p o -

t h e r m i c a l l y p r e s e r v e d

f o r

s e v e r a l h o u r s

b e f o r e t h e i r

d i s a g g r e g a t i o n

w i t h o u t m a r k e d

l o s s

o f

t h e v i a b i l i t y o f i s o l a t e d c e l l s ( 1 1 ) .

H e p a t o c y t e

s u b p o p u l a t i o n s c a n a l s o b e

p r e p a r e d . P e r i v e n o u s o r

p e r i p o r t a l

h e p a t o -

c y t e s

c a n

b e o b t a i n e d

b y

s e l e c t i v e d e s t r u c -

t i o n

o f

t h e

p e r i p o r t a l

o r

p e r i v e n o u s

p a r t

o f

t h e m i c r o c i r c u l a t i o n

b y d i g i t o n i n p e r f u s i o n

b e f o r e

a p p l y i n g

t h e

b a s i c c o l l a g e n a s e m e t h o d

( 1 2 , 1 3 ) . Two w h o l e l i v e r s m u s t b e

u s e d .

H e p a t o c y t e s u b p o p u l a t i o n s

a r e

p r e p a r e d

f r o m w h o l e

c e l l

p o p u l a t i o n s

b y c o u n t e r -

f l o w

c e n t r i f u g a t i o n

a c c o r d i n g

t o t h e i r

d e g r e e

o f

p l o i d y

( 1 4 ) . E n r i c h e d h e p a t o c y t e

c o u p l e t p o p u l a t i o n s c a n

a l s o

b e

o b t a i n e d

b y s l i g h t

m o d i f i c a t i o n s o f

t h e c l a s s i c a l


H e a l t h


*

V o l 1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l 1 9 9 8

1 2



I N V I T R O H E P A T O T O X I C I T Y

t w o - s t e p c o l l a g e n a s e p e r f u s i o n ,

s u c h

a s

a d d i t i o n

o f t r y p s i n

i n h i b i t o r i n t h e

c o l l a g e n -

a s e

s o l u t i o n ( 1 5 ) .

T h e c e l l


c o n t a i n s a p p r o x i m a t e l y

3 0 c o u p l e t s ; a f t e r

c o u n t e r f l o w

e l u t r i a t i o n

a f r a c t i o n

c o n t a i n -

i n g 8 5 c o u p l e t s

h a s

b e e n

o b t a i n e d ( 1 6 ) .

A l l t h e s e

m e t h o d s

h a v e

b e e n

a p p l i e d

o n l y

t o r o d e n t


T h e

u s e

o f

a c r u d e c o l l a g e n a s e

p r e p a r a -

t i o n

t h a t a l s o c o n t a i n s o t h e r

p r o t e o l y t i c

e n z y m e s r e p o r t e d l y

a l t e r s s u r f a c e p r o p e r t i e s

o f p a r e n c h y m a l c e l l s .

T o

o v e r c o m e

t h i s

d r a w b a c k

s o m e

i n v e s t i g a t o r s

h a v e

a t t e m p t e d

t o

d e v e l o p

d i s s o c i a t i o n

t e c h n i q u e s

w i t h o u t

t h e

u s e o f

c o l l a g e n a s e .

T h e

e n z y m e

i s

r e p l a c e d b y

a c h e l a t i n g a g e n t . A d d i t i o n o f

2 mM

e t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t a t e

( E D T A ) t o

t h e c o l l a g e n a s e - f r e e p e r f u s i o n

m e d i u m

a l l o w s v i a b l e


t o

b e

o b t a i n e d

( 1 7 , 1 8 ) ;

h o w e v e r ,

t h e

y i e l d

o f


b y

t h i s

m e t h o d

i s

l o w e r

a n d

t h e

g e n e r a t i o n

o f

s u b s t a n t i a l

n u m b e r s

o f

d a m a g e d

c e l l s

i s

u n a v o i d a b l e , m a k i n g

t h e i r

r e m o v a l b y

t h e u s e o f a

p e r c o l l g r a d i e n t

n e c e s s a r y

( 1 8 ) .

T h i s

m e t h o d

i m p r o v e s

m a i n t e n a n c e

o f

f u n c t i o n a l

c a p a c i t i e s

i n

c u l -

t u r e d

h e p a t o c y t e s c o m p a r e d

t o t h e s t a n d a r d


m e t h o d

( 1 9 ) ,

b u t

c o n f l i c t i n g

d a t a

h a v e b e e n

r e p o r t e d

( 2 0 ) .

P r e p a r a t i o n

o f h e p a t o c y t e s f r o m

o t h e r

s p e c i e s .

T h e

t w o - s t e p c o l l a g e n a s e p e r f u s i o n

p r o t o c o l ,

f i r s t

d e s i g n e d

f o r r a t

l i v e r ,

h a s

b e e n

a p p l i e d

t o

t h e l i v e r

o f

v a r i o u s

s p e c i e s ,

i n c l u d i n g

h u m a n

( 2 1 - 2 3 ) .

V i a b l e

h e p a t o -

c y t e s

h a v e b e e n o b t a i n e d f r o m w h o l e

l i v e r s ,

l o b e

p o r t i o n s ,

o r

w e d g e

b i o p s i e s .

I s o l a t e d


a r e

u s u a l l y

p r e p a r e d

f r o m w h o l e

l i v e r s

w h e n s m a l l

a n i m a l s

a r e

u s e d , e . g . ,

f i s h ,

f r o g s , b i r d s , h a m s t e r s ,

a n d r a b b i t s .

W e d g e

b i o p s i e s

a r e

f r e q u e n t l y

u s e d t o

o b t a i n


c e l l s

f r o m

l a r g e r

m am-

m a l s

s u c h a s

d o g s , m o n k e y s ,

r u m i n a n t s ,

a n d

h u m a n s .

H o w e v e r ,

e v e n

f o r t h e

h u m a n

l i v e r , t h e


o f t h e

w h o l e

o r g a n

h a s b e e n

d e s c r i b e d

( 2 4 ) .

I f

t h e

b a s i c

c o l l a -

g e n a s e p r o t o c o l

i s

u s e d , a p p r o p r i a t e

m o d i -

f i c a t i o n s

m u s t

b e m a d e

w i t h

r e s p e c t

t o

c a n n u l a

d i a m e t e r , p e r f u s a t e v o l u m e s ,

a n d

f l o w

r a t e s .

C o m p a r a t i v e

c o n d i t i o n s

f o r

d i s -

s o c i a t i o n

o f v a r i o u s

h u m a n

s a m p l e s

h a v e

b e e n

r e c e n t l y

s u m m a r i z e d

( 2 5 ) .

C h a r a c t e r i s t i c

f e a t u r e s

o f

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e s . F r e s h l y

i s o l a t e d


r e t a i n

r e s p o n s i v e n e s s

t o

s i g n a l s

t o w h i c h

t h e y

r e a c t e d

p r i o r

t o

l i v e r d i s s o c i a t i o n .

H o w e v e r ,

s o m e

p h e n o t y p i c

c h a n g e s

h a v e b e e n

o b s e r v e d

j u s t

a f t e r

t i s s u e

d i s r u p t i o n . F r e s h l y

i s o l a t e d

r a t

h e p a t o c y t e s r e p o r t e d l y

e x p r e s s

c - f o s ( 2 6 )

a n d

e x h i b i t

c h a n g e s

i n

a b u n -

d a n c e s

o f v a r i o u s

c y t o c h r o m e

P 4 5 0

( C Y P )

t r a n s c r i p t s ( 2 7 ) . M o r e o v e r ,

c o n s p i c u o u s

i n d i v i d u a l v a r i a t i o n s i n c e l l u l a r

f u n c t i o n s

a r e

c e l l s

p r e s e r v e d

i n

t h i s

m e d i u m

a r e a b l e t o

f r e q u e n t l y o b s e r v e d i n h u m a n


c o r r e c t l y

a t t a c h

t o p l a s t i c a n d s u r v i v e

i n

( 2 8 ) ( T a b l e

2 ) . I n a d d i t i o n

t o a g e ,

s e x ,

l i v e r

c u l t u r e

( 3 6 ) .

d i s e a s e s ,

a n d g e n e t i c p o l y m o r p h i s m s , p r e - V a r i o u s p r o c e d u r e s f o r c r y o p r e s e r v a t i o n

m e d i c a t i o n

a n d t h e d u r a t i o n

a n d c o n d i t i o n s o f


h a v e

b e e n

d e s c r i b e d ;

t h e

o f l i v e r p r e s e r v a t i o n b e f o r e

c e l l

d i s r u p t i o n

i m p o r t a n c e o f t h e n a t u r e

a n d

c o n c e n t r a -

m a y

g r e a t l y i n f l u e n c e t h e

m e t a b o l i c

a c t i v i t i e s

t i o n

o f

c r y o p r o t e c t a n t , c o o l i n g

r a t e ,

a n d

o f

f r e s h l y

i s o l a t e d h u m a n h e p a t o c y t e s c o n d i t i o n s

o f t h a w i n g h a v e b e e n

s t r e s s e d

( 2 9 , 3 0 ) . T h e

c o n d i t i o n s o f

o r g a n

p r e s e r v a - ( 3 7 - 4 4 ) . P a r e n c h y m a l

c e l l s f r o m v a r i o u s

t i o n b e f o r e d i s s o c i a t i o n

a r e a l s o

c r i t i c a l . V o n s

s p e c i e s

c a n b e f r o z e n

( 4 0 ) .

H o w e v e r ,

c e l l

e t

a l . ( 3 1 ) r e p o r t e d

t h a t

h u m a n l i v e r s

s t o r e d v i a b i l i t y i s r e d u c e d a n d f u n c t i o n s i n c l u d i n g

f o r

7

±

2

h r i n c o l d

U n i v e r s i t y o f

W i s c o n s i n

d r u g

m e t a b o l i z i n g

e n z y m e

a c t i v i t i e s a r e

s o l u t i o n ( D u p o n t , P a r i s ) g a v e

l o w e r

c e l l

y i e l d s m o r e

o r

l e s s i m p a i r e d ( 4 0 , 4 4 ) .

A b o u t

5 0

t h a n

s u r g i c a l

l i v e r b i o p s i e s w h e n e x p r e s s e d o f h e p a t o c y t e s

t h a t a r e a b l e t o a t t a c h

a n d

p e r g r a m o f t i s s u e . M o r e o v e r ,

m o s t

o f t h e s e

s u r v i v e i n c u l t u r e w h e n p l a t e d

j u s t

a f t e r

c e l l

p o p u l a t i o n s a t t a c h e d p o o r l y t o

p l a s t i c . i s o l a t i o n s t i l l p o s s e s s t h e s e

p r o p e r t i e s a f t e r

C r i t i c a l p a r a m e t e r s

a r e

p r o b a b l y

t h e

l e n g t h f r e e z i n g

i n

l i q u i d

n i t r o g e n

a n d

t h a w i n g .

o f

h y p o t h e r m i c p r e s e r v a t i o n

a n d e x t e n t o f T h e l e n g t h

o f p r e s e r v a t i o n i s

n o t a c r i t i c a l

w a s h i n g

w i t h b u f f e r

b e f o r e l i v e r d i s s o c i a t i o n .

p a r a m e t e r .

W h e t h e r c r y o p r e s e r v e d

f o r a

S u r v i v a l

o f i s o l a t e d h e p a t o c y t e s

i n

f e w d a y s o r f o r 4 y e a r s , h u m a n


s u s p e n s i o n

i s

s h o r t ,

n o t

e x c e e d i n g

a

f e w w e r e

e q u a l l y

v i a b l e

a f t e r

t h a w i n g

( 4 0 ) .

h o u r s ,

a n d

t h e

f u n c t i o n a l

c a p a c i t y i s

d e p e n -

Among t h e

s p e c i e s

s t u d i e d , d o g h e p a t o -

d e n t o n t h e

c o m p o s i t i o n

o f t h e

i n c u b a t i o n c y t e s

a p p e a r

t o b e

t h e

m o s t s e n s i t i v e

c e l l s

m e d i u m

( 3 2 ) . H o w e v e r , w h e n e n t r a p p e d

i n

t o t h e f r e e z e / t h a w p r o c e s s ( 4 0 , 4 4 ) .

A m o n g

a l g i n a t e b e a d s ,

i s o l a t e d


s u r v i v e t h e

m o s t s e n s i t i v e f u n c t i o n s t o

t h e

m u c h

l o n g e r .

We

h a v e s h o w n t h a t

u n d e r

f r e e z e / t h a w p r o c e s s

a r e c y t o s o l i c p h a s e

I I

t h e s e c o n d i t i o n s ,

r a t


i n c u b a t e d e n z y m e a c t i v i t i e s

a n d

p r o t e i n

n e o s y n t h e s i s ,

i n a c u l t u r e m e d i u m

w e r e c a p a b l e o f c o n j u -

w h i c h

a r e n o t

r e s t o r e d

i n

t h a w e d h e p a t o -

g a t i n g

b i l i r u b i n

f o r 2 4

h r

o r m o r e

( 3 3 ) .

c y t e s

i n

p u r e c u l t u r e . H o w e v e r ,

w h e n

F r e s h l y

i s o l a t e d


c a n

a l s o b e

t h a w ed p a r e nc h y m a l c e l l s

a r e

s e t u p

i n

t r a n s i e n t l y p r e s e r v e d

b y h y p o t h e r m i a

o r

c o c u l t u r e

w i t h

r a t

p r i m i t i v e

b i l i a r y c e l l s ,

c r y o p r e s e r v e d

f o r m o n t h s

o r

y e a r s .

When

t h e y

r e c o v e r

l e v e l s o f f u n c t i o n a l

a c t i v i t i e s

s t o r e d a t

4 0 C

e i r h e r

i n t h e

L e i b o v i t z m e d i u m

c l o s e

t o t h o s e

f o u n d i n f r e s h

h e p a t o c y t e

( G i b c o

L a b o r a t o r i e s , C e r g y - P o n t o i s e ,

c o c u l t u r e s a f t e r a f e w

d a y s

( 4 5 ) .

A

r e c e n t

F r a n c e )

o r

i n

t h e U n i v e r s i t y

o f

W i s c o n s i n

s t u d y

h a s

s h o w n

t h a t

w h e n

e n t r a p p e d

i n

s o l u t i o n

( D u p o n t )

t h e

m o s t

e f f e c t i v e

s o l u -

a l g i n a t e

b e a d s , h e p a t o c y t e s

e x h i b i t

o n l y

t i o n f o r c o l d

o r g a n

p r e s e r v a t i o n ) ,

r a t

h e p a t o -

l i m i t e d

r e d u c e d

c e l l

v i a b i l i t y

a n d r e t a i n

c y t e s

s u r v i v e d

f o r

1

o r 2

d a y s

( 3 4 - 3 6 ) .

t h e i r f u n c t i o n s a t

h i g h

l e v e l s

( 4 6 ) .

H o w e v e r ,

s u r v i v a l

a n d m e t a b o l i c

c o m p e -

T h e r e s u l t s w i t h

h u m a n


t e n c e a r e b e t t e r m a i n t a i n e d

i n

t h e L e i b o v i t z

d e s e r v e f u r t h e r

c o m m e n t s .

I n d e e d ,

a l t h o u g h

m e d i u m . A f t e r

2

d a y s

o f

s t o r a g e o n l y

t h e

d a t a

a r e

r e p r o d u c i b l e

a n d

s i m i l a r

t o t h o s e

T a b l e 2 .

D r u g m e t a b o l i z i n g e n z y m e

a c t i v i t i e s i n h u m a n

h e p a t o c y t e s . a

E n z y m e a c t i v i t y

S u b s t r a t e

r e a c t i o n )

R a n g e

M e a n

n

E t h o x y r e s o r u f i n b d e e t h y l a t i o n )

0 . 2 - 8

3 . 0

1 9

P h e n a c e t i n c

d e e t h y l a t i o n )

0 . 1 - 2 5

4 . 7 2 5

P e n t o x y r e s o r u f i n b

d e a l k y l a t i o n ) 0 . 1 - 5

0 . 7

1 9

M e p h e n y t o i n c

h y d r o x y l a t i o n )

0 . 1 - 2

0 . 7

6

D e x t r o m e t o r p h a n c

d e m e t h y l a t i o n )

0 . 1 - 2

0 . 5 6

N i f e d i p i n e c

o x i d a t i o n )

0 . 5 - 1 3

5 . 3 8

L a u r i c a c i d c

h y d r o x y l a t i o n )

0 . 3 - 2

0 . 8

7

P a r a c e t a m o i c

G l u c u r o c o n j u g a t i o n

0 . 3 - 1 6

4 . 1 2 6

S u l f o c o n j u g a t i o n

0 . 1 - 1 4

3 . 6

2 7

- C h l o r o - 2 , 4 - d i n i t r o b e n z e n e d c o n j u g a t i o n

w i t h

G S H )

0 . 0 5

- 0 . 5

0 . 2

1 4

P r o c a i n a m i d e c

N - a c e t y l t r a n s f e r a s e )

0 . 1 - 7

1 . 1

3 2

A b b r e v i a t i o n s :

G S H , g l u t a t h i o n e ;

n ,

n u m b e r o f

t e s t e d c e l l

p o p u l a t i o n s

f r o m d i f f e r e n t

d o n o r s .

a A c t i v i t i e s

w e r e m e a -

s u r e d

1 6 t o

4 8 h r

a f t e r

h e p a t o c y t e s e e d i n g .

b P i c o m o l e

m e t a b o l i t e s

f o r m e d

p e r

m i n u t e

p e r

m i l l i g r a m

c e l l u l a r

p r o -

t e i n .

c N a n o m o l e m e t a b o l i t e s

f o r m e d

p e r

h o u r

p e r m i l l i g r a m

c e l l u l a r

p r o t e i n .

d U n i t

p e r

m i l l i g r a m

c e l l u l a r

p r o t e i n .

D a t a

f r o m G u i l l o u z o a n d

C h e s n e

2 8 ) .

E n v i r o n m e n t a l H e a l t h


*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

513



A .

G U I L L O U Z O

o b t a i n e d w i t h a n i m a l


w h e n

t h e

c e l l s

a r e

p r e p a r e d

f r o m

f r e s h ,

h i s t o l o g i c a l l y

n o r m a l l i v e r

p i e c e s , t h e y

a r e

m u c h

m o r e

v a r i a b l e w i t h


c e l l s

i s o l a t e d

f r o m

p a t h o l o g i c a n d / o r

h y p o t h e r m i c a l l y

p r e s e r v e d

l i v e r

s a m p l e s .

F u r t h e r

s t u d i e s

a r e

r e q u i r e d

t o b e t t e r

d e f i n e

t h e

c r i t i c a l

c o n d i -

t i o n s

f o r

c o r r e c t

c r y o p r e s e r v a t i o n

o f

s u c h

c e l l

p o p u l a t i o n s .

S o m e b i o c h e m i c a l

p a r a m e -

t e r s

p r o b a b l y

s h o u l d b e m e a s u r e d

a n d

s h o r t -

t e r m i n c u b a t i o n o r

c u l t u r e

o f

t h e

c e l l s

b e f o r e

f r e e z i n g w i l l

i m p r o v e s u r v i v a l

a n d f u n c t i o n

a f t e r

t h a w i n g .

C u l t u r e

o f

i s o l a t e d


T o

s u r v i v e

f o r

p r o l o n g e d

p e r i o d s ,

l i v e r


c e l l s

m u s t

b e

p u t

i n

c u l t u r e .

H o w e v e r ,

m a j o r

p r o b l e m s h a v e b e e n

e n c o u n t e r e d

w i t h

p r i -

m a r y

l i v e r c e l l

c u l t u r e s ;

t h e y

a r e

r e l a t e d

t o

l i m i t e d s u r v i v a l

( n o t

e x c e e d i n g

a f e w

d a y s )

a n d t h e l o s s o f

l i v e r - s p e c i f i c

f u n c t i o n s

s u c h a s

d r u g m e t a b o l i z i n g

e n z y m e s

( 4 7 , 4 8 ) .

CYP

c o n c e n t r a t i o n

d e c r e a s e s

a p p r o x i m a t e l y 5 0

d u r i n g

t h e f i r s t 2 4

t o

4 8

h r i n

r o d e n t

h e p a t o -

c y t e s ( 4 9 - 5 2 ) ,

b u t

t h e

s u m o f t h e a m o u n t s

o f

i m m u n o r e a c t i v e

p r o t e i n

d e c l i n e s

m o r e

s l o w l y .

S t e w a r d e t a l .

( 5 3 ) r e p o r t e d

t h a t t h e

t o t a l

s p e c t r a l CYP m e a s u r e d

i n

r a t

h e p a t o -

c y t e s

d e d i n e d 6 8

d u r i n g

t h e f i r s t

3 d a y s

o f

c u l t u r e i n

a s e r u m - f r e e

m e d i u m ,

w h e r e a s t h e

s u m o f

t h e

a m o u n t s o f i m m u n o r e a c t i v e

p r o -

t e i n

f o r

s e v e n CYP

e n z y m e s

d e c l i n e d

o n l y

2 4

d u r i n g

t h e

s a m e p e r i o d .

T h e s e

f i n d i n g s

s u g g e s t

t h a t

l o s s

o f h e m e r a t h e r t h a n

p r o t e i n

a c c o u n t e d f o r m u c h

o f t h e

o b s e r v e d

CYP

l o s s

i n

c u l t u r e d

r a t


CYP

m R N A s a l s o

d r o p

d r a m a t i c a l l y d u r i n g

t h e

f i r s t

d a y s

o f c u l t u r e

( 5 4 , 5 5 ) .

S e v e r a l

i m m u n o b l o t t i ng a n d N o r t h e r n

b l o t t i n g

a n a l y s e s

h a v e

s h o w n

t h a t

CYP

e n z y m e s

a r e

d i f f e r e n t l y

a f f e c t e d

( 5 5 - 5 8 ) .

I n d u c t i o n o f

s p e c i f i c

C Y P s

b y

p h e n o b a r b i t a l

i s d i f f i c u l t

t o

a c h i e v e

( 5 9 ) ;

s e v e r a l

o t h e r

C Y P s , a l t h o u g h

d e c r e a s e d ,

r e m a i n

c a p a b l e

o f

r e s p o n d i n g

t o

i n d u c e r s i n

v i t r o

( 5 3 , 5 6 - 5 8 , 6 0 , 6 1 ) .

H o w e v e r ,

t h e

r e s p o n s e c a n

b e d i f f e r e n t

f r o m

t h a t

o b s e r v e d i n v i v o

( 6 2 ) . D i f f e r e n t i a l

c h a n g e s

a r e

a l s o

o b s e r v e d

f o r

u r i d i n e

d i p h o s -

p h a t a s e

( U D P ) - g l u c u r o n y l t r a n s f e r a s e

f o r m s

( 6 3 )

a n d

g l u t a t h i o n e

S - t r a n s f e r a s e

( G S T )

s u b u n i t s

( 6 4 - 6 7 ) .

U D P - g l u c u r o n y l t r a n s -

f e r a s e

a c t i v i t y

i s

m o r e

s t a b l e t h a n t h a t

o f s u l -

f o t r a n s f e r a s e s

( 6 6 ) . T h e l o s s o f

s p e c i f i c

f u n c t i o n s i s

a s s o c i a t e d w i t h a n

e a r l y d r o p o f

t r a n s c r i p t i o n

r a t e s o f


g e n e s ,

e . g . ,

a l b u m i n

a n d

t r a n s f e r r i n ,

t h a t

r e p r e s e n t

o n l y

1

t o

1 0

o f

t h o s e

f o u n d i n t h e

l i v e r

a f t e r

2 4

h r

o f

c u l t u r e

( 6 8 , 6 9 ) .

P h e n o t y p i c c h a n g e s

w i t h

t i m e i n

c u l t u r e

a l s o

i n c l u d e

o v e r e x p r e s s i o n i n

a d u l t

r a t

h e p a t o c y t e s o f

P - g l y c o p r o t e i n , t h e

p r o d u c t

o f

m u l t i d r u g

r e s i s t a n c e

g e n e ( s ) ,

a f t e r 2

t o

3

d a y s

o f

c u l t u r e , m a k i n g

t h e c e l l s

m u c h

l e s s s e n s i t i v e t o

a n t i c a n c e r

d r u g s .

I n d e e d ,

t h i s

a d e n o s i n e

t r i p h o s p h a t e

( A T P ) -

d e p e n d e n t

d r u g

e f f l u x

p u m p

i s

f u n c t i o n a l ,

a s

s h o w n

b y

a

p a r a l l e l

d e c r e a s e

i n

i n t r a c e l l u -

l a r

a c c u m u l a t i o n o f

d o x o r u b i c i n a n d

t h e

m a r k e d

e f f e c t

o f

k n o w n

b l o c k e r s

s u c h

a s

v e r a p a m i l

a n d

c y c l o s p o r i n

( 7 0 ) .

M o s t i n

v i t r o s t u d i e s

o n

d e t e r m i n a t i o n

o f

d r u g m e t a b o l i z i n g

e n z y m e a c t i v i t i e s

h a v e

b e e n

p e r f o r m e d o n

r o d e n t


H o w e v e r ,

m a j o r

s p e c i e s

d i f f e r e n c e s

h a v e

b e e n

o b s e r v e d , p a r t i c u l a r l y w h e n

c o m p a r -

i s o n s i n v o l v e

h u m a n


I n d e e d ,

m a n y

i n v e s t i g a t o r s h a v e

c l e a r l y

d e m o n -

s t r a t e d

t h a t f u n c t i o n a l

a l t e r a t i o n s

o c c u r

l a t e r

a n d a r e

m o r e p r o g r e s s i v e

i n

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

t h a n i n

t h e i r r o d e n t

c o u n t e r p a r t s

( 2 9 , 7 1 - 7 3 ) . A b o u t 50

o f t h e i n i t i a l

C Y P

c o n t e n t i s

s t i l l

f o u n d

a f t e r

1

w e e k

o f

c u l t u r e

( 2 9 , 7 3 ) ,

a n d

a l l

m a j o r

C Y P s

i . e . , C Y P i A ,

C Y P 2 C , C Y P 2 E , a n d

C Y P 3 A )

r e m a i n

w e l l

e x p r e s s e d a n d

r e s p o n s i v e

t o

s p e c i f i c i n d u c e r s

( 7 2 ) .

S p e c i f i c

i n d u c t i o n s

w e r e

d e m o n s t r a t e d

w i t h r i f a m p i c i n

( 7 2 , 7 4 ) , 3 - m e t h y l c h o l a n -

t h r e n e

( 7 2 ) ,

o m e p r a z o l e ( 7 5 ) ,

a n d

d i h y -

d r a l a z i n e

( 7 6 ) . A s

f o u n d

i n

v i v o ,

r i f a m p i c i n

c o n t r o l s

e x p r e s s i o n

o f C Y P 3 A

a t

t h e

t r a n -

s c r i p t i o n a l

l e v e l

( 7 7 ) .

P h a s e

I I e n z y m e s

a r e

a l s o

p r e s e r v e d i n

c u l t u r e d

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

( 7 3 , 7 8 , 7 9 ) . H o w e v e r ,

a n

e a r l y

d e c r e a s e

h a s

b e e n o b s e r v e d f o r

G S T

a c t i v i t y ,

w h i c h w a s

n o t

f o l l o w e d b y a n

i n c r e a s e

a s

f o u n d

i n r a t


( 7 9 ) .

N e v e r t h e l e s s ,

G S T s

r e m a i n

r e s p o n s i v e

t o

i n d u c e r s .

A

s p e c i f i c

i n d u c t i o n o f

G S T

a l p h a - c l a s s

t r a n s c r i p t s

b y

p h e n o b a r b i t a l ,

3 - m e t h y l c h o l a n t h r e n e ,

a n d

d i t h i o l e t h i o n e s

h a s

b e e n

r e p o r t e d

i n

p r i m a r y h u m a n

h e p a -

t o c y t e c u l t u r e s

( 8 0 ) .

P - G l y c o p r o t e i n

i s

o n l y

s l i g h t l y o v e r e x p r e s s e d

( 8 1 ) .

A n

a d d i t i o n a l p a r t i c u l a r

f e a t u r e o f

h u m a n


i s

t h e

f r e q u e n t

b i p h a s i c

e x p r e s s i o n

o f

s o m e m R N A s .

S o m e t r a n -

s c r i p t s ,

p a r t i c u l a r l y

CYP

m R N A s ,

s h o w

a

c o n s p i c u o u s d r o p

f o l l o w e d b y a n

i n c r e a s e

a f t e r

2

o r

3

d a y s

o f

c u l t u r e

( 7 2 , 8 2 ) .

T h i s

b e h a v i o r

c o u l d

h a v e

s o m e

m a r k e d

i m p l i c a -

t i o n s i n

m e t a b o l i c

c a p a c i t y o f

t h e

c e l l s

a n d

s u p p o r t s

t h e

v i e w

t h a t

h u m a n


c a n

b e

u s e d

f o r

v a r i o u s

s t u d i e s

e v e n a f t e r

2

o r

3

d a y s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

V a r i o u s

f u n c t i o n s

a r e c e l l

d e n s i t y

d e p e n d e n t .

T h u s

a l b u m i n

s e c r e t i o n

r a t e

p e r

c e l l i s

m u c h

h i g h e r

w h e n r a t


a r e

p l a t e d

a t l o w

d e n s i t y ( 8 3 ) .

I n

c o n v e n -

t i o n a l

c u l t u r e

c o n d i t i o n s c e l l

d i v i s i o n s , i f

a n y ,

a r e

r a r e ,

a n d

t h e c e l l s d o

n o t s u r v i v e

f o r

m o r e t h a n 1

t o 2

w e e k s .

H e p a t o c y t e

s u b p o p u l a t i o n s h a v e a l s o

b e e n

i n v e s t i g a t e d

i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

T e t r a p l o i d h e p a t o c y t e s

e x p r e s s

h i g h e r

l e v e l s

o f


f u n c t i o n s t h a n

d i p l o i d

c e l l s ,

s u g g e s t i n g

t h a t

a l l

g e n e s

a r e f u n c t i o n a l

1 4 ) .

P e r i p o r t a l

a n d

p e r i v e n o u s


r e t a i n

t h e i r f u n c t i o n a l


8 4 , 8 5 ) .

T h e

r e a s o n s f o r t h e

l o s s o f


f u n c t i o n s

h a v e b e e n

a n d

r e m a i n

a

m a t t e r

o f

d e b a t e . T h e

l o s s

o f a

s u r f a c e f a c t o r

d u r i n g



o f i s o l a t e d

h e p a t o -

c y t e s ,

a s w e l l

a s

d i s r u p t i o n

o f

t h e e x t r a c e l -

l u l a r m a t r i x

a n d c e l l - c e l l

c o n t a c t s h a v e

b e e n

p r o p o s e d

t o

b e

r e s p o n s i b l e

f o r

t h e

e a r l y

a n d

c o n s p i c u o u s p h e n o t y p i c

c h a n g e s .

R e c e n t l y

W r i g h t

a n d

P a i n e

( 2 0 )

e v a l u a t e d

t h e l e v e l s o f

CYP i n

b o t h r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

p r e p a r e d

w i t h

t h e

c h e l a t i n g

a g e n t

EDT A

t o

a v o i d

p r o t e o l y s i s

a n d i n l i v e r

s l i c e s

w h e r e

b o t h

t h e

e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x

a n d

c e l l - c e l l

i n t e r a c t i o n s a r e

p r e s e r v e d .

T h e s e

a u t h o r s

f o u n d

a

l o s s o f

C Y P i n b o t h

s y s t e m s ,

s u g g e s t i n g

t h a t

t h e r e

i s

n o

d i r e c t

r e l a t i o n s h i p

b e t w e e n

s u c h f u n c t i o n a l

a l t e r -

a t i o n s

a n d t h e

u s e o f

c o l l a g e n a s e ,

t h e l o s s

o f c e l l - c e l l

c o n t a c t s ,

a n d / o r

t h e a b s e n c e

o f

a n e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x

2 0 ) .

O b v i o u s l y ,

d i f f e r e n t

e v e n t s

o c c u r

d u r i n g

t h e

i s o l a t i o n

p r o c e s s ,

c e l l

s e e d i n g ,

a n d

a t t a c h m e n t

t h a t

c a n

a l l b e

c o n s i d e r e d

c r i t i -

c a l

s t e p s . O v e r e x p r e s s i o n

o f


o f

i m m e d i a t e

o r

e a r l y

g e n e s

s u c h a s

c - j u n

a n d

c - f o s

a n d

a c t i v a t i o n o f

n u d e a r

f a c t o r

k a p p a

B

a r e

a s s o c i a t e d

w i t h

c e l l i s o l a t i o n .

R a p i d

d e g r a d a t i o n

o f

p a r t i c u l a r

mRNAs a n d

t r a n -

s c r i p t i o n a l s i l e n c i n g

o f c e r t a i n

g e n e s

o c c u r

r a p i d l y

a f t e r

c e l l

i s o l a t i o n .

B o t h


e . g . ,

s o m e

C Y P s )

a n d

h o u s e k e e p i n g

e . g . ,

c o p p e r - z i n c s u p e r o x i d e d i s m u t a s e )

f u n c -

t i o n s a r e

i n v o l v e d .

O t h e r

c h a n g e s

a r e r e l a t e d

t o

c e l l

a t t a c h m e n t ,

w h i c h

r e s u l t s i n a

r e d i s -

t r i b u t i o n o f

m e m b r a n e

r e c e p t o r s .

A

b e t t e r

k n o w l e d g e

o f

m e c h a n i s m s

i n v o l v e d i n a l l

t h e s e e v e n t s i s

n e e d e d t o

i m p r o v e

i n v i t r o

s u r v i v a l a n d f u n c t i o n

o f


F a c t o r s

i n f l u e n c i n g h e p a t o c y t e

s u r v i v a l

a n d f r n c t i o n .

A

n u m b e r

o f s t u d i e s

d e a l i n g

w i t h t h e d e f i n i t i o n o f

m o r e

s u i t a b l e

c u l t u r e

c o n d i t i o n s h a v e l e d t o

t h e

c o n c l u s i o n t h a t

t h r e e

g r o u p s

o f

f a c t o r s c a n

a f f e c t

c e l l u l a r

f u n c t i o n s i n

v i t r o : s o l u b l e

f a c t o r s ,

e x t r a c e l -

l u l a r

m a t r i x

c o m p o n e n t s ,

a n d

c e l l - c e l l

i n t e r a c t i o n s

( 8 6 , 8 7 ) .

ExOGENOUS S O L U B L E

F AC T O R S.

The


o f t h e

c u l t u r e

m e d i u m h a s

b e e n

w i d e l y

e x p l o r e d

( 8 8 - 9 5 )

( T a b l e

3 ) .

A

v a r i e t y

o f s o l u b l e

f a c t o r s , i n c l u d i n g h o r -

m o n e s , g r o w t h

f a c t o r s ,

a n d

t r a c e

e l e m e n t s ,

i m p r o v e

h e p a t o c y t e

s u r v i v a l a n d

f u n c t i o n

i n

v i t r o

( 8 7 , 9 5 , 9 6 ) .

I n

a d d i t i o n

a

n u m b e r

o f

n o n p h y s i o l o g i c

s o l u b l e

f a c t o r s a r e

a l s o

e f f e c t i v e ;

t h e y

i n c l u d e

l i g a n d s

s u c h

a s

m e t y ra p o ne a n d

i s o n i c o t i n a m i d e

( 9 0 ) ,


H e a l t h


*

V o l 1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

14




T a b l e 3 . S o l u b l e

f a c t o r s

a f f e c t i n g s u r v i v a l a n d

l i v e r - s p e c i f i c f u n c t i o n s o f h e p a t o c y t e s i n p r i m a r y

c u l t u r e s .

E f f e c t s

F a c t o r s

S u r v i v a l

a

F u n c t i o n s

R e f e r e n c e

C o r t i c o s t e r o i d s

+

S o m e

f u n c t i o n s

a r e i m p r o v e d b G u g u e n - G u i l l o u z o

e t

a l .

8 8 )

I n s u l i n

+ 1 -

L e s s

e f f e c t i v e t h a n w i t h

c o r t i c o s t e r o i d s

L a i s h e s a n d

W i l l i a m s

8 9 )

I s o n i c o t i n a m i d e -

M a i n t e n a n c e o f C Y P s

i m p r o v e d P a i n e

9 0 ) ,

l n o u e e t a l .

9 1 )

M e t y r a p o n e

a c t s a s a l i g a n d )

-

M a i n t e n a n c e

o f

C Y P s

i m p r o v e d

P a i n e

9 0 )

D i m e t h y l s u l f o x i d e

+ + +

M a n y

f u n c t i o n s

i m p r o v e d I s o m e t a l .

9 2 )

N a f e n o p i n

+ +

P r o d u c t i o n

o f

p l a s m a

p r o t e i n s

i m p r o v e d B a y l y e t a l .

9 3 )

i n h i b i t i o n o f

a p o p t o s i s )

P y r u v a t e

S o m e f u n c t i o n s i m p r o v e d b

T o m i t a e t

a l .

9 4 )

I r o n - c o n t a i n i n g d i f e r r i c

+ +

F u n c t i o n s

i m p r o v e d b B l o c k e t a l . ( 9 5 )

t r a n s f e r r i n

I n c r e a s e d

s u r v i v a l : - , n o ; + ,

a

f e w d a y s ; + + t o + + + , a w e e k t o s e v e r a l

w e e k s . b O n l y

t h e

m o s t s t a b l e f u n c t i o n s i n

v i t r o , e . g . , a l b u m i n p r o d u c t i o n ,

a r e

i m p r o v e d .

d r u g i n d u c e r s

s u c h

a s

p h e n o b a r b i t a l ( 9 7 ) ,

a n d s o l v e n t s

s u c h

a s d i m e t h y l s u l f o x i d e

( 9 2 ) , w h i c h i s t h e m o s t

e f f e c t i v e .

H o w e v e r ,

d i m e t h y l

s u l f o x i d e

m u s t

b e

u s e d

a t

a

c o n -

c e n t r a t i o n a s

h i g h

a s

2

t o

g i v e m a x i m u m

e f f e c t s

( 9 2 ) .

S o m e

c o m p l e x s e r u m - f r e e

h o r m o n a l l y

d e f i n e d m e d i a

h a v e

b e e n

p r o p o s e d

f o r

c u l -

t u r i n g h e p a t o c y t e s

( 9 8 ) ,

b u t

t h e y

d o n o t

a l l o w

s a t i s f a c t o r y m a i n t e n a n c e

o f

s p e c i f i c

g e n e


a n d e x p r e s s i o n

o f d i f f e r -

e n t i a t e d f u n c t i o n s b e y o n d

a

s h o r t

p e r i o d .

O n l y t r a n s i t o r y

i m p r o v e m e n t

o f

p l a s m a

p r o t e i n p r o d u c t i o n

r a t e s ( 9 9 )

a n d

d r u g


e n z y m e l e v e l s a n d

r e s p o n s e

t o

i n d u c e r s

( 1 0 0 )

h a s b e e n

r e p o r t e d

i n r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s .

I n

s t a n d a r d

c u l t u r e

c o n d i t i o n s

i . e . ,

i n

t h e a b s e n c e

o f

m i t o g e n i c f a c t o r s ,

r a t

h e p a -

t o c y t e s

a r e

b l o c k e d i n t h e m i d t o

l a t e G

1

p h a s e a t

t h e r e s t r i c t i o n p o i n t

( 1 0 1 ) .

A

n u m b e r

o f s t u d i e s

h a v e

i n v o l v e d t h e

i d e n t i -

f i c a t i o n

o f

s o l u b l e

f a c t o r s

t h a t

m a y

s t i m u -

l a t e

DN A

s y n t h e s i s

i n

h e p a t o c y t e s p l a t e d

a t

l o w d e n s i t i e s

( 1 0 2 , 1 0 3 ) .

Two

g r o u p s

o f

h u m o r a l

g r o w t h - p r o m o t i n g

a g e n t s

c a n

b e

d i s t i n g u i s h e d :

t h e

p r i m a r y m i t o g e n i c

f a c -

t o r s

a n d t h e

c o m i t o g e n i c

f a c t o r s .

T h u s ,

e p i d e r m a l g r o w t h

f a c t o r

r e q u i r e s

i n s u l i n

o r

a n g i o t e n s i n

I I

f o r m a x i m a l s t i m u l a t i o n o f

N s y n t h e s i s .

S e r u m

f a c t o r s

s u c h a s

h e p a t o p o i e t i n

B a n d

t h e

h e p a t o c y t e

g r o w t h

f a c t o r

a l s o

s t i m u l a t e

h e p a t o c y t e p r o l i f e r a -

t i o n .

I n

a d d i t i o n

v a r i o u s

s u b s t a n c e s

a n d

c u l t u r e

c o n d i t i o n s c a n m o d u l a t e

t h e

r e s p o n s e

o f


t o

g r o w t h

s t i m u l i

i n v i t r o .

T h e y

i n c l u d e

e n e r g e t i c

c o m p o -

n e n t s

o f

t h e b a s a l

m e d i u m , e . g . , p y r u v a t e

( 1 0 2 ) ,

l a c t a t e

( 1 0 2 ) , g l u c o s e ( 9 5 ) , p r o l i n e

( 1 0 4 ) ,

a n d i r o n - c o n t a i n i n g

d i f e r r i c

t r a n s -

f e r r i n

( 1 0 4 ) .

When

r a t


a r e

g r o w n

i n

s e r u m - f r e e

m e d i u m

c o n t a i n i n g

l o w C a 2 +


( 0 . 4 m M )

a n d


f a c t o r ,

a

h i g h p e r c e n t a g e

g o

t h r o u g h o n e c y c l e

o f

d i v i s i o n

a n d a f e w

r e p l i c a t e

t w i c e ( 1 0 5 ) . N i c o t i n a m i d e

a p p e a r s t o

b e

v e r y

e f f e c t i v e

( 9 1 , 1 0 6 ) ;

t h e

m e c h a n i s m

m e d i a t i n g

t h e s e e f f e c t s

r e m a i n s

u n c l e a r

( 9 5 ) .

A b o u t

1 5

o f

r a t


u n d e r g o

t h r e e r o u n d s o f

c e l l d i v i s i o n

w h e n

m a i n t a i n e d

i n a

s e r u m - f r e e m e d i u m c o n -

t a i n i n g

1 0

m m o l / l i t e r n i c o t i n a m i d e a n d

1 0 n g / m l e p i d e r m a l g r o w t h f a c t o r ( 1 0 6 ) .

S e v e r a l e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x s u b s t r a t e s

c a n

a l s o

p r o m o t e c e l l g r o w t h ( 9 5 , 1 0 7 ) . L o y e r

e t

a l .

( 1 0 1 )

s h o w e d t h a t i n

t h e p r e s e n c e

o f

m i t o g e n s e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x s u b s t r a t e s

e n t e r

S - p h a s e

4 8 h r

a f t e r

s e e d i n g ;

m a x i -

m um DN A s y n t h e s i s t a k e s

p l a c e

a t

8 4 h r

a n d

t h e maximum o f

m i t o t i c

f i g u r e s

i s

o b s e r v e d

a t

a p p r o x i m a t e l y 9 6

h r . Human


a l s o e x h i b i t a

p r o l i f e r a t i v e

a c t i v -

i t y w h e n

s t i m u l a t e d w i t h

e p i d e r m a l

g r o w t h

h o r m o n e , h e p a t o c y t e g r o w t h

h o r m o n e ,

o r

h u m a n

s e r u m

( 1 0 8 - 1 1 0 ) .

E X T R A

C E L L

U L A R M A T R I X C O M P O N E N T S .

T h e i n f l u e n c e

o f e x t r a c e l l u l a r m a t r i x o n t h e

m a i n t e n a n c e o f


f u n c t i o n s h a s

a l s o b e e n

w i d e l y

a n a l y z e d

( 1 1 1 - 1 1 5 )

( T a b l e 4 ) .

A

v a r i e t y

o f f o r m s o f e x t r a -

c e l l u l a r

m a t r i x

w e r e

t e s t e d .

T h e

e f f i c i e n c y

o f a t t a c h m e n t o f


i s

i n c r e a s e d

w h e n

t h e c e l l s

a r e

c u l t u r e d

i n

p l a s t i c

d i s h e s

c o a t e d

w i t h

m a t r i x

p r o t e i n s . I n m o s t c a s e s

h e p a t o c y t e

s p r e a d i n g

i s a l s o e n h a n c e d a n d

i s

a s s o c i a t e d w i t h t h e l o s s o f

s p e c i f i c

f u n c t i o n s

( 1 1 2 , 1 1 6 , 1 1 7 ) .

M a i n t e n a n c e o f

d i f f e r e n t i a t e d f u n c t i o n s

i s p r o l o n g e d

w h e n t h e c e l l s a r e c u l t u r e d

o n

m a t r i g e l

o r

i n

a

s a n d w i c h ,

t w o

c o n d i t i o n s

t h a t f a v o r t h e

p r e s e r v a t i o n

o f t h e g l o b u l a r

c e l l

s h a p e .

T h e

m o s t c o n v i n c i n g i m p r o v e -

m e n t h a s

b e e n

o b t a i n e d u s i n g

m a t r i g e l , a

l a m i n i n - r i c h

g e l m a t r i x i s o l a t e d f r o m a

m o u s e s a r c o m a

( 5 4 , 1 1 3 ) .

V a r i o u s

f u n c -

t i o n s ,

i n c l u d i n g i n d u c t i o n o f C Y P 2 B 1

a n d C Y P 2 B 2

b y

p h e n o b a r b i t a l ,

a r e

m a i n -

t a i n e d

f o r

s e v e r a l

d a y s

( 5 4 , 5 5 ) .

H o w e v e r ,

t h e

s i g n i f i c a n c e o f m a t r i g e l

e f f e c t s i s d i f f i c u l t

t o

i n t e r p r e t b e c a u s e c o n t a m i n a t i o n

w i t h

p r o t e i n s ,

h o r m o n e s , a n d / o r g r o w t h f a c t o r s

h a s b e e n r e p o r t e d ( 1 1 8 , 1 1 9 ) .

Among

t h e

v a r i o u s f a c t o r s

i d e n t i f i e d w e r e t r a n s f o r m i n g

g r o w t h

f a c t o r b e t a ,

e p i d e r m a l

g r o w t h

f a c t o r ,

i n s u l i n l i k e g r o w t h f a c t o r - 1 , b o v i n e f i b r o b l a s t

g r o w t h f a c t o r ,

a n d

p l a t e l e t - d e r i v e d g r o w t h

f a c t o r

( 1 1 8 ) .

R a t


a l s o

m a i n t a i n

a

h i g h

a l b u m i n s e c r e t i o n

r a t e

f o r m o r e t h a n 4 0

d a y s

a n d a m o r e

c u b o i d a l

s h a p e w h e n c u l -

t u r e d b e t w e e n t w o

l a y e r s

o f

t y p e

I

c o l l a g e n

( 1 2 0 ) .

R e c e n t l y L e e e t a l .

( 1 1 4 )

r e p o r t e d

t h a t t h e c o n t i n u o u s

p r e s e n c e

o f

L - p r o l i n e i n

t h e m e d i u m

o f

s a n d w i c h e d r a t


w a s

n e c e s s a r y

a n d c o n c l u d e d t h a t c o n t i n u e d

s y n t h e s i s

o f

e n d o g e n o u s

c o l l a g e n b y h e p a t o -

c y t e s

w a s c r i t i c a l . H o w e v e r ,

f u r t h e r w o r k i s

r e q u i r e d

t o

d e t e r m i n e

t h e

p r e c i s e r o l e

o f

L - p r o l i n e a n d

t h e m e c h a n i s m

o f i n t e r a c t i o n

b e t w e e n


a n d

n e o s y n t h e s i z e d

c o l l a g e n .

W h e t h e r t h e c e l l s m u s t r e t a i n t h e i r

c u b o i d a l

s h a p e

t o

e x p r e s s


f u n c t i o n s h a s

b e e n

r e c e n t l y q u e s t i o n e d .

C a r o n

( 1 2 1 )

r e p o r t e d

t h a t

r a t


s p r e a d

o n t y p e

I

c o l l a g e n

a n d

w h e n

e x p o s e d

t o

m a t r i g e l

d i l u t e d

i n

t h e c u l t u r e

m e d i u m

t h e y

s h o w e d

i n c r e a s e d


o f

t h e

a l b u m i n

g e n e

w i t h o u t i nd u c t i o n

o f a

c u b o i d a l

c e l l

s h a p e .

T a b l e

4 .

M a t r i x

p r o t e i n s a f f e c t i n g

s u r v i v a l

a n d


f u n c t i o n s o f


i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

E f f e c t s

P r o t e i n

S u r v i v a l a F u n c t i o n s

R e f e r e n c e

C o l l a g e n s ,

f i b r o n e c t i n

a s

s u b s t r a t e s

+

E a r l y

d e c r e a s e

o r l o s s

J o h a n s s o n a n d H o o k

1 1 1 ) ,

M i c h a l o p o u l o s

a n d P i t o t

1 1 2 )

M a t r i g e l

+ +

M a n y

f u n c t i o n s

w e l l - p r e s e r v e d

B i s s e l l

e t

a l .

1 1 3 )

f o r a t

l e a s t

a

f e w

d a y s

C o l l a g e n

g e l

s a n d w i c h

+ F u n c t i o n s

i m p r o v e d b

L e e e t a l .

1 1 4 )

D u n n e t a l .

1 2 0 )

C o l l a g e n

f o r i m m o b i l i z a t i o n

+

F u n c t i o n s

i m p r o v e d

b

K o e b e

e t

a l .

1 1 5 )

I n c r e a s e d s u r v i v a l :

+ ,

a

f e w

d a y s ;

+ +

t o

+ + + ,

1

w e e k

t o

s e v e r a l w e e k s .

b i n

t h e s e

t w o

s y s t e m s , h e p a t o c y t e s

s t i l l

f o r m

a

m o n o l a y e r ;

r e s u l t s f o r a l i m i t e d

n u m b e r o f

f u n c t i o n s

e . g . ,

a l b u m i n

p r o d u c t i o n .


H e a l t h


*

V o l

1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

5 t 5



GUILLOUZO

R e c e n t l y , i m p r o v e d m a i n t e n a n c e

a n d

i n d u c i b i l i t y

o f

C Y P

e n z y m e s

w e r e

o b t a i n e d

i n r a t


c u l t u r e d

o n

c r u d e

l i v e r

m e m b r a n e

f r a c t i o n s

( 1 2 2 ) .

S a a d e t a l .

( 1 2 3 ) c o n c l u d e d t h a t

t h e s e r e s u l t s

c o u l d b e

e x p l a i n e d b y

t h e

p r e s e n c e

o f

a p p r e c i a b l e

a m o u n t s

o f

m a t r i x

c o m p o n e n t s

( e . g . ,

l a m i n i n a n d t y p e

I V

c o l l a g e n )

i n t h e

c r u d e

m e m b r a n e p r e p a r a t i o n s ( 1 2 3 ) .

C E L L - C E L L I N T E R A C T I O N S .

A n o t h e r

a p p r o a c h i s t o c r e a t e c e l l - c e l l


i n

v i t r o .

I n d e e d ,

t h e

l i v e r i s

a n

o r g a n

c o m p o s e d

o f m a n y

c e l l

t y p e s ,

a n d b o t h

h o m o t y p i c

a n d

h e t e r o t y p i c


m a y

i n f l u e n c e l i v e r -

s p e c i f i c

f u n c t i o n s

( T a b l e

5 ) .

W h e n

p l a c e d

i n

p u r e

c u l t u r e


r e a g g r e g a t e ,

b u t

i n t e r c e l l u l a r

c o m m u n i c a t i o n

t h r o u g h

g a p

j u n c t i o n s d i s a p p e a r s

w i t h i n

a

f e w

h o u r s .

A l t h o u g h

v a r i o u s f u n c t i o n s a r e

d e p e n d e n t

o n c e l l

d e n s i t y ,

w h e t h e r a t

l o w

o r

h i g h

d e n -

s i t y ,


s h o w

c o m p a r a b l e

s u r v i v a l

t i m e s a n d e x h i b i t

p h e n o t y p i c

c h a n g e s

i n

c o n v e n t i o n a l

c u l t u r e

c o n d i t i o n s , i n d i c a t i n g

t h a t

h o m o t y p i c

i n t e r a c t i o n s a r e n o t c r i t i c a l

i n

t h e m a i n t e n a n c e o f s p e c i f i c f u n c t i o n s

i n

v i t r o ( 8 3 ) .

T h e

f i r s t a t t e m p t s

t o

c o c u l t u r e

h e p a t o c y t e s w i t h o t h e r c e l l

t y p e s

s u c h a s

s i n u s o i d a l

c e l l s

( 1 2 4 )

a n d h u m a n

f i b r o -

b l a s t s

( 1 2 5 )

s h o w e d

o n l y

l i m i t e d

i m p r o v e -

m e n t

o f

h e p a t o c y t e

s u r v i v a l a n d f u n c t i o n .

A

c o n s i d e r a b l e

s t e p f o r w a r d

i n

l o n g - t e r m




w a s

m a d e

b y a d d i n g

a n o t h e r l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l

t y p e

( 1 2 6 ) .

When

c o c u l t u r e d w i t h

r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

p r o b a b l y

d e r i v e d

f r o m

p r i m i t i v e

b i l i a r y c e l l s , h e p a t o c y t e s

f r o m

v a r i o u s

s p e c i e s i n c l u d i n g

h u m a n s s u r v i v e

f o r s e v e r a l

w e e k s a n d

r e t a i n

v a r i o u s

l i v e r -

s p e c i f i c

f u n c t i o n s ;

t h e s e i n c l u d e

p r o d u c t i o n

o f

p l a s m a p r o t e i n s , e x p r e s s i o n

o f

b o t h

p h a s e

I

a n d

p h a s e

I I

d r u g

m e t a b o l i z i n g e n z y m e s ,

a n d t a u r o c h o l a t e

u p t a k e

( 5 2 , 7 1 , 1 2 7 - 1 3 5 ) .

C o c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s r e m a i n

a b l e t o

t r a n -

s c r i b e

s p e c i f i c

g e n e s a t

h i g h e r

v a l u e s

s t i l l

r e p r e s e n t i n g

2 0 t o

40

o f i n i t i a l

v a l u e s )

t h a n

t h o s e

m e a s u r e d

i n

c e l l s c u l t u r e d

i n

t h e

p r e s e n c e o f 2 d i m e t h y l s u l f o x i d e o r

o n m a t r i x

p r o t e i n s ( 6 9 ) . T h e m a i n t e n a n c e

o f d i f f e r e n t i a t e d

f u n c t i o n s i s a s s o c i a t e d

w i t h e a r l y

d e p o s i t i o n

o f

m a t r i x

p r o t e i n s

p r i m a r i l y b e t w e e n t h e

t w o

c e l l

t y p e s

( 7 1 , 1 2 6 , 1 2 8 ) a n d w i t h p r e s e r v a t i o n

o f


t h r o u g h

g a p

j u n c t i o n s

( 1 3 6 ) .

T h e s e

t w o f e a t u r e s

c o u l d

b e r e l a t e d

b e c a u s e

i n

p u r e h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

t h e

a d d i t i o n

o f

p r o t e o g l y c a n s i m p r o v e s

g a p

j u n c t i o n

a c t i v i t y ( 1 3 7 ) .

T h e

e n h a n c e d s u r -

v i v a l

a n d

f u n c t i o n o f


c o c u l -

t u r e d w i t h

r a t l i v e r

e p i t h e l i a l c e l l s

h a v e

b e e n

c o nf i rm e d b y m a n y

i n v e s t i g a t o r s

( 1 3 4 , 1 3 8 - 1 4 3 ) ;

t h e

i n d u c t i o n o f C Y P 2 B 1

a n d

CYP2B2

b y

p h e n o b a r b i t a l h a s

a l s o

b e e n d e m o n s t r a t e d

( 1 3 7 , 1 4 4 ) . M o r e o v e r ,

o t h e r

c e l l s

h a v e b e e n e f f e c t i v e ,

i n c l u d i n g

b o t h

l i v e r

e n d o t h e l i a l c e l l s

a n d

n o n h e p a t i c

c e l l s

( 1 4 5 - 1 4 7 ) .

S t u d i e s

f r o m

o u r

l a b o r a -

t o r y

( 1 4 8 , 1 4 9 ) h a v e

s h o w n

t h a t

t h e

p r e s -

e n c e

o f a n

i n t e g r a l

p l a s m a m e m b r a n e

g l y c o p r o t e i n i s

a

p r e r e q u i s i t e

t o o b t a i n

l o n g -

t e r m

s u r v i v a l



i n c o c u l t u r e .

T h i s

g l y c o p r o t e i n

i s

e x p r e s s e d

b y

b o t h


a n d r a t l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

a n d

i s

a l s o

f o u n d

i n s o m e

o t h e r t i s s u e s

( 1 4 8 , 1 4 9 ) . O n e

c o u l d

p o s t u l a t e t h a t n o n -

h e p a t i c c e l l s t h a t e x p r e s s

t h i s g l y c o p r o t e i n

a r e

p o t e n t i a l l y c a p a b l e

o f

i n t e r a c t i n g

w i t h

h e p a t o c y t e s . H o w e v e r ,

i t i s i m p o r t a n t t h a t

t h e s e

c e l l s

c e a s e

t o

d i v i d e

w h e n

t h e y

f o r m

c o n f l u e n t c e l l

m o n o l a y e r s w i t h h e p a t o c y t e s

a n d

t h a t ,

l i k e

r a t l i v e r e p i t h e l i a l c e l l s

( 6 9 ) ,

t h e y c a n b e s e p a r a t e d

f r o m


c e l l s . A s

i n

c o n v e n t i o n a l

c u l t u r e ,

t h e l e v e l s

o f f u n c t i o n s

i n

c o c u l t u r e a r e d e p e n d e n t o n

t h e


o f

t h e n u t r i e n t m e d i u m

( 1 5 0 ) . A s a r u l e

s o m e

q u a l i t a t i v e a n d

q u a n -

t i t a t i v e

c h a n g e s

o c c u r , a n d

t h e r e a p p e a r -

a n c e o f

f e t a l - l i k e

f u n c t i o n s

i s

n o t

t o t a l l y

p r e v e n t e d i n c o c u l t u r e ( 6 5 ) .

M o r e o v e r , i t

i s i m p o r t a n t t o

p o i n t o u t t h a t o u r c o c u l -

t u r e

s y s t e m i s

c o r t i c o s t e r o i d d e p e n d e n t

( 1 5 1 )

a n d t h a t

n o t a l l l i v e r e p i t h e l i a l c e l l

l i n e s a r e s i m i l a r l y

e f f i c i e n t t o

s t i m u l a t e

e x p r e s s i o n o f l i v e r - s p e c i f i c

f u n c t i o n s

i n


c e l l s .

T h e r e f o r e ,

i t i s c r i t i c a l

t o

e v a l u a t e

t h e

i n f l u e n c e

o f

e a c h

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l l i n e

o n

h e p a t o c y t e

f u n c t i o n ,

e . g . , b y m e a s u r i n g

a l b u m i n

p r o d u c t i o n i n

t h e c o c u l t u r e s o v e r

a 2 - w e e k

p e r i o d .

S p e c i f i c

f u n c t i o n s a r e

a l s o b e t t e r

p r e s e r v e d

i n

h e p a t o c y t e s c u l t u r e d

i n

a g g r e -

g a t e s .

T h e s e s t r u c t u r e s

a r e o b t a i n e d

b y

s e e d i n g

t h e c e l l s i n t o

a

d i s h

s o

t h e y

c a n n o t

a d h e r e t o t h e s u r f a c e b u t i n s t e a d

r e a g g r e -

g a t e

w i t h e a c h

o t h e r t o

f o r m

m u l t i l a y e r

s p h e r o i d s . S u c h t h r e e - d i m e n s i o n a l

c u l -

t u r e s h a v e b e e n

p r e p a r e d

f r o m f e t a l

( 1 5 2 ) ,

n e o n a t a l

( 1 5 3 , 1 5 4 ) ,

a n d a d u l t

( 1 5 5 )

h e p a -

t o c y t e s . D i s h e s c o a t e d w i t h

p o l y ( 2 - h y d r o x -

y e t h y l

m e t h a c r y l a t e ) a n d p o s i t i v e l y

c h a r g e d

p r i m a r i a d i s h e s

a r e u s e d

f o r

s p h e r o i d

f o r -

m a t i o n .

L o n g - t e r m

s e c r e t i o n

o f a l b u m i n

a n d

t r a n s f e r r i n

( 1 5 5 )

a n d

d e p o s i t i o n o f

m a t r i x

p r o t e i n s ( 1 5 3 ) h a v e

b e e n

d e m o n s t r a t e d .

S p h e r o i d s

f r e q u e n t l y

c o n t a i n

n o n p a r e n c h y -

m a l c e l l s , a n d i t

i s n o t c l e a r w h e t h e r

t h e s e

c e l l s a r e

e s s e n t i a l

f o r

l o n g - t e r m

s u r v i v a l

o f


C o m p a r e d t o

m o n o l a y e r h e p a -

t o c y t e c o c u l t u r e s , s p h e r o i d s s u f f e r f r o m

s o m e

m a j o r l i m i t a t i o n s :

S m a l l

a g g r e g a t e s

t e n d t o

f u s e

t o

f o r m

l a r g e r

a g g r e g a t e s ,

c e l l s i n

t h e

c e n t e r o f a g g r e g a t e s d o n o t

s u r v i v e , t h e n u m -

b e r

o f n o n p a r e n c h y m a l

c e l l s a n d


p e r a g g r e g a t e

c a n n o t b e

p r e c i s e l y e s t i m a t e d ,

a n d t h e s u r v i v a l

o f


i s

u s u a l l y

m o r e l i m i t e d

( 1 5 2 - 1 5 5 ) .

I n

s u m m a r y ,

a l t h o u g h a d u l t


c a n

e x p r e s s

v a r i o u s


f u n c t i o n s

f o r s e v e r a l

w e e k s

w h e n

p l a c e d

i n s o p h i s t i -

c a t e d c u l t u r e

c o n d i t i o n s ,

t h e y

d o

n o t

f u l l y

m i m i c

t h e

i n v i v o

s i t u a t i o n .

S o m e p h e n o -

t y p i c c h a n g e s o c c u r

e a r l y d u r i n g t h e i s o l a t i o n

p r o c e s s

a n d a f t e r s e e d i n g ,

p r o b a b l y

a s

a c o n -

s e q u e n c e

o f a n

a d a p t a t i o n o f p a r e n c h y m a l

c e l l s t o

a

n e w e n v i r o n m e n t . H o w e v e r ,

e v e n

i f

t h e y

a r e l o s t

r a p i d l y a f t e r

c e l l s e e d i n g ,

s o m e

f u n c t i o n s r e m a i n

i n d u c i b l e ,

a s s h o w n f o r

s u l -

f o t r a n s f e r a s e

a c t i v i t i e s ( 6 7 ) .

M o r e o v e r , t h e r e

i s c u r r e n t l y

n o e x p e r i m e n t a l

c o n d i t i o n

t h a t

a l l o w s

n o r m a l

h e p a t o c y t e s t o a c t i v e l y

p r o l i f e r a t e a n d t h e r e f o r e b e

s u b c u l t i v a t e d .

T a b l e 5 . I n f l u e n c e o f c e l l - c e l l i n t e r a c t i o n s o n s u r v i v a l a n d

l i v e r - s p e c i f i c f u n c t i o n s o f h e p a t o c y t e s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

E f f e c t s

F a c t o r s

S u r v i v a l a

F u n c t i o n s

R e f e r e n c e

H o m o t y p i c

f a c t o r s

( h e p a t o c y t e s +

h e p a t o c y t e s )

-

V a r i o u s f u n c t i o n s a r e r e l a t e d e i t h e r p o s i t i v e l y o r

n e g a t i v e l y

G u g u e n - G u i l l o u z o

( 8 3 )

t o

c e l l

d e n s i t y

H e t e r o t y p i c

f a c t o r s

H e p a t o c y t e s

+

K u p f f e r c e l l s

-

N o i m p r o v e m e n t

W a n s o n e t a l . ( 1 2 4 )

H e p a t o c y t e s + p r i m i t i v e

b i l i a r y

c e l l s b

+ + +

A

n u m b e r

o f f u n c t i o n s a r e w e l l

m a i n t a i n e d a t h i g h l e v e l s

G u g u e n - G u i l l o u z o e t

a l .

( 1 2 6 , 1 2 8 ) ,

B e g u e

e t a l .

1 2 7 )

H e p a t o c y t e s + l i v e r e n d o t h e l i a l

c e l l s b + + o r

-

L i m i t e d i m p r o v e m e n t

M o r i n e t a l .

( 1 3 8 )


+

3 T 3 c e l l s b + +

V a r i o u s f u n c t i o n s

b e t t e r

p r e s e r v e d

M e n d o z a - F i g u e r o a e t a l .

( 1 4 5 )

I n c r e a s e d s u r v i v a l :

- , n o ; + ,

a

f e w d a y s ;

+ +

t o + + + ,

1 w e e k t o s e v e r a l w e e k s .

b

A l l

t h e

c e l l s i n t e r a c t i n g w i t h


e x p r e s s

a l i v e r - s p e c i f i c r e g u l a t i n g

p r o t e i n

o n t h e i r

p l a s m a

m e m b r a n e 1 4 8 ) .



*

V o l

1 0 6 , S u p p l e m e n t 2

*

A p r i l

1 9 9 8

1 6



I N VITRO HEPATOTOXICllY

I S O L A T I O N

A N D C U L T U R E

OF H E P A T I C

NONPARENCHYMAL

C E L L S . K u p f f e r

a n d

e n d o t h e l i a l c e l l s

c a n

b e o b t a i n e d b y

t h e

c o l -

l a g e n a s e - p r o n a s e

m e t h o d

a n d

f u r t h e r s e p a -

r a t e d b y

e l u t r i a t i o n ( 1 5 6 ) .


a n d p r o p a g a t i o n

o f

l i v e r e n d o t h e l i a l

c e l l s

i n

c u l t u r e

h a v e

b e e n

d i f f i c u l t ,

t h o u g h

t o

s o m e

e x t e n t

s u c c e s s f u l

( 1 5 7 ) .

S t e l l a t e c e l l s a r e p u r i f i e d f r o m

n o n p a r e n c h y m a l

c e l l s

f i r s t

i s o l a t e d b y t h e

p r o n a s e - c o l l a g e n a s e m e t h o d ,

u s i n g

a

s i n g l e - s t e p d e n s i t y

g r a d i e n t

c e n t r i f u g a t i o n

w i t h

N i c o d e n z

( N y e g a a r d

a n d C o . , O s l o ,

N o r w a y ) a t a f i n a l c o n c e n t r a t i o n o f

1 1 . 4

( 1 5 8 ) .

F r e s h l y i s o l a t e d s t e l l a t e c e l l s d i s p l a y

a

m o r p h o l o g i c a p p e a r a n c e

s i m i l a r t o

t h a t

o b s e r v e d

i n s i t u . D u r i n g

t h e

f i r s t

3 d a y s

a f t e r

s e e d i n g , s t e l l a t e

c e l l s

a p p e a r

h o m o -

g e n o u s

a n d s h o w

c h a r a c t e r i s t i c m o r p h o l -

o g y

w i t h

l i p i d

d r o p l e t s

s u r r o u n d i n g

t h e

n u c l e u s .

D u r i n g t h e

f o l l o w i n g d a y s

t h e y

d i v i d e

a n d

t r a n s f o r m

i n t o

m y o f i b r o b l a s d i k e

c e l l s

e x p r e s s i n g

d e s m i n

a n d

i s o - a - a c t i n a n d

p r o d u c i n g i n c r e a s e d a m o u n t s

o f c o l l a g e n .

B o t h

i n t r a h e p a t i c

b i l i a r y

a n d

g a l l b l a d d e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

c a n

b e

i s o l a t e d a n d c u l t u r e d .

I n t r a h e p a t i c b i l i a r y

c e l l s

h a v e

b e e n

o b t a i n e d

b y i m m u n o i s o l a t i o n w i t h

a n

a n t i b o d y

t h a t

r e c o g n i z e s

a c e l l - s u r f a c e g l y c o p r o t e i n l o c a l -

i z e d

o n l y

o n

t h e s e

c e l l s

i n

t h e

l i v e r ; t h e y

c a n

b e m a i n t a i n e d

f o r a

s h o r t

p e r i o d u s i n g

s t a n -

d a r d

c u l t u r e c o n d i t i o n s

( 1 5 9 ) .

G a l l b l a d d e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

a r e

o b t a i n e d

f r o m


m u c o s a

b y


t r e a t m e n t

( 1 6 0 , 1 6 1 ) ;

t h e y

a t t a c h

t o

v a r i o u s

s u b s t r a t e s a n d

r a p i d l y

p r o l i f e r a t e .

G a l l b l a d d e r

b i l i a r y

c e l l s

e x p r e s s

s p e c i f i c

m a r k e r s

s u c h

a s y - g l u t a m y l t r a n s p e p -

t i d a s e

a n d

c y t o k e r a t i n s

a n d

m a i n t a i n

m u c u s

s e c r e t i o n

f o r a t l e a s t

1 w e e k

i n c u l t u r e

( 1 6 2 ) .

L i v e r C e l l

L i n e s .

C h a r a c t e r i s t i c s

o f l i v e r

c e l l

l i n e s

i n c l u d e

u n l i m i t e d

s u b c u l t i v a t i o n

a n d c e l l


i n

l a r g e

n u m b e r s .

H e p a t o c y t e

c e l l l i n e s

c a n b e o b t a i n e d

f r o m

h e p a t o m a s

o r a f t e r

t r a n s f e c t i o n

o f

n o r m a l


w i t h

v i r a l

o r c e l l u l a r

DNA.

V a r i o u s

h e p a t o m a

c e l l

l i n e s h a v e

b e e n e s t a b -

l i s h e d f r o m r o d e n t

o r h u m a n

h e p a t o m a s ;

h o w e v e r ,

n o n e

o f t h e m

e x p r e s s

t h e f u l l

s p e c t r u m

o f

d r u g m e t a b o l i z i n g e n z y m e s .

M o r e o v e r ,

m a r k e d

d e v i a t i o n

o f

t h e

p h e n o -

t y p e

a n d

g e n o t y p e u s u a l l y

o c c u r s

w i t h

t i m e

i n

c u l t u r e .

S i m i l a r l y ,

n o n e o f t h e

i m m o r t a l i z e d

r o d e n t

a n d h u m a n

h e p a t i c

c e l l

l i n e s

e s t a b l i s h e d t o

t h e

p r e s e n t

h a v e

r e t a i n e d a l l

t i s s u e - s p e c i f i c

f u n c t i o n s a n d

c a n

b e

c o n s i d e r e d

t o

r e f l e c t t h e i n v i v o

s i t u a t i o n .

N o n p a r e n c h y m a l

c e l l

l i n e s

h a v e

a l s o

b e e n

o b t a i n e d .

T h u s ,

r a t l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s , p r o b a b l y

d e r i v e d

f r o m

p r i m i t i v e

b i l i a r y

c e l l s

a n d

i s o l a t e d

b y t r y p s i n i s a t i o n

o f

t h e

l i v e r o f

y o u n g

r a t s ,

t r a n s f o r m i n

v i t r o

a n d

c a n

b e

c u l t u r e d

i n d e f i n i t e l y . T h e y

e x p r e s s

o n l y

a

f e w h e p a t i c f u n c t i o n s ; e . g . , C Y P 2 E 1

a n d

e p o x i d e

h y d r o l a s e a c t i v i t y

( 1 6 3 ) .


F r a c t i o n s . S u b c e l l u l a r

f r a c t i o n s ,

i . e . ,

t i s s u e

h o m o g e n a t e s ,

m i c r o -

s o m e s ,

a n d p u r i f i e d

o r g a n e l l e s

s u c h a s

m i t o -

c h o n d r i a

a n d

n u c l e i ,

a r e a l s o

u s e f u l

i n

s t u d y i n g

m e c h a n i s m s o f

d r u g -

a n d c h e m i -

c a l - i n d u c e d

h e p a t o t o x i c i t y . T h e l i v e r

9 0 0 0

x

g

s u p e r n a t a n t

f r a c t i o n a n d m i c r o -

s o m e s

f o r t i f i e d

w i t h

c o f a c t o r s h a v e

l o n g

b e e n

r e c o g n i z e d

a s

a

g o o d m e t a b o l i z i n g s y s -

t e m

f o r

a c t i v a t i o n o f x e n o b i o t i c s i n i n

v i t r o

m u t a g e n i c i t y

t e s t i n g p r o c e d u r e s ( 1 6 4 ) .

M i c r o s o m e s

a r e

a l s o u s e d

t o

d e t e c t

l i p i d

p e r o x i d a t i o n

i n d u c e d b y

h e p a t o t o x i n s .

I s o l a t e d

m i t o c h o n d r i a

a r e u s e d t o s t u d y t h e

e f f e c t s

o f

c h e m i c a l s

o n o x i d a t i v e p h o s p h o -

r y l a t i o n , ATP s y n t h e s i s , a n d [ - o x i d a t i o n o f

f a t t y a c i d s . I s o l a t e d n u c l e i a r e u s e d i n r u n -

o n

e x p e r i m e n t s f o r g e n e


a n a l y s e s .

L i k e

p e r f u s e d

l i v e r

a n d

s u s p e n d e d

i s o l a t e d h e p a t o c y t e s ,

s u b c e l l u l a r f r a c t i o n s

a r e

f u n c t i o n a l

o n l y

f o r a s h o r t

p e r i o d .

G e n e t i c a l l y

E n g i n e e r e d C e l l s . Y e a s t s ,

b a c t e r i a , i n s e c t c e l l s ,

a n d

n o n h e p a t i c m a m -

m a l i a n

c e l l s

h a v e

b e e n

t r a n s f e c t e d

w i t h

c D N A - e n c o d i n g

h u m a n C Y P s

a n d

e x p r e s s

t r a n s i e n t l y

o r

s t a b l y

o n e o r s e v e r a l h u m a n

C Y P s .

T h e y

a r e u s e f u l t o

i d e n t i f y

C Y P s

i n v o l v e d

i n t h e m e t a b o l i s m o f

c h e m i c a l s ,

c o v a l e n t

b i n d i n g , a n d

d r u g

i n h i b i t i o n

s t u d i e s

( 1 6 5 ) .

M o r e

r e c e n t l y ,

c e l l s t r a n s -

f e c t e d

w i t h t h e cDNA f o r

v a r i o u s

p h a s e

I I

e n z y m e s

h a v e a l s o b e e n

o b t a i n e d

( 1 6 6 , 1 6 7 ) .

An

u n l i m i t e d

n u m b e r

o f

t r a n s f e c t e d

c e l l s

c a n

b e

p r e p a r e d

i n

a n

i n e x p e n s i v e w a y .

I n

V i t r o

L i v e r M o d e l s

i n

T o x i c i t y T e s t i n g

T h e

e v a l u a t i o n

o f

t h e

s a f e t y

o f a

c h e m i c a l

b e f o r e

h u m a n

e x p o s u r e

r e p r e s e n t s

a c r i t i c a l

s t e p .

C h r o n i c

t o x i c i t y

s t u d i e s

d u r i n g t h e

d e v e l o p m e n t

o f a n e w

d r u g

a r e

t i m e c o n -

s u m i n g

a n d

c o s t l y . T h e y

a r e

u s u a l l y

p e r -

f o r m e d o n t wo

a n i m a l

s p e c i e s :

a r o d e n t

a n d

a

n o n r o d e n t s u c h a s

d o g

o r

m o n k e y .

B e c a u s e m a r k e d



f r e q u e n t l y

e x i s t

i n

b o t h t h e

r a t e s a n d t h e

r o u t e s

o f

d r u g

m e t a b o l i s m ,


b e t w e e n

h u m a n s

a n d

a n i m a l s ,

t o x i c o l o g i c

d a t a

o b t a i n e d

i n

t w o a n i m a l

s p e c i e s

c a n n o t

b e

e x t r a p o l a t e d

t o t h e

h u m a n s i t u a t i o n

w i t h o u t

r i s k .

F o r

t h e s e r e a s o n s

a s w e l l a s

f o r

e t h i c a l

c o n s i d e r a t i o n s ,

t h e r e

i s

c o n s i d e r a b l e i n t e r -

e s t i n

r e d u c i n g

a n i m a l

u s a g e

a n d

t o x i c i t y

t e s t i n g

c o s t s .

M o r e o v e r ,

i t i s

d e s i r a b l e t o

c l e a r l y

e s t a b l i s h

h u m a n

r i s k

b e f o r e h u m a n

e x p o s u r e

t o

c h e m i c a l s .

T h i s

e x p l a i n s

w h y

i n

v i t r o

a p p r o a c h e s

h a v e r e c e i v e d

i n c r e a s e d

a t t e n t i o n i n

r e c e n t y e a r s .

B e c a u s e

t h e l i v e r

i s t h e p r i m a r y

t a r g e t

o r g a n ,

i n v i t r o l i v e r

s y s t e m s ,

e s p e c i a l l y

t h e

i s o l a t e d h e p a t o c y t e

m o d e l , h a v e b e e n w i d e l y u s e d

f o r t o x i c i t y

t e s t i n g . T h e y h a v e

t h e

p o t e n t i a l

t o

p r o v i d e

i n f o r m a t i o n a b o u t h o w

c h e m i c a l s

a r e

m e t a b -

o l i z e d

a n d

h o w

t h e

l i v e r

c a n b e

a d v e r s e l y

a f f e c t e d

b y

a t o x i c a g e n t .

T h i s

i m p l i e s t h a t

i n

v i t r o l i v e r

p r e p a r a t i o n s

a r e

m e t a b o l i c a l l y

c o m p e t e n t a n d p r o d u c e t h e

s a m e m e t a b o -

l i t e s

a s i n v i v o . I s o l a t e d h e p a t o c y t e s ,

e i t h e r

i n

s u s p e n s i o n o r i n

p r i m a r y

c u l t u r e ,

a r e

u s e d f o r

s c r e e n i n g e v a l u a t i o n

o f d i f f e r e n t

c l a s s e s

o f c h e m i c a l s ; c y t o t o x i c i t y

c a n b e

a s s e s s e d b y n o n s p e c i f i c

a n d / o r l i v e r - s p e c i f i c

e n d p o i n t s . H o w e v e r ,

t h e m o s t f r e q u e n t

u s e

o f

t h e s e m o d e l s i s f o r m e c h a n i s t i c

s t u d i e s

o f

t h e a c t i o n o f

h e p a t o t o x i n s .

C y t o t o x i d t y

M e a s u r e s

A

w i d e

a r r a y

o f

m o r p h o l o g i c

a n d

b i o c h e m -

i c a l m a r k e r s a r e a v a i l a b l e f o r o b t a i n i n g

i n f o r m a t i o n

a t t h e

c e l l u l a r a n d m o l e c u l a r

l e v e l s t o

d e t e c t

a n d m e a s u r e c h e m i c a l -

i n d u c e d p e r t u r b a t i o n s

( 1 6 8 ) .

S e v e r a l

c l a s s i -

f i c a t i o n s

c a n

b e

p r o p o s e d :

e . g . , p a r a m e t e r s

t h a t

e s t i m a t e

p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y

a n d

p a r a m e t e r s

t h a t e s t i m a t e


e f f e c t s ;

p a r a m e t e r s

t h a t

a s s e s s i r r e v e r s i b l e

c y t o t o x i c i t y

c e l l

d e a t h )

a n d r e f l e c t r e v e r s i b l e

c h a n g e s ;

o r

n o n s p e c i f i c a n d


e n d

p o i n t s .

N o n s p e c i f i c

E n d P o i n t s .


e n d

p o i n t s

a r e

u s u a l l y

u s e d t o

e s t i m a t e

i r r e -

v e r s i b l e c e l l u l a r

d a m a g e .

T h e c h o i c e o f


i n d i c a t o r

d e p e n d s

o n

a

n u m b e r

o f f a c t o r s t h a t

i n d u d e c o r r e s p o n d e n c e

w i t h

t h e

l e s i o n

b e i n g

i n d u c e d

i n

v i v o ,

r e l i a b i l i t y ,

r e p r o d u c i b i l i t y

a n d

s e n s i t i v i t y ,

c o n v e n i e n c e ,

c o s t ,

a n d

s p e c i e s

s p e c i f i c i t y .


c r i t e r i a

m a y

m o n i t o r

m o r p h o l o g i c c h a n g e s ,

m e m b r a n e

i n t e g r i t y ,


p e r t u r b a -

t i o n s ,

a n d m e t a b o l i c a c t i v i t i e s .

L i g h t

m i c r o -

s c o p i c

e x a m i n a t i o n

i s

u s e f u l t o

s u p p o r t

b i o c h e m i c a l

e n d

p o i n t s ;

c e l l

r o u n d i n g ,

c e l l

d e t a c h m e n t , b l e b b i n g

i n d i c a t i v e o f c e l l

m e m b r a n e

a n d

c y t o s k e l e t o n

d i s t u r b a n c e ,

v a c u o l i z a t i o n ,

a n d


l i p i d

d r o p l e t s

c a n b e

v i s u a l i z e d ,

w h e r e a s t r a n s -

m i s s i o n

e l e c t r o n

m i c r o s c o p y

i s

r e q u i r e d

t o

d e t e c t

s u b t l e a l t e r a t i o n s

o f

o r g a n e l l e s .

E n d

p o i n t s

f o r i n

v i t r o


e v a l u a t i o n

i n c l u d e

t h e

f o l l o w i n g :

M o r p h o l o g i c p a r a m e t e r s

*

L i g h t

m i c r o s c o p y :

c e l l

s h a p e ,

n u c l e a r

a n d

c y t o p l a s m i c a l t e r a t i o n s ;

a c c u m u l a t i o n

o f

v a c u o l e s ;

l i p i d

d r o p l e t s ,

f o r m a t i o n

o f

b l e b s ;

c e l l a t t a c h m e n t

a n d d e t a c h m e n t

c e l l c o u n t )

*

E l e c t r o n

m i c r o s c o p y :

a l t e r a t i o n s o f

o r g a n e l l e s


H e a l t h


*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

5 1 7



A .

G U I L L O U Z O

B i o c h e m i c a l

p a r a m e t e r s

*

P l a s m a m e m b r a n e

i n t e g r i t y :

p r o t e i n

o r

DN A

c o n t e n t ;

t r y p a n

b l u e

e x c l u s i o n

t e s t ; e n z y m e

l e a k a g e

l a c t a t e

d e h y d r o g e -

n a s e

[ L D H ] ,

t r a n s a m i n a s e s ) ;

r e l e a s e

o f

5 1 C r ; n e u t r a l

r e d

u p t a k e

*

A l t e r a t i o n s o f

c e l l

p e r m e a b i l i t y : l e a k a g e

o f

i o n s a n d s m a l l m o l e c u l e s

( K +

c o n -

c e n t r a t i o n ;

C a 2 +

f l u x ) ;


o f

e x o g e n o u s

m o l e c u l e s

s u c c i n a t e , e t c . )

* M e t a b o l i c

p a r a m e t e r s :

3 - [ 4 , 5 - d i m e t h y l -

t h i a z o l - 2 - y l ]

- 2 , 5 - d i p h e n y l - t e t r a z o l i u m

b r o m i d e

( M T T )

t e s t

( r e d u c t i o n

o f

a

f o r m a z a n

s a l t ) ;

A TP

c o n t e n t ;

p r o t e i n

n e o s y n t h e s i s ;

l a c t a t e / p y r u v a t e

r a t i o ;


( G S H ) c o n t e n t ;

l i p i d

p e r o x i d a t i o n ;

c o v a l e n t

b i n d i n g

P L A S M A M E M B R A N E

D I S T U R B A N C E S .

L o s s

o f p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y .

A s s a y s

f o r

l o s s

o f

m e m b r a n e

i n t e g r i t y

a r e i n d i c a t o r s

o f

i r r e -

v e r s i b l e c e l l

i n j u r y ;

t h e y

i n c l u d e

c e l l

c o u n t

( p e r c e n t a g e

o f a t t a c h e d

c e l l s ) ,

t r y p a n

b l u e

e x c l u s i o n ,

a n d

c y t o s o l i c

e n z y m e

l e a k a g e .

C e l l

d e a t h

n e c r o s i s )

i s t h e

c o n s e q u e n c e

o f

l o s s

o f

p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y

a s s e s s e d

b y

t r y p a n

b l u e

u p t a k e

a n d

l e a k a g e

o f

c y t o s o l i c

e n z y m e s .

T h e

t r y p a n

b l u e

e x c l u -

s i o n t e s t

i s

w i d e l y

u s e d

t o e s t i m a t e

t h e

p e r -

c e n t a g e

o f

v i a b l e c e l l s

i n

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e

s u s p e n s i o n s . S e v e r a l

e n z y m e s

a r e

u s e d

f o r

m o n i t o r i n g c e l l

v i a b i l i t y .

T h e


L DH

t o

t o t a l

L DH

r a t i o

c o r r e l a t e s

b e t t e r

t h a n t h a t o f

o t h e r

e n z y m e s

w i t h

m o r p h o -

l o g i c

c h a n g e s o b s e r v e d

b y p h a s e - c o n t r a s t

m i c r o s c o p y

a n d c e l l

v i a b i l i t y

a s s e s s e d

b y

t r y -

p a n

b l u e

e x c l u s i o n

( 1 6 9 , 1 7 0 ) .

T h i s

g r e a t e r

s e n s i t i v i t y

o f

L DH c a n

b e

e x p l a i n e d

b y

t h e

i n t r a c e l l u l a r

c o m p a r t m e n t a l i z a t i o n o f

t r a n s a m i n a s e s ;

t h u s

8 0

t o

8 5

o f

a s p a r t a t e

a m i n o t r a n s f e r a s e

i s

f o u n d

i n

m i t o c h o n d r i a .

H o w e v e r ,

L DH

i s n o t a

c o n s t a n t

r e l i a b l e

i n d i c a t o r o f

l o s s o f


i n t e g r i t y a n d c e l l

d e a t h ;

i t

i s

a

l e s s r e l i a b l e

a n d

l e s s

s e n s i t i v e

p a r a m e t e r

f o r

h u m a n

h e p a t o c y t e s t h a n f o r t h e i r

r o d e n t

c o u n t e r -

p a r t s

( 1 7 1 , 1 7 2 ) .

R e l i a b l e v a l u e s

a r e

o b t a i n e d

b y

t h e

d e t e r m i n a t i o n o f

i n t r a c e l l u -

l a r

L DH

( 1 7 2 ) ,

a n

i n d e x a l s o

u s e d

t o

c o u n t

v i a b l e


( 1 1 7 , 1 7 3 ) .

H o w e v e r ,

i n

s o m e

c a s e s ,

i t

c o u l d

b e

a d v i s a b l e

t o a l s o

d e t e r m i n e i f

v i a b l e c e l l s h a v e

d e t a c h e d .

T h e

r e l e a s e o f

5 ' C r i s

a n o t h e r

e n d

p o i n t

o f

c e l l

d e a t h ;

i t

m e a s u r e s

m e m b r a n e

i n t e g r i t y . T h i s

i n d e x h a s

s o m e


b e c a u s e t h e c e l l s

m u s t

b e

p r e l o a d e d w i t h

t h e

i s o t o p e

a n d

5 1 C r i s

n o t

e n t i r e l y r e l e a s e d

b y l y s e d

c e l l s .

M o s t

o f

t h e

t e s t s

u s e d t o

e s t i m a t e

i r r e v e r s i b l e

c e l l u l a r d a m a g e

c a n b e

c o n -

d u c t e d

i n

9 6 - w e l l

p l a t e s w i t h

3 0 , 0 0 0

c e l l s / w e l l . A

n u m b e r o f

t e s t s

u s e d t o e v a l u a t e

c e l l

d e n s i t y

i n

t h e

c u l t u r e s

a r e no w

m i n i a t u r i z e d a n d

a u t o m a t e d

( 1 7 4 ) .

D o s e - r e s p o n s e c u r v e s

a r e

c a l c u l a t e d f r o m

t h e r e s u l t s

o b t a i n e d ,

t h e n

t h e r e s u l t s a r e

s u m m a r i z e d a s

m e d i a n

i n h i b i t i o n

c o n c e n -

t r a t i o n

( I C 5 0 )

v a l u e s ; i . e . ,

t h e

c o n c e n t r a -

t i o n s

o f t e s t

c h e m i c a l s t h a t

m o d i f y

t h e

r e s p o n s e o f

t e s t w e l l s

b y

50

( 1 7 5 ) .

I C I O

v a l u e s

a r e

s o m e t i m e s

u s e d ,

a s

t h e y

a r e

c o n -

s i d e r e d t h e

l o w e s t


c a u s i n g

s t a t i s t i c a l l y

s i g n i f l c a n t

c y t o t o x i c

e f f e c t s

( 1 7 6 ) .

H o w e v e r ,

t h e

I C 5 0

v a l u e i s

u s u a l l y

c o n s i d e r e d

t h e b e s t

i n d i c a t o r o f

i n

v i t r o


b e c a u s e

i t i s

t a k e n f r o m

t h e

m i d d l e

o f

t h e

d o s e - r e s p o n s e c u r v e

( 1 7 6 ) .

A n o t h e r

i n d e x , i . e . ,

t h e

maximum n o n -

t o x i c


o v e r

a g i v e n

i n c u b a -

t i o n

p e r i o d ,

c a n

a l s o

b e c a l c u l a t e d

a n d

i s

u s e f u l

f o r

d e s i g n i n g l o n g - t e r m

t o x i c i t y

s t u d i e s

w i t h

r e p e a t e d a d d i t i o n s

o f

t h e

c h e m i c a l

( 1 7 7 ) . T h e m o s t

w i d e l y

u s e d

t e s t s

q u a n t i t a t e

s o m e

c e l l u l a r c o m p o n e n t s

s u c h a s DN A a n d

p r o t e i n s

o r

e s t i m a t e t h e

n u m b e r

o f v i a b l e c e l l s

e . g . , b y

t h e

r e d u c -

t i o n

o f M T T

b y

m i t o c h o n d r i a l

s u c c i n a t e

d e h y d r o g e n a s e s o r t h e

u p t a k e o f

n e u t r a l

r e d

i n

l y s o s o m e s ,

t h e

l a t t e r

b e i n g

f r e q u e n t l y

m o r e

s e n s i t i v e ) .

R e v e r s i b l e


a l t e r a t i o n s .

O t h e r

i n d i c e s o f

t o x i c i t y

m a y r e f l e c t

r e v e r s i b l e

i n j u r y . T h u s

i n c r e a s e d

p e r m e -

a b i l i t y o f

p l a s m a m e m b r a n e s

t o i o n s

a n d

s m a l l

m o l e c u l e s

p r e c e d e s t o t a l l o s s

o f c e l l

v i a b i l i t y . A

l o s s o f i n t r a c e l l u l a r

K +

a n d a l t e r -

a t i o n

o f

C a 2 +

i o n

f l u x a r e

u s u a l l y

o b s e r v e d .

C h a n g e s

i n

0 2

c o n s u m p t i o n

e s t i m a t e d

a f t e r

a d d i t i o n o f

e x o g e n o u s s u c c i n a t e

a l s o

p r e c e d e i r r e v e r s i b l e

i n j u r y .

S U B C E L L U L A R

C H A N G E S . W i t h

t h e

e x c e p t i o n

o f d i r e c t a c t i o n

o f

a t o x i c

c o m -

p o u n d o n

t h e

c e l l u l a r

m e m b r a n e ,

s u b c e l l u -

l a r

c h a n g e s a l s o o c c u r

p r i o r t o l o s s

o f

p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y .


c h a n g e s

c a n

b e v i s u a l i z e d

b y

f u n c t i o n a l

c h a n g e s

a n d

e l e c t r o n

m i c r o s c o p i c e x a m i n a -

t i o n . T h e

f u n c t i o n a l

i n d i c a t o r s a r e

b a s e d

o n

e v a l u a t i o n

o f

e n e r g y

c o n s e r v a t i o n ,

e . g . ,

A TP

c o n t e n t

a n d m e t a b o l i c

c o m p e t e n c e ,

e . g . ,

l a c t a t e / p y r u v a t e

r a t i o ,

a n d

p r o t e i n

s y n -

t h e s i s .

B o t h

s e c r e t e d

a n d


n e o s y n t h e s i z e d p r o t e i n s

c a n

b e

e s t i m a t e d .

M e t a b o l i c

d i s t u r b a n c e s m u s t

b e

s i g n i f i c a n t

a n d


t o

b e t a k e n

i n t o

c o n s i d e r -

a t i o n .

T h e y

o f t e n

f a r

p r e c e d e i r r e v e r s i b l e

c e l l u l a r

i n j u r y .

W h e t h e r

t h e

e f f e c t s

a r e

r e v e r s i b l e i s

a l s o a n

i m p o r t a n t q u e s t i o n t h a t

i s

r a r e l y

a n s w e r e d ( 1 7 8 ) .

OTHER

I N D I C A T O R S OF

R E V E R S I B L E

C E L L U L A R

D I S T U R B A N C E S . O t h e r

i n d i c a -

t o r s

o f

r e v e r s i b l e c e l l u l a r

d i s t u r b a n c e s

e x i s t

t h a t

i n d i c a t e

a

p o t e n t i a l f o r

i n j u r y

w i t h o u t

i n s i g h t

i n t o

p a r t i c u l a r

s i t e s ) .

T h e m o s t

f r e q u e n t l y

u s e d i n d i c a t o r s t h a t

f i t

i n t o t h i s

c a t e g o r y

a r e

G S H

c o n t e n t ,

l i p i d

p e r o x i d a -

t i o n ,

a n d

c o v a l e n t

b i n d i n g

o f

r e a c t i v e

c o m p o u n d s

t o

c e l l u l a r

m a c r o m o l e c u l e s .

G l u t a t h i o n e

l e v e l s .

T h e

t r i p e p t i d e

G S H

i s

t h e m o s t

e f f i c i e n t

p r o t e c t i o n

o f

t h e

c e l l s

a g a i n s t

r e a c t i v e

m e t a b o l i t e s a n d

f r e e r a d i -

c a l s .

GS H i s a n

e s s e n t i a l

c o f a c t o r f o r

G S H

p e r o x i d a s e

a n d

r e m o v e s

h y d r o p e r o x i d e s ;

i t

i s

c o n v e r t e d

t o

i t s o x i d i z e d f o r m

( G S S G ) .

G S H i s a l s o

i n v o l v e d

i n t h e

c o n j u g a t i o n

a n d

i n a c t i v a t i o n

b y

G S T ,

o f

r e a c t i v e


f o r m e d

b y

o x i d a t i o n r e a c t i o n s .

I n t r a c e l l u l a r

G S H l e v e l s

a r e

u s u a l l y

mea-

s u r e d

b y

a

f l u o r i m e t r i c m e t h o d .

GSSG i s

t o x i c

t o

t h e


m e d i u m . I t i s

c o n -

v e r t e d

b a c k t o

G S H

b y

t h e G S H

r e d u c t a s e

p a t h w a y .

T h e

m o s t

c o m m o n

p a t h w a y

o f

G S H

d e p l e t i o n

i n

d r u g t o x i c i t y

i s

e x c e s s i v e

c o n s u m p t i o n

o f

GS T

w i t h o u t

r e c o v e r y .

O n e

o f

t h e

c o n s e q u e n c e s

o f

G S H

d e p l e t i o n

c a n

b e t h e

m o d i f i c a t i o n o f

t h e

s u l f h y d r y l

g r o u p s

t o

a r y l a t i n g

a n d

o x i d i z i n g

s p e c i e s

1 7 9 ) .

S e v e r a l

x e n o b i o t i c s

i n d u c e

a n

o x i d a -

t i v e

s t r e s s

t h a t r e s u l t s

i n

S - t h i o l a t i o n o f

p r o t e i n s ,

p r e s u m a b l y b y

t h i o l - d i s u l f a t e

e x c h a n g e

( 1 8 0 ) .

T w o

m e c h a n i s m s

o f d e t h i -

o l a t i o n

o f

p r o t e i n s

h a v e b e e n

i d e n t i f i e d ,

b o t h

u l t i m a t e l y

r e q u i r i n g

G S H

a n d

e n z y -

m a t i c

r e d u c t i o n

b y

r e d u c e d

n i c o t i n a m i d e

a d e n i n e

d i n u c l e o t i d e

p h o s p h a t e :

one

i n v o l v e s

G S H

a n d G S H

r e d u c t a s e

a n d t h e

o t h e r

i n v o l v e s

t h i o r e d o x i n a n d

t h i o r e d o x i n

r e d u c t a s e ,

a

t h i o l r e d u c t a n t

s h o w i n g

a

b r o a d

s p e c i f i c i t y

f o r

r e d u c t i o n

o f

d i s u l f i d e s

( 1 8 0 ) .

G S H i s

a l s o

p r e s e n t

i n

m i t o c h o n d r i a ;

i t

p r e v e n t s

t h e

e f f e c t s o f

o x i d a n t s

g e n e r a t e d

d u r i n g

o x i d a t i v e

p h o s p h o r y l a t i o n

o n s e n s i -

t i v e t h i o l

g r o u p s ( 1 8 1 ) .

M i t o c h o n d r i a

r e l y

o n G S H

p e r o x i d a s e ,

a n d h e n c e

o n

G S H ,

t o

d e t o x i f y

h y d r o p e r o x i d e s .

B o t h

G S H a n d G S S G

c a n b e

m e a s u r e d

e n z y m a t i c a l l y

o r

d e t e c t e d

b y

h i g h - p e r f o r -

m a n c e

l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ,

b u t b o t h

m e t h o d s l a c k

s e n s i t i v i t y .

C o n s e q u e n t l y ,

i n t r a c e l l u l a r GS H l e v e l s a r e

u s u a l l y

m e a s u r e d

b y

a f l u o r i m e t r i c

m e t h o d

1 8 2 ) .

L i p i d

p e r o x i d a t i o n .

L i p i d


r e s u l t s

f r o m


o f

u n s a t u r a t e d

l i p i d c o m p o n e n t s

w i t h

o x y g e n

f r e e

r a d i c a l s

o r

e x c e s s

H 2 0 2

g e n e r a t e d

b y

t o x i c c o m -

p o u n d s d u r i n g

m e t a b o l i s m .

V a r i o u s

a n a -

l y t i c a l

m e t h o d s

a r e

u s e d t o

m e a s u r e

l i p i d


p r o d u c t s

i n

v i t r o ; t h e y

a r e

b a s e d o n

t h e

d e t e c t i o n o f

i n t e r m e d i a t e s ,

r e a c t a n t s ,

a n d

e n d

p r o d u c t s

o f

l i p i d

p e r o x i -

d a t i o n .

T h e m e t h o d s

i n c l u d e

m e a s u r e m e n t

o f

m a l o n d i a l d e h y d e f o r m a t i o n

u s i n g

t h e

t h i o b a r b i t u r i c a c i d

r e a c t i o n ,

s p e c t r o p h o t o -

m e t r i c


l i p i d - c o n j u g a t e d


P e r s p e c t i v e s * V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l 1 9 9 8

18



I N

W T R O HEPATOTOXICITY

d i e n e s ,

m e a s u r e m e n t

o f e v o l v e d

g a s e o u s

h y d r o c a r b o n s

( e t h a n e a n d p e n t a n e ) ,

q u a n -

t i f i c a t i o n o f f l u o r e s c e n t

p i g m e n t s ,

a n d

c h e m i l u m i n e s c e n c e

( 1 8 3 ) .

Tw o

w i d e l y

u s e d

m a r k e r s

o f

l i p i d


a r e

e x t r a c e l l u l a r f r e e

m a l o n d i a l d e h y d e

f o r m a -

t i o n

( a l t h o u g h

i t

a p p e a r s

t o

b e

r e l a t e d t o

o n l y

1 0

o f t h e t o t a l l i p i d s

o x i d i z e d e s t i -

m a t e d o n

t h e u l t r a f i l t r a t e

o f c u l t u r e

m e d i u m

b y s i z e - e x c l u s i o n

c h r o m a t o g r a -

p h y )

a n d c o n j u g a t e d

d i e n e s e v a l u a t e d

b y

t h e

s e c o n d - d e r i v a t i v e

u l t r a v i o l e t

s p e c -

t r o s c o p y

o f t h e c e l l l i p i d

e x t r a c t ( 1 8 4 ) .

A

p r o m i s i n g m e t h o d

i s t h e d e t e c t i o n

o f f r e e

r a d i c a l s b y

s p i n

t r a p p i n g

i n

w h o l e c e l l s b y

e l e c t r o n p a r a m a g n e t i c

r e s o n a n c e

( 1 8 5 ) .

C o v a l e n t b i n d i n g .

C o v a l e n t b i n d i n g

o f

r e a c t i v e

c o m p o u n d s t o

c e l l u l a r m a c r o -

m o l e c u l e s

h a s

b e e n c o n s i d e r e d

t o b e a n

i m p o r t a n t

m e c h a n i s m

o f

h e p a t o t o x i c i t y

b y

x e n o b i o t i c s

( 1 8 6 ) .

H o w e v e r ,

c e l l u l a r

t a r g e t s ( m a i n l y p r o t e i n s )

a n d t h e i r i n t r a -

c e l l u l a r l o c a t i o n

r e m a i n

o b s c u r e

a n d

t h e

s i g n i f i c a n c e

o f c o v a l e n t

b i n d i n g

o f

r e a c t i v e

c h e m i c a l s t o p r o t e i n s

i n t h e

a p p e a r a n c e

o f

c e l l d e a t h

i s n o t o b v i o u s .

M o r e o v e r ,

i t

h a s

b e e n

r e p o r t e d

t h a t

i n


t r e a t e d

w i t h

a c e t a m i n o p h e n ,

c o v a l e n t b i n d i n g

a s s o -

c i a t e d w i t h d e n a t u r e d

c e l l

m a t e r i a l

i s

a b o u t

t w i c e t h e

l e v e l o f

b i n d i n g

m e a s u r e d

i n

v i a b l e

c e l l s

( 1 8 7 ) ,

m a k i n g

t h e

u s e

o f


c o n t r o l s e s s e n t i a l

a n d

m a k i n g

o v e r e s t i m a t i o n

o f

c o v a l e n t

b i n d i n g

l i k e l y

w h e n a

f r a c t i o n

o f

t r e a t e d c e l l s

i s

i r r e v e r s i b l y d a m a g e d .

L i v e r - S p e c i f i c

C r i t e r i a .

A n u m b e r o f

m a r k e r s r e p r e s e n t a t i v e

o f

t h e

v a r i o u s

l i v e r -

s p e c i f i c

f u n c t i o n s

c a n a l s o s e r v e

a s

p a r a m e -

t e r s o f

f u n c t i o n a l


i n i s o l a t e d


e x p o s e d

t o

x e n o b i o t i c s .

T h e

m o s t

w i d e l y

t e s t e d m a r k e r s

i n c l u d e

n e o s y n -

t h e s i s

o f l i v e r - s p e c i f i c p l a s m a p r o t e i n s

s u c h

a s

a l b u m i n

a n d

t r a n s f e r r i n a n d

a c u t e - p h a s e

p r o t e i n s ,

g l y c o n e o g e n e s i s ,

a n d

g l y c o g e n

s y n -

t h e s i s

( 1 8 8 ) ;

u r e a

s y n t h e s i s

( 1 8 9 ) ; l i p o p r o -

t e i n

s y n t h e s i s ;

i n d u c t i o n

o r

i n h i b i t i o n

o f

s p e c i f i c

C Y P s

( 1 9 0 ) ;

a n d

b i l e

a c i d

s e c r e t i o n .

V a r i o u s

s p e c i f i c


o r g a n e l l e s

c a n

a l s o

b e o b s e r v e d

i n

l i v e r


c e l l s

b y

e l e c t r o n

m i c r o s c o p i c

e x a m i n a t i o n ,

e . g . ,

p r o l i f e r a t i o n o f

s m o o t h

e n d o p l a s m i c

r e t i c u l u m ,

i n c r e a s e d

n u m b e r

o f

p e r o x i -

s o m e s

a s s o c i a t e d

w i t h i n d u c t i o n

o f t h e

p e r -

o x i s o m a l

P - o x i d a t i o n

p a t h w a y

( 1 9 1 ) ,

a n d

c h a r a c t e r i s t i c


o f c o n c e n t r i c

m e m b r a n e s

i n

l y s o s o m e s .

T h e s e c r i t e r i a

a r e u s u a l l y

m u c h

m o r e

s e n s i t i v e

t h a n

e n d

p o i n t s

o f t h e

p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y ;

t h e y c o m p a r e

t o c r i t e r i a

f o r

m e t a b o l i c

c o m p e t e n c e .

H o w e v e r ,

w i t h

a

f e w

c o m p o u n d s m a j o r


c a n

b e

o b s e r v e d . T h u s ,

c y c l o h e x i m i d e

i n h i b i t s

p r o t e i n

s y n t h e s i s b u t

n o t u r e a

s y n t h e s i s ,

w h e r e a s

n o r v a l i n e d o e s

t h e o p p o s i t e

( 1 9 2 ) .

C h o i c e o f

E x p e r i m e n t a l

C o n d i t i o n s


c o n d i t i o n s

m u s t b e c a r e f u l l y

d e f i n e d ;

t h e y

c a n

g r e a t l y

a f f e c t t h e

r e s u l t s .

A m o n g

t h e

m a j o r

p a r a m e t e r s

t o

b e

c o n s i d -

e r e d a r e t h e f u n c t i o n a l

c a p a c i t y

o f

t h e

c e l l s ,


o f t h e m e d i u m ,

t h e

p h y s i o c h e m i c a l

p r o p e r t i e s

o f

t h e t e s t c o m -

p o u n d ,

d u r a t i o n o f

t r e a t m e n t ,

a n d c h o i c e

o f e n d p o i n t s .

R e t e n t i o n

o f X e n o b i o t i c

M e t a b o l i c

C a p a c i t y

b y I s o l a t e d

H e p a t o c y t e s .

A

n u m -

b e r o f c o m p o u n d s

a r e h e p a t o t o x i c

o n l y a f t e r

b i o t r a n s f o r m a t i o n . T h e

p r o d u c t i o n o f

r e a c -

t i v e m e t a b o l i t e s i s

d e p e n d e n t

o n a

b a l a n c e

o f a c t i v a t i o n

a n d i n a c t i v a t i o n

p a t h w a y s ;

t h e r e f o r e ,

i t

i s c r i t i c a l

t o d e m o n s t r a t e

t h a t

i s o l a t e d h e p a t o c y t e s

a r e c a p a b l e

o f

p r o d u c -

i n g t h e

s a m e


a s

t h o s e

f o r m e d

i n

v i v o .

T h e

p a r e n t

x e n o b i o t i c a n d


c a n b e m e a s u r e d

i n

b o t h m e d i a

a n d

c e l l

e x t r a c t s

a n d t h e i r i n t r a c e l l u l a r c o v a l e n t l y

b o u n d p e r c e n t a g e

c a n b e

e s t i m a t e d .

A n u m b e r

o f

s t u d i e s

h a v e s h o w n

t h a t


r e t a i n t h e i r

a b i l i t y t o g e n e r -

a t e m e t a b o l i t e s i d e n t i c a l

t o

t h o s e

f o u n d

i n

v i v o .


t h i s

m o d e l

i s s u i t -

a b l e f o r

d e m o n s t r a t i n g


v a r i -

a b i l i t y

a n d p o t e n t i a l

d r u g i n t e r a c t i o n s

( 1 2 7 , 1 9 3 - 2 0 2 ) .

T h e r e s u l t s

w i t h h u m a n

c e l l s w e r e

e i t h e r

c l o s e

t o

o r

q u i t e

d i f f e r e n t

f r o m

t h o s e

o b t a i n e d

w i t h


f r o m

t h e

m o s t f r e q u e n t l y

u s e d

a n i m a l s p e c i e s .

A

g o o d

i n v i v o / i n v i t r o q u a l i t a t i v e

c o r r e l a t i o n

f o r


f o r m e d

b y

b o t h

p h a s e

I

a n d

p h a s e

I I

p a t h w a y s

i s

u s u a l l y

f o u n d .

H o w e v e r ,

v a r i o u s

p a r a m e t e r s

s u c h

a s c h e m i c a l

c o n c e n t r a t i o n a n d

t h e d u r a t i o n

o f t h e

i n c u b a t i o n

w i t h

t h e c h e m i c a l

m a y

g r e a t l y

a f f e c t

t h e

m e t a b o l i c p r o f i l e .

S o m e

d r u g s

a r e

r a p i d l y

a n d

a c t i v e l y

m e t a b o l i z e d

w h e r e a s

o t h e r s a r e t r a n s f o r m e d m u c h

m o r e

s l o w l y .

C o n j u g a t e d

m e t a b o l i t e s c a n

b e

d e t e c t e d

o n l y

a f t e r 6 t o

8

h r

o f i n c u b a t i o n

o r m o r e

( 1 2 7 ) .

I n a r e c e n t

s t u d y

w e

f o u n d

t h a t

m i n o r


w e r e d e t e c t e d

o n l y

a f t e r t w o

o r t h r e e

d a i l y

e x p o s u r e s

t o

t h e

c o m p o u n d s

( 2 0 3 ) .

T h e

c h o i c e

o f

d r u g

c o n -

c e n t r a t i o n s t o b e

t e s t e d i s a l s o

i m p o r t a n t .

S o m e


c a n

b e

m i s s e d

i f

t h e c o n -

c e n t r a t i o n

i s t o o

l o w ;

i f t h e c o n c e n t r a t i o n i s

t o o

h i g h

c e l l u l a r

t o x i c i t y

c a n r e s u l t . I t

i s


t o t e s t

a t

l e a s t

t w o

c o n c e n t r a -

t i o n s ,

w i t h

t h e

h i g h e s t

c l o s e

t o

t h e

m a x i -

m um n o n t o x i c

c o n c e n t r a t i o n . H o w e v e r ,

f o r

s o m e

d r u g s ,

i n

v i t r o b i o t r a n s f o r m a t i o n

i s

l o w

a n d

d o e s n o t r e f l e c t t h e

i n

v i v o s i t u a t i o n

w h a t e v e r

c u l t u r e

c o n d i t i o n s

a r e

u s e d

( 2 0 4 ) .

S u c h

s t r i k i n g q u a n t i t a t i v e


a r e

s o m e t i m e s m i n i m i z e d

w h e n m e t a b o l i t e s

a r e e x p r e s s e d

p e r c e l l , a s

s h o w n b y B e r t h o u

e t a l . ( 2 0 4 )

f o r c a f f e i n e .

I n a d d i t i o n ,

t h e

m e t a b o l i c

p r o f i l e o b t a i n e d w i t h h e p a t o -

c y t e s c a n b e

q u i t e

d i f f e r e n t

f r o m a m e t a -

b o l i c

p r o f i l e

o b t a i n e d f r o m

a g i v e n

c o m p a r t m e n t

i n v i v o

e . g . ,

u r i n e o r

p l a s m a )

a n d i t m i s s e s

m e t a b o l i s m i n

n o n h e p a t i c

t i s -

s u e s i n

v i v o . I n

v i v o / i n v i t r o

q u a n t i t a t i v e

d i f -

f e r e n c e s

c a n

b e m u c h

m o r e

p r o n o u n c e d i n

o n e s p e c i e s

c o m p a r e d t o a n o t h e r .

T h e n e w

d r u g S - 3 3 4 1 w a s

p o o r l y m e t a b o l i z e d

b o t h

i n

h u m a n s

a n d

i n p r i m a r y h u m a n

h e p a t o -

c y t e c u l t u r e s ( 4 a n d 2 0 ,

r e s p e c t i v e l y ) , b u t

w a s

m u c h

m o r e

b i o t r a n s f o r m e d

i n v i t r o

t h a n i n v i v o

i n

t h e

r a t ( 6 3 v s 2 0 ) ( 2 0 5 ) .

T h e r e

i s

e v i d e n c e

f o r

s t e r e o s e l e c t i v e

a n d

c o m p e t i t i v e

m e t a b o l i s m

o f d r u g s ,

a n d

t h e

i m p l i c a t i o n s o n

t h e

i n d u c t i o n

o f

l i v e r c e l l

d a m a g e

s h o u l d

b e

c o n s i d e r e d .

L e

C o r r e

e t a l .

( 2 0 6 ) h a v e

a n a l y z e d


m e t a b o -

l i s m

o f

d i s o p y r a m i d e

i n h u m a n

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s . T h e m e t a b o l i c

r a t e

o f

S ( + ) d i s o p y -

r a m i d e

w a s 2 . 5 - f o l d h i g h e r

t h a n t h a t o f

R ( - )

d i s o p y r a m i d e .

T h e s t e r e o s e l e c t i v e i n d e x

S ( + ) / R ( - )

w a s

s i m i l a r

t o

t h a t f o u n d i n v i v o

( 1 . 5 1

±

0 . 1 1 v s

1 . 5 5

±

0 . 1 0 ) . H e p a t o c y t e

c u l -

t u r e s

a l s o r e p r e s e n t

a

p o w e r f u l

s y s t e m t o

d e m o n s t r a t e

o r

p r e d i c t

d r u g i n t e r a c t i o n s

( 2 0 0 , 2 0 7 ) .

E x p o s u r e

o f h u m a n


t o

v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s o f

e r y t h r o m y c i n

e s t o l a t e r e s u l t s

i n a

d o s e - d e p e n d e n t

i n h i b i -

t i o n

o f

c y c l o s p o r i n e

m e t a b o l i s m ;

b o t h

c o m -

p o u n d s

a r e t r a n s f o r m e d b y

C Y P 3 A 4 .

E r y t h r o m y c i n

e s t o l a t e t h a t

i s h e p a t o t o x i c

i n

v i v o

f o r m s

s t a b l e

c o m p l e x e s

w i t h

CYP3A

b o t h i n

v i v o a n d

i n

v i t r o

( 2 0 8 , 2 0 9 ) .

T h e c a p a c i t y

o f h e p a t o c y t e s

t o

f o r m

m e t a b o l i t e s d e c r e a s e s

w i t h t i m e i n c u l t u r e ;

a s

e x p e c t e d

f r o m

m e a s u r e m e n t o f

d r u g


e n z y m e s ,

i t

d r o p s m u c h

e a r -

l i e r

i n

r o d e n t h e p a t o c y t e s

t h a n i n t h e i r

h u m a n

c o u n t e r p a r t s

( 1 9 8 ) .

F o r e x a m p l e ,

n o c h a n g e

i n t h e

m e t a b o l i c

r a t e

a n d

p e r c e n t -

a g e

o f t h e t w o

m a j o r


f o r m e d

f r o m k e t o t i f e n

w a s o b s e r v e d

i n

h u m a n


d u r i n g

t h e f i r s t

4

d a y s

o f c u l -

t u r e ;

t h e m e t a b o l i c

r a t e

m a r k e d l y

d e c r e a s e d

i n

r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s b e t w e e n

d a y

2

a n d

d a y

4 .

T h e

u s e

o f m o r e

s o p h i s t i c a t e d

c u l t u r e

c o n d i t i o n s

i s

r e q u i r e d

f o r

p r o l o n g e d

m a i n -

t e n a n c e o f

d r u g

m e t a b o l i s m a c t i v i t y

i n

c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s ;

t h i s i s

o f

p a r t i c u l a r

i m p o r t a n c e

w h e n

t h e

c e l l s m u s t

b e

i n d u c e d

i n v i t r o

b e f o r e a d d i t i o n

o f t h e t e s t

d r u g .

B y

u s i n g

t h e c o c u l t u r e

s y s t e m ,

i . e . ,

h e p a t o -

c y t e s

m i x e d

w i t h

r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s ,

V i l l a

e t a l .

( 2 1 0 )


t h a t

e r y -

t h r o m y c i n

e s t o l a t e

i n d u c e d C Y P

a n d

f o r m e d

i n a c t i v e

c o m p l e x

w i t h

t h e i r o n o f


H e a l t h


*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

51 9



G U I L L O U Z O

t h e i n d u c e d CYP i n

r a t

h e p a t o c y t e s . I n

c o c u l t u r e d

h u m a n

h e p a t o c y t e s , c a f f e i n e

a n d

t h e o p h y l l i n e

m e t a b o l i s m w e r e

i n c r e a s e d

5 . 8

±

2 . 3 - a n d

3 . 3

±

1 . 1 - f o l d , r e s p e c t i v e l y ,

a f t e r

a

3 - d a y t r e a t m e n t

w i t h

3 ' - m e t h y l -

c h o l a n t h r e n e

( 2 1 1 ) .

G l u c u r o n i d a t i o n

o f

k e t o t i f e n

w a s

s t i l l


a f t e r

3

w e e k s

o f

c o c u l t u r e ,

w h e r e a s n o

c o n j u g a t e

w a s

d e t e c t e d

i n 6

d a y s

p u r e

c u l t u r e

( 1 2 7 ) .

H u g e i n t e r i n d i v i d u a l

v a r i a t i o n s a r e

f r e -

q u e n t l y

o b s e r v e d

i n

d r u g

m e t a b o l i c

p r o f i l e s

i n

h u m a n

h e p a t o c y t e c u l t u r e s ,

m a k i n g

i t

c r i t i c a l

t o t e s t

a t

l e a s t

t w o

d i f f e r e n t

c e l l

p o p u l a t i o n s a n d e v a l u a t e f u n c t i o n a l

c a p a c -

i t y

o f e a c h

c e l l

p o p u l a t i o n

b y m e a s u r i n g

v a r i o u s

p h a s e

I

a n d

p h a s e

I I

e n z y m e

a c t i v i -

t i e s . S u c h a m e t a b o l i c

a n a l y s i s

m a y

d e t e r -

m i n e

w h e t h e r

t h e c e l l s t h a t a r e

b e i n g u s e d

i n v i t r o

a r e f r o m a n

i n d i v i d u a l

w i t h

p a r t i c -

u l a r

m e t a b o l i c c h a r a c t e r i s t i c s r e l a t e d

t o

f a c -

t o r s s u c h

a s

g e n e t i c

p o l y m o r p h i s m ,

f o r

i n s t a n c e , o r

t o

e n v i r o n m e n t a l

f a c t o r s

e . g . ,

h e a v y

s m o k e r s , d r u g

a b u s e r s ,

e t c . ) .

C o m p o si t i on o f

t h e M e d i u m . T h e


o f

t h e

c u l t u r e m e d i u m

m a y

g r e a t l y

a f f e c t

t h e

r e s p o n s e

o f

i s o l a t e d

h e p a -

t o c y t e s

t o

c y t o t o x i c a g e n t s .

C y t o t o x i c i t y

o f

s o d i u m s a l i c y l a t e t o c u l t u r e d

r a t

h e p a t o -

c y t e s

i s

d e p e n d e n t

o n

t h e


o f

b o v i n e

s e r u m

a l b u m i n

i n

t h e

m e d i u m

( 2 1 2 ) . V a r i o u s

c o m p o u n d s

b i n d

p r o t e i n s .

V i l l a e t

a l .

( 1 9 0 )

f o u n d t h a t t h e

t o x i c i t y

o f


e s t o l a t e

( k n o w n

t o b i n d

p r o -

t e i n s )

i n

r a t


i n c r e a s e d

i n

a

m e d i u m

d e p r i v e d o f p r o t e i n s . T h e a d d i -

t i o n

o f

c a l c i u m

t o

t h e

m e d i u m

h a s

b e e n

a

m a t t e r o f

d e b a t e .

I n d e e d ,


C a 2 +

h a s

p a r a d o x i c a l

b e n e f i c i a l a n d

d e t r i m e n t a l

e f f e c t s

t o i s o l a t e d


e x p o s e d

t o

t o x i c

c o m p o u n d s .

C a l c i u m

c h l o r i d e

i n

t h e

i n c u b a t i o n

m e d i u m

( 3 . 6

m M ) e n h a n c e d

c a r b o n

t e t r a c h l o r i d e

( C C 1 4 ) t o x i c i t y

i n r a t


( 2 1 3 - 2 1 6 )

a n d

i t

w a s

h y p o t h -

e s i z e d t h a t c a l c i u m

e n t r y

i n t o t h e c e l l

m a y

b e

i n v o l v e d i n l i v e r c e l l

d a m a g e .

I n

c o n -

t r a s t ,

S m i t h e t

a l .

( 2 1 6 ) r e p o r t

t h a t s e v e r a l

c y t o t o x i c

a g e n t s c a u s e d l e s s

i n j u r y

t o

c u l -

t u r e d


i n t h e

p r e s e n c e

o f

2 . 6

mM

c a l c i u m t h a n

u n d e r c a l c i u m - f r e e

c o n -

d i t i o n s .

E d m o n s o n

a n d

B a n g

( 2 1 7 )

d e m o n -

s t r a t e d

t h a t

i n

t h e a b s e n c e

o f


c a l c i u m ,

i s o l a t e d


r a p i d l y

r e l e a s e

L DH

a n d f a i l

t o

a c c u m u l a t e

y - a m i n o i s o b u -

t y r i c a c i d .

S t a c e y

a n d

K l a a s s e n

( 2 1 8 )

r e p o r t e d t h a t i s o l a t e d


e x p o s e d

t o

c a d m i u m

a n d

c o p p e r

a m p h o t e r i n

s h o w

n o

c h a n g e

i n

v i a b i l i t y

w i t h t h e

a d d i t i o n

o f

1

mM

c a l c i u m

c h l o r i d e ;

h o w e v e r ,

o m i s s i o n o f

C a 2 +

r e v e r s e d


o f t h e

c a l c i u m

i o n o p h o r e A 2 3 1 8 7 . R e c e n t

e v i d e n c e

s h o w s

t h a t i n

m a n y c h e m i c a l

t o x i c i t i e s a n i n c r e a s e

i n


f r e e

c a l c i u m c a n

b e

d i s s o c i a t e d

f r o m

t h e

t o x i c i t y g e n e r a t e d

b y

t h a t

a g e n t

( 2 1 9 , 2 2 0 ) ,

s u p p o r t i n g

t h e i d e a

t h a t

t h e r i s e i n


c a l c i u m

i s a

c o n s e q u e n c e o f

c e l l

m e m b r a n e

i n j u r y .

B y

u s i n g i m a g i n g

f l u o r e s c e n c e

m i c r o s c o p y ,

t h e

t e m p o r a l

r e l a t i o n s h i p s

b e t w e e n

c h a n g e s

i n

C a 2 + a n d

c e l l d e a t h

w e r e

e v a l u a t e d i n

i n d i -

v i d u a l c e l l s .

S a k a i d a e t a l . ( 2 1 9 )

s h o w e d

t h a t o x i d a t i v e s t r e s s p r o d u c e d

b y

t e r t - b u t y l

h y d r o x y p e r o x i d e i n d u c e d

t h r e e

d i s t i n c t

p h a s e s

o f

i n c r e a s e d c y t o s o l i c - f r e e

c a l c i u m


t h a t o c c u r r e d s o m e w h a t

a s y n -

c h r o n o u s l y i n

p r i m a r y

r a t

h e p a t o c y t e

c u l -

t u r e s . H a r m a n e t

a l . ( 2 2 0 ) r e p o r t e d t h a t

i n

a c e t a m i n o p h e n - t r e a t e d m o u s e



c a l c i u m c o n c e n t r a t i o n

i n c r e a s e d

w e l l

a f t e r

t h e

a p p e a r a n c e o f

c e l l s u r f a c e b l e b s

a n d s h o r t l y b e f o r e c e l l d e a t h .

D r u g I n c u b a t i o n

C o n d i t i o n s .

When

e v a l u a t i n g

t h e

t o x i c i t y

o f a t e s t c h e m i c a l

t o

i s o l a t e d


t h e

i n v e s t i g a t o r

m u s t

b e

a w a r e t h a t a n u m b e r

o f

p r o b l e m s r e g a r d -

i n g c h e m i c a l

i n c u b a t i o n c o n d i t i o n s

a f f e c t

t h e

q u a l i t y

a n d

a c c u r a c y

o f t h e

r e s u l t s .

B e f o r e s t a r t i n g t h e

e x p e r i m e n t o n

h e p a t o -

c y t e s

a

n u m b e r o f

q u e s t i o n s

m u s t

b e

a d d r e s s e d :

W h a t

s o l v e n t

c a n

b e u s e d

t o

d i s -

s o l v e t h e c o m p o u n d ? I s

t h e

c o m p o u n d

v o l a t i l e ?

A r e r e a c t i o n s

o c c u r r i n g

b e t w e e n

t h e

c o m p o u n d

a n d t h e

m e d i u m

t h a t

w i l l

a f f e c t

p H ,

o s m o l a r i t y ,

o r

t u r b i d i t y ? W i l l

r e a c t i o n s

r e s u l t

i n

t h e f o r m a t i o n

o f

p r e c i p i t a t e s ?

D u ra t i on o f

T r e a t m e n t . T h e d u r a t i o n

o f

i n c u b a t i o n

w i t h

c h e m i c a l s

c a n

b e

a

c r i t i c a l

p a r a m e t e r

b e c a u s e

o f

t h e

l a c k

o f

e x t r a h e p a t i c

e l i m i n a t i o n o f t o x i c

c o m p o u n d s a n d

t h e


c o m p o u n d s

i n

t h e

c u l t u r e

m e d i u m .

P a i n e a nd H o c k i n

( 2 2 1 ) s t u d i e d

t h e e f f e c t s

o f t h r e e

g r o u p s

o f t o x i n s o n

c u l -

t u r e d r a t


m a i n t a i n e d i n

c o n d i -

t i o n s

t h a t r e s u l t e d i n e i t h e r

a l o w o r a

h i g h


o f

C Y P . A s

p r e d i c t e d , t o x i n s

t h a t

a r e n o t

m e t a b o l i z e d b y C Y P ,

i . e . ,

e t h i o -

n i n e

a n d

g a l a c t o s a m i n e , w e r e

e q u a l l y

t o x i c

r e g a r d l e s s o f t h e C Y P

c o n c e n t r a t i o n .

I n

c o n -

t r a s t ,

t h e

t w o

o t h e r

g r o u p s

o f t o x i n s

h a d

n o n p r e d i c t a b l e

b e h a v i o r . I n d e e d , c o m -

p o u n d s

t h a t

a r e a c t i v a t e d

b y

CYP

( C C 1 4 ,

b r o m o b e n z e n e , c y c l o p h o s p h a m i d e ,

p a r a c e t a -

m o l )

a n d t h o s e

t h a t a r e

d e t o x i f i e d

b y C Y P

p e n t o b a r b i t a l ,

s t r y c h n i n e )

w e r e

a l s o

e q u a l l y

t o x i c

r e g a r d l e s s

o f

t h e

CYP

c o n t e n t

o f t h e

c e l l s

a f t e r

a

2 4 - h r

i n c u b a t i o n .

O n l y

w h e n t h e

e x p o s u r e

w a s

l i m i t e d t o

1

t o

4

h r

a n d f o l -

l o w e d

b y a 2 0 - h r

i n c u b a t i o n i n a

t o x i n - f r e e

m e d i u m

w a s

C C 1 4

m o r e t o x i c

t o

c u l t u r e d


c o n t a i n i n g

h i g h

l e v e l s o f C Y P .

S h o r t - t e r m

a s s a y s ,

h o w e v e r ,

d o n o t

r e f l e c t

t h e

common i n v i v o

s i t u a t i o n

i n

w h i c h

d r u g s o f t e n p r o d u c e l i v e r

d a m a g e

a f t e r

r e p e a t e d

a d m i n i s t r a t i o n

f o r

w e e k s o r

m o n t h s .

F o r

l o n g - t e r m t o x i c i t y ,

i n

v i t r o

m o d e l s

i n

w h i c h


r e t a i n t h e i r

m e t a b o l i c

a c t i v i t i e s

a r e

r e q u i r e d .

C o c u l t u r e s

o f


w i t h r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

o f f e r

a n

a t t r a c t i v e

a p p r o a c h

f o r

e s t i m a t i n g

c h r o n i c

t o x i c i t y

o f

c h e m i c a l s

( 1 7 7 , 2 0 5 ) .

V a r i o u s

d r u g


c a n b e

t e s t e d

b e g i n n i n g

w h e n c e l l

c o n f l u e n c y

i s r e a c h e d

a n d

w i t h

d a i l y

r e n e w a l .

T h e

h i g h e s t

c o n c e n -

t r a t i o n

u s e d i s t h e

m a x i m u m n o n t o x i c

c o n -

c e n t r a t i o n ,

d e f i n e d

a f t e r

a

2 4 - h r i n c u b a t i o n

o f t h e

c o m p o u n d

w i t h

p u r e h e p a t o c y t e

c u l -

t u r e s .

D e p e n d i n g

o n t h e

c h e m i c a l

t e s t e d ,

f o u r

s i t u a t i o n s c a n b e o b s e r v e d :

n o

c y t o t o x i -

c i t y

t o

b o t h c e l l

t y p e s

i s

f o u n d ; o n l y

h e p a t o -

c y t e s

a r e

d a m a g e d ;

o n l y

r a t l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s a r e

d a m a g e d ;

a n d b o t h

c e l l

t y p e s

a r e

s e n s i t i v e t o t h e

c h e m i c a l . A s i n

a c u t e

t o x i c i t y

t e s t i n g , m a j o r


i n t h e

s e n s i t i v i t y o f

e n d

p o i n t s

c a n

b e o b s e r v e d ( 1 7 7 ) .

B e c a u s e

r a t l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

u s e d

i n

c o c u l t u r e

d o

n o t

m e t a b o l i z e

d r u g s , c o m p a r i s o n s

o f t h e

e f f e c t s o f

s i m i l a r

d r u g

c o n c e n t r a t i o n s o n

p u r e

c u l t u r e s

o f t h e s e

c e l l s m a k e

i t

p o s s i b l e

t o

d e t e r m i n e

w h e t h e r a

d r u g r e q u i r e s

b i o -

t r a n s f o r m a t i o n t o b e

c y t o t o x i c .

T h e

c o c u l -

t u r e

m o d e l

t h u s

h a s

a d o u b l e i n t e r e s t :

i t

a l l o w s t h e


a c u m u l a t i v e

c h e m i -

c a l - i n d u c e d

t o x i c e f f e c t a s w e l l a s t h e

a b i l i t y

t o

d i s t i n g u i s h b e t w e e n

c o m p o u n d s

t h a t

r e q u i r e


t o i n d u c e c e l l u l a r

i n j u r y . T h u s a m i t r y p t i l i n e , b u t

n o t c l o n i -

d i n e ,

e x e r t e d a

c u m u l a t i v e t o x i c e f f e c t i n

r a t

h e p a t o c y t e c o c u l t u r e s

( 1 7 7 ) .

C h o i c e

o f End

P o i n t s .

A

s i n g l e

e n d

p o i n t

i s

u s u a l l y

s u f f i c i e n t t o

e s t i m a t e

i r r e v e r s i b l e

i n j u r y i n d u c e d

b y t o x i c c o m -

p o u n d s . F o r

e x a m p l e , c o m p a r a b l e

r e s u l t s

w e r e o b t a i n e d w i t h

p r i m a r y r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

e x p o s e d t o

v a r i o u s

c o m p o u n d s

b y

m e a s u r i n g

e x t r a c e l l u l a r a n d t o t a l

L DH

r a t i o ,

t o t a l

c e l l u l a r

p r o t e i n c o n t e n t ,

TT

a s s a y , a n d

n e u t r a l r e d u p t a k e

( 1 7 4 ) . When

m e t a b o l i c c o m p e t e n c e

i s e v a l u a t e d ,

I C 5 0

v a l u e s c a n

b e

m u c h

l o w e r

t h a n

t h o s e

c a l c u -

l a t e d

f r o m

p a r a m e t e r s o f p l a s m a

m e m b r a n e

i n t e g r i t y a n d

f a l s e

n e g a t i v e c o m p o u n d s

h a v e

b e e n r e p o r t e d .

T h e a d v a n t a g e

o f c r i t e -

r i a

r e f l e c t i n g

b o t h

i r r e v e r s i b l e c e l l u l a r

d a m -

a g e

a n d

a l t e r e d

m e t a b o l i c

c o m p e t e n c e

i s

t h a t

t h e y

a l l o w d e t e r m i n a t i o n

o f

m e t a b o l i c


w i t h

c o n c e n t r a t i o n s o f

t h e

t o x i c a g e n t m u c h l o w e r t h a n t h o s e

r e q u i r e d

f o r

c e l l

d e a t h .

D e t e c t i o n

o f

C y t o t o x i c

a n d G n o t o x i c

C o m p o u n d s


S c r e e n i n g

o f C y t o t o x i c

C o m p o u n d s . I s o l a t e d

h e p a t o c y t e s , e i t h e r

i n

s u s p e n s i o n

o r i n

c u l t u r e ,

r e p r e s e n t

a



*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

a

A p r i l

1 9 9 8

20



I N V I T R O

H E P A T O T O X I C I T Y

u n i q u e e x p e r i m e n t a l

a p p r o a c h t o

s c r e e n i n g

v a r i o u s c o m p o u n d s a t

s e v e r a l c o n c e n t r a -

t i o n s u s i n g

d i f f e r e n t c r i t e r i a o n

t h e

s a m e

c e l l s u s p e n s i o n .

H o w e v e r , t h e y

a r e

n o t

s u i t a b l e

f o r s c r e e n i n g

i d i o s y n c r a t i c

t o x i n s

h a v i n g a

h y p e r s e n s i t i v i t y

o r i g i n b e c a u s e

t h e s e

i n v o l v e

a n

i m m u n e

r e a c t i o n .

O n l y

s h o r t - t e r m

s t u d i e s

n o t e x c e e d i n g

2 t o 4 h r c a n

b e

p e r f o r m e d

w i t h

s u s p e n -

s i o n s

o f

f r e s h l y

i s o l a t e d


c e l l s .

M o r e o v e r ,

i t m u s t

b e

c o n s i d e r e d

t h a t t h e

c e l l s a r e

a l t e r e d , p r i m a r i l y

b e c a u s e

o f t h e

u s e o f c o l l a g e n a s e

a n d

m e c h a n i c a l a g i t a -

t i o n . A m o n g

t h e

a l t e r e d

f u n c t i o n s

a r e l o w e r

5 ' - n u c l e o t i d a s e

a n d

a l k a l i n e p h o s p h a t a s e

a c t i v i t i e s a n d

r e s p o n s e

t o

h o r m o n e s .


i t

i s

p r o b a b l y

m o r e

e f f e c t i v e

t o a l l o w h e p a t o c y t e s

t o r e c o v e r

f r o m

t h e

t r a u m a

o f i s o l a t i o n

a n d

r e g a i n

m e t a b o l i c

p r o p e r t i e s . H o w e v e r ,

o n e h a s

t o

f a c e

m a j o r

c h a n g e s

a f f e c t i n g

v a r i o u s

p h a s e

I

a n d

p h a s e

I I

e n z y m e s

a f t e r a f e w

h o u r s

o f

c u l t u r e .

T h i s

e x p l a i n s

w h y

m o s t s t u d i e s o n a t t a c h e d


c e l l s h a v e b e e n

c o n d u c t e d

o v e r a

s h o r t

p e r i o d

o f

t i m e

n o t e x c e e d i n g

2 4 h r

a n d

w i t h t h e a d d i t i o n

o f a s i n g l e d o s e

o f t h e

t e s t

c h e m i c a l . C o m p a r i s o n

o f t h e

d a t a o b t a i n e d

w i t h

n o n h e p a t i c

c e l l s

s u c h

a s

H e L a

c e l l s i n d i c a t e s

t h a t


a r e

u s u a l l y

m o r e s e n s i t i v e

t o

c o m p o u n d s

t h a t

r e q u i r e m e t a b o l i c

a c t i v a t i o n ( 2 2 2 ) .

N o r m a l


a l s o a r e o f t e n

m o r e

s e n s i t i v e

t h a n

h e p a t o m a

c e l l s ,

w h i c h

e x h i b i t

l o w e r

d r u g


e n z y m e

a c t i v i t i e s

( 1 7 4 ) .

S p e c i e s d i f f e r e n c e s

i n t h e

s e n s i t i v i t y

o f

t h e

c e l l s a r e a l s o

f r e q u e n t l y

o b s e r v e d .

T h e

s u i t a b i l i t y

o f

i s o l a t e d


a s

a

s c r e e n i n g p r o c e d u r e e a r l y

i n

d r u g

d e v e l -

o p m e n t

i s

m o r e

c o n v i n c i n g

w h e n s t r u c -

t u r a l l y

r e l a t e d c o m p o u n d s

a r e

t e s t e d ,

a s w e

h a v e s h o w n

f o r

n e u r o l e p t i c a g e n t s

( 1 7 0 )

a n d m a c r o l i d e

a n t i b i o t i c s

( 1 9 0 ) .

C h e m i c a l s

a s s o c i a t e d

w i t h


i n

h u m a n s

a r e

u s u a l l y

m o r e

c y t o t o x i c

t o r a t

o r h u m a n


i n v i t r o t h a n n o n h e p a t i c - r e l a t e d

t o x i c

c o m p o u n d s ,


t h o s e t h a t

r e q u i r e h e p a t i c


t o e x e r t

c e l l u l a r

d a m a g e .

I t

i s

o b v i o u s

t h a t

t h e

u t i l i t y

o f

i n

v i t r o

s y s t e m s

d e p e n d s

o n

c o n f i d e n c e

i n

e x t r a p o -

l a t i n g

d a t a

t o t h e

i n v i v o s i t u a t i o n .

F o r

s u c h

c o m p a r i s o n s

t h e

m o s t

u s e f u l

p a r a m e -

t e r s a r e

t h o s e

t h a t a s s e s s

e n d

p o i n t

t o x i c i t y

f o r

w h i c h

i n v i v o d a t a

( h i s t o l o g y ,

e l e v a t e d

s e r u m

e n z y m e

l e v e l s ,

m e d i a n l e t h a l d o s e

[ L D 5 0 ] )

a r e

m o s t

r e a d i l y

a v a i l a b l e .

S e v e r a l

i n v i t r o

t o x i c i t y

s t u d i e s o n

c u l t u r e d


h a v e

b e e n

d e s i g n e d

t o

e s t a b l i s h

c o m p a r i s o n s

w i t h

i n

v i v o

h e p a t o -

t o x i c

r e s p o n s e s .

I n

g e n e r a l ,

t h e

i n

v i t r o / i n

v i v o


i n

d i s c r i m i n a t i n g

b e t w e e n h e p a t o t o x i c a n t s

a n d

n o n h e p a t o -

t o x i c a n t s

i s

g o o d .

S t o r y e t a l . ( 1 6 9 )

t e s t e d

3 4

c h e m i c a l s f o r c y t o t o x i c i t y

i n c u l t u r e d

r a t h e p a t o c y t e s

b y m e a s u r i n g t r a n s a m i n a s e

r e l e a s e

a f t e r

2

a n d 5 h r o f e x p o s u r e .

A

g o o d


b e t w e e n

i n v i t r o c y t o t o x i c i t y

a n d

i n

v i v o

h e p a t o t o x i c r e s p o n s e

w a s

f o u n d . T y s o n

e t

a l . ( 2 2 3 )

i n v e s t i g a t e d 2 3

c h e m i c a l s

a n d f o u n d g o o d


f o r

a l l

b u t

t w o

( t h i o a c e t a m i d e

a n d

a l l y l

a l c o h o l )

o n t h e b a s i s

o f e n z y m e

r e l e a s e .

I n c o n s i s t e n c i e s

c a n b e

r e l a t e d

t o

t h e n a t u r e

o f

t h e

c h e m i c a l

t e s t e d ,

t h e i n c u b a t i o n

c o n -

d i t i o n ,

a n d

t h e e n d

p o i n t

t e s t e d . I n d e e d ,

a

s i m p l e

p r o t o c o l

f o r

i n

v i t r o c y t o t o x i c i t y

t e s t i n g

c a n n o t

b e u s e d

f o r a l l k i n d s o f

c o m -

p o u n d s . F a u t r e l

e t a l . ( 1 7 4 ) t e s t e d

3 0

c o d e d l i q u i d

o r c o d e d s o l i d c o m p o u n d s

o n

p r i m a r y

r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

u s i n g

9 6 - w e l l

p l a t e s

a n d

d i d

n o t f i n d

a

g o o d

i n

v i t r o / i n v i v o

c o r r e l a t i o n f o r

a l l

c o m p o u n d s

t e s t e d .

O b v i o u s l y

i n

a g r e e m e n t

w i t h

o t h e r

w o r k s , t h e i r s t u d y

i n d i c a t e s

t h a t v o l a t i l e

a n d

l i p o s o l u b l e

c o m p o u n d s

r e q u i r e a p p r o -

p r i a t e

c u l t u r e c o n d i t i o n s .

T y s o n e t a l . ( 2 2 4 )

f o u n d

t h a t r e l a t i v e

h e p a t o t o x i c

p o t e n t i a l s

f o r

f i v e h a l o a l k a n e s m e a s u r e d

i n

h e p a t o c y t e

s u s p e n s i o n s

a n d i n v i v o w e r e

r a n k e d

c o r -

r e c t l y

i f

p a r t i t i o n

c o e f f i c i e n t s

w e r e f a c t o r e d

i n t o

t h e d a t a

t o

r e c o n c i l e

t h e d i f f e r e n c e s

b e t w e e n

s o l v e n t v o l a t i l i t y

a n d r e t e n t i o n

i n

t h e t w o

s y s t e m s .

O b v i o u s l y

m o r e i n f o r m a -

t i o n i s n e e d e d o n

c o m p o u n d s

f o r

w h i c h

n o


i s f o u n d

b e t w e e n i n

v i v o

a n d i n

v i t r o

d a t a .

T h i s

w i l l b e

o f

g r e a t

h e l p

i n

d e s i g n i n g

m o r e

s u i t a b l e

i n v i t r o t e s t s

a n d

f o r o u r

k n o w l e d g e

a b o u t t h e i r l i m i t a t i o n s .

I C 5 0

v a l u e s

h a v e

b e e n

c o m p a r e d

w i t h

i n v i v o l e t h a l

d o s e s .

I n

a

m u l t i c e n t e r

s t u d y

w e

c o m p a r e d

n e u t r a l

r e d u p t a k e I C 5 0

v a l -

u e s o b t a i n e d w i t h

p r i m a r y

r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

a n d

o r a l ,

i p ,

o r i v

L D 5 0

v a l u e s .

A s i g n i f i c a n t

c o r r e l a t i o n w a s f o u n d

o n l y

b e t w e e n

I C 5 0

a n d

i v

L D 5 0

v a l u e s ( 2 2 5 ) .

S i m i l a r l y ,

J o v e r

e t

a l .

( 1 7 6 )

f o u n d

a

g o o d


b e t w e e n

M T T

I C 5 0

o n

c u l t u r e d

h u m a n


a n d h u m a n

a c u t e

l e t h a l

b l o o d


f o r

1 0

c h e m i c a l s .

A n o t h e r

i m p o r t a n t

q u e s t i o n

i s t h e

c o r r e -

l a t i o n

b e t w e e n

i n

v i t r o

t o x i c


a n d

t h e i n

v i v o

t o x i c

d o s e s .

S u c h a c o r r e l a -

t i o n m u s t t a k e

i n t o

a c c o u n t

t h e

p h a r m a -

c o k i n e t i c s

o f t h e

d r u g ;

i t

r e m a i n s

a n

o p e n

q u e s t i o n

t h a t

r e q u i r e s

f u r t h e r

i n v e s t i g a t i o n .

S c r e e n i n g o f

G e n o t o x i c

C o m p o u n d s .

I n v i t r o

l i v e r

m o d e l s

h a v e

l o n g

b e e n

u s e d t o

a s s e s s t h e

g e n o t o x i c

p o t e n t i a l

o f c h e m i c a l

a n d

p h y s i c a l a g e n t s

o n

t h e b a s i s

o f t h e i r

a b i l i t y

t o

c o v a l e n t l y

b i n d

t o a n d

d a m a g e

D N A ,

i n d u c e

DN A

r e p a i r

r e s p o n s e s ,

m u t a t e

s p e c i f i c

g e n e t i c l o c i ,

i n d u c e

p h e n o t y p i c a l l y

a l t e r e d

c e l l s , o r

i n d u c e

c h r o m o s o m e

o r

c h r o m a t i d - l e v e l a b e r r a t i o n s

( 2 2 6 - 2 2 8 ) .

M e t a b o l i s m o f

c h e m i c a l s i s f r e q u e n t l y

a

n e c e s s a r y p r e r e q u i s i t e .

B e c a u s e

t h e y

r e t a i n t h e c r i t i c a l

a c t i v a -

t i o n / i n a c t i v a t i o n b a l a n c e ,

i s o l a t e d

h e p a t o -

c y t e s

a r e

w e l l s u i t e d

f o r

q u a n t i t a t i o n o f

DN A

r e p a i r

e l i c i t e d b y

e x p o s u r e

t o

g e n o -

t o x i c

a g e n t s o f a w i d e

v a r i e t y

o f

s t r u c t u r a l

c l a s s e s . O n l y

a f e w c h e m i c a l s , i n c l u d i n g

c i m e t i d i n e ( 2 2 9 ) ,

P - n a p h t h y l a m i n e ,

2 , 6 -

d i a m i n o t o l u e n e ,

a n d 5 - m e t h y l c h r y s e n e

( 2 3 0 ) ,

g i v e a q u a l i t a t i v e l y d i f f e r e n t

r e s p o n s e

b e t w e e n t h e

h u m a n

a n d

r a t h e p a t o c y t e s .

I n

t h e l a s t s t u d y , 2 5 c o m p o u n d s

w e r e

t e s t e d ;

c o m p o u n d s

f o u n d

t o

b e

g e n o t o x i c

i n v i v o

w e r e

n e g a t i v e

i n v i t r o

i n

o n l y o n e

c a s e

o u t

o f

e i g h t .

E x t e n s i v e v a l i d a t i o n h a s

b e e n p e r -

f o r m e d

w i t h r a t


( 2 3 1 )

a n d

t h e

h e p a t o c y t e p r i m a r y

c u l t u r e / D N A r e p a i r

t e s t i s n o w

w i d e l y

a c c e p t e d

b y t e s t i n g

a n d

r e g u l a t o r y a g e n c i e s .

B e c a u s e

t h e u n s c h e d -

u l e d

DN A

s y n t h e s i s

( U D S )

a s s a y

r e q u i r e s

s m a l l

n u m b e r s

o f

c e l l s , i t r e p r e s e n t s

t h e

s u i t a b l e

m e t h o d

t o

t e s t g e n o t o x i c c o m -

p o u n d s

o n

h u m a n h e p a t o c y t e s

( 2 3 0 ) .

V a r i o u s

c h e m i c a l s

i n d u c e UDS

i n

h u m a n

h e p a t o c y t e s ;

t h e y i n c l u d e

n i t r o s a m i n e s , 2 -

a c e t y l a m i n o f l u o r e n e ,

b e n z o [ a ] p y r e n e ,

a f l a -

t o x i n s ,

a n d d i n i t r o p y r e n e s .

A f l a t o x i n B 1 ,

a

s u s p e c t e d

h u m a n

h e p a t o c a r c i n o g e n ,

i n d u c e s a UDS

r e s p o n s e

a t

o r b e l o w 1

p M .

S u r p r i s i n g l y ,

a l t h o u g h

t h e

UDS

r e s p o n s e

i s u s u a l l y

s i m i l a r i n h u m a n a n d

r a t

h e p a t o -

c y t e s

( 2 3 2 ) ,

m a r k e d d i f f e r e n c e s

a r e f o u n d

w h e n

h u m a n h e p a t o c y t e s

a r e

c o m p a r e d

t o


o f o t h e r a n i m a l

s p e c i e s ( 2 3 3 ) .

B e c a u s e c l o n a l g r o w t h

o f h e p a t o c y t e s

r e m a i n s u n s u c c e s s f u l ,

d i r e c t

m u t a g e n e s i s

a s s a y s

w i t h h e p a t o c y t e s

a r e

n o t

p o s s i b l e .

T o

o b v i a t e t h i s

d i f f i c u l t y ,


c a n

b e c o c u l t u r e d

w i t h

a c t i v e l y

p r o l i f e r a t i n g

c e l l s s u c h

a s h u m a n f i b r o b l a s t s ( 2 3 4 )

o r

V - 7 9

C h i n e s e

h a m s t e r

f i b r o b l a s t s

( 2 3 5 ) .

M o r e o v e r ,

t h e

l o w

g r o w t h c a p a c i t y

o f

p r i -

m a r y


m a k e s

t h e i r

w i d e

u s e f o r

a s s a y s

s u c h

a s

t h e

m i c r o n u c l e u s

a n d s i s t e r

c h r o m a t i d

e x c h a n g e q u e s t i o n a b l e .

T h e

UDS

t e s t

w i t h i s o l a t e d


i s

b e c o m i n g

m o r e

s i g n i f i c a n t

b e c a u s e

i t

i s

f r e q u e n t l y

a

c o m p o n e n t

o f

t e s t

b a t t e r i e s .

I n t r a l a b o r a t o r y

a n d

i n t e r l a b o r a t o r y r e p r o -

d u c i b i l i t y

i s

g o o d ;

h o w e v e r ,

t h i s t e s t

d e t e c t s

DN A

a l t e r a t i o n s ,

n o t m u t a t i o n s .

E v a l u a t i o n

o f

H e p a t o p r o t e e f i v e

A g e n t s

V a r i o u s

a n t i o x i d a n t s a n d

s c a v e n g e r s

o f f r e e

r a d i c a l s h a v e

b e e n

t e s t e d

o n

i n v i t r o l i v e r


a n d a c t

a s

i n

v i v o .

D u r i n g

t h e

l a s t

f e w

y e a r s ,

n e w

n a t u r a l l y

o c c u r r i n g


H e a l t h

P e r s p e c t i v e s *

V o l

1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

5 2 1



G U I L L O U Z O

s u b s t a n c e s o f

p l a n t

o r i g i n

a n d f r o m

s y n t h e t i c

c o m p o u n d s

h a v e

a l s o

b e e n

e v a l u a t e d .

T h e s e s t u d i e s h a v e l e d

t o

t h e

s e l e c t i o n o f

t h e

m o s t

a c t i v e m o l e c u l e s a n d

h a v e s h o w n

t h a t t h e

b e n e f i c i a l

e f f e c t s c o u l d

b e

d e p e n d e n t

o n t h e

t o x i n .

M o r e o v e r ,

s t r u c t u r e - a c t i v i t y

c o r r e l a t i o n s

h a v e

b e e n

s o m e t i m e s


a n d a f e w m o l e c u l e s

r e p o r t e d l y h a v e

t h e i r

own

t o x i c i t y

( 2 3 6 , 2 3 7 ) .

T h e i r

e f f e c t s

m a y

d e p e n d

o n

t h e

s p e c i e s

s t u d i e d

a n d t h e

d u r a t i o n o f t r e a t m e n t .

+ ) -

C y a n i d a n o l - 3 w a s

e f f e c t i v e

o n

r a t

h e p a t o -

c y t e s

i n t o x i c a t e d

b y

a f l a t o x i n

B ,

w h e n

a d d e d

a t

l e a s t

5

m i n b e f o r e t h e

m y c o t o x i n ,

b u t w a s w i t h o u t

e f f e c t o n

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s ( 2 3 6 ) . T h e

s i g n i f i c a n c e

o f i n v i v o

a n d

i n

v i t r o e x p e r i m e n t a l d a t a

t o t h e

h u m a n

s i t u a t i o n

m a y

b e

q u e s t i o n e d . P o t e n t i a l a n t i -

d o t e s m u s t

b e a d d e d b e f o r e

o r

j u s t

a f t e r

t o x i n

a d m i n i s t r a t i o n t o b e

e f f e c t i v e .

S u c h

c o n d i t i o n s

d o

n o t

u s u a l l y

m i m i c

t h e h u m a n

s i t u a t i o n . R e p e a t e d a d m i n i s t r a t i o n

o f

t h e

h e p a t o p r o t e c t i v e

a g e n t

i s a

m o r e

r e a s o n a b l e

a p p r o a c h

t o o b t a i n

i m p r o v e m e n t s

i n

p a t i e n t s

s u f f e r i n g

f r o m

c h r o n i c l i v e r

d i s e a s e s ,

a s

e x p e c t e d w i t h

m a l o t i l a t e .

T h i s

s y n t h e t i c

c o m p o u n d ,

w h i c h

r e p o r t e d l y p r o t e c t e d

r a t s

i n t o x i c a t e d w i t h C C t s ,

w a s w i t h o u t

e f f e c t

o n

b o t h

r a t

a n d h u m a n


e v e n

a f t e r

r e p e a t e d t r e a t m e n t i n v i t r o

( 2 3 8 )

a n d o n

p a t i e n t s

w i t h

p r i m a r y

b i l i a r y

c i r r h o s i s a s

s h o w n

b y

a m u l t i c e n t e r

s t u d y ( 2 3 9 ) .

P r i m a r y


o f h u m a n a n d

r o d e n t o r i g i n h a v e a l s o b e e n

u s e d

r e c e n t l y

t o

a n a l y z e

t h e

m e c h a n i s m o f a c t i o n o f

i m p o r t a n t

c l a s s e s

o f

c h e m o p r o t e c t i v e

a g e n t s

t h a t

m o d u l a t e m e t a b o l i c

p r o c e s s i n g

o f

c a r c i n o g e n s ,

s u c h a s

d i t h i o l e t h i o n e s ,

i s o t h i o c y a n a t e s ,

a n d

f l a v o n e s .

B y

u s i n g

p r i -

m a r y

h u m a n


w e h a v e

s h o w n

t h a t

o l t i p r a z ,

a

s y n t h e t i c

d e r i v a t i v e

o f

1 , 2 -

d i t h i o n e - 3 - t h i o n e ,

a n d

s u l f o r a p h a n e ,

a n

i s o t h i o c y a n a t e

f o u n d i n

b r o c c o l i ,

a r e b o t h

t r a n s i e n t i n h i b i t o r s o f C Y P s

a n d

i n d u c e r s

o f

G S T s

( 2 4 0 , 2 4 1 ) .

H o w e v e r , n o t a l l GST

f o r m s

a r e

e q u a l l y

i n d u c e d .

T h u s

o l t i p r a z

m a i n l y i n d u c e s

G S T

a l p h a f o r m s t h a t

a r e

n o t i n v o l v e d i n


o f

G S H t o

t h e

c a r c i n o g e n i c

e x o - 8 , 9 - e p o x i d e

m e t a b o l i t e

o f

a f l a t o x i n

B ,

( 2 4 0 ) .

I n

V t o

S t u d i e s o n

C l a r a c t e r i s t i c

I v e r L e s i o n s a n d

A s o c i a t e d


M e c i a n i s m s

I n d u c e d

b y

T o x i c

C o m p o u n d s

M o s t i n

v i t r o


o n

t o x i c

c o m p o u n d s

h a v e b e e n

d i r e c t e d

t o

t h e

r e p r o d u c i b i l i t y o f l i v e r - s p e c i f i c

l e s i o n s

a n d


c h a n g e s

a s s o c i a t e d w i t h

t h e

l e s i o n s .

C h a r a c t e r s * i c L i v e r L e s i o n s .

A n u m b e r

o f i n v e s t i g a t i o n s

h a v e

t e s t e d

i n v i t r o

l i v e r

c e l l m o d e l s f o r t h e i r a b i l i t y

t o

r e p r o d u c e

s t e a t o s i s a n d c h o l e s t a s i s a n d

i n d u c e

s p e c i f i c

o r g a n e l l e

i n j u r y .

I s o l a t e d

h e p a t o c y t e s r e p r o d u c e i n v i v o

s t e a t o s i s .

I m p a i r m e n t

o f

f a t t y

a c i d

m e t a -

b o l i s m

a n d

p r o t e i n

s y n t h e s i s

h a s

b e e n

r e p o r t e d i n

r a t h e p a t o c y t e


e x p o s e d

t o

d r u g s

k n o w n

t o

p r o d u c e

s t e a t o -

s i s i n

v i v o , e . g . , t e t r a c y c l i n e

( 2 4 2 ) a n d

m e t h o t r e x a t e ( 2 4 3 ) .

I s o l a t e d h e p a t o c y t e s

i n

s u s p e n s i o n ,

h e p a t o c y t e

c o u p l e t s , a n d

p r i m a r y

h e p a t o -

c y t e

c u l t u r e s h a v e b e e n u s e d t o

d e m o n -

s t r a t e

t h e

c h o l e s t a t i c

p o t e n t i a l o f v a r i o u s

c o m p o u n d s t h a t i n d u c e

c h o l e s t a s i s

i n v i v o

( 2 4 4 ) .

B o t h

m o r p h o l o g i c a n d

f u n c t i o n a l

a p p r o a c h e s

h a v e b e e n u s e d .

T h e u s e o f

f l u -

o r e s c e n t - l a b e l e d s u b s t r a t e s a n d i m a g i n g

t e c h n i q u e s a l l o w s v i s u a l i z a t i o n

o f

c h a n g e s

i n

b i l e

c a n a l i c u l u s

s t r u c t u r e s

( 2 4 4 , 2 4 5 ) .

H e p a t o c y t e c o u p l e t s p o s s e s s

a

b i l e c a n a l i c u -

l u s t h a t i s f u n c t i o n a l f o r a f e w

h o u r s .

P h a l l o i d i n ,

b i l e

a c i d s s u c h a s t a u r o l i t h o -

c h o l a t e a n d

c h e n o d e o x y c h o l a t e ,

e r y t h r o -

m y c i n e s t o l a t e , a n d

e t h y l n y l

e s t r a d i o l

i n h i b i t e d

c a n a l i c u l a r

s e c r e t i o n ,

w h e r e a s

n o n -


c o m p o u n d s

w e r e

i n e f f e c t i v e

( 2 4 6 ) .

C o m p o u n d s t h a t i n d u c e c h o l e s t a s i s

b y a c t i n g

o n

o t h e r l i v e r c e l l

t y p e s ,

e . g . ,

p a r a c -

e t a m o l ,

g a l a c t o s a m i n e ,

a n d


b a s e ,

a s w e l l

a s

c h l o r p r o m a z i n e ,

w e r e

a l s o

i n e f f e c t i v e

( 2 4 6 ) .

T h e a b s e n c e

o f

e f f e c t

o f

c h l o r p r o m a z i n e c o u l d b e

e x p l a i n e d

b y

a n

i n c u b a t i o n

p e r i o d

t h a t

w a s

t o o

s h o r t

( 2 h r ) ,

a s t h i s

d r u g

i s

r e p o r t e d l y


o n l y

a f t e r


( 2 4 7 ) . B y c o n t r a s t ,

i t s

c h o l e s t a t i c a c t i o n h a s b e e n s h o w n

i n

p r i -

m a r y r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s a f t e r

a

l o n g e r

e x p o s u r e

p e r i o d

( 2 4 8 ) .

A l t e r a t i o n

o f

a c t i n

f i l a m e n t s

b y

p h a l l o i d i n

t r e a t m e n t h a s

b e e n

o b s e r v e d

i n

b ot h m o d e l s

( 2 4 4 , 2 4 6 ) .

T a u r o u r s o d e o x y c h o l a t e , w h i c h p r e v e n t s

l i v e r

l e s i o n s

i n


c h o l e s t a s i s ( 2 4 9 ) ,

p a r t l y p r e v e n t e d c h a n g e s

i n

p e r i c a n a l i c u l a r

a c t i n

m i c r o f i l a m e n t

d i s t r i b u t i o n

b y

t a u -

r o l i t h o c h o l a t e o r e r y t h r o m y c i n

e s t o l a t e i n

i s o l a t e d r a t

h e p a t o c y t e

c o u p l e t s w h e n a d d e d

a t

e q u i m o l a r


w i t h

e i t h e r

c o m p o u n d ( 2 5 0 ) .

S p e c i f i c


o r g a n e l l e s

h a v e

b e e n n ot e d w i t h v a r i o u s

c o m p o u n d s .

R a t

o r

h u m a n

h e p a t o c y t e s e x p o s e d

t o a m i o -

d a r o n e

s h o w

t h e f o r m a t i o n

o f m u l t i l a m e l -

l a r i n c l u s i o n

b o d i e s

i n

t h e a b s e n c e

o f o t h e r

s t r u c t u r a l

c h a n g e s

( 2 5 1 , 2 5 2 ) .

T h e

m a j o r

m e t a b o l i t e

d e s e t h y l a m i o d a r o n e a l s o

i n d u c e s t h e

f o r m a t i o n o f s u c h

i n c l u s i o n s

( 2 5 2 ) . P e r h e x i l i n e

m a l e a t e a n d a n t i b i o t i c s

s u c h a s

e r y t h r o m y c i n a n d

t r o s p e c t i n s u l f a t e

( 2 5 3 )

a r e o t h e r

c o m p o u n d s

t h a t i n d u c e

a c c u m u l a t i o n o f c o n c e n t r i c

m e m b r a n e s i n

l y s o s o m e s

i n

c u l t u r e d


A l i n e a r

c o r r e l a t i o n w a s o b t a i n e d

b e t w e e n

a m i o -

d a r o n e

i n t r a c e l l u l a r c o n c e n t r a t i o n a n d

t h e

p e r c e n t

v o l u m e

d e n s i t y

o f i n c l u s i o n

b o d i e s

( 2 5 2 ) .

M y e l i n o i d

i n c l u s i o n

b o d i e s

w e r e

o b s e r v e d w i t h c o n c e n t r a t i o n s

o n l y

t w o

t o

f i v e

t i m e s

a s

h i g h

a s

t h e

u s u a l

d r u g

l e v e l s

i n

a m i o d a r o n e - t r e a t e d

p a t i e n t s .

P e r o x i s o m e

p r o l i f e r a t i o n

a f t e r t r e a t m e n t o f

r a t s w i t h

s e v e r a l

h y p o l i p i d e m i c a g e n t s ,

i n c l u d i n g

c l o f i b r i c

a c i d , n a f e n o p i n ,

a n d

b e c l o f i b r i c

a c i d ,

h a s

b e e n

r e p r o d u c e d

i n v i t r o

( 2 5 4 - 2 5 6 ) . S p e c i f i c

m i t o c h o n d r i a l a l t e r -

a t i o n s h a v e b e e n o b s e r v e d i n

r a t


b o t h i n v i v o a n d

i n

v i t r o

a f t e r

t r e a t m e n t

w i t h d i t e r c a l i n i u m

( 2 5 7 ) .

B i o c b e m i c a l M e c h a n i s m s .

T h e r e

a r e

m a n y e x a m p l e s i l l u s t r a t i n g

t h e

u s e

o f i s o -

l a t e d


t o

d e t e r m i n e

t h e

m e c h a -

n i s m s i n v o l v e d

i n

x e n o b i o t i c - m e d i a t e d

h e p a t o t o x i c i t y .

S i m i l a r

c h e m i c a l -

o r

d r u g -

i n d u c e d b i o c h e m i c a l

c h a n g e s

i n v i v o a n d i n

v i t r o h a v e b e e n

d e m o n s t r a t e d f o r v a r i o u s

d r u g s , p a r t i c u l a r l y

t h e

c l a s s i c a l

h e p a t o t o x i n s

s u c h a s

p a r a c e t a m o l ,

C C 1 4 ,

a n d

h a l o t h a n e ,

a s

w e l l a s

f o r m e t a l s .

H e p a t o t o x i c i t y

o f

p a r a c e t a m o l i s

i n d u c e d

b y t h e f o r m a t i o n o f

N - a c e t y l - p -

b e n z o q u i n o n e i m i n e

( 2 5 8 ) . When

t h i s

r e a c t i v e m e t a b o l i t e ,

f o r m e d b y

a

C Y P -

m e d i a t e d p a t h w a y , i s

n o t c o m p l e t e l y

d e t o x -

i f i e d

b y

c o n j u g a t i o n w i t h g l u t a t h i o n e , i t

b i n d s

t o c e l l u l a r p r o t e i n s

a n d i n d u c e s l i v e r

i n j u r y .

S p e c i e s d i f f e r e n c e s

i n

s e n s i t i v i t y t o

p a r a c e t a m o l t o x i c e f f e c t s h a v e b e e n

r e p r o -

d u c e d i n

i s o l a t e d h e p a t o c y t e s . I n

a d d i t i o n ,

b y u s i n g

i s o l a t e d h a m s t e r


B o o b i s e t a l .

( 2 5 9 ) h a v e

s h o w n

t h a t b i n d -

i n g

o f t h e

r e a c t i v e m e t a b o l i t e

t o

c e l l u l a r

p r o t e i n s a n d

l o s s

o f c e l l

v i a b i l i t y

c o u l d b e

d i s s o c i a t e d . A f t e r a 9 0 - m i n

i n c u b a t i o n w i t h

p a r a c e t a m o l ,

h a m s t e r h e p a t o c y t e s

w e r e

w a s h e d t o r e m o v e

a l l u n b o u n d d ru g a n d

r e f r e s h e d

w i t h

p a r a c e t a m o l - f r e e

m e d i u m .

A

r a p i d

l o s s o f c e l l

v i a b i l i t y w a s

o b s e r v e d a n d

w a s

p r e v e n t e d

b y

t h e

a d d i t i o n o f

N - a c e t y l -

c y s t e i n e .

T h i s

s u g g e s t e d

t h a t

t h e

r e d u c i n g

a g e n t

w a s

a b l e

t o r e p a i r o x i d a t i v e

d a m a g e

i n d u c e d b y

N - a c e t y l - p - b e n z o q u i n o n e i m i n e .

T h e

t a r g e t

p r o t e i n s

t h a t i n t e r a c t w i t h p a r a c -

e t a m o l - r e a c t i v e m e t a b o l i t e s

h a v e b e e n

a n a l y z e d b y B a r t o l o m e e t a l .

( 2 6 0 ) .

A t

l e a s t

t w o

p r o t e i n s o f

4 4

a n d

5 8 k D a , r e s p e c -

t i v e l y ,

w e r e

c o v a l e n t l y

a s s o c i a t e d

w i t h

p a r a c e t a m o l

b y

u s i n g

a n t i b o d i e s d i r e c t e d

a g a i n s t

p a r a c e t a m o l - b o u n d

a n t i g e n s .

C C 1 4

i s

a n o t h e r

h e p a t o t o x i c a n t

t h a t

h a s

b e e n

s t u d i e d

e x t e n s i v e l y .

A

c o m p a r a t i v e

s t u d y

i n

v i v o a n d i n

p r i m a r y

r a t

h e p a t o c y t e


H e a l t h P e r s p e c t i v e s

*

V o l 1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

X

A p r i l

1 9 9 8

22



I N

V I T R O

H E P A T O T O X I C I T Y

c u l t u r e s

l e d

t o t h e

c o n c l u s i o n

t h a t

t h e

b i o c h e m i c a l c h a n g e s

i n d u c e d

b y

t h i s

t o x i c

c o m p o u n d w e r e g e n e r a l l y

s i m i l a r

i n

b o t h

m o d e l s b u t

m o r e

r a p i d

i n

v i t r o

( 2 6 1 ) .

D e c r e a s e d p r o t e i n

a n d

l i p o p r o t e i n s y n t h e -

s i s ( 2 6 2 ) ,

i n c r e a s e d

l i p i d p e r o x i d a t i o n

( 2 6 3 ) ,

a n d

p o t e n t i a t i o n

o f

C C l 4 - i n d u c e d

l i v e r i n j u r y b y p r e t r e a t m e n t

o f t h e a n i m a l s

w i t h

2 , 5 - h e x a n e d i o n e ,

i s o p r o p a n o l ,

a n d

c h l o r d e c o n e

( 2 6 4 , 2 6 5 )

h a v e b e e n

r e p r o -

d u c e d

i n

i s o l a t e d

r a t


A s

i n

v i v o ,

t h e CYP

i n h i b i t o r

S K F - 5 2 5

i n h i b -

i t e d t o x i c i t y i n d u c e d b y C C 1 4 ( 2 6 6 ) .

I n

s o m e s t u d i e s i n v i v o o b s e r v a t i o n s

w e r e

n o t

r e p r o d u c e d

i n

i n v i t r o

m o d e l s ,

p r o b a b l y

b e c a u s e o f i n a p p r o p r i a t e e x p e r i m e n t a l

c o n d i t i o n s

( 2 6 3 ) .

E v i d e n c e

s h o w s t h a t

C C 1 4 u s e d

a t

r e l a t i v e l y h i g h d o s e s i n d u c e s

m e m b r a n e i n j u r y

t h r o u g h a

d i r e c t

s o l v e n t

a c t i o n

( 2 6 7 ) .

T h e

a n e s t h e t i c

h a l o t h a n e

c a u s e s

t w o

t y p e s

o f l i v e r

d a m a g e :

t r a n s i e n t

l i v e r

d y s -

f u n c t i o n

i n a b o u t

20

o f a n e s t h e t i z e d

p a t i e n t s

o r ,

i n

r a r e

c a s e s ,

a s e v e r e

h e p a t i t i s

r e s u l t i n g

f r o m

a c e l l - m e d i a t e d

i m m u n e

r e s p o n s e . B o t h

f o r m s

a r e

t h o u g h t

t o

b e

r e l a t e d t o m e t a b o l i s m

o f t h e a n e s t h e t i c

t h a t o c c u r s t h r o u g h

a n

o x i d a t i v e a n d

a

r e d u c t i v e

p a t h w a y .

S e v e r a l

s t u d i e s

h a v e e s t a b l i s h e d

a


b e t w e e n

h e p a t i c

c e n t r i l o b u l a r

i n j u r y a n d

l o w

o x y g e n

t e n s i o n ; g r e a t e r

l i v e r

d a m a g e

h a s

b e e n a s s o c i a t e d w i t h t h e f o r -

m a t i o n o f u n s t a b l e

r e a c t i v e


t h r o u g h

t h e r e d u c t i v e

p a t h w a y .


i n

i s o l a t e d


f r o m

h a l o t h a n e h a s

b e e n d e m o n s t r a t e d

( 1 7 2 , 2 6 8 , 2 6 9 ) .

R a t

c e l l s

a r e

m o r e s e n s i t i v e t h a n

t h e i r

h u m a n

c o u n -

t e r p a r t s

( 1 7 2 ) .

I n

a r e c e n t

s t u d y u s i n g

e n r i c h e d

p e r i p o r t a l

a n d

c e n t r i l o b u l a r

h e p a -

t o c y t e

s u b p o p u l a t i o n s

i n

p r i m a r y c u l t u r e ,

w e

f o u n d t h a t

t h e l a t t e r w e r e

t h e m o s t

s e n s i -

t i v e t o t h e

a n e s t h e t i c a n d t h a t i n c r e a s e d

r e d u c t i v e

m e t a b o l i s m o f

h a l o t h a n e

i n d u c e d

b y d e c r e a s i n g o x y g e n

c o n c e n t r a t i o n i s

n o t

a

c r i t i c a l

p a r a m e t e r

f o r

t h e

o c c u r r e n c e o f l i v e r

d a m a g e

i n t h e s e c e l l s

( 2 7 0 ) .

I n

i m m u n e - m e d i a t e d

h a l o t h a n e

h e p a t i t i s , n e o a n t i g e n s

a r e g e n e r a t e d

u n d e r

o x i d a t i v e

c o n d i t i o n s

a n d

i n v o l v e

t h e

f o r -

m a t i o n

o f

h i g h l y

r e a c t i v e i n t e r m e d i a t e

t r i -

f l u o r o a c e t y l

g r o u p s

c a p a b l e

o f

c o v a l e n t l y

b i n d i n g

t o l i v e r

p r o t e i n s

( 2 7 1 ) .

I s o l a t e d


h a v e

a l s o

b e e n

u s e d

t o

i d e n t i f y

i m m u n o g e n i c

m o i e t i e s

t h a t a r e

g e n e r a t e d

a f t e r

e x p o s u r e

t o h a l o t h a n e

a n d a r e

r e s p o n -

s i b l e f o r t h i s i m m u n e

r e s p o n s e .

A n

i n t e r -

e s t i n g a p p r o a c h

h a s

b e e n

p r o p o s e d b y

s o m e

g r o u p s ;

i t i n v o l v e s

u s i n g


f r o m

p r e t r e a t e d

a n i m a l s

a n d

a n a l y z i n g

c y t o t o x i c

e f f e c t s

o f

s e r a

f r o m

p a t i e n t s

w i t h

h a l o t h a n e - i n d u c e d h e p a t i t i s .

S t r o n g

e v i d e n c e

w a s p r o v i d e d t h a t i n v i v o a d m i n i s t r a t i o n

o f

h a l o t h a n e c o u l d

g e n e r a t e n e o a n t i g e n i c

d e t e r m i n a n t s

o n

h e p a t o c y t e p l a s m a

m e m -

b r a n e s t h a t

a r e

v e r y

s i m i l a r ,

i f n o t

i d e n t i c a l ,

t o t h o s e

g e n e r a t e d

i n

p a t i e n t s w i t h

h a l o t h a n e

h e p a t i t i s ( 2 7 2 ) .

H o w e v e r ,

t h e u s e

o f a n i m a l

h e p a t o c y t e s c o u l d

h a v e

s o m e

l i m i -

t a t i o n s .

I n

a

r e c e n t

s t u d y

( 2 7 3 ) ,

w e p r e -

p a r e d a h a p t e n - s p e c i f i c

a n t i f l u o r o a c e t y l

a n t i b o d y t h a t

r e a c t e d

w i t h n o v e l

a n t i g e n s i n

p r i m a r y h u m a n h e p a t o c y t e c u l t u r e s

e x p o s e d

t o

h a l o t h a n e . T h e s e

a n t i g e n s , l o c a t e d

i n t h e

e n d o p l a s m i c

r e t i c u l u m a nd o n t h e

p l a s m a

m e m b r a n e , h a d

m o l e c u l a r m a s s e s

s i m i l a r

t o

t h o s e o f t r i f l u o r o a c e t y l p r o t e i n a n t i g e n s

e x p r e s s e d

i n

v i v o

( 2 7 3 ) .

T h e

c e l l u l a r d i s t r i -

b u t i o n o f t h e s e a n t i g e n s

w a s c o m p a t i b l e w i t h

t h e i r g e n e r a t i o n b y C Y P s

a n d t h e i r a c c e s s i -

b i l i t y t o

i m m u n e

e f f e c t o r s

i n p a t i e n t s .

I n a

r e c e n t

s t u d y

C Y P 2 E l

w a s

f o u n d

t o

b e

a

c e l l

s u r f a c e a u t o a n t i g e n

i n

h a l o t h a n e h e p a t i t i s

( 2 7 4 ) .

A s

a l r e a d y

n o t e d w i t h

c l o m e t a c i n ,

a n o t h e r

d r u g k n o w n

t o

i n d u c e

i m m u n o -

a l l e r g i c

h e p a t i t i s i n h u m a n s ( 2 7 5 ) , p r i m a r y

h u m a n h e p a t o c y t e s c o u l d

r e p r e s e n t

a v a l u -

a b l e m o d e l

f o r

d e t e c t i n g c i r c u l a t i n g a n t i b o d -

i e s i n t h e s e r a

o f

p a t i e n t s w i t h

h a l o t h a n e

h e p a t i t i s a n d

f o r

c h a r a c t e r i z i n g t h e a n t i g e n s

r e c o g n i z e d b y

t h e s e

a n t i b o d i e s .

I s o l a t e d

h e p a t o c y t e s a r e

a l s o w i d e l y

u s e d

t o

s t u d y

m e t a l - i n d u c e d t o x i c i t y

[ r e v i e w e d

b y

K l a a s s e n a n d

S t a c e y ( 2 7 6 ) ] .

S o m e

m e t a l s s u c h a s c a d m i u m

a n d

m e r -

c u r y

a r e

n o t

e s s e n t i a l

f o r

l i f e

a n d

a r e

c o n -

s i d e r e d

o n l y

f r o m

a t o x i c o l o g i c

p o i n t

o f

v i e w , w h e r e a s

o t h e r

m e t a l s

s u c h

a s i r o n

a n d

c o p p e r

a r e e s s e n t i a l a n d

o n l y

t h e i r e x c e s s

i s

r e s p o n s i b l e

f o r t i s s u e d a m a g e .

S e v e r a l

s t u d i e s

h a v e s h o w n

t h a t

c a d m i u m i s

c y t o t o x i c

t o

i s o l a t e d

h e p a t o -

c y t e s ( 2 7 6 , 2 7 7 )

a n d a n

a p p r o x i m a t e

c o m -

p a r i s o n

o f m e t a l

d o s e s

i n

v i v o

a n d

i n v i t r o

i n d i c a t e s

t h a t c e l l d e a t h

o c c u r s

a t s i m i l a r

l e v e l s . R e c e n t

s t u d i e s

h a v e

s h o w n t h a t

c a d m i u m

p r e t r e a t m e n t

e x e r t s

a

p r o t e c t i v e

e f f e c t

a g a i n s t

t h e g e n o t o x i c i t y

o f 2 - a c e t y l -

a m i n o f l u o r e n e i n c u l t u r e d r a t h e p a t o c y t e s

( 2 7 8 ) . T h i s e f f e c t c o u l d b e r e l a t e d

t o a n

i n c r e a s e

o f

m e t a l l o t h i o n e i n

( t h o u g h t

t o b e

i n v o l v e d

i n

p r o t e c t i o n

m e c h a n i s m s ) a f t e r

c a d m i u m t r e a t m e n t .

A

p r o t e c t i o n a g a i n s t

c a d m i u m

t o x i c i t y i n

v i t r o

h a s

b e e n

r e p o r t e d

w i t h z i n c ,

l e a d , a n d i r o n ( 2 7 9 ) .

I n v e s t i g a t i o n s

o f i r o n

t o x i c i t y i n i s o l a t e d


a f t e r a

s h o r t p e r i o d

o f

e x p o s u r e

d i d

n o t

d e m o n s t r a t e t h a t t h i s m e t a l

w a s

c y t o t o x i c ( 2 8 0 ) .

H o w e v e r , M o r e l e t a l .

( 2 8 1 ) d e m o n s t r a t e d t h a t f e r r i c

i r o n i n

i t s

c o m p le x ed f or m w i t h

n i t r i l o t r i a c e t i c

a c i d

i n d u c e d

a

d o s e -

a n d

t i m e - d e p e n d e n t

t o x i c i t y t o

p r i m a r y

r a t h e p a t o c y t e c u l t u r e s .

T h e c e l l s w e r e e x p o s e d

t o 5 ,

2 0 ,

o r 1 0 0

j i M

f e r r i c i r o n

u p

t o 4 8

h r ;

c y t o t o x i c i t y w a s


b y

p r o d u c t i o n o f f r e e r a d i c a l s

a n d

L DH

r e l e a s e .

T h e

u s e

o f

c h e l a t o r s

t o

r e m o v e

m e t a l s

i s

a n

i m p o r t a n t

a p p l i c a t i o n o f i n v i t r o h e p a t o -

c y t e

s y s t e m s

i n

t h e a s s e s s m e n t

o f

m e t a l

c y t o t o x i c i t y ( 2 8 2 , 2 8 3 ) .

A s a n e x a m p l e ,

p y o v e r d i n P f ,

a n

i r o n c h e l a t o r

i s o l a t e d f r o m

p s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s ,

w a s r e c e n t l y f o u n d

t o

p r e v e n t c y t o t o x i c i t y

i n d u c e d

b y f e r r i c

n i t r i l o a c e t a t e i n

r a t h e p a t o c y t e c u l t u r e s .

I t

a p p e a r s

t o b e

a s e f f e c t i v e

a s

t h e

w e l l - k n o w n

c h e l a t o r d e s f e r r i o x a m i n e

B

( 2 8 4 ) .

M e t a l s

i n d u c e

t o x i c i t y b y

a v a r i e t y o f m e c h a n i s m s .

I n

a d d i t i o n t o p e r o x i d a t i o n , w h i c h i s f r e -

q u e n t l y e l i c i t e d ,

i n h i b i t i o n o f

m i t o c h o n -

d r i a l

f u n c t i o n

o r

a d e n o s i n e p h o s p h a t a s e s

a n d


w i t h

s u l f h y d r y l

g r o u p s

h a v e

b e e n

r e p o r t e d

( 2 7 7 ) .

F u t u r e S t r a t e g i e s

L i v e r

C e l l

M o d e l s

T h e

a d v a n t a g e s

a n d l i m i t a t i o n s o f d i f f e r e n t

l i v e r


a r e

w e l l d o c u m e n t e d ;

t h e

p o t e n t i a l

u s e f o r

p h a r m a c o t o x i c o l o g i c

r e s e a r c h i s

s u m m a r i z e d

i n T a b l e

6 . B e c a u s e

t h e i s o l a t e d

p e r f u s e d

l i v e r m o d e l

c a n

b e u s e d

o n l y

f o r

a f e w

h o u r s ,

t w o o t h e r i n t a c t

T a b l e 6 .

A p p l i c a t i o n s

o f h u m a n i n v i t r o

l i v e r


i n

p h a r m a c o t o x i c o l o g i c

s t u d i e s .

I n

v i t r o l i v e r

p r e p a r a t i o n a

S u s p e n d e d

C u l t u r e d

A s s a y

S l i c e s

h e p a t o c y t e s h e p a t o c y t e s

M i c r o s o m e s

M e t a b o l i c

p r o f i l e

+

±

+

±

C o m p a r a t i v e i n t e r s p e c i e s

m e t a b o l i s m

+

±

+ +

K i n e t i c s t u d i e s

±

+

+

+

D r u g - d r u g


+

+ +

+

I n d u c t i o n

s t u d i e s

+ b

+

T o x i c i t y s c r e e n i n g

±

+ b

+

M e c h a n i s t i c

s t u d i e s

+

+ b

+

U n s c h e d u l e d

D N A

s y n t h e s i s

t e s t

±

±

+

A b b r e v i a t i o n s :

± ,

p o s s i b l e

t o

s o m e

e x t e n t ;

+ ,

c u r r e n t l y

u s e d ;

-

n o t s u i t a b l e .

a I s o l a t e d

o r g a n s

n o t

i n c l u d e d b e c a u s e

o f

l a c k o f

a v a i l a b i l i t y .

b S h o r t - t e r m

s t u d y .


H e a l t h

P e r s p e c t i v e s *

V o l 1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2 *

A p r i l

1 9 9 8 5 2 3



A .

G U I L L O U Z O

s y s t e m s , i . e . , s l i c e s

( 2 8 5 )

a n d

i s o l a t e d


( 2 8 6 , 2 8 7 ) , a p p e a r t o b e

m o r e

p o w e r f u l

m o d e l s

t o

m i m i c t h e

i n v i v o

s i t u a -

t i o n .

I s o l a t e d

h e p a t o c y t e s e i t h e r

i n

s u s p e n -

s i o n

o r

i n

c u l t u r e

a r e u s e d

m o r e

f r e q u e n t l y .

H o w e v e r , o n e m u s t f a c e

t h e

p r o b l e m s o f


a n d

i n s t a b i l i t y

i n

p r i m a r y

c u l t u r e

o f n o r m a l


a n d

t h e

i n a b i l i t y

o f

p e r m a n e n t

h e p a t o c y t e c e l l l i n e s t o

e x p r e s s

a l l

o f

t h e

f u n c t i o n s e x h i b i t e d

b y

t h e i r n o r m a l

c o u n t e r p a r t s i n

v i v o .

N o r m a l

H e p a t o c y t e s .

T h e

m a j o r

l i m i t a t i o n i n

t h e

u s e o f

n o r m a l


i s t h e


o f

h u m a n

s a m p l e s

a n d ,

t o

a l e s s e r

d e g r e e ,

o f

l a r g e

m a m m a l

l i v e r s .

T e c h n i c a l , s a f e t y , a n d

e t h i c a l

p r o b l e m s

a r e

a s s o c i a t e d

w i t h

t h e

u s e o f

h u m a n

l i v e r

t i s -

s u e . T h e

o p p o r t u n i t y

t o

o b t a i n


f r o m

s o m e

a n i m a l

s p e c i e s

s u c h

a s

m o n k e y

o r

d o g

i s

a l s o

l i m i t e d ,

p r i m a r i l y

f o r

e t h i c a l

a n d

e c o n o m i c a l

r e a s o n s .

B e c a u s e o f

t h e

p r o g r e s s

i n

l i v e r t r a n s p l a n t a t i o n

i n

h u m a n s ,

n o n p a t h o l o g i c

w h o l e

o r g a n s

a v a i l a b l e

f o r

c e l l i s o l a t i o n a r e no w

e x t r e m e l y

s c a r c e .

P a t h o l o g i c

a n d i n j u r e d l i v e r s c a n

b e

u s e d ;

h o w e v e r ,

c e l l

y i e l d s d e p e n d

o n t h e e x t e n t

o f

t h e

l e s i o n s ,

e . g . ,

s t e a t o s i s .

C i r r h o t i c l i v -

e r s

a r e

p o o r l y

d i s s o c i a t e d

b y


t r e a t m e n t .


h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

a r e

n o w

m o r e

f r e q u e n t l y p r e p a r e d

f r o m

s u r g i c a l

t i s s u e

p i e c e s ;

t h i s

r e q u i r e s

c a r e -

f u l

e v a l u a t i o n

o f

t h e i r

f u n c t i o n a l a c t i v i t i e s

b e f o r e

a n y d a t a

c a n

b e

c o r r e c t l y

i n t e r p r e t e d .

H u m a n l i v e r

s a m p l e s

m u s t b e t r e a t e d

a s

b i o h a z a r d o u s .

I d e a l l y ,

p o s s i b l e

i n f e c t i o n

o f

t h e

d o n o r b y

h e p a t i t i s

a n d / o r h u m a n

i m m u n o d e f i c i e n c y

v i r u s e s

s h o u l d

b e

d e t e r -

m i n e d b e f o r e

h a n d l i n g

a n d

t r a n s p o r t

o f

l i v e r t i s s u e .

T h e

s c a r c i t y

a n d

u n p r e d i c t a b i l i t y

o f

h u m a n l i v e r

t i s s u e l e a d t o t h e

q u e s t i o n

o f

w h e t h e r l i v e r

t i s s u e a n d l i v e r c e l l b a n k s

s h o u l d b e e s t a b l i s h e d a n d

m a d e a v a i l a b l e

t o

t h o s e

w i l l i n g

t o

c o n d u c t


w i t h

h u m a n l i v e r .

A l t h o u g h

c e l l

r e c o v e r y

i s s t i l l

l i m i t e d ,

t h e r e

i s

n o w

e v i d e n c e

t h a t

b o t h

h u m a n

a n d a n i m a l l i v e r


c e l l s

c a n

b e


f o r

m o n t h s o r

e v e n

y e a r s .

H o w e v e r ,

i t

i s

n o t

c o n c e i v a b l e t h a t

s u p p l i e s

o f

h u m a n

l i v e r t i s s u e

w i l l

d r a m a t i -

c a l l y

i n c r e a s e

i n t h e

f u t u r e

i f

o n e

a b i d e s

b y

e t h i c a l

a n d

l e g a l

a s p e c t s ,

a n d

c o n s e q u e n t l y

n o

l a r g e t i s s u e

o r

c e l l b a n k

t h a t

w i l l a l l o w


o f

s a m p l e s

t h r o u g h

a

l a r g e

a r e a

c o u l d b e

e s t a b l i s h e d .

O n e

w a y

t o

a c c o m -

m o d a t e

b o t h

e t h i c a l

a s p e c t s a n d t h e n e e d

f o r

f u n c t i o n a l l y

c h a r a c t e r i z e d s a m p l e s

m i g h t b e t o

s e t

u p

a

d a t a b a s e

a n d a

t i s s u e

b a n k u n d e r

t h e

c o n t r o l o f

a n

i n s t i t u t i o n a l

o r g a n i z a t i o n

a t t h e

n a t i o n a l

l e v e l ,

w i t h

c e l l s

o r

t i s s u e s

d i s t r i b u t e d a s r e f e r e n c e

s a m p l e s .

A n o t h e r

c r i t i c a l

p r o b l e m

i s

t h e

f u n c t i o n a l

s t a b i l i t y

o f n o r m a l a d u l t

h e p a t o -

c y t e s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

R e c e n t

i n v e s t i g a -

t i o n s

h a v e

c l e a r l y


t h a t

t h r e e

g r o u p s

o f

f a c t o r s ,

i . e . ,

s o l u b l e

f a c t o r s ,

e x t r a -

c e l l u l a r

m a t r i x

c o m p o n e n t s ,

a n d c e l l - c e l l

i n t e r a c t i o n s ,

i m p r o v e

i n

v i t r o


o f


f u n c t i o n s .

H o w e v e r ,

w h a t -

e v e r

t h e

c u l t u r e

c o n d i t i o n s

u s e d ,

h e p a t o -

c y t e s

e x h i b i t

p h e n o t y p i c

c h a n g e s

w i t h i n a

f e w

d a y s i n v i t r o .

T h e

c o c u l t u r e m o d e l

t h a t a s s o c i a t e s

h e p a t o c y t e s w i t h r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l c e l l s

r e m a i n s

t h e m o s t

p o w e r f u l

i n v i t r o

s y s t e m ( 2 8 8 ) . K n o w l e d g e

o f

f a c t o r s

r e q u i r e d f o r

h e p a t o c y t e r e p l i c a t i o n

i n v i t r o i s

a n o t h e r

i m p o r t a n t

c h a l l e n g e f o r t h e

f u t u r e .

T h e r e f o r e , s i g n i f i c a n t

p r o g r e s s

m u s t

b e

m a d e

t o i m p r o v e


c o n d i t i o n s -

p r o g r e s s

t h a t w i l l

l e a d t o

p r o l o n g e d m a i n t e -

n a n c e o f

l i v e r - s p e c i f i c f u n c t i o n s

a n d / o r t o

m o r e

t h a n

a

f e w

c y c l e s

o f

r e p l i c a t i o n

i n

v i t r o . S u c h

i m p r o v e m e n t s

w o u l d

b e

p a r t i c u -

l a r l y

a d v a n t a g e o u s

f o r

l o n g - t e r m

h e p a t i c

t o x i c o l o g y

a n d

c a r c i n o g e n e s i s

s t u d i e s .

H e p a t o c y t e C e l l L i n e s . T h e

d e v e l o p -

m e n t

o f

i m m o r t a l i z e d h e p a t o c y t e

c e l l

l i n e s

r e p r e s e n t s a

p r o m i s i n g

a l t e r n a t i v e

t o

n o n -

p r o l i f e r a t i n g o r

p o o r l y

r e p l i c a t i n g

n o r m a l

h e p a t o c y t e s . D e v e l o p m e n t o f

i m m o r t a l -

i z e d a n i m a l

h e p a t o c y t e

l i n e s

t h a t

r e t a i n

v a r i o u s

s p e c i f i c l i v e r

p r o p e r t i e s i s

p r o v i n g

d i f f i c u l t .

I m m o r t a l i z e d

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

w o u l d b e t h e

o p t i m a l

c h o i c e , b u t

t h e y a p p e a r t o

b e

s t i l l

m o r e

d i f f i c u l t

t o

o b t a i n

a n d

m a i n t a i n

i n

c u l t u r e

w i t h

s o m e


f u n c t i o n s

( 2 8 9 ) .

T h i s

m e a n s

t h a t

o p t i m a l

c o n d i t i o n s

f o r

i m m o r t a l i z i n g

a n d

c u l t u r i n g

a d u l t


m u s t

b e

f u r t h e r

d e f i n e d .

An

i n t e r e s t i n g n e w

a p p r o a c h

i s

t o

e s t a b l i s h

h e p a t o c y t e l i n e s

f r o m

t r a n s g e n i c

m i c e .


n o n t r a n s f o r m e d f e t a l

h e p a t o c y t e l i n e s o b t a i n e d

b y


o f

t h e

l i v e r

b e f o r e v i s i b l e

p a t h o l o g i c c h a n g e s

r e p o r t e d l y

r e t a i n

h i g h l y d i f f e r e n t i a t e d

f u n c t i o n s

f o r

m a n y

m o n t h s w h e n

c u l t u r e d

i n a


m e d i u m ( 2 9 0 ) .

P r e s e n t l y ,

a t t e m p t s

a r e

b e i n g

m a d e

t o t r a n s f e c t

h u m a n

h e p a t o c y t e

c e l l

l i n e s

w i t h cDNA

e n c o d i n g C Y P s

i n

w h i c h

e x p r e s s i o n i s

m i s s i n g

a n d

t o o b t a i n

t r a n s -

g e n i c m i c e

e x p r e s s i n g

human

d r u g -


e n z y m e s .

I n

V W n )

T o x i c i t y

T e s t s

C o n s i d e r a b l e

i n f o r m a t i o n

h a s b e e n

p u b l i s h e d

r e g a r d i n g

t h e u s e

o f t h e

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e ,

e i t h e r i n

s u s p e n s i o n

o r i n

p r i -

m a r y c u l t u r e ,

f o r

i n v i t r o

t o x i c i t y t e s t i n g

( 2 8 6 , 2 8 7 ) .

A l t h o u g h c a r r i e d

o u t

w i t h

d i f -

f e r e n t

m e t h o d o l o g i e s ,

t h e s e

s t u d i e s

g i v e

u s

a

g o o d

i d e a

a b o u t

a d v a n t a g e s

a n d


o f

t h e

m o d e l

f o r

s c r e e n i n g

a n d

m e c h a n i s t i c

a n a l y s i s

o f


t o x i c

c o m p o u n d s .

T h e

i n t e r l a b o r a t o r y

v a l i d a t i o n

s c h e m e s

p r e v i o u s l y

c o n d u c t e d

u s i n g

d a s s i c a l

e x p e r i -

m e n t a l c o n d i t i o n s a n d

v a r i o u s i n

v i t r o e n d

p o i n t s

i n d i c a t e t h a t

n o

s i n g l e

p r o t o c o l

i . e . ,

o n e c u l t u r e

c o n d i t i o n )

c a n

b e u s e d

f o r

t e s t -

i n g e v e r y c o m p o u n d

( 1 7 4 )

a n d t h a t

p r o b -

l e m s o f

i n t e r p r e t a t i o n

c a n b e

g r e a t l y

m a g n i f i e d

w h e n

t e s t s

i n v o l v i n g

d i f f e r e n t

m e c h a n i s m s

o f

t o x i c i t y

a n d

e n d

p o i n t s

a r e

c o m p a r e d

2 9 1 ) .

E a r l y

p h e n o t y p i c c h a n g e s

o c c u r r i n g

i n


a f t e r

s e e d i n g

a r e a

m a j o r

l i m i -

t a t i o n f o r

l o n g - t e r m t o x i c i t y

s c r e e n i n g .

H o w e v e r ,

t h e u s e o f

m o r e


c u l t u r e

c o n d i t i o n s

e . g . , c o c u l t u r e s )

c o u l d

o v e r c o m e t h i s

d r a w b a c k .


t h e

f o l l o w i n g

s t r a t e g y

i s

p r o p o s e d

f o r

s h o r t - t e r m

a n d

l o n g - t e r m

t o x i c i t y

s t u d i e s .

C o m p o u n d s

c o u l d

f i r s t b e

t e s t e d

o n

n o n h e p a t i c

c e l l s

e . g . ,

f i b r o b l a s t s ,

c e l l

l i n e s ) u s i n g n o n s p e c i f i c

e n d

p o i n t s

o v e r

a s h o r t

p e r i o d

n o t

e x c e e d i n g

2 0

t o 2 4

h r ,

a n d

I C 5 0

v a l u e s

w o u l d

b e c a l c u l a t e d .

T h i s

s t u d y

w o u l d e l i c i t

i n f o r m a t i o n o n c o m -

p o u n d p r o p e r t i e s

s u c h a s

s o l u b i l i t y

a n d

i n t r i n s i c

t o x i c i t y .

T h e s e d a t a

w o u l d b e u s e -

f u l f o r

t e s t i n g

t h e

c o m p o u n d

o n

p r i m a r y

r a t


i n a s e c o n d

s t e p .

When


c h e m i c a l - i n d u c e d

c e l l u l a r

l e s i o n s a r e

s u s p e c t e d , a p p r o p r i a t e

l i v e r - s p e -

c i f i c

i n d i c a t o r s

w o u l d

b e u s e d .

L o n g - t e r m


w o u l d

b e e s t i m a t e d

u s i n g

s o p h i s t i c a t e d c u l t u r e

s y s t e m s e . g . ,

c o c u l -

t u r e s . T h e c u l t u r e s

w o u l d b e

e x p o s e d

d a i l y

f o r

e i t h e r a

f e w

d a y s

o r 1

t o 2

w e e k s .

I f

l i v e r - s p e c i f i c t o x i c i t y

i s


w i t h

a n i m a l


a n d


i f

s p e c i e s


e x i s t

i n m e t a b o l i c

p a t h -

w a y s

o f

t h e t e s t

c o m p o u n d ,

t h e

u s e o f

h u m a n

h e p a t o c y t e s w o u l d b e

d e s i r a b l e .

A n o t h e r

s t e p

c o u l d b e

c a r r i e d o u t

i n v i t r o

u s i n g

m i x e d

c u l t u r e s

o f


a n d

n o n h e p a t i c

t a r g e t

c e l l s

e . g . , k i d n e y

c e l l s ) .

T h i s

l a s t m o d e l

s y s t e m

w o u l d

d e t e r m i n e

w h e t h e r


f o r m e d

b y l i v e r c e l l s

w o u l d

b e

t o x i c

f o r

o t h e r

c e l l s .

T h e s e

c u l t u r e s

c o u l d b e

p e r f o r m e d

i n

s t a t i c

c o n -

d i t i o n s

( o r p r e f e r a b l y i n

p e r i f u s i o n c o n d i -

t i o n s ) , t h e r e b y b e t t e r m i m i c k i n g

i n v i v o

x e n o b i o t i c

c l e a r a n c e

( 2 9 2 ) .

I n a d d i t i o n t o

i n t a c t

h e p a t o c y t e

m o d e l s ,

l i v e r

S 9 ,

m i c r o s o m e s , a n d

g e n e t i c -

a l l y

e n g i n e e r e d c e l l s

a r e

a l s o

o f

i n t e r e s t ,


f o r t h e

s t u d y o f

m u t a g e n s . O n e

m a y

w o n d e r

w h e t h e r

t h e

r a t l i v e r

S 9 c o u l d

b e

r e p l a c e d

b y

m i c r o s o m e s

f r o m

g e n e t i c -

a l l y e n g i n e e r e d

c e l l s

e x p r e s s i n g h u m a n

C Y P s

i n a p p r o p r i a t e c o n c e n t r a t i o n s

i n t h e


H e a l t h

P e r s p e c t i v e s * V o l

1 0 6 , S u p p l e m e n t 2

*

A p r i l 1 9 9 8

24



IN

VI T R O

HEPATOTOXIC ITY

Ames t e s t . I t

c o u l d

a l s o

b e

p o s s i b l e t o

m i m i c

t h e h u m a n

s i t u a t i o n ,

i n c l u d i n g t h e

g e n e t i c

d e f e c t s

i n

s o m e C Y P s .

C o n c l u s i o n s

O v e r t h e l a s t

f e w

d e c a d e s ,

m a j o r

p r o g r e s s

h a s b e e n

m a d e

i n

t h e

d e v e l o p m e n t o f


m e t h o d s

f o r

t h e


a n d

c u l t u r e

o f



a n d

l i v e r s l i c e s

o f b o t h

a n i m a l a n d h u m a n

o r i g i n . T h e u s e f u l n e s s

o f i s o l a t e d

h e p a t o -

c y t e s

f o r d r u g m e t a b o l i s m

a n d

t o x i c i t y

s t u d i e s h a s

b e e n d e m o n s t r a t e d . I t i s

t i m e t o

s t a n d a r d i z e

m e t h o d o l o g i e s

t h a t

c o u l d b e

v a l i d a t e d a n d

a c c e p t e d

b y

t h e s c i e n t i f i c

c o m m u n i t y a n d b y

r e g u l a t o r y

a g e n c i e s .

H o w e v e r ,

i t

s h o u l d

b e c o n s i d e r e d t h a t i f

a

g r e a t d e a l o f

i n f o r m a t i o n c a n b e

o b t a i n e d

f r o m i n v i t r o

m o d e l s , t h e

a p p r o p r i a t e s t r a t -

e g y

i n

t h e c o u r s e

o f

d r u g d e v e l o p m e n t

i s

t h e i r u s e

i n

a l t e r n a n c e w i t h

i n v i v o

s t u d i e s .

M o r e o v e r ,

s o m e

l i m i t a t i o n s e x i s t

r e l a t e d t o t h e

o c c u r r e n c e

o f

e a r l y

p h e n o -

t y p i c

c h a n g e s

i n

c u l t u r e d


t h e i r

l o w

p r o l i f e r a t i n g

c a p a c i t y ,

a n d

t h e s c a r c e

a v a i l a b i l i t y o f h u m a n

h e p a t o c y t e s . T h e

m a j o r c h a l l e n g e s

o f

t h e

c o m i n g y e a r s

w i l l

b e

t o

f u r t h e r

i m p r o v e

c u l t u r e

c o n d i t i o n s

f o r

p r i m a r y a d u l t


a n d

t o

o b t a i n

i m m o r t a l i z e d , u n t r a n s f o r m e d


r e t a i n i n g

l i v e r - s p e c i f i c f u n c t i o n s .

T h e u s e

o f

n e w

t e c h n o l o g i e s

( e . g . ,

s c a n n i n g

l a s e r

c y t o m e t e r , c o n f o c a l

m i c r o s c o p y ) s h o u l d

a l s o a l l o w t h e

d e v e l o p m e n t o f

n e w ,

r e l i a b l e ,

a n d s e n s i t i v e

t o x i c i t y

t e s t s .

REFERENCES

A N D

N O T E S

1 . C o n w a y

J P , P o p p J A ,

T h u r m a n R G .

T h e

e f f e c t

o f

s i z e o n t h e

p o r t a l

c i r c u l a t i o n

o f

h e p a t i c

n o d u l e s f r o m

c a r c i n o g e n

t r e a t e d

r a t s . C a n c e r R e s

4 3 : 3 3 7 4 - 3 3 7 9

( 1 9 8 3 ) .

2 .

P l a a

C L .

M e c a n i s m e s d e s a t t e i n t e s

h e p a t i q u e s d ' o r i g i n e c h i m -

i q u e . I n : F o i e

i s o l e p e r f u s d ( B a l l e t

F ,

T h u r m a n

R G ,

e d s ) .

P a r i s : L e s E d i t i o n s

I N S E R M

a n d

J o h n

L i b b e y ,

E u r o t e x t ,

1 9 9 3 ; 4 1 1 - 4 2 6 .

3 .

B e l i n s k y S A , K a u f f m a n

F C ,

J i

S ,

L e m a s t e r s

J J ,

T h u r m a n

R G .

R a t e s o f

a l l y l a l c o h o l

m e t a b o l i s m

i n p e r i p o r t a l a n d

p e r i c e n t r a l

r e g i o n s

o f t h e

l i v e r l o b u l e .

M o l

P h a r m a c o l

2 5 : 1 5 8 - 1 6 4 ( 1 9 8 4 ) .

4 . S m i t h

P F ,

K r a c k

G , McKee K L , J o h n s o n

DG ,

G a n d o l f i A J ,

H r u b y

V J ,

K r u m d i e c k

C L , B r e n d e l

K .

M a i n t e n a n c e o f a d u l t

r a t

l i v e r

s l i c e s

i n

d y n a m i c

o r g a n

c u l t u r e .

I n

V i t r o C e l l

D e v

B i o l

2 2 : 7 0 6 - 7 1 2 ( 1 9 8 6 ) .

5 .

B r e n d e l

K .

G a n d o l f i

A J ,

K r u m d i e c k C L , S m i t h P F .

O r g a n

s l i c e s

r e v i s i t e d . T r e n d s

P h a r m a c o l

S c i

8 : 1 1 - 1 5 ( 1 9 8 7 ) .

6 .

V i c k e r s

AE M.

U s e o f h u m a n

o r g a n

s l i c e s

t o

e v a l u a t e

t h e b i o -

t r a n s f o r m a t i o n a n d

d r u g - i n d u c e d

s i d e - e f f e c t s

o f

p h a r m a c e u t i -

c a l s .

C e l l

B i o l

T o x i c o l

1 0 : 4 0 7 - 4 1 4

( 1 9 9 4 ) .

7 .

B e a m a n d

J A ,

P r i c e R J ,

C u n n i n g h a m e M E , L a k e

B G . C u l t u r e

o f

p r e c i s i o n - c u t

l i v e r

s l i c e s : e f f e c t

o f s o m e

p e r o x i s o m e

p r o l i f e r a -

t o r s .

F o o d C h e m T o x i c o l

3 1 : 1 3 7 - 1 4 7

( 1 9 9 3 ) .

8 .

H o w a r d

R B , C h r i s t e n s e n

A K ,

G i b b s

A F ,

P e s c h

L A .

T h e

e n z y -

m a t i c


o f

i s o l a t e d

i n t a c t


c e l l s

f r o m

r a t

l i v e r .

J

C e l l

B i o l

3 5 : 6 7 5 - 6 8 4

( 1 9 6 7 ) .

9 .

B e r r y

M N , F r i e n d D S .

H i g h - y i e l d p r e p a r a t i o n

o f i s o l a t e d

r a t

l i v e r


c e l l s .

A


a n d f i n e s t r u c t u r a l

s t u d y . J

C e l l B i o l

4 3 : 5 0 6 - 5 2 0

( 1 9 6 9 ) .

1 0 .

S e g l e n

P O . P r e p a r a t i o n

o f

i s o l a t e d

r a t

l i v e r c e l l s .

M e t h o d s C e l l

B i o l

1 3 : 2 9 - 8 3

( 1 9 7 5 ) .

1 1 .

G u y o m a r d

C ,

C h e s n d

C ,

M e u n i e r

B ,

F a u t r e l

A ,

C l e r c C ,

M o r e l

F , R i s s e l

M ,

C a m p i o n J P , G u i l l o u z o

A .

P r i m a r y

c u l -

t u r e

o f

a d u l t r a t

h e p a t o c y t e s a f t e r

4 8

h o u r


o f t h e

l i v e r w i t h c o l d

UW

s o l u t i o n .

H e p a t o l o g y

1 2 : 1 3 2 9 - 1 3 3 6

( 1 9 9 0 ) .

1 2 .

Q u i s t o r f f

B , G r u n n e t N ,

C o r n e l l

N W .

D i g i t o n i n p e r f u s i o n

o f

r a t l i v e r . A n e w

a p p r o a c h

i n

t h e

s t u d y

o f


c o m p a r t -

m e n t a t i o n

i n

t h e

l i v e r .

B i o c h e m

J 2 2 6 : 2 1 8 9 - 2 9 7

( 1 9 8 5 ) .

1 3

L i n d r o s

K O ,

P e n t t i l a K E .

D i g i t o n i n - c o l l a g e n a s e

p e r f u s i o n

f o r

e f f i c i e n t

s e p a r a t i o n

o f

p e r i p o r t a l

a n d

p e r i v e n o u s


B i o c h e m

J

2 2 8 : 5 6 0 - 5 7 5

( 1 9 8 5 ) .

1 4 .

L e R u m e u r

E , G u g u e n - G u i l l o u z o

C ,

B e a u m o n t

C ,

S a u n i e r

A ,

G u i l l o u z o

A .

A l b u m i n

s e c r e t i o n

a n d

p r o t e i n s y n t h e s i s

b y

c u l -

t u r e d

d i p l o i d a n d

t e t r a p l o i d r a t


s e p a r a t e d

b y

e l u t r i -

a t i o n .

E x p

C e l l

R e s

1 4 7 : 2 4 7 - 2 5 4

( 1 9 8 3 ) .

1 5 . G a u t a m

A , N g O C ,

B o y e r J L .

I s o l a t e d r a t

h e p a t o c y t e

c o u p l e t s

i n

s h o r t t e r m

c u l t u r e , s t r u c t u r a l

c h a r a c t e r i s t i c s a n d

p l a s m a

m e m b r a n e

r e o r g a n i z a t i o n .

H e p a t o l o g y

7 : 2 1 6 - 2 2 3

( 1 9 8 7 ) .

1 6 .

W i l t o n

J C ,

W i l l i a m s

D E ,

S t r a i n

A J , P a r s l o w

R A , C h i p m a n

J K ,

C o l e m a n R . P u r i f i c a t i o n

o f

h e p a t o c y t e c o u p l e t s b y

c e n t r i f u g a l

e l u t r i a t i o n .

H e p a t o l o g y 1 4 : 1 8 0 - 1 8 3

( 1 9 9 1 ) .

1 7 . Wang S R ,

R e n a u d

G ,

I n f a n t e

J ,

C a t a l a

D , I n f a n t e R . I s o l a t i o n

o f r a t

h e p a t o c y t e s w i t h ED TA a n d

t h e i r m e t a b o l i c

f u n c t i o n s i n

p r i m a r y

c u l t u r e . I n V i t r o

C e l l D e v

B i o l 2 1 : 5 2 6 - 5 3 0

( 1 9 8 5 ) .

1 8 .

B e r r y M N ,

E d w a r d s A M ,

B a r r i t t

G J .

I s o l a t e d h e p a t o c y t e s :

p r e p a r a t i o n ,

p r o p e r t i e s a n d a p p l i c a t i o n s .

I n : L a b o r a t o r y

T e c h n i q u e s

i n B i o c h e m i s t r y

a n d

M o l e c u l a r B i o l o g y . V o l 2 1 .

A m s t e r d a m : E l s e v i e r , 1 9 9 1 ; 6 1 - 6 4 .

1 9 . M e r e d i t h M J .

R a t

h e p a t o c y t e s p r e p a r e d

w i t h o u t

c o l l a g e n a s e :

p r o l o n g e d

r e t e n t i o n o f


c h a r a c t e r i s t i c s i n

c u l t u r e .

C e l l B i o l

T o x i c o l

4 : 4 0 5 - 4 2 5 ( 1 9 8 8 ) .

2 0 .

W r i g h t M C ,

P a i n e A J . E v i d e n c e

t h a t t h e l o s s o f

r a t l i v e r

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

i n v i t r o

i s n o t

s o l e l y

a s s o c i a t e d

w i t h

t h e u s e

o f

c o l l a g e n a s e ,

t h e

l o s s o f c e l l - c e l l c o n t a c t s

a n d / o r t h e a b s e n c e

o f a n

e x t r a c e l l u l a r m a t r i x . B i o c h e m

P h a r m a c o l

4 3 : 2 3 3 7 - 2 3 4 3

( 1 9 9 2 ) .

2 1 . G u g u e n - G u i l l o u z o C ,

G u i l l o u z o A . M e t h o d s

f o r p r e p a r a t i o n o f

a d u l t a n d f e t a l h e

p a t o c y t e s .

I n :

I s o l a t e d a n d

C u l t u r e d


( G u i f l o u z o

A ,

G u g u e n - G u i l l o u z o C , e d s ) .

P a r i s : L e s

E d i t i o n s I N S E R M

a n d

J o h n L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 6 ; 1 - 1 2 .

2 2 . V a n ' t K l o o s t e r

G A E ,

W o u t e r s e n - V a n

N i j n a n t e n

F M A ,

K l e i n

WR ,

B l a a u b o e r

B J ,

N o o r d h o e k

J ,

V a n

M i e r t

A S J P A M . E f f e c t s

o f

v a r i o u s m e d i u m

f o r m u l a t i o n s

a n d

a t t a c h m e n t s u b s t r a t a

o n

t h e

p e r f o r m a n c e

o f

c u l t u r e d

r u m i n a n t


i n

b i o t r a n s -

f o r m a t i o n s t u d i e s .

X e n o b i o t i c a

2 2 : 5 2 3 - 5 3 4

( 1 9 9 2 ) .

2 3 . M c Q u e e n C A .

I s o l a t i o n a n d c u l t u r e o f


f r o m d i f f e r -

e n t

l a b o r a t o r y s p e c i e s .

I n :

I n V i t r o

B i o l o g i c a l

S y s t e m s .

M e t h o d s

i n

T o x i c o l o g y . V o l

I

( T y s o n C A , F r a z i e r

J M , e d s ) . S a n D i e g o ,

C A : A c a d e m i c

P r e s s , 1 9 9 3 ; 2 5 5 - 2 7 0 .

2 4 .

F a b r e

G , R a h m a n i R , P l a c i d i

M ,

C o m b a l b e r t

J ,

C o v o

J ,

C a n o

J P , C o u l a n g e C ,

D u c r o s

M ,

R a m p a l

M.

C h a r a c t e r i z a t i o n o f

m i d a z o l a m m e t a b o l i s m

u s i n g

h u m a n

h e p a t i c

m i c r o s o m a l

f r a c -

t i o n s

a n d h e p a t o c y t e s

i n

s u s p e n s i o n

o b t a i n e d

b y p e r f u s i n g

w h o l e

h u m a n l i v e r s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 7 : 4 3 8 9 - 4 3 9 7

( 1 9 8 8 ) .

2 5 .

G u g u e n - G u i l l o u z o C , G u i l l o u z o

A . Human

h e p a t o c y t e c u l -

t u r e s . I n : I n V i t r o

B i o l o g i c a l

S y s t e m s .

M e t h o d s

i n

T o x i c o l o g y .

V o l

I

( T y s o n

C A , F r a z i e r

J M , e d s ) . S a n

D i e g o ,

C A : A c a d e m i c

P r e s s ,

1 9 9 3 ; 2 7 1 - 2 7 8 .

2 6 .

E t i e n n e

P L , B a f f e t

G , D e s v e r g n e

B ,

B o i s n a r d - R i s s e l

M ,

G l a i s e

D ,


C .

T r a n s i e n t

e x p r e s s i o n

o f

c - f o s

a n d

c o n -

s t a n t

e x p r e s s i o n

o f

c - m y c

i n

f r e s h l y i s o l a t e d

a n d

c u l t u r e d n o r -

m a l

a d u l t r a t


O n c o g e n e

R e s

3 : 2 5 5 - 2 6 2

( 1 9 8 8 ) .

2 7 . P a d g h a m

C RW ,

P a i n e

A J . A l t e r e d

e x p r e s s i o n

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 mRNAs, a n d


o f o t h e r

t r a n s c r i p t s e n c o d i n g

k e y

h e p a t i c

f u n c t i o n s ,

a r e t r i g g e r e d

d u r i n g

t h e

i s o l a t i o n o f r a t


B i o c h e m

J

2 8 9 : 6 2 1 - 6 2 4 ( 1 9 9 3 ) .

2 8 .

G u i l l o u z o A ,

C h e s n e

C . X e n o b i o t i c

m e t a b o l i s m

i n

e p i t h e l i a l

c e l l

c u l t u r e s .

I n : C e l l C u l t u r e M o d e l s o f

E p i t h e l i a l

T i s s u e s : A

P r a c t i c a l

A p p r o a c h ( S h a w

A J ,

e d ) .

O x f o r d : O x f o r d

U n i v e r s i t y

P r e s s ,

1 9 9 6 ; 6 7 - 8 5 .



*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t 2

*

A p r i l 1 9 9 8

52 5



GUILLOUZO

2 9 .

G u i l l o u z o A , B e a u n e

P ,

G a s c o i n MN ,

B e g u e J M ,

C a m p i o n

J P ,

G u e n g e r i c h

F P , G u g u e n - G u i l l o u z o C . M a i n t e n a n c e o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 i n

c u l t u r e d a d u l t h u m a n


B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 4 : 2 9 9 1 - 2 9 9 5

( 1 9 8 5 ) .

3 0 .

H o u s s i n

D ,

C a p r o n M , C e l i e r C , C r e s t e i l

T , D e m a u g r e F ,

B e a u n e P .

E v a l u a t i o n

o f i s o l a t e d h u m a n


L i f e S c i

3 3 : 1 8 0 5 - 1 8 0 9 ( 1 9 8 3 ) .

3 1 .

V o n s

C ,

P e g o r i e r J P , I v a n o v

M A , G i r a r d J , M e l c i o n

C , C o r d i e r

A , F r a n c o

D .

C o m p a r i s o n

o f

c u l t u r e d

h u m a n


i s o -

l a t e d f r o m

s u r g i c a l b i o p s i e s

o r

c o l d - s t o r e d o r g a n d o n o r l i v e r s .

T o x i c o l

I n

V i t r o

4 : 4 3 2 - 4 3 4 ( 1 9 9 0 ) .

3 2 . S e g l e n

P O . P r o t e i n - c a t a b o l i c

s t a t e

o f



B i o c h i m B i o p h y s

A c t a 4 9 6 : 1 8 2 - 1 9 1 ( 1 9 7 7 ) .

3 3 .

F r e m o n d

B ,

M a l a n d a i n C , G u y o m a r d

C ,

C h e s n e

C , G u i l l o u z o

A ,

C a m p i o n J P .

C o r r e c t i o n o f b i l i r u b i n


i n t h e

G u n n r a t

u s i n g h e p a t o c y t e s

i m m o b i l i z e d

i n

a l g i n a t e g e l

b e a d s

a s a n

e x t r a c o r p o r e a l

b i o a r t i f i c i a l

l i v e r . C e l l

T r a n s p l a n t

2 : 4 5 3 - 4 6 0 ( 1 9 9 3 ) .

3 4 .

S o r r e n t i n o

D ,

V a n

N e s s

K ,

R i b e i r o

J ,

M i l l e r

CM. F u n c t i o n a l

a n d

m o r p h o l o g i c a l

f e a t u r e s

o f

i s o l a t e d


p r e s e r v e d

i n

U n i v e r s i t y

o f W i s c o n s i n s o l u t i o n .

H e p a t o l o g y

1 4 : 3 3 1 - 3 3 9

( 1 9 9 1 ) .

3 5 . S a n d k e r

GW,

S l o o f f

M J H ,

G r o o t h u i s G M M .

D r u g t r a n s p o r t ,

v i a b i l i t y a n d

m o r p h o l o g y

o f

i s o l a t e d

r a t


p r e s e r v e d

f o r

2 4

h o u r s

i n

U n i v e r s i t y o f

W i s c o n s i n

s o l u t i o n .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

4 3 : 1 4 7 9 - 1 4 8 5 ( 1 9 9 2 ) .

3 6 .

P o u l l a i n

MG,

F a u t r e l

A ,

G u y o m a r d C ,

C h e s n e C ,

G r i s l a i n

L ,

G u i l l o u z o

A .

V i a b i l i t y

a n d

p r i m a r y

c u l t u r e o f

r a t


a f t e r

h y p o t h e r m i c

p r e s e r v a t i o n :

t h e

s u p e r i o r i t y

o f

t h e

L e i b o v i t z

m e d i u m o v e r

t h e UW s o l u t i o n

f o r

c o l d

s t o r a g e . H e p a t o l o g y

1 5 : 9 7 - 1 0 6 ( 1 9 9 2 ) .

3 7 . C h e s n e

C ,

G u i l l o u z o A .


o f


h e p a -

t o c y t e s :

a

c r i t i c a l e v a l u a t i o n

o f

f r e e z i n g

a n d

t h a w i n g

c o n d i t i o n s .

C r y o b i o l o g y 2 5 : 3 2 3 - 3 3 0

( 1 9 8 8 ) .

3 8 .

L o r e t z

L J ,

L i

A P , F l y e

M W ,

W i l s o n

A G E .

O p t i m i z a t i o n

o f

c r y -

o p r e s e r v a t i o n p r o c e d u r e s

f o r

r a t

a n d h u m a n



1 9 : 4 8 9 - 4 9 8 ( 1 9 8 9 ) .

3 9 .

L a w r e n c e

J N ,

B e n f o r d

D J . D e v e l o p m e n t

o f

a n

o p t i m a l

m e t h o d

f o r t h e

c r y o p r e s e r v a t i o n

o f


a n d

t h e i r

s u b s e q u e n t

m o n o l a y e r c u l t u r e . T o x i c o l

I n

V i t r o 5 : 3 9 - 5 1

( 1 9 9 1 ) .

4 0 .

C h e s n e C ,

G u y o m a r d C ,

F a u t r e l

A ,

P o u l l a i n

MG,

F r e m o n d B ,

De J o n g

H ,

G u i l l o u z o

A .

V i a b i l i t y

a n d

f u n c t i o n

i n

p r i m a r y

c u l t u r e o f

a d u l t


f r o m

v a r i o u s a n i m a l

s p e c i e s a n d

h u m a n

b e i n g s

a f t e r

c r y o p r e s e r v a t i o n . H e p a t o l o g y

1 8 : 4 0 6 - 4 1 4

1 9 9 3 ) .

4 1 .

C h e s n e

C , G u y o m a r d C ,

G r i s l a i n

L ,

C l e r c

C ,

F a u t r e l

A ,


U s e

o f


a n i m a l a n d h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

f o r


s t u d i e s . T o x i c o l

I n

V i t r o

5 : 4 7 9 - 4 8 2

( 1 9 9 1 ) .

4 2 . U t e s c h

D ,

D i e n e r

B ,

M o l i t o r

E ,

O e s c h

F ,

P l a t t K L .

C h a r a c t e r i z a t i o n o f


r a t l i v e r


c e l l s

b y

m e t a b o l i s m o f

d i a g n o s t i c

s u b s t r a t e s

a n d a c t i v i t i e s

o f

r e l a t e d

e n z y m e s .

B i o c h e m P h a r m a c o l

4 4 : 3 0 9 - 3 1 5 ( 1 9 9 2 ) .

4 3 .

Do u

M ,

De

S o u s a G ,

L a c a r e l l e

B , P l a c i d i

M , L e c h e n e d e l a

P o r t e

P ,

D o m i n g o

M , L a f o n t

H ,

R a h m a n i R .

T h a we d h u m a n


i n

p r i m a r y c u l t u r e . C r y o b i o l o g y

2 9 : 4 5 4 - 4 6 9

( 1 9 9 2 ) .

4 4 .

P o w i s G , S a n t o n e K S , M e l d e r

D C , T h o m a s

L ,

M o o r e

D . J .

W i l k e T J .


o f r a t

a n d

d o g h e p a t o c y t e s

f o r

s t u d i e s o f

x e n o b i o t i c

m e t a b o l i s m

a n d a c t i v a t i o n .

D r u g

M e t a b

D i s p

1 5 : 8 2 6 - 8 3 2 ( 1 9 8 7 ) .

4 5 . F a u t r e l

A , J o l y B , G u y o m a r d

C , G u i l l o u z o

A . L o n g - t e r m

m a i n -

t e n a n c e o f

d r u g


e n z y m e

a c t i v i t i e s

i n


a f t e r

c r y o p r e s e r v a t i o n .

T o x i c o l

A p p l

P h a rm a c ol 1 4 7 : 1 1 0 - 1 1 4

( 1 9 9 7 ) .

4 6 .

G u y o m a r d C , R i a l l a n d

L ,

F r e m o n d B ,

C h e s n e C ,

G u i l l o u z o

A .

I n f l u e n c e o f

a l g i n a t e

g e l e n t r a p m e n t a n d

c r y o p r e s e r v a t i o n o n

s u r v i v a l

a n d

x e n o b i o t i c

m e t a b o l i s m

c a p a c i t y

o f r a t h e p a t o c y t e s .

T o x i c o l

A p p l P h a r m a c o l 1 4 1 : 3 4 9 - 3 5 6

( 1 9 9 6 ) .

4 7 .

S i r i c a

A E ,

P i t o t

H C .

D r u g

m e t a b o l i s m

a n d e f f e c t s o f c a r c i n o -

g e n s

i n

c u l t u r e d

h e p a t i c c e l l s .

P h a r m a c o l

R e v

3 1 : 2 0 5 - 2 2 8

( 1 9 8 0 ) .

4 8 .


C , G u i l l o u z o A . M o d u l a t i o n

o f f u n c t i o n a l

a c t i v i t i e s

i n c u l t u r e d


M o l

C e l l B i o c h e m

5 3 / 5 4 : 3 5 - 5 6

( 1 9 8 3 ) .

4 9 .

G u z e l i a n

P S ,

B i s s e l l

DM ,

M e y e r U A . D r u g m e t a b o l i s m i n

a d u l t

r a t


i n

p r i m a r y m o n o l a y e r

c u l t u r e .

G a s t r o e n t e r o l o g y

7 2 : 1 2 3 2 - 1 2 3 9 ( 1 9 7 7 ) .

5 0 . F a h l

WE,

M i c h a l o p o u l o s G ,

S a t t l e r G L ,

J e f c o a t e

C R ,

P i t o t

H C .

C h a r a c t e r i s t i c s

o f

m i c r o s o m a l

e n z y m e

c o n t r o l s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

r a t


A r c h

B i o c h e m

B i o p h y s

1 9 2 : 6 1 - 7 2

( 1 9 7 9 ) .

5 1 . M a s l a n s k y

C J ,

W i l l i a m s

GM.

P r i m a r y c u l t u r e s

a n d

t h e

l e v e l s o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

i n


f r o m

m o u s e , r a t ,

h a m s t e r

a n d

r a b b i t

l i v e r .

I n

V i t r o

1 8 : 6 6 3 - 6 9 3

( 1 9 8 2 ) .

5 2 .

B e g u e J M ,


C ,

P a s d e l o u p N ,


P r o l o n g e d


o f a c t i v e

c y t o c h r o m e P - 4 5 0

i n

a d u l t r a t


c o - c u l t u r e d w i t h

a n o t h e r l i v e r

c e l l

t y p e .

H e p a t o l o g y

4 : 8 3 9 - 8 4 2 ( 1 9 8 4 ) .

5 3 .

S t e w a r d

A R ,

D a n n a n

G A ,

G u z e l i a n

P S ,

G u e n g e r i c h

F P .

C h a n g e s

i n

t h e c o n c e n t r a t i o n o f

s e v e n f o r m s o f

c y t o c h r o m e

P -

4 5 0

i n

p r i m a r y c u l t u r e s

o f

a d u l t

r a t


M o l

P h a r m a c o l

2 7 : 1 2 5 - 1 3 2

( 1 9 8 5 ) .

5 4 .

S c h u e t z

E G ,

L i

D ,

O m i e c i n s k i

J , M u l l e r - E b e r h a r d

U ,

K l e i n m a n

H K ,

E l s w i c k

B ,

G u z e l i a n

P S .

R e g u l a t i o n o f g e n e

e x p r e s s i o n

i n

a d u l t r a t


c u l t u r e d o n

a

b a s e m e n t

m e m b r a n e

m a t r i x .

J

C e l l

P h y s i o l

1 3 4 : 3 0 9 - 3 2 3

( 1 9 9 3 ) .

5 5 .

K o c a r e k

T A ,

S c h u e t z

E G ,

G u z e l i a n

P S . E x p r e s s i o n o f

m u l t i p l e

f o r m s

o f

c y t o c h r o m e P - 4 5 0 s

i n

p r i m a r y c u l t u r e s o f

r a t

h e p a t o -

c y t e s m a i n t a i n e d

o n

m a t r i g e l .

M o l

P h a r m a c o l

4 3 : 3 2 8 - 3 3 4

1 9 9 3 ) .

5 6 .

D a u j a t M ,

P i c h a r d

L ,

D a l e t

C ,

L a r r o q u e C ,

B o n f i l s

C , P o m p o n

D ,

L i

D ,

G u z e l i a n

P S ,

M a u r e l P .

E x p r e s s i o n

o f

f i v e

f o r m s

o f

m i c r o s o m a l

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s o f r a b b i t


t r e a t e d w i t h

v a r i o u s c l a s s e s

o f

i n d u c e r s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 6 : 3 5 9 7 - 3 6 0 6

( 1 9 8 7 ) .

5 7 .

N a m i k i

M ,

D e g a w a M ,

M a s u k i

T ,

H a s h i m o t o

Y .

C h a n g e s

i n

t h e

q u a n t i t y

a n d

a c t i v i t y

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 i s o z y m e s

i n

p r i -

m a r y

c u l t u r e d r a t

h e p a t o c y t e s . J p n

J

C a n c e r R e s

8 0 : 1 2 6 - 1 3 1

( 1 9 8 9 ) .

5 8 . P e r r o t

N ,

C h e s n e

C ,

d e

W a z i e r s

I , C o n n e r

J , B e a u n e

P ,

G u i l l o u z o

A .

E f f e c t s o f

e t h a n o l a n d c l o f i b r a t e o n

e x p r e s s i o n

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 e n z y m e s

a n d

e p o x i d e

h y d r o l a s e i n

c u l t u r e s

a n d

c o c u l t u r e s

o f

r a t


E u r

J

B i o c h e m 2 0 0 : 2 5 5 - 2 6 2

( 1 9 9 1 ) .

5 9 .

Ne wman

S ,

G u z e l i a n

P S . S t i m u l a t i o n o f

d e

n o v o

s y n t h e s i s

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

b y


i n

p r i m a r y n o n p r o l i f e r a t -

i n g

c u l t u r e s o f a d u l t r a t

h e p a t o c y t e s . P r o c N a t l A c a d

S c i US A

7 9 : 2 9 2 2 - 2 9 2 6 ( 1 9 8 2 ) .

6 0 .

E l s h o u r b a g y N A ,

B a r w i c k

J L ,

G u z e l i a n

P S .


c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

b y

p r e g n e n o l o n e - 1 6 a - c a r b o n i t r i l e

i n

p r i -

m a r y

m o n o l a y e r

c u l t u r e s

o f

a d u l t

r a t


a n d i n a c e l l -

f r e e

t r a n s l a t i o n

s y s t e m .

J

B i o l

C h e m

2 5 6 : 6 0 6 0 - 6 0 6 8

( 1 9 8 1 ) .

6 1 .

L a k e B G ,

G r a y T J B , S t u b b e r f i e l d

C R ,

B e a m a n d

J A , G a n g o l l i

S D .


l a u r i c

a c i d

h y d r o x y l a t i o n a n d m a i n t e n a n c e o f

c y t o c h r o m e P - 4 5 0

c o n t e n t

b y

c l o f i b r a t e i n

p r i m a r y

c u l t u r e s o f

r a t


L i f e

S c i

3 3 : 2 4 9 - 2 5 4 ( 1 9 8 3 ) .

6 2 .

W a t k i n s

P B ,

W r i g h t o n S A , S c h u e t z

E G , M a u r e l

P ,

G u z e l i a n

P S .

M a c r o l i d e

a n t i b i o t i c s i n h i b i t

t h e

d e g r a d a t i o n

o f

t h e

g l u c o -

c o r t i c o i d - r e s p o n s i v e

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 p

i n

r a t


i n

v i v o

a n d

i n

p r i m a r y m o n o l a y e r

c u l t u r e .

J

B i o l C h e m

2 6 1 : 6 2 6 4 - 2 6 7 1

( 1 9 8 6 ) .

6 3 . F o r s t e r

U , L u i p p o l d

G ,

S c h w a r t z

L R .

I n d u c t i o n

o f

m o n o o x y -

g e n a s e

a n d

U D P - g l u c u r o n y l t r a n s f e r a s e

a c t i v i t i e s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

r a t


D r u g

M e t a b

D i s p o s

4 : 3 5 3 - 3 6 0

( 1 9 8 6 ) .

6 4 .

V a n d e n b e r g h e

Y ,

G l a i s e

D ,

M e y e r

D J , G u i l l o u z o A , K e t t e r e r

B .


t r a n s f e r a s e

i s o e n z y m e s

i n

c u l t u r e d r a t h e p a t o -

c y t e s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 7 : 2 4 8 2 - 2 4 8 5

( 1 9 8 8 ) .

6 5 .

V a n d e n b e r g h e Y ,

M o r e l

F ,

P e m b l e S ,

T a y l o r J B ,

R o g i e r s V ,

R a t a n a s a v a n h

D ,

V e r c r u y s s e A ,

K e t t e r e r

B , G u i l l o u z o

A .

C h a n g e s

i n

e x p r e s s i o n

o f

mRN

c o d i n g

f o r


S -


s u b u n i t s

1 - 2

a n d

7

i n c u l t u r e d r a t


M o l

P h a r m a c o l 3 7 : 3 7 2 - 3 7 6 ( 1 9 9 0 ) .

52 6



*

V o l 1 0 6 ,

S u p p l e m e n t 2

*

A p r i l

1 9 9 8



IN

VITRO

H E P A T O T O X I C T Y

6 6 . L a n g o u e t

S , M o r e l F , M e y e r D . J , F a r d e l 0 , C o r c o s

L ,

K e t t e r e r

B , G u i l l o u z o A . A c o m p a r i s o n

o f t h e e f f e c t

o f

i n d u c e r s

o n t h e

e x p r e s s i o n

o f g l u t a t h i o n e 5 - t r a n s f e r a s e s

i n

t h e l i v e r o f

t h e

i n t a c t

r a t

a n d

i n h e p a t o c y t e s

i n p r i m a r y c u l t u r e . H e p a t o l o g y

4 3 : 8 8 1 - 8 8 7

( 1 9 9 6 ) .

6 7 . L i u L , L e C l u y s e E L ,

L i u

J ,

K l a a s s e n

C D .

S u l f o t r a n s f e r a s e

g e n e

e x p r e s s i o n

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s o f r a t


B i o c h e m

P h a r m a c o l 5 2 : 1 6 2 1 - 1 6 3 0

( 1 9 9 6 ) .

6 8 .

C l a y t o n

D F ,

D a r n e l l

J E .

C h a n g e s

i n


c o m p a r e d

t o

common

g e n e


d u r i n g

p r i m a r y

c u l t u r e o f

m o u s e

h e p a t o c y t e s . M o l

C e l l B i o l

3 : 1 5 5 2 - 1 5 6 1

( 1 9 8 3 ) .

6 9 . F r a s l i n J M ,

K n e i p B , V a u l o n t S , G l a i s e D , M u n n i c h A ,


C . D e p e n d e n c e

o f

h e p a t o c y t e

s p e c i f i c

g e n e

e x p r e s s i o n o n

c e l l - c e l l


i n p r i m a r y c u l t u r e . E MB O J

4 : 2 4 8 7 - 2 4 9 1 ( 1 9 8 5 ) .

7 0 .

F a r d e l

0 ,


D ,

L o y e r P ,

K e t t e r e r


A .

O v e r e x p r e s s i o n

o f t h e m u l t i d r u g r e s i s t a n c e g e n e p r o d u c t

i n

a d u l t

r a t


d u r i n g

p r i m a r y

c u l t u r e . E u r J B i o c h e m

2 0 5 : 8 4 7 - 8 5 2 ( 1 9 9 2 ) .

7 1 .

C l e m e n t

B , G u g u e n - G u i l l o u z o C ,

C a m p i o n

J P ,

G l a i s e D ,

B o u r e l M , G u i l l o u z o A . L o n g - t e r m c o - c u l t u r e s

o f a d u l t h u m a n

h e p a t o c y t e s w i t h r a t l i v e r e p i t h e l i a l

c e l l s :

m o d u l a t i o n o f a c t i v e

a l b u m i n s e c r e t i o n a n d


o f

e x t r a c e l l u l a r m a t e r i a l .

H e p a t o l o g y

4 : 3 7 3 - 3 8

( 1 9 8 4 ) .

7 2 .

M o r e l F ,

B e a u n e

P , R a t a n a s a v a n h D , F l i n o i s J P , Y a n g C S ,

G u e n g e r i c h F P , G u i l l o u z o

A .

E x p r e s s i o n

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

e n z y m e s

i n

c u l t u r e d

h u m a n


E u r

J

B i o c h e m

1 9 1 : 4 3 7 - 4 4 4 ( 1 9 9 0 ) .

7 3 . D o n a t o

MT,

G o m e z - L e c h o n

M J , C a s t e l l J V .

B i o t r a n s f o r m a t i o n

o f d r u g s b y

c u l t u r e d


I n : I n V i t r o A l t e r n a t i v e s

t o

A n i m a l

P h a r m a c o - t o x i c o l o g y ( C a s t e l l J V ,


M J ,

e d s ) .

M a d r i d : F a r m a i n d u s t r i a , 1 9 9 2 ; 1 4 9 - 1 7 8 .

7 4 . P i c h a r d L , F a b r e I , F a b re G ,

D o m e r g u e J , S a i n t A u b e r t B ,

M o u r a d G ,

M a u r e l

P .

C y c l o s p o r i n A d r u g

i n t e r a c t i o n s . S c r e e n i n g

f o r i n d u c e r s a n d

i n h i b i t o r s o f

c y t o c h r o m e P - 4 5 0

( c y c l o s p o r i n

A

o x i d a s e )

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s o f h u m a n


a n d

i n

l i v e r

m i c r o s o m e s . D r u g

M e t a b

D i s p o s 1 8 : 5 9 5 - 6 0 6 ( 1 9 9 0 ) .

7 5 .

D i a z

D ,

F a b r e I , D a u j a t M , S a i n t L a u r e n t B , B o r i e s P , M i c h e l

H , M a u r e l

P .

O m e p r a z o l e

i s

a n a r y l h y d r o c a r b o n - l i k e

i n d u c e r

o f

human

h e p a t i c

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 . G a s t r o e n t e r o l o g y

9 9 : 7 3 7 - 7 4 7 ( 1 9 9 0 ) .

7 6 .

B o u r d i

M ,

G a u t i e r J C ,

M i r c h e v a

J ,

L a r r e y

D ,

G u i l l o u z o

A ,

A n d r e

C ,

B e l l o c

C , B e a u n e

P . A n t i - l i v e r m i c r o s o m e s a u t o a n t i -

b o d i e s

a n d

d i h y d r a l a z i n e - i n d u c e d

h e p a t i t i s : s p e c i f i c i t y

o f

a u t o a n t i b o d i e s

a n d

i n d u c t i v e c a p a c i t y

o f t h e

d r u g .

M o l

P h a r m a c o l 4 2 : 2 8 0 - 2 8 5 ( 1 9 9 2 ) .

7 7 . D a u j a t M,

F a b r e

I ,

D i a z

D ,

P i c h a r d

L ,

F a b r e

G ,

F a b r e

J M ,

S a i n t - A u b e r t

B ,

M a u r e l

P .

I n d u c i b i l i t y

a n d

e x p r e s s i o n

o f c l a s s

I A a n d

I I I A

c y t o c h r o m e s

P - 4 5 0

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s o f a d u l t

h u m a n


L i f e S c i A d v

9 : 3 1 5 - 3 2 6 ( 1 9 9 1 ) .

7 8 .

G r a n t

M H,

B u r k e

MD,

H a w k s w o r t h

GM ,

D u t h i e

S J ,

E n g e s e t

J ,

P e t r i e

J C .

Human a d u l t h e p a t o c y t e s

i n

p r i m a r y

m o n o l a y e r

c u l t u r e s .

M a i n t e n a n c e o f m i x e d f u n c t i o n

o x i d a s e a n d c o n j u g a -

t i o n

p a t h w a y s

o f

d r u g

m e t a b o l i s m .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 6 : 2 3 1 1 - 2 3 1 6

( 1 9 8 7 ) .

7 9 .

V a n d e n b e r g h e Y , R a t a n a s a v a n h

D ,

R o g i e r s

V , G u i l l o u z o

A .



a c t i v i t y

i n

c u l t u r e d h u m a n

h e p a t o -

c y t e s .

C e l l

B i o l I n t

R e p 3 4 : 4 4 9 - 4 6 0 ( 1 9 8 8 ) .

8 0 . M o r e l

F ,

F a r d e l

0 ,

M e y e r D J , L a n g o u e t

S ,

G i l m o r e

K S ,

M e u n i e r B ,

Tu

C P D ,

K e n s l e r

TW,

K e t t e r e r

B ,

G u i l l o u z o

A .

P r e f e r e n t i a l

i n c r e a s e

o f



c l a s s

a l p h a


i n

c u l t u r e d h u m a n


b y p h e n o b a r b i t a l ,

3 -

m e t h y i c h o l a n t h r e n e

a n d d i t h i o l e t h i o n e s .

C a n c e r

R e s

5 3 : 2 3 0 - 2 3 4

( 1 9 9 3 ) .

8 1 . F a r d e l

0 ,

M o r e l

F ,

G u i l l o u z o

A .

P - G l y c o p r o t e i n

e x p r e s s i o n

i n

h u m a n , m o u s e , h a m s t e r

a n d r a t


i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

C a r c i n o g e n e s i s 1 4 : 7 8 1 - 7 8 3 ( 1 9 9 3 ) .

8 2 . A b d e l R a z z a k

Z , L o y e r P ,

F a u t r e l

A , G a u t i e r

J C ,

C o r c o s

L ,

T u r l i n B , B e a u n e P ,

G u i l l o u z o

A .

C y t o k i n e s d o w n - r e g u l a t e

e x p r e s s i o n

o f

m a j o r c y t oc h r o m e P - 4 5 0

e n z y m e s

i n a d u l t

h u m a n


i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

Mol P h a r m a c o l

4 4 : 7 0 7 - 7 1 5 ( 1 9 9 3 ) .

8 3 . G u g u e n - G u i l l o u z o

C . R o l e o f

h o m o t y p i c

a n d

h e t e r o t y p i c c e l l

i n t e r a c t i o n s i n e x p r e s s i o n o f s p e c i f i c

f u n c t i o n s b y

c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s . I n :

I s o l a t e d

a n d C u l t u r e d H e p a t o c y t e s

( G u i l l o u z o

A ,


C , e d s ) .

P a r i s : L e s

E d i t i o n s I N S E R M

a n d

J o h n

L i b b e y E u r o t e x t , 1 9 8 6 ; 2 7 1 - 2 9 6 .

8 4 .

G e b h a r d t

R . H o r m o n a l c o n t r o l

o f

a m i n o a c i d t r a n s p o r t

s y s -

t e m s i n

c u l t u r e d

p e r i p o r t a l

a n d

p e r i v e n o u s h e p a t o c y t e s . I n :

H e p a t i c T r a n s p o r t

i n

O r g a n i c

S u b s t a n c e s

( P e t z i n g e r E ,

K i n n e

RKH,

S i e s

H ,

e d s ) .

B e r l i n : S p r i n g e r - V e r l a g ,

1 9 8 9 ; 1 7 7 - 1 8 7 .

8 5 .

A n u n d i

J ,

L i n d r o s

K O .

E v i d e n c e

f o r

c y t o c h r o m e P - 4 5 0 2 E 1 -

m e d i a t e d

t o x i c i t y

o f N - n i t r o s o d i m e t h y l a m i n e

i n c u l t u r e d

p e r i v e n o u s h e p a t o c y t e s

f r o m e t h a n o l t r e a t e d r a t s . P h a r m a c o l

T o x i c o l

7 0 : 4 5 3 - 4 5 8

( 1 9 9 2 ) .

8 6 . G u i l l o u z o

A , M o r e l F , R a t a n a s a v a n h D , C h es ne

C ,

G u g u e n -

G u i l l o u z o

C .

L o n g - t e r m

c u l t u r e o f f u n c t i o n a l


T o x i c o l

I n V i t r o 4 : 4 1 5 - 4 2 7 ( 1 9 9 0 ) .

8 7 .


C .

I s o l a t i o n a n d c u l t u r e o f a n i m a l a n d

h u m a n

h e p a t o c y t e s . I n : C u lt u re o f

E p i t h e l i a l C e l l s .

V o l

1

( F r e s h n e y R I , e d ) .

G l a s g o w : A l a n

R . L i s s ,

1 9 9 1 ; 1 9 7 - 2 2 3 .

8 8 .


C ,

G u i ll ou z o A , B o i s n a rd M , L e

C a m

A ,

B o u r e l M .

E t u d e u l t r a s t r u c t u r a l e

d e m o n o c o u c h e s

d ' h e p a t o -

c y t e s

d e r a t a d u l t e c u l t i v e s

e n

p r e s e n c e d ' h e m i s u c c i n a t e

d ' h y -

d r o c o r t i s o n e .

B i o l

G a s t r o e n t e r o l 8 : 2 2 3 - 2 3 1 ( 1 9 7 5 ) .

8 9 .

L a i s h e s

B A ,

W i l l i a m s GM . C o n d i t i o n s a f f e c t i n g

p r i m a r y c e l l

c u l t u r e s o f f u n c t i o n a l a d u l t

r a t

h e p a t o c y t e s . I :

T h e e f f e c t o f

i n s u l i n . I n

V i t r o

1 2 : 5 2 1 - 5 3 2 ( 1 9 6 7 ) .

9 0 . P a i n e A J .

T h e


o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

i n r a t

h e p a t o -

c y t e c u l t u r e :

s o m e a p p l i c a t i o n s o f

l i v e r

c e l l

c u l t u r e s t o t h e s t u d y

o f d r u g m e t a b o l i s m , t o x i c i t y

a n d t h e i n d u c t i o n o f

t h e

P - 4 5 0

s y s t e m .

Chem B i o l I n t e r a c t

7 4 : 1 - 3 1

( 1 9 9 0 ) .

9 1 .

I no u e C , Y a m a m o t o H , N a k a m u r a

T , I c h i h a r a A ,

O k a m o t o

H .

N i c o t i n a m i d e p r o l o n g s

s u r v i v a l o f p r i m a r y c u l t u r e d

h e p a t o -

c y t e s w i t h o u t i n v o l v i n g l o s s

o f

h e p a t o c y t e - s p e c i f i c

f u n c t i o n s .

J

B i o l C h e m 2 6 4 : 4 7 4 7 - 4 7 5 0 ( 1 9 8 9 ) .

9 2 .

I s o m HC, S e c o t t

T ,

G e o r g o f f

I ,

W o o d w o r t h C ,

M u m m a w

J .



r a t


i n

p r i m a r y c u l -

t u r e .

P r o c

N a t l

A c a d S c i

US A

8 2 : 3 2 5 2 - 3 2 5 6 ( 1 9 8 5 ) .

9 3 . B a y l y

A C , R o b e r t s

R A ,

D i v e

C . S u p p r e s s i o n

o f l i v e r

c e l l

a p o p -

t o s i s i n v i t r o

b y

t h e

n o n - g e n o t o x i c

h e p a t o c a r c i n o g e n

a n d

p e r -

o x i s o m e

p r o l i f e r a t o r

n a f e n o p i n .

J C e l l

B i o l

1 2 5 : 1 9 7 - 2 0 3

1 9 9 4 ) .

9 4 .

T o m i t a Y ,

Y u a s a

C ,

N i R ,

I s h i m u r a

K ,

I c h i h a r a

A .

L o n g - t e r m


o f

f u n c t i o n a l

r a t


i n

p r i m a r y

c u l t u r e

b y

a d d i t i o n s

o f

p y r u v a t e

a n d

v a r i o u s

h o r m o n e s . B i o c h i m

B i o p h y s A c t a

1 2 4 3 : 3 2 9 - 3 3 5

( 1 9 9 5 ) .

9 5 .

B l o c k

GD,

L o c k e r

J , B o w e n WC,

P e t e r s e n

B E ,

K a t y a l S ,

S t r o m

S C , R i l e y T ,

H o w a r d T A , M i c h a l o p o u l o s

GK.

P o p u l a t i o n

e x p a n s i o n ,

c l o n a l

g r o w t h ,

a n d

s p e c i f i c

d i f f e r e n t i a t i o n

p a t t e r n s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f


i n d u c e d b y

H G F / S F ,

E GF

a n d

T GFa

i n

a c h e m i c a l l y d e f i n e d

HGM)

m e d i u m .

J

C e l l

B i o l

1 3 2 : 1 1 3 3 - 1 1 4 9 ( 1 9 9 6 ) .

9 6 .

D e c a d G M ,

H s i e h

DPH,

B y a r d J L .


o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

a n d

m e t a b o l i s m

o f a f l a t o x i n B 1

i n

p r i m a r y

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s .

B i o c h e m

B i o p h y s

R e s

C o m m u n

7 8 : 2 7 9 - 2 8 7

( 1 9 7 7 ) .

9 7 .

M i y a z a k i M ,

H a n d a

Y ,

Oda

M ,

Y a b e

T , M i y a n o K ,

S a t o

J .

L o n g - t e r m

s u r v i v a l

o f f u n c t i o n a l


f r o m a d u l t r a t

i n

t h e

p r e s e n c e

o f


i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

E x p

C e l l R e s

1 5 9 : 1 7 6 - 1 9 0

( 1 9 8 5 ) .

9 8 .

E n a t

R , J e f f e r s o n

DM ,

R u i z - O p a z o

N ,

G a t m a i t a n

Z ,

L e i n w a n d

L ,

R e i d

LM. H e p a t o c y t e


i n

v i t r o :

i t s

d e p e n d e n c e

o n t h e u s e

o f s e r u m - f r e e

h o r m o n a l l y

d e f i n e d

m e d i u m

a n d s u b s t r a t a o f e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x . P r o c N a t l

A c a d

S c i

U S A

8 1 : 1 4 1 1 - 1 4 1 5

( 1 9 8 4 ) .

9 9 .

R e i d

LM,

N a r i t a

M, F u j i t a M, M u r r a y

Z , L i v e r p o o l C ,

R o s e n b e r g ,

L .

M a t r i x a n d h o r m o n a l

r e g u l a t i o n

o f

d i f f e r e n t i a t i o n

i n

l i v e r

c u l t u r e s . I n : I s o l a t e d a n d C u l t u r e d

H e p a t o c y t e s ( G u i l l o u z o

A , G u g u e n - G u i l l o u z o

C , e d s ) .

P a r i s : L e s

E d i t i o n s I N S E R M a n d

J o h n

L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 6 ; 2 2 6 - 2 5 8 .

1 0 0 . Waxman

D J ,

M o r r i s s e y

J J ,

N a i k

S ,

J a u r e g u y

HO.

P h e n o b a r b i t a l

i n d u c t i o n o f

c y t o c h r o m e s P - 4 5 0 .

B i o c h e m

J 2 7 1 : 1 1 3 - 1 1 9

( 1 9 9 0 ) .

E n v i r o n m e n t a l H e a l t h P e r s p e c t i v e s

*

V o l 1 0 6 , S u p p l e m e n t 2

*

A p r i l

1 9 9 8

527



G U I L L O U Z O

1 0 1 .

L o y e r

P , C a r i o u

S ,

G l a i s e

D , B i l o d e a u

M ,

B a f f e t G , G u g u e n -

G u i l l o u z o C .

G r o w t h

f a c t o r - d e p e n d e n c e o f

e n t r y

a n d

p r o g r e s s i o n

t h r o u g h G I

a n d

S

p h a s e s o f a d u t

r a t


i n v i t r o . J B i o l

Chem

2 7 1 : 1 1 4 8 4 - 1 1 4 9 2

( 1 9 9 6 ) .

1 0 2 .

McGowan J A .

H e p a t o c y t e


i n c u l t u r e .

I n :

I s o l a t e d

a n d C u l t u r e d H e p a t o c y t e s

( G u i l l o u z o A , G u g u e n - G u i l l o u z o

C ,

e d s ) .

P a r i s : L e s E d i t i o n s I N S E R M

a n d J o h n L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 6 ; 1 3 - 3 8 .

1 0 3 . L u e t t e k e N C ,


GK

C o n t r o l

o f

h e p a t o c y t e

p r o l i f e r -

a t i o n

i n

v i t r o .

I n :

T h e

I s o l a t e d

H e p a t o c y t e :

U s e

i n

T o x i c o l o g y

a n d

X e n o b i o t i c B i o t r a n s f o r m a t i o n s ( R a u c k m a n

E J , P a d i l l a G M ,

e d s ) . O r l a n d o ,

F L A c a d e m i c

P r e s s ,

1 9 8 7 ,

9 3 - 1 1 8 .

1 0 4 . N a k a m u r a T , T e r a m o t o

H ,

T o m i t a

Y , I c h i h a r a

A .

L - p r o l i n e i s a n

e s s e n t i a l

a m i n o

a c i d

f o r

h e p a t o c y t e - g r o w t h

i n

c u l t u r e .

B i o c h e m

B i o p h y s

R e s

Commun

1 2 2 : 8 8 4 - 8 9 1 ( 1 9 8 4 ) .

1 0 5 :

E c k

P M ,

W h i t c o m b

WR,


G K , J i r t l e

R L . E f f e c t s

o f

EGF a n d

c a l c i u m

o n a d u l t p a r e n c h y m a l

h e p a t o c y t e p r o l i f e r a -

t i o n . J C e l l

P h y s i o l

1 3 2 : 3 6 3 - 3 6 6

( 1 9 8 7 ) .

1 0 6 .

M i t a k a

T , S a t t l e r C A ,

S a t t l e r G L , S a r g e n t

LM, P i t o t HC.

M u l t i p l e

c e l l

c y d e s

o c c u r

i n


c u l t u r e d

i n t h e

p r e s -

e n c e o f n i c o t i n a m i d e

a n d


f a c t o r .

H e p a t o l o g y

1 3 : 2 1 - 3 0 ( 1 9 9 1 ) .

1 0 7 . S a w a d a

N , T o m o m u r a A ,

S a t t l e r C A , S a t t l e r G L ,

K l e i n m a n H K ,

P i t o t

H C . E x t r a c e l l u l a r m a t r i x c o m p o n e n t s

i n f l u e n c e DN A s y n -

t h e s i s o f


i n

p r i m a r y c u l t u r e .

E x p C e l l R e s

1 6 7 : 4 5 8 - 4 7 0 ( 1 9 8 6 ) .

1 0 8 .

I s m a i l

T

H o w l J ,

W h e a t l e y

M ,

M c M a s t e r

P ,

N e u b e r g e r

J M ,

S t r a i n A J . G r o w t h

o f

n o r m a l h u m a n h e p a t o c y t e s

i n

p r i m a r y c u l -

t u r e : e f f e c t s o f

h o r m o ne s a n d

g r o w t h

f a c t o r s

o n

N

s y n t h e s i s .

H e p a t o l o g y 1 4 : 1 0 7 6 - 1 0 8 2

( 1 9 9 1 ) .

1 0 9 .

L i

A P , M y e r o

C A , R o q u e M A ,

K a m i n s k i

D L .

E p i d e r m a l g r o w t h

f a c t o r ,

DN A s y n t h e s i s

a n d h u m a n h e p a t o c y t e s .

I n

V i t r o

C e l l D e v

B i o l 2 7 : 8 3 1 - 8 3 3 ( 1 9 9 1 ) .

1 1 0 . B l a n c P ,

E t i e n n e

H , D a u j a t M ,

F a b r e

I ,

Z i n d y F ,

D o m e r g u e

J ,

A s t r e

C ,

S a i n t

A u b e r t

B ,

M i c h e l

H ,

M a u r e l P . M i t o t i c

r e s p o n s i v e -

n e s s o f c u l t u r e d a d u l t

h u m a n

h e p a t o c y t e s t o e p i d e r m a l

g r o w t h

f a c t o r , t r a n s f o r m i n g g r o w t h

f a c t o r a l p h a a n

h u m a n s e r u m .


1 0 2 : 1 3 4 0 - 1 3 5 0

( 1 9 9 2 ) .

1 1 1 .

J o h a n s s o n S ,

H o o k

M .

S u b s t r a t e

a d h e s i o n o f

r a t h e p a t o c y t e s :

o n

t h e

m e c h a n i s m o f a t t a c h m e nt

o f f i b r o n e c t i n .

J

C e l l B i o l

9 8 : 8 1 0 - 8 1 7 ( 1 9 8 4 ) .

1 1 2 . M i c h a l o p o u l o s

G , P i t o t

H C .

P r i m a r y

c u l t u r e o f


l i v e r c e l l s o n

c o l l a g e n

m e m b r a n e s . E x p C e l l

R e s

9 4 : 7 0 - 7 8 ( 1 9 7 5 ) .

1 1 3 .

B i s s e l l

DM ,

A r e n s o n

DM , M a h e r

J J

R o l l

F J .

S u p p o r t o f

c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s b y a

l a m i n i n - r i c h

g e l . J

C l i n

I n v e s t 7 9 : 8 0 1 - 8 1 2

1 9 8 7 ) .

1 1 4 .

L e e

J , M o r g a n

J R ,

T o m p k i n s R G ,

Y a r m u s h M l . P r o l i n e - m e d i a t e d

e n h a n c e m e n t o f

h e p a t o c y t e

f u n c t i o n

i n

a

c o l l a g e n

g e l

s a n d w i c h

c u l t u r e

c o n f i g u r a t i o n .

F A S E B

J

7 : 5 8 6 - 5 9 1 ( 1 9 9 3 ) .

1 1 5 .

K o e b e HG, P a h e r n i k S ,

E y e r

P ,

S c h i l d b e r g

FW .

C o l l a g e n g e l

i m m o b i l i z a t i o n :

a u s e f u l c e l l

c u l t u r e

t e c h n i q u e

f o r

l o n g - t e r m

m e t a b o l i c s t u d i e s

o n

human



2 4 : 9 5 - 1 0 7 ( 1 9 9 4 ) .

1 1 6 .

R o j k i n d M , G a t m a i t a n

Z ,

M a c k e n s e n

S ,

G i a m b r o n e M A , P o n c e

P ,

R e i d

L M . C o n n e c t i v e

t i s s u e

b i o m a t r i x : i t s i s o l a t i o n

a n d

u t i l i z a -

t i o n f o r

l o n g - t e r m

c u l t u r e s

o f n o r m a l

r a t


J

C e l l

B i o l

8 7 : 2 5 5 - 2 6 3

( 1 9 8 0 ) .

1 1 7 .


C , S e i g n o u x D ,

C o u r t o i s Y ,

B r i s s o t

P ,

M a r c e a u

N ,

G l a i s e

D ,

G u i l l o u z o

A .

A m p l i f i e d p h e n o t y p i c

c h a n g e s

i n

a d u l t

r a t

a n d b a b o on


c u l t u r e d

o n a c o m -

p l e x

b i o m a t r i x . B i o l C e l l

4 6 : 1 1 - 2 0

( 1 9 8 2 ) .

1 1 8 . V u k i c e v i c

S ,

K l e i n m a n

H K ,

L u y t e n

F P ,

R o b e r t s

A B ,

R o c h e

N S ,

R e d d i AH. I d e n t i f i c a t i o n o f

m u l t i p l e

a c t i v e

g r o w t h

f a c t o r s

i n

b a s e m e n t m e m b r a n e

m a t r i g e l

s u g g e s t s c a u t i o n

i n

i n t e r p r e t a t i o n

o f

c e l l u l a r

a c t i v i t y

r e l a t e d

t o

e x t r a c e l l u l a r m a t r i x c o m p o n e n t s . E x p

C e l l

R e s 2 0 2 : 1 - 8

( 1 9 9 2 ) .

1 1 9 .

D i r a m i

G , P a p a d o p o u l o s

V ,

K l e i n m a n

H K ,

D e f r e e s e

D C ,

M u s t o

N A ,

D y n

M . I d e n t i f i c a t i o n

o f

t r a n s f e r r i n a n d

i n h i b i n - l i k e

p r o -

t e i n s

i n

m a t r i g e l .

I n V i t r o C e l l D e v B i o l

3 1 : 4 0 9 - 4 1 1

( 1 9 9 5 ) .

1 2 0 . D u n n

J Y ,

Y a rm u sh M L ,

K o e b e

H G ,

T o m p k i n s

R G .

H e p a t o c y t e

f u n c t i o n

a n d e x t r a c e l l u l a r

m a t r i x

g e o m e t r y :

l o n g - t e r m

c u l t u r e

i n

a

s a n d w i c h

c o n f i g u r a t i o n .

F A S E B

J

3 : 1 7 4 - 1 7 7 ( 1 9 8 9 ) .

1 2 1 .

C a r o n

J M .

I n d u c t i o n

o f

a l b u m i n

g e n e t r a n s c r i p t i o n

i n

h e p a t o -

c y t e s b y

e x t r a c e l l u l a r m a t r i x

p r o t e i n s .

Mol C e l l B i o l

1 0 : 1 2 3 9 - 1 2 4 3

( 1 9 9 0 ) .

1 2 2 .

S a a d B , S c h a w a l d e r

H ,

M a i e r

P . C r u d e l i v e r m e m b r a n e

f a c -

t i o n s

a s s u b s t r a t e

p r e s e r v e

l i v e r s p e c i f i c

f u n c t i o n s i n l o n g - t e r m ,

s e r u m - f r e e r a t h e p a t o c y t e c u l t u r e s .

I n V i t r o

C e l l

D e v

B i o l

2 9 A : 3 2 - 4 0 ( 1 9 9 3 ) .

1 2 3 . S a a d

B ,

S c h o l l F A , Thomas

H ,

S c h w a l d e r

H ,

S t r e i t V ,

W a e c h t e r

F , M a i e r

P .

C r u d e

l i v e r m e m b r a n e

f r a c t i o n s a n d

e x t r a c e l l u l a r m a t r i x

c o m p o n e n t s

a s

s u b s t r a t a

r e g u l a t e d i f f e r e n -

t i a l l y t h e


a n d

i n d u c i b i l i t y o f

c y t o c h r o m e P - 4 5 0

i s o e n z y m e s

i n


h e p a t o c y t e s . E u r

J

B i o c h e m

4 6 : 8 0 5 - 8 1 4

( 1 9 9 3 ) .

1 2 4 . Wanson

J C ,

M o s s e l m a n s R ,

B r o u w e r A ,

Knook D L .

I n t e r a c t i o n

o f a d u l t r a t h e p a t o c y t e s

a n d s i n u s o i d a l c e l l s

i n

c o -

c u l t u r e .

B i o l

C e l l 5 6 : 7 - 1 6

( 1 9 7 9 ) .

1 2 5 .


G ,

R u s s e l F , B i l e s C .

P r i m a r y

c u l t u r e s o f

h e p a -

t o c y t e s o n

h u m a n

f i b r o b l a s t s .

I n V i t r o

1 5 : 7 9 6 - 8 0 6

( 1 9 7 9 ) .

1 2 6 .

G u g u e n - G u i l l o u z o C , C l e m e n t

B ,

B a f f e t

G ,

B e a u m o n t

C ,

M o r e l - C h a n y E , G l a i s e

D , G u i ll o u z o A .


a n d

r e v e r s i b i l i t y

o f a c t i v e

a l b u m i n s e c r e t i o n

b y a d u l t

r a t


c o - c u l t u r e d

w i t h

a n o t h e r

l i v e r e p i t h e l i a l

c e l l t y p e . E x p C e l l

R e s

1 4 3 : 4 7 - 5 4

( 1 9 8 3 ) .

1 2 7 .

B e g u e

J M ,

L e

B i g o t

J F , G u g u e n - G u i l l o u z o C ,

K i e c h e l J R ,

G u i l l o u z o

A .

C u l t u r e d

h u m a n

a d u l t

h e p a t o c y t e s :

a n e w m o d el

f o r

d r u g

m e t a b o l i s m

s t u d i e s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 2 : 1 6 4 3 - 1 6 4 6

( 1 9 8 3 ) .

1 2 8 . G u g u e n - G u i l l o u z o

C ,

C l e m e n t B ,

L e s c o a t G , G l a i s e

D ,


M o d u l a t i o n

o f

h u m a n f e t a l

h e p a t o c y t e

s u r v i v a l

a n d d i f f e r e n t i a t i o n

b y

i n t e r a c t i o n s w i t h a r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l

l i n e .

D e v

B i o l

1 0 5 : 2 1 1 - 2 2 0

( 1 9 8 4 ) .

1 2 9 .

G u i l l o u z o A ,

D e l e r s F , C l d m e n t

B ,

B e r n a r d

N , E n g l e r R . L o n g -

t e r m p r o d u c t i o n

o f

a c u t e - p h a s e

p r o t e i n s

b y

a d u l t r a t

h e p a t o -

c y t e s


a n o t h e r l i v e r c e l l t y p e

i n

s e r u m - f r e e

m e d i u m .

B i o c h e m

B i o p h y s

R e s C o m m u n

1 2 0 : 3 1 1 - 3 1 7

( 1 9 8 4 ) .

1 3 0 .

F o l i o t

A , G l a i s e D ,

E r l i n g e r

S ,


C . L o n g -

t e rm m a i n t en a nc e

o f t a u r o c h o l a t e

u p t a k e b y

a d u l t r a t

h e p a t o -

c y t e s c o - c u l t u r e d

w i t h a

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l l i n e .

H e p a t o l o g y

1 6 : 2 1 5 - 2 1 9 ( 1 9 8 5 ) .

1 3 1 .

L e s c o a t

G ,

T h e z e

N ,

C l e m e n t B , G u i l l o u z o

A ,

G u g u e n -

G u i l l o u z o C . C o n t r o l o f

a l b u m i n a n d

a - f e t o p r o t e i n

s e c r e t i o n

b y

f e t a l

a n d

n e o n a t a l

r a t


m a i n t a i n e d

i n

c o - c u l t u r e .

C e l l

D i f f

1 6 : 2 5 9 - 2 6 8

( 1 9 8 5 i .

1 3 2 .

L e b r e t o n J P , D a v e a u M,

H i r o n M, F o n t a i n e M, B i o u

M,

G i l b e r t

D ,


C . L o n g - t e r m b i o s y n t h e s i s

o f

c o m p l e m e n t

c o m p o n e n t C 3

a n d

a l p h a - 1

g l y c o p r o t e i n

b y

a d u l t

r a t


i n

a c o - c u l t u r e s y s t e m

w i t h a n e p i t h e l i a l l i v e r

c e l l - t y p e .

B i o c h e m

J 2 3 5 : 4 2 1 - 4 2 7

( 1 9 8 6 ) .

1 3 3 .

C o n n e r

J ,

V a l l e t - C o l l o m

I ,

D a v e a u M ,

D e l e r s

F ,

L e b r e t o n

J P ,

G u i l l o u z o

A . A c u t e

p h a s e

r e s p o n s e i n d u c t i o n

i n

r a t



r a t

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s .

B i o c h e m

J

2 6 6 : 6 8 3 - 6 8 8

( 1 9 9 0 ) .

1 3 4 .

N i e m a n n

C ,

G a u t h i e r J C , R i c h e r t L ,

I v a n o v

MA,

M e l c i o n

C ,

C o r d i e r A . R a t a d u l t


i n

p r i m a r y p u r e

a n d m i x e d

m o n o l a y e r

c u l t u r e .

C o m p a r i s o n

o f t h e


m i x e d

f u n c t i o n o x i d a s e a n d c o n j u g a t i o n p a t h w a y s

o f d r u g

m e t a b o -

l i s m .

B i o c h e m

P h a r m a c o l 4 2 : 3 7 3 - 3 7 9 ( 1 9 9 1 ) .

1 3 5 .

L e r c h e

C ,

F a u t r e l

A , S h a w

P M , G l a i s e D ,

B a l l e t

F ,

G u i l l o u z o

A ,

C o r c o s

L .

R e g u l a t i o n

o f

t h e

m a j o r

d e t o x i c a t i o n

f u n c t i o n s b y


a n d

3 - m e t h y l c h o l a n t h r e n e

i n

c o - c u l t u r e s

o f

r a t


a n d l i v e r e p i t h e l i a l

c e l l s .

E u r

J

B i o c h e m

2 4 4 : 9 8 - 1 0 6

( 1 9 9 7 ) .

1 3 6 .

M e s n i l

M,

F r a s l i n J M ,

P i c c o l i

C ,

Y a m a s a k i H , G u g u e n -

G u i l l o u z o

C . C e l l c o n t a c t

b u t

n o t

j u n c t i o n a l


( d y e

c o u p l i n g )

w i t h

b i l i a r y

e p i t h e l i a l

c e l l s i s

r e q u i r e d

f o r

h e p a -

t o c y t e s

t o

m a i n t a i n d i f f e r e n t i a t e d

f u n c t i o n s .

E x p

C e l l

R e s

1 7 3 : 5 2 4 - 5 3 3 ( 1 9 8 7 ) .

1 3 7 .

S p r a y D C , F u j i t a

M ,

S a e z

J C ,

C h o i

H ,

W a t a n a b e T ,

H e r t z b e r g

E , R o s e n b e r g L C ,

R e i d LM.

P r o t e o g l y c a n s

a n d g l y c o s a m i n o -

g l y c a n s

i n d u c e g a p

j u n c t i o n

s y n t h e s i s

a n d f u n c t i o n

i n

p r i m a r y

l i v e r c u l t u r e s .

J

C e l l B i o l

1 0 5 : 5 4 1 - 5 5 1

( 1 9 8 7 ) .

5 2 8


H e a l t h P e r s p e c t i v e s *

V o l 1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8



I N

V I T R O

HEPATOTOXICITY

1 3 8 .

M o r i n

0 , N o r m a n d C . L o n g - t e r m


o f

h e p a t o c y t e

f u n c t i o n a l

a c t i v i t y

i n c o - c u l t u r e : r e q u i r e m e n t s

f o r s i n u s o i d a l

e n d o t h e l i a l

c e l l s

a n d d e x a m e t h a s o n e .

J C e l l P h y s i o l

1 2 9 : 1 0 3 - 1 1 0

( 1 9 8 6 ) .

1 3 9 . G l e i b e r m a n

A S ,

K u d r j a v t s e v a E I , S h a r o v s k a y a

U Y , A b e l e v

G I .

S y n t h e s i s

o f

a l p h a - f e t o p r o t e i n i n h e p a t o c y t e s

i s

c o o r d i n a t e l y r e g u -

l a t e d

w i t h c e l l - c e l l

a n d

c e l l - m a t r i x


M o l

B i o l Med

6 : 9 5 - 1 0 7 ( 1 9 8 9 ) .

1 4 0 .

S c h r o d e

W ,

M e c k e

D ,

G e b h a r d t

R

I n d u c t i o n o f g l u t a m i n e

s y n -

t h e t a s e

i n

p e r i p o r t a l


b y c o - c u l t i v a t i o n

w i t h a l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l

l i n e .

E u r o p J C e l l

B i o l 5 3 : 3 5 - 4 1 ( 1 9 9 0 ) .

1 4 1 . R o g i e r s V , V a n d e n b e r g h e

Y ,

C a l l a e r t s

A , V e r l e y e G ,

C o r n e t M ,

M e r t e n s K ,

S o n k W ,

V e r c r u y s s e A . P h a s e I a n d

p h a s e

I I x e n o b i -

o t i c b i o t r a n s f o r m a t i o n

i n

c u l t u r e s

a n d c o c u l t u r e s

o f

a d u l t

r a t


B i o c h e m

P h a r m a c o l

4 0 : 1 7 0 1 - 1 7 0 6

( 1 9 9 0 ) .

1 4 2 . D o n a t o M T , C a s t e l l J V ,


M J .

C o c u l t u r e s

o f h e p a -

t o c y t e s

w i t h

e p i t h e l i a l - l i k e

c e l l l i n e s :

e x p r e s s i o n o f d r u g

b i o t r a n s -

f o r m a t i o n

a c t i v i t i e s

b y

h e p a t o c y t e s . C e l l B i o l

T o x i c o l 7 : 1 - 1 4

( 1 9 9 1 ) .

1 4 3 . U t e s c h D ,

M o l i t o r E ,

P l a t t

K L ,

O e s c h

F .

D i f f e r e n t i a l s t a b i l i z a t i o n

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 i s o e n z y m e s

i n p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

a d u l t

r a t

l i v e r


c e l l s . I n V i t r o

C e l l D e v

B i o l

2 7 A : 8 5 8 - 8 6 3

( 1 9 9 1 ) .

1 4 4 .

A k r a w i

M ,

R o g i e r s V , V a n d e n b e r g h e

Y , P a l m e r

C N A , V e r c r u y s s e

A , S h e p h a r d L A ,

P h i l l i p s

I R


a n d

i n d u c t i o n

i n

c o -

c u l t u r e d r a t h e p a t o c y t e s

o f

c o m p o n e n t s

o f

t h e

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0 -

m e d i a t e d

m o n o - o x y g e n a s e . B i o c h e m

P h a r m a c o l 4 5 : 1 5 8 3 - 1 5 9 1

1 9 9 3 ) .

1 4 5 . M e n d o z a - F i g u e r o a T ,

H e r n a n d e z A ,

L o p e z M L , K u h a r c u c h

W .

I n t r a c y t o p l a s m i c

t r i g l y c e r i d e a c c u m u l a t i o n p r o d u c e d

b y d e x a m -

e t h a s o n e

i n

a d u l t

r a t


c u l t i v a t e d

o n

3 T 3 c e l l s .

T o x i c o l o g y

5 2 : 2 7 3 - 2 8 6 ( 1 9 8 8 ) .

1 4 6 .

G o u l e t

F ,

N o r m a n d C ,

M or i n 0 . C e l l u l a r


p r o m o t e


f u n c t i o n ,

b i o m a t r i x

d e p o s i t i o n

a n d j u n c t i o n a l c o m -

m u n i c a t i o n o f

p r i m a r y

c u l t u r e d


H e p a t o l o g y

8 : 1 0 1 0 - 1 0 1 8 ( 1 9 8 8 ) .

1 4 7 .

D o n a t o M T ,

C a s t e l l

J V ,


M J .

P r o l o n g e d

e x p r e s -

s i o n o f b i o t r a n s f o r m a t i o n

a c t i v i t i e s

o f r a t h e p a t o c y t e s

c o - c u l -

t u r e d w i t h e s t a b l i s h e d

c e l l

l i n e s . T o x i c o l

I n V i t r o

4 : 4 6 1 - 4 6 6

( 1 9 9 0 ) .

1 4 8 .

C o r l u

A ,

K n e i p

B ,

L h a d i

C , L e r a y

G ,

G l a i s e

D ,

B a f f e t

G ,

B o u r e l

D ,


C .

A

p l a s m a

m e m b r a n e

p r o t e i n

i s

i n v o l v e d

i n

c e l l

c o n t a c t - m e d i a t e d r e g u l a t i o n

o f


g e n e s

i n

a d u l t


J C e l l B i o l

1 1 5 : 5 0 5 - 5 1 5 ( 1 9 9 1 ) .

1 4 9 .

C o r l u

A ,

I l y i n

G P ,

G e r a r d N , K ne i p B ,

R i s s e l

M , J e g o u B ,


C . T i s s u e


o f l i v e r

r e g u l a t i n g p r o -

t e i n :

e v i d e n c e f o r a c e l l

r e c o g n i t i o n s i g n a l

c o m m o n

t o

l i v e r , p a n -

c r e a s , g o n a d s ,

a n d

h e m o p o e t i c

t i s s u e s .

A m J P a t h o l

1 4 5 : 7 1 5 - 7 2 7

( 1 9 9 4 ) .

1 5 0 .

V a n d e n b e r g h e

Y ,


D ,

G l a i s e

D ,

G u i l l o u z o

A .

I n f l u e n c e

o f m e d i u m c o m p o s i t i o n

a n d c u l t u r e

c o n d i t i o n s

o n

g l u -

t a t h i o n e

5 - t r a n s f e r a s e a c t i v i t y

i n

a d u l t

h e p a t o c y t e s d u r i n g

c u l t u r e .

I n V i t r o C e l l

D e v

B i o l

2 4 : 2 8 1 - 2 8 8

( 1 9 8 8 ) .

1 5 1 .

B a f f e t

G , C l e m e n t B ,

G l a i s e

D ,

G u i l l o u z o

A ,


C .

H y d r o c o r t i s o n e

m o d u l a t e s

t h e

p r o d u c t i o n

o f


m a t e r i a l

a n d a l b u m i n

i n

l o n g - t e r m

c o c u l t u r e s o f a d u l t

r a t

h e p a t o -

c y t e s

w i t h

o t h e r

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s . B i o c h e m

B i o p h y s

R e s

Commun

1 0 9 : 5 0 7 - 5 1 2

( 1 9 8 2 ) .

1 5 2 .

G u i g o z Y ,

W e r f f e l i

P ,

F a v r e

D ,

J u i l l e r a t M ,

W e l l i n g e r

R ,

H o n e g g e r

P .

A g g r e g a t e

c u l t u r e s

o f f o e t a l

r a t

l i v e r c e l l s :

d e v e l o p -

m e n t

a n d


o f

l i v e r

g e n e

e x p r e s s i o n .

B i o l C e l l

6 0 : 1 6 3 - 1 7 2

( 1 9 8 7 ) .

1 5 3 .

L a n d r y

J ,

B e r n i e r

D ,

Q u e l l e t

C ,

G o y e t t e R ,

M a r c e a u

N .

S p h e r o i d a l

a g g r e g a t e

c u l t u r e

o f r a t

l i v e r

c e l l s :

h i s t o t y p i c r e o r g a n i -

z a t i o n ,

b i o m a t r i x

d e p o s i t i o n ,

a n d


o f

f u n c t i o n a l

a c t i v i t i e s .

J

C e l l

B i o l

1 0 1 : 9 1 4 - 9 2 3

( 1 9 8 5 ) .

1 5 4 .

K o i d e

K S , S a k a g u c h i

K ,

K o i d e

Y ,

A s a n o

K ,

K a w a g u c h i

M ,

M a t s u s h i m a

H ,

T a k e n a m i

T , S h i n j i T ,

M o r i

M , T s u j i

T .

F o r m a t i o n

o f

m u l t i c e l l u l a r

s p h e r o i d s

c o m p o s e d

o f

a d u l t

r a t

h e

p a t o c y t e s

i n

d i s h e s w i t h

p o s i t i v e l y c h a r g e d

s u r f a c e s

a n d

u n d e r

o t h e r n o n

a d h e r e n t

e n v i r o n m e n t s .

E x p

C e l l R e s

1 8 6 : 2 2 7 - 2 3 5

( 1 9 9 0 ) .

1 5 5 .

T o n g J Z , De L a g a u s i e P ,

F u r l a n V , C r e s t e i l T ,

B e r n a r d

0 ,

A l v a r e z F . L o n g - t e r m

c u l t u r e o f a d u l t r a t h e p a t o c y t e

s p h e r o i d s .

E x p C e l l

R e s

2 0 0 : 3 2 6 - 3 3 2 ( 1 9 9 2 ) .

1 5 6 .

K n o o k D L ,

B l a n s j a a r

N ,

S l e y s t e r

E . I s o l a t i o n a n d

c h a r a c t e r i z a t i o n

o f

K u p f f e r

a n d e n d o t h e l i a l

c e l l s

f r o m t h e r a t

l i v e r .

E x p

C e l l R e s

1 0 9 : 3 1 7 - 3 2 9

( 1 9 7 7 ) .

1 5 7 .

B r o u w e r A , W i s s e E , K n o o k

D L . S i n u s o i d a l

e n d o t h e l i a l

c e l l s

a n d

p e r i s i n u s o i d a l

f a t - s t o r i n g c e l l s .

I n : T h e L i v e r B i o l o g y

a n d

P a t h o b i o l o g y

( A r i a s

I M ,

J a k o b y

WB,

P o p p e r H ,

S c h a c h t e r

D ,

S h a f r i t z

D A ,

e d s ) .

N ew Y o r k : R a v e n P r e s s , 1 9 8 8 ; 6 6 5 - 6 8 0 .

1 5 8 . D e L e e u w

AM,

M c C a r t h y

S P ,

G e e r t s A ,

K n o o k D L .

P u r i f i e d r a t

l i v e r f a t - s t o r i n g c e l l s

i n c u l t u r e d i v i d e

a n d c o n t a i n

c o l l a g e n .

H e p a t o l o g y

4 : 3 9 2 - 4 0 3 ( 1 9 8 4 ) .

1 5 9 .

J o p l i n R , S t r a i n A J , N e u b e r g e r J M .

I m m u n o i s o l a t i o n

a n d

c u l t u r e

o f b i l i a r y

e p i t h e l i a l

c e l l s

f r o m

n o r m a l h u m a n l i v e r . I n V i t r o

C e l l

D e v

B i o l

2 5 : 1 1 8 9 - 1 1 9 2

( 1 9 8 9 ) .

1 6 0 .

H o e r l

B J ,

V r o m a n B T , K a s p e r b a u e r

J L ,

L a R u s s o

N F , S c o t t

R E .

B i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s

o f p r i m a r y c u l t u r e s

o f

h u m a n


e p i t h e l i a l c e l l s .

L a b

I n v e s t

6 6 : 2 4 3 - 2 5 0

( 1 9 9 2 ) .

1 6 1 . C a m p i o n

J P ,

P o r c h e t

N , A u b e r t J P , L ' H e l g o u a l c ' h

A , C l e m e n t B .

U W - p r e s e r v a t i o n

o f c u l t u r e d

h u m a n g a l l b l a d d e r

e p i t h e l i a l

c e l l s :

p h e n o t y p i c a l t e r a t i o n s

a n d d i f f e r e n t i a l m u c i n

g e n e

e x p r e s s i o n

i n

t h e

p r e s e n c e

o f

b i l e .

H e p a t o l o g y

2 1 : 2 2 3 - 2 3 1

( 1 9 9 5 ) .

1 6 2 . Y o s h i t o m i S ,

M i y a z a k i K , N a k a y a m a

F .

D e m o n s t r a t i o n

a n d


o f

m u c u s

s e c r e t i o n

i n

c u l t u r e d

h u m a n


e p i t h e l i a l

c e l l s . I n V i t r o C e l l

D e v B i o l

2 3 : 5 5 9 - 5 6 6 ( 1 9 8 7 ) .

1 6 3 . L e r c h e

C , L e J o s s i c C ,

F a u t r e l A , De W a z i e r s

I ,

B a l l e t F ,

G u i l l o u z o

A ,

C o r c o s

L . R a t l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

e x p r e s s

f u n c t i o n a l

c y t o c h r o m e

P 4 5 0

2 E 1 .

C a r c i n o g e n e s i s 1 7 : 1 1 0 1 - 1 1 0 6

( 1 9 9 6 ) .

1 6 4 . A m e s B N ,

McCann J , Y a m a s a k i E . M e t h o d s

f o r d e t e c t i n g c a r -

c i n o g e n s

a n d

m u t a g e n s

w i t h t h e S a l m o n e l l a / m a m m a l i a n - m i c r o -

s o m e m u t a g e n i c i t y

t e s t . M u t a t R e s 3 1 : 3 4 7 - 3 6 4 ( 1 9 7 5 ) .

1 6 5 . M a c e

K ,

O f f o r d

E A ,

P f e i f e r

AMA.

D r u g

m e t a b o l i s m a n d

c a r c i n o -

g e n

a c t i v a t i o n s t u d i e s

w i t h h u m a n

g e n e t i c a l l y

e n g i n e e r e d c e l l s .

I n :

I n V i t r o

M e t h o d s

i n

P h a r m a c e u t i c a l

R e s e a r c h

( C a s t e l l J V ,


MJ e d s ) .

S a n

D i e g o , C A : A c a d e m i c

P r e s s ,

1 9 9 7 ; 4 3 3 - 4 5 6 .

1 6 6 .

L a v o i e

L ,

T r e m b l a y A ,

M i r a u l t

M E .

D i s t i n c t

o x i d o r e s i s t a n c e p h e -

n o t y p i c

o f h u m a n T47D c e l l s

t r a n s f e c t e d b y

r a t


5 -


Y c

e x p r e s s i o n

v e c t o r s .

J

B i o l C h e m

2 6 7 : 3 6 3 2 - 3 6 3 6

( 1 9 9 2 ) .

1 6 7 .

G u e n g e r i c h

F P ,

G i l l a m

E M ,

S h i m a d a

T .

N e w

a p p l i c a t i o n s

o f

b a c t e r i a l

s y s t e m s

t o

p r o b l e m s

i n

t o x i c o l o g y .

C r i t

R e v T o x i c o l

2 6 : 5 5 1 - 5 8 3

( 1 9 9 6 ) .

1 6 8 .

T y s o n C A ,

G r e e n

C E .


m e a s u r e s :

c h o i c e s

a n d

m e t h -

o d s .

I n : T h e

I s o l a t e d

H e p a t o c y t e ,

U s e i n

T o x i c o l o g y

a n d

X e n o b i o t i c B i o t r a n s f o r m a t i o n s ( R a u c k m a n E G ,

P a d i l l a

GM ,

e d s ) .

O r l a n d o ,

F L : A c a d e m i c

P r e s s , 1 9 8 7 ; 1 1 9 - 1 5 8 .

1 6 9 .

S t o r y D L ,

G e e

S J , T y s o n C A ,

G o u l d

DH.

R e s p o n s e

o f i s o l a t e d


t o

o r g a n i c

a n d

i n o r g a n i c c y t o t o x i n s .

J

T o x i c o l

E n v i r o n

H e a l t h

1 1 : 4 8 3 - 5 0 1 ( 1 9 8 3 ) .

1 7 0 .


D ,

R i c h e

C , B e g u e

J ,

G u i l l o u z o

A . L e s


e n

c u l t u r e :

u t i l i s a t i o n

e n

p h a r m a c o t o x i c o l o g i e .

I n :

M e t o d e s

I n

V i t r o

e n

P h a r m a c o t o x i c o l o g i e .

V o l

1 7 0 ( A d o l p h e

M ,

G u i l l o u z o

A , e d s ) .


I N S E R M , 1 9 8 8 ; 1

1 - 1 6 .

1 7 1 .

L e B ot

MA,

B e g u e J M ,

K e r n a l e g u e n D ,

R o b e r t

J ,


D ,

A i r i a u J , R i c h e C ,


D i f f e r e n t


a n d

m e t a b o l i s m o f d o x o r u b i c i n , d a u n o r u b i c i n ,

e p i r u b i c i n ,

e s o r u b i c i n

a n d

i d a r u b i c i n

i n c u l t u r e d h u m a n a n d

r a t


B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 7 : 3 8 7 7 - 3 8 8 7

( 1 9 8 8 ) .

1 7 2 .

M a l l e d a n t

Y ,

S i p r o u d h i s L , T a n g u y

M ,

C l e r c

C ,

C h e s n e

C ,

S a i n t -

M a r c

C ,

G u i l l o u z o

A .

E f f e c t s o f

h a l o t h a n e o n

h u m a n

a n d

r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s .

A n e s t h e s i o l o g y

7 2 : 5 2 6 - 5 3 4

( 1 9 9 0 ) .

1 7 3 .

R u b i n

K ,

O l d b e r g A ,

H o o k

M ,

O b r i n k

B . A d h e s i o n

o f

r a t

h e p a -

t o c y t e s

t o

c o l l a g e n . E x p

C e l l R e s

1 1 7 : 1 6 5 - 1 7 7 ( 1 9 7 8 ) .

1 7 4 .

F a u t r e l

A , C h e s n e C ,

G u i l l o u z o

A ,

De S o u s a

G ,

P l a c i d i

M ,

R a h m a n i

R ,

B r a u t

F ,

P i c h o n

J , H o e l l i n g e r H ,

V i n t e z o u

P

e t a l .

A

m u l t i c e n t r e

s t u d y

o f a c u t e

i n v i t r o


i n

r a t

l i v e r c e l l s .

T o x i c o l

I n

V i t r o

5 : 5 4 3 - 5 4 7

( 1 9 9 1 ) .

1 7 5 .

R i d d e l l

R J ,

P a n a c e r

D S ,

W i l d e

S M ,

C l o t h i e r

P H ,

B a l l s

M . T h e

i m p o r t a n c e

o f

e x p o s u r e

p e r i o d

a n d c e l l

t y p e

i n i n

v i t r o

c y t o t o x i c -

i r y

t e s t s .

ATLA

1 4 : 8 6 - 9 2

( 1 9 8 6 ) .



* V o l 1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

529



GUILLOUZO

1 7 6 .

J o v e r

R , P o n s o d a

X ,

C a s t e l l

J V ,


M J .

E v a l u a t i o n

o f

t h e

c y t o t o x i c i t y o f t e n

c h e m i c a l s

o n

h u m a n

c u l t u r e d

h e p a t o -

c y t e s :

p r e d i c t a b i l i t y

o f

h u m a n

t o x i c i t y

a n d

c o m p a r i s o n

w i t h

r o d e n t

c e l l

c u l t u r e

s y s t e m s . T o x i c o l I n

V i t r o

6 : 4 7 - 5 2

( 1 9 9 2 ) .

1 7 7 .


D , B a f f e t

G ,

L a t i n i e r

M F ,

R i s s e l M ,

G u i l l o u z o

A .

U s e o f

h e p a t o c y t e

c o - c u l t u r e s i n

a s s e s s m e n t o f

d r u g

t o x i c i t y f r o m

c h r o n i c

e x p o s u r e .


1 8 : 7 6 5 - 7 7 1

( 1 9 8 8 ) .

1 7 8 .


M J , L a r r a u r i

A ,

D o n a t o

T , L o p e z

P ,

M o n t o y a

A ,

C a s t e l l

J V .

P r e d i c t i v e

v a l u e

o f

t h e

i n

v i t r o t e s t

f o r


o f

x e n o b i o t i c s .

I n : L i v e r

C e l l s a n d D r u g s .

V o l 1 6 4

( G u i l l o u z o

A ,

e d ) .

P a r i s : L e s

E d i t i o n s

I N S E R M a n d

J o h n

L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 8 ; 3 7 1 - 3 7 7 .

1 7 9 . B o o b i s

A R , D u n c a n

J ,

F a w t h r o p

J ,

D a v i s

D S .

M e c h a n i s m s o f

c e l l

d e a t h .

T r e n d s P h a r m a c o l S c i

1 0 : 2 7 5 - 2 8 0

( 1 9 8 9 ) .

1 8 0 .

T h o m a s

J A ,

P a r k

E M .

O x y r a d i c a l - i n i t i a t e d

S - t h i o l a t i o n

a n d

e n z y m i c

d e t h i o l a t i o n . B a s i c

L i f e S c i

4 9 : 3 6 5 - 3 6 8

( 1 9 8 8 ) .

1 8 1 .

V i g n a i s P M ,

V i g n a i s

P V .

F u s c i n ,

a n

i n h i b i t o r

o f


S H - d e p e n d e n t

t r a n s p o r t - l i n k e d f u n c t i o n s . B i o c h i m

B i o p h y s

A c t a

3 2 5 : 3 5 7 - 3 7 4

( 1 9 7 3 ) .

1 8 2 .

C a s t e l l

J V ,


M J , P o n s o d a

X ,

B o r t R

I n v i t r o

i n v e s -

t i g a t i o n

o f

t h e

m o l e c u l a r

m e c h a n i s m s

o f


I n :

I n

V i t r o

M e t h o d s

i n


R e s e a r c h

C a s t e l l

J V ,

G o m e z -

L e c h o n

M J ,

e d s ) .

S a n

D i e g o ,

C A A c a d e m i c

P r e s s , 1 9 9 7 ; 3 7 5 - 4 1 0 .

1 8 3 .

K a p p u s H .

L i p i d p e r o x i d a t i o n :

m e c h a n i s m s ,

a n a l y s i s , e n z y m o l o g y

a n d

b i o l o g i c a l r e l e v a n c e .

I n :

O x i d a t i v e

s t r e s s

( S i e s

H ,

e d i ) .

L o n d o n A c a d e m i c

P r e s s ,

1 9 8 5 ; 2 7 3 - 3

1 0 .

1 8 4 .

S e r g e n t

0 , M o r e l

I ,

C o g r e l

P ,

C h e v a n n e

M ,

P a s d e l o u p N ,

B r i s s o t

P , L e s c o a t

G ,

C i l l a r d

P ,

C i l l a r d

J . S i m u l t a n e o u s

m e a s u r e m e n t s

o f

c o n j u g a t e d d i e n e s

a n d f r e e

m a l o n d i a l d e h y d e ,

u s e d

a s a

m i c r o m e t h o d f o r

t h e


l i p i d

p e r o x i d a t i o n i n r a t

h e p a -

t o c y t e

c u l t u r e s .

C h e m

P h y s

L i p i d s

6 5 : 1 3 3 - 1 3 9

( 1 9 9 3 ) .

1 8 5 . M o r e l

I ,

S e r g e n t

0 ,

C o g r e l

P ,

L e s c o a t

G ,

P a s d e l o u p

N ,

B r i s s o t

P ,

C i G l a r d

P ,

C i l l a r d

J .

EPR

s t u d y

o f

a n t i o x i d a n t

a c t i v i t y

o f

t h e

i r o n

c h e l a t o r s

p y o v e r d i n

a n d

h y d r o x y p y r i d - 4 - o n e s

i n

i r o n

l o a d e d

h e p a t o c y t e c u l t u r e s .

F r e e R a d i c B i o l

M e d

1 8 : 3 0 3 - 3 1 0

( 1 9 9 5 ) .

1 8 6 .

G i l l e t t e

J R .

A

p e r s p e c t i v e o n

t h e r o l e o f

c h e m i c a l l y

r e a c t i v e

m e t a b o l i t e s o f

f o r e i g n

c o m p o u n d s i n

t o x i c i t y .

I :

C o r r e l a t i o n

o f

c h a n g e s i n

c o v a l e n t

b i n d i n g

o f

r e a c t i v e


w i t h

c h a n g e s

i n

t h e i n c i d e n c e

a n d

s e v e r i t y

o f

t o x i c i t y .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

2 3 : 2 9 2 7 - 2 9 3 8

( 1 9 7 4 ) .

1 8 7 .

G r e e n

C E ,

D a b b s J E ,

T y s o n

C A .

M e t a b o l i s m

a n d

c y t o t o x i c i t y o f

a c e t a m i n o p h e n

i n


i s o l a t e d

f r o m

r e s i s t a n t

a n d

s u s c e p -

t i b l e

s p e c i e s . T o x i c o l

A p p l P h a r m a c o l

7 6 : 1 3 9 - 1 4 9

( 1 9 8 4 ) .

1 8 8 .

G o e t h a l s

F , K r a c k

G ,

D e b o y s e r

D , V o s s e n

P ,

R o b e r f r o i d M .

C r i t i c a l


f u n c t i o n s

o f

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e s a s

s e n s i t i v e

i n d i c a t o r s o f

c h e m i c a l

t o x i c i t y . F u n d a m

A p p l

T o x i c o l

4 : 4 4 1 - 4 5 0

( 1 9 8 4 ) .

1 8 9 . S a n t o n e

K S , A c o s t a

D .

M e a s u r e m e n t

o f

f u n c t i o n a l

m e t a b o l i c

a c t i v i t y

a s

a

s e n s i t i v e

p a r a m e t e r

o f


i n

c u l t u r e d

h e p a t o -

c y t e s .

J

T i s s u e

C u l t

M e t h

7 : 1 3 7 - 1 4 2

( 1 9 8 2 ) .

1 9 0 .

V i l l a

P , B e g u e

J M , G u i l l o u z o

A .

E f f e c t s

o f


d e r i v a -

t i v e s

o n

c u l t u r e d

r a t


B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 3 : 4 0 9 8 - 4 1 0 1

( 1 9 8 4 ) .

1 9 1 .

R e d d y

J K , L a l w a n i N D .

C a r c i n o g e n e s i s b y

p e r o x i s o m e

p r o l i f e r a -

t o r s :


t h e

r i s k o f

h y p o l i p i d a e m i c

d r u g s

a n d

i n d u s t r i a l

p l a s t i c i z e r s t o

h u m a n s .

C R C

C r i t

R e v

T o x i c o l

1 2 : 1 - 5 8 ( 1 9 8 3 ) .

1 9 2 .

H e n s g e n s

H E S J ,

M e i j e r A J .

T h e

i n t e r r e l a t i o n s h i p

b e t w e e n

u r e o -

g e n e s i s

a n d

p r o t e i n

s y n t h e s i s i n

i s o l a t e d

r a t

l i v e r

c e l l s .

B i o c h i m

B i o p h y s A c t a

5 8 2 : 5 2 5 - 5 3 2

( 1 9 7 9 ) .

1 9 3 .

G e e

S J ,

G r e e n

C E , T y s o n C A .


m e t a b o l i s m

o f

t o l b u -

t a m i d e

b y i s o l a t e d

h e p a t o c y t e s f r o m

r a t ,

r a b b i t ,

d o g a n d

s q u i r r e l

m o n k e y .

D r u g M e t a b

D i s p o s

1 2 : 1 7 4 - 1 7 8

( 1 9 8 4 ) .

1 9 4 .

P a i n e

A J , M a u r e r

G , V o n

W a r t b u r g B R .

T h e

a p p l i c a t i o n

o f h e p a -

t o c y t e

c u l t u r e t o

t h e

i d e n t i f i c a t i o n o f

p a t h w a y s

o f

d r u g m e t a b o -

l i s m . S t u d i e s

w i t h

p i n d o l o l

a n d

f l u p e r l a p i n e .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 3 : 3 1 1 1 - 3 1 1 4

( 1 9 8 4 ) .

1 9 5 .

G r e e n C E ,

L e v a l l e y

S E ,

T y s o n

CA

C o m p a r i s o n

o f

a m p h e t a m i n e

m e t a b o l i s m

u s i n g

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e s f r o m f i v e

s p e c i e s

i n d u d i n g

h u m a n .

J P h a r m a c o l

E x p T h e r

2 3 7 : 9 3 1 - 3 9 6

( 1 9 8 6 ) .

1 9 6 .

M c Q u e e n

C A ,

M i l l e r

M j ,

W i l l i a m s GM.

S e x d i f f e r e n c e s

i n t h e


o f

2 - a c e t y l - a m i n o f l u o r e n e

i n c u l t u r e d r a t

h e p a -

t o c y t e s . C e l l

B i o l

T o x i c o l

2 : 2 7 1 - 2 8 1

( 1 9 8 6 ) .

1 9 7 .

C h e n e r y

R J ,

A y r t o n

A ,

O l d h a m

H G ,

S t a n d i n g P ,

N o r m a n

S J ,

S e d d o n T ,

K i r b y

R .

D i a z e p a m


c u l t u r e d

h e p a t o -

c y t e s f r o m

r a t ,

r a b b i t ,

d o g , g u i n e a

p i g

a n d

m a n .

D r u g

M e t a b

D i s p o s

1 5 : 3 1 2 - 3 1 7

( 1 9 8 7 ) .

1 9 8 . L e

B i g o t

J F ,

B e g u e

J M , K i e c h e l

J R , G u i l l o u z o

A .

S p e c i e s

d i f f e r -

e n c e s

i n

m e t a b o i s m o f

k e t o t i f e n

i n

r a t ,

r a b b i t

a n d

m a n :

d e m o n -

s t r a t i o n o f s i m i l a r

p a t h w a y s

i n

v i v o a n d i n

c u l t u r e d


L i f e

S c i

4 0 : 8 8 3 - 8 9 0

( 1 9 8 7 ) .

1 9 9 .

G u i l l o u z o

A ,

B e g u e

J M ,

M a u r e r

G ,

K o c h

P .

I d e n t i f i c a t i o n

o f

m e t a b o l i c p a t h w a y s o f

p i n d o l o l a n d

f l u p e r l a p i n e

i n

a d u l t

h u m a n

h e p a t o c y t e c u l t u r e s .


1 8 : 1 3 1 - 1 3 9

( 1 9 8 8 ) .

2 0 0 .

R a h m a n i

R ,

R i c h a r d

B , F a b r e

G ,

C a n o

J P .

E x t r a p o l a t i o n

o f

p r e -

c l i n i c a l

p h a r m a c o k i n e t i c

d a t a

t o

t h e r a p e u t i c

d r u g

u s e .


1 8 : 7 1 - 8 8

( 1 9 8 8 ) .

2 0 1 .

O l d h a m

H G ,

S t a n d r i n g P , N o r m a n

S J ,

B l a k e

T J ,

B e a t t i e

I ,

C o x

P J ,

C h e n e r y J .

M e t a b o l i s m

o f

t e m e l a s t i n e

( S K F

9 3 9 4 4 )

i n


f r o m

r a t ,

d o g ,

c y n o m o l g u s

m o n k e y

a n d

m a n .

D r u g

M e t a b

D i s p o s

1 8 : 1 4 6 - 1 5 2

( 1 9 9 0 ) .

2 0 2 .

L a c a r e l l e

B ,

M a r r e

F ,

D u r a n d

A ,

D a v i

H ,

R a h m a n i

R .

M e t a b o l i s m

o f

m i n a p r i n e

i n

h u m a n

a n d

a n i m a l


a n d

l i v e r

m i c r o s o m e s - p r e d i c t i o n

o f


v i v o .


2 1 : 3 1 7 - 3 2 9

( 1 9 9 1 ) .

2 0 3 .

B e g u e

J M, K o c h

P , M a u r e r

G , G u i l l o u z o A .


o f

t h e


c a p a c i t y

b y c u l t u r e d h u m a n


a f t e r

s e v e r a l

d a i l y e x p o s u r e s

t o

d r u g s . T o x i c o l

I n

V i t r o

7 : 4 9 3 - 4 9 8

1 9 9 3 ) .

2 0 4 .

B e r t h o u

F ,


D ,

A l i x

D ,

C a r h l a n t

D ,

R i c h e C ,

G u i l l o u z o

A .

C a f f e i n e

a n d


m e t a b o l i s m

i n

n e w b o r n

a n d

a d u l t

h u m a n


c o m p a r i s o n w i t h

a d u l t

r a t

h e p a t o -

c y t e s . B i o c h e m P h a r m a c o l

3 7 : 3 6 9 1 - 3 7 0 0

( 1 9 8 8 ) .

2 0 5 .

G r i s l a i n

L , R a t a n a s a v a n h

D ,

M o q u a r d

M T ,

R a q u i l l e t L ,

B e g u e

J M ,

Du

V i g n a u d

P ,

G e n i s s e l

P , G u i l l o u z o

A ,

B r o m e t

N .

P r i m a r y

c u l t u r e s

o f

r a t

a n d h u m a n


a s

a

m o d e l

s y s t e m f o r t h e


c y t o t o x i c i t y a n d

m e t a b o l i c

p a t h w a y s

o f

a

n e w

d r u g

S - 3 3 4 1 .

I n :

L i v e r

C e l l s

a n d

D r u g s . V o l

1 6 4

( G u i l l o u z o A ,

e d ) .

P a r i s : L e s

E d i t i o n s

I N S E R M

a n d

J o h n

L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 8 ; 3 5 7 - 3 6 3 .

2 0 6 .

L e C o r r e

P ,


D ,

C h e v a n n e

F ,

G i b a s s i e r

D ,

S a d o P ,

L e

V e r g e

R ,

G u i l l o u z o

A . I n

v i t r o

a s s e s s m e n t o f


h e p a t i c

m e t a b o l i s m

o f

d i s o p y r a m i d e i n

h u m a n s

-

c o m p a r i s o n

w i t h i n

v i v o

d a t a .

C h i r a l i t y

3 : 4 0 5 - 4 1 1

( 1 9 9 1 ) .

2 0 7 .

P i c h a r d

L ,

F a b r e

I ,

F a b r e

G ,

D o m e r g u e

J ,

S a i n t - A u b e r t

B ,

M o u r a d

G , M a u r e l

P .

C y c l o s p o r i n A

d r u g


S c r e e n i n g

f o r

i n d u c e r s

a n d

i n h i b i t o r s

o f

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

( c y c l o s p o r i n

A

o x i d a s e )

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s

a n d

l i v e r

m i c r o s o m e s .

D r u g M e t a b

D i s p

1 8 : 5 9 5 - 6 0 6

( 1 9 9 0 ) .

2 0 8 .

L a r r e y D ,

F u n c k - B r e n t a n o

C , B r e i l

P , V i l a u x

J ,

T h e o d o r e

C ,

B a b a n y G ,

P e s s a y r e D . E f f e c t s

o f


o n

h e p a t i c

d r u g -


e n z y m e s

i n

h u m a n s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 2 : 1 0 6 3 - 1 0 6 8

( 1 9 8 3 ) .

2 0 9 .

G u i l l o u z o

A ,

G r i p o n

P ,


D ,

C l e m e n t

B ,

G u g u e n -

G u i l l o u z o

C .

C u l t u r e d h u m a n


a s

a

m o d e l

s y s t e m

f o r

m a n i n

p h a r m a c o t o x i c o l o g i c a l

r e s e a r c h . I n :

A d v a n c e s

i n

A p p l i e d

T o x i c o l o g y .

V o l 1

( D a y a n

A D ,

P a i n e

A J e d s ) .

L o n d o n : T a y l o r

F r a n c i s ,

1 9 8 8 ; 7 7 - 1 0 3 .

2 1 0 .

V i l l a

P ,

B e g u e

J M ,

G u i l l o u z o

A .

E r y t h r o m y c i n

t o x i c i t y

i n p r i -

m a r y

c u l t u r e s

o f

r a t



1 5 : 7 6 7 - 7 7 3

( 1 9 8 5 ) .

2 1 1 .


D ,

B e r t h o u

F , D r e a n o

Y ,

M o n d i n e P ,

G u i l l o u z o

A , R i c h e C .

M e t h y l c h o l a n t h r e n e

b u t

n o t


e n h a n c e s

c a f f e i n e

a n d


m e t a b o l i s m

i n

c u l t u r e d

a d u l t

h u m a n

h e p a t o c y t e s . B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 9 : 8 5 - 9 4

( 1 9 9 0 ) .

2 1 2 .

T o l m a n n

K G ,

P e t e r s o n

P , G r a y

B S ,

H a m m a r S P .

H e p a t o t o x i c i t y

o f

s a l i c y l a t e s i n

m o n o l a y e r c e l l

c u l t u r e s .


7 4 : 2 0 5 - 2 0 8

( 1 9 7 8 ) .

2 1 3 . S c h a n n e

F A , K a n e

A B ,

Y o u n g E E , F a r b e r

J L .

C a l c i u m

d e p e n -

d e n c e o f

t o x i c

d e a t h :

a f i n a l

common

p a t h w a y . S c i e n c e

2 0 6 : 7 0 0 - 7 0 2

( 1 9 7 9 ) .

2 1 4 .

C a s i n i

A F ,

F a r b e r

J L .

D e p e n d e n c e o f

t h e

c a r b o n

t e t r a c h l o r i d e -

i n d u c e d c e l l

d e a t h

o f

c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s o n

t h e

e x t r a c e l l u l a r c a l -

c i u m


A m J

P a t h o l l O 5 : 1 3 8 - 1 4 8

( 1 9 8 1 ) .

53 0


H e a l t h


*

V o l

1 0 6 ,

S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8




2 1 5 . C h e n e r y

R M , G e o r g e M , K r i s h n a

G . T h e

e f f e c t

o f

i o n o p h o r e A

2 3 1 8 7

a n d

c a l c i u m

o n

c a r b o n t e t r a c h l o r i d e

i n d u c e d

t o x i c i t y

i n



T o x i c o l

A p p l

P h a r m a c o l 6 0 : 2 4 1 - 2 5 2

( 1 9 8 1 ) .

2 1 6 . S m i t h

M T , T h or H ,

O r r i e n u s S . T o x i c i n j u r y t o i s o l a t e d

h e p a t o -

c y t e s

i s n o t

d e p e n d e n t o n

e x t r a c e l l u l a r c a l c i u m . S c i e n c e

2 1 3 : 1 2 5 7 - 1 2 5 9

( 1 9 8 1 ) .

2 1 7 . E d m o n s o n

J W ,

B a n g N O .

D e l e t e r i o u s e f f e c t s o f

c a l c i u m d e p r i v a -

t i o n

o n

f r e s h l y i s o l a t e d


A m

J

P h y s i o l

2 4 1 : 6 3 - 6 8

( 1 9 8 1 ) .

2 1 8 .

S t a c e y

NH, K l a a s s e n

C J J .

L a c k o f p r o t e c t i o n a g a i n s t

c h e m i c a l l y

i n d u c e d i n j u r y

t o


b y o m i s s i o n

o f c a l c i u m

f r o m

t h e i n c u b a t i o n

m e d i u m .

J

T o x i c o l

E n v i r o n

H e a l t h

9 : 2 6 7 - 2 7 6 ( 1 9 8 2 ) .

2 1 9 .

S a k a i d a I , T h o m a s

A P , F a r b e r J L . I n c r e a s e s i n

c y t o s o l i c c a l c i u m

i o n

c o n c e n t r a t i o n c a n b e d i s s o c i a t e d

f r o m

t h e k i l l i n g

o f

c u l t u r e d

h e p a t o c y t e s b y t e r t - b u t y l

h y d r o x y p e r o x i d e .

J B i o l C h e m

2 6 6 : 7 1 7 - 7 2 2

( 1 9 9 1 ) .

2 2 0 . H a r m a n AW,

M a h a r S O , B u r c h a m

P C , M a d s e n B W .

L e v e l o f

c y t o s o l i c

f r e e

c a l c i u m d u r i n g a c e t a m i n o p h e n t o x i c i t y

i n m o u s e

h e p a t o c y t e s . M o l

P h a r m a c o l 4 1 : 6 6 5 - 6 7 0

( 1 9 9 2 ) .

2 2 1 . P a i n e A J ,

H o c k i n

L J .

T h e m a i n t e n a n c e

o f c y t o c h r o m e P - 4 5 0 i n

l i v e r

c e l l c u l t u r e : r e c e n t s t u d i e s o n

P - 4 5 0 - m e d i a t e d m e c h a n i s m s

o f

t o x i c i t y .

T o x i c o l o g y 2 5 : 4 1 - 4 5

( 1 9 8 2 ) .

2 2 2 .

E k w a l l

B ,

A c o s t a

D .

I n

v i t r o

c o m p a r a t i v e

t o x i c i t y

o f

s e l e c t e d

d r u g s

a n d

c h e m i c a l s i n

H e L a

c e l l s ,

C h a n g

l i v e r c e l l s a n d

r a t


D r u g

C h e m T o x i c o l

5 : 2 1 9 - 2 3 1

( 1 9 8 2 ) .

2 2 3 . T y s o n C A , M i t o m a C ,

K a l i v o d a

J . E v a l u a t i o n

o f


i s o -

l a t e d

b y

a n o n p e r f u s i o n

t e c h n i q u e

i n a p r e s c r e e n

f o r

c y t o t o x i c i t y .

J

T o x i c o l

E n v i r o n

H e a l t h

6 : 1 9 7 - 2 0 5 ( 1 9 8 0 ) .

2 2 4 .

T y s o n

C A ,

H a w k - P r a t h e r C , S t o r y

D L , G o u l d DH .

C o r r e l a t i o n s

o f i n v i t r o a n d

i n

v i v o


f o r f i v e

h a l o a l k a n e s .

T o x i c o l A p p I

P h a r m a c o l

7 0 : 2 8 9 - 3 0 2

( 1 9 8 3 ) .

2 2 5 .

F a u t r e l

A ,

C h e s n e C , G u i l l o u z o

A ,

D e

S o u s a

G ,

P l a c i d i

M ,

R a h m a n i R ,

B r a u t

F ,

P i c h o n

J ,

H o e l l i n g e r H ,

V i n t e z o u

P

e t

a l . A

m u l t i c e n t r e

s t u d y

o f a c u t e

i n v i t r o


i n r a t


t e n t a t i v e


b e t w e e n i n

v i t r o t o x i c i t i e s a n d

i n

v i v o d a t a .

ATLA 2 1 : 2 8 1 - 2 8 4 ( 1 9 9 3 ) .

2 2 6 .

M i c h a l o p o u l o s G K ,

S t r o m

S C ,

J i r t l e

R L .

U s e o f


f o r

s t u d i e s

o f


a n d

c a r c i n o g e n e s i s .

I n :

I s o l a t e d a n d

C u l t u r e d


( G u i l l o u z o A ,


P a r i s : L e s

E d i t i o n s

I N S E R M

a n d

J o h n

L i b b e y ,

E u r o t e x t ,

1 9 8 6 ; 3 3 3 - 3 5 2 .

2 2 7 .

S t r o m

S C ,

M o n t e i t h

DK ,

M a n o h a r a n

K ,

N o v o t n y

A .

G e n o t o x i c i t y

s t u d i e s

w i t h human


I n :

T h e

I s o l a t e d H e p a t o c y t e :

U s e

i n

T o x i c o l o g y

a n d

X e n o b i o t i c

B i o t r a n s f o r m a t i o n s ( R a u c k m a n

E J ,

P a d i l l a

G M , e d s ) .

O r l a n d o ,

F L : A c a d e m i c

P r e s s , 1 9 8 7 ; 2 6 5 - 2 8 0 .

2 2 8 .

E c k I

P ,

S t r o m S C ,

M i c h a l o p o u l o s G ,

J i r t l e

R L .

I n d u c t i o n o f s i s t e r

c h r o m a t i d

e x c h a n g e s

i n

c u l t u r e d

a d u l t r a t


b y d i r e c t l y

a n d

i n d i r e c t l y

a c t i n g m u t a g e n s / c a r c i n o g e n s .

C a r c i n o g e n e s i s

8 : 1 0 7 7 - 1 0 8 3

( 1 9 8 7 ) .

2 2 9 .

M a r t e l l i

A ,

R o b b i a n o

L ,

G h i a

M ,

G i u l i a n o

L , A n g e l i n i G ,

B r a m b i l l a

G .

A

s t u d y

o f t h e

p o t e n t i a l

g e n o t o x i c i t y

o f c i m e t i d i n e

u s i n g

h u m a n

h e p a t o c y t e

p r i m a r y

c u l t u r e s :

d i s c r e p a n c y

f r o m

r e s u l t s o b t a i n e d

i n

r a t


C a n c e r

L e t t

3 0 : 1 1 - 1 6

( 1 9 8 6 ) .

2 3 0 .

B u t t e r w o r t h B E ,

S m i t h - O l i v e r

T ,

E a r l e L ,

L o u r y D J ,

W h i t e

R D ,

D o o l i t t l e

D J , W o r k i n g

P K , C a t t l e y

R C ,

J i r t l e

R , M i c h a l o p o u l o s

G

e t

a l . U s e

o f

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

h u m a n


i n

t o x i c o l -

o g y

s t u d i e s . C a n c e r

R e s

4 9 : 1 0 7 5 - 1 0 8 4 ( 1 9 8 9 ) .

2 3 1 .

W i l l i a m s GM.

T h e

d e t e c t i o n

o f

g e n o t o x i c

c h e m i c a l s

i n

t h e

h e p a -

t o c y t e p r i m a r y

c u l t u r e : D N A

r e p a i r

t e s t . I n :

M u t a t i o n ,

P r o m o t i o n

a n d

T r a n s f o r m a t i o n .

V o l

2 1

( I m u i N ,

K u r u k i

T ,

Y a m a d a

M A ,

H e i d e l b u r g e r C ,

e d s ) .

G a n n

M o n o g r C a n c e r

R e s

1 9 8

1 ; 4 7 - 5 7 .

2 3 2 .

S t r o m

S C , J i r t l e R L ,


G .

G e n o t o x i c

e f f e c t s

o f 2 -

a c e t y l a m i n o f l u o r e n e

o n

r a t

a n d h u m a n


E n v i r o n

H e a l t h

P e r s p e c t 4 9 : 1 6 5 - 1 7 0 ( 1 9 8 3 ) .

2 3 3 .

S t e i n m e t z

K L , S p a k D K ,

G r e e n

C E ,

M i r s a l i s

J C .

I n d u c t i o n

o f

u n s c h e d u l e d

N

s y n t h e s i s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

h a m s t e r ,

r a t ,

m o u s e

a n d

h u m a n


[ A b s t r a c t ] .

T o x i c o l o g i s t 5 : 2 0

( 1 9 8 5 ) .

2 3 4 . S t r o m

S C , N o v i c k i D L , N o v ot n y A ,

J i r t l e R , M i c h a l o p o u l o s

G .

H u m a n h e p a t o c y t e m e d i a t e d


a n d

DN A r e p a i r

a c t i v -

i t y .

C a r c i n o g e n e s i s 4 : 6 8 3 - 6 8 6

( 1 9 8 3 ) .

2 3 5 . M o o r e

C J , G o u l d

M N. M e t a b o l i s m

o f

b e n z o [ a ] p y r e n e

b y

c u l -

t u r e d h u m a n h e p a t o c y t e s

f r o m m u l t i p l e d o n o r s . C a r c i n o g e n e s i s

5 : 1 5 7 7 - 1 5 8 2 ( 1 9 8 4 ) .

2 3 6 .

B e g u e

J M , B a f f e t

G ,

C a m p i o n

J P , G u i l l o u z o A . D i f f e r e n t i a l

r e s p o n s e

o f

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f h u m a n

a n d

r a t


t o

a f l a -

t o x i n

B 1 - i n d u c e d


a n d

p r o t e c t i o n

b y

t h e

h e p a t o p r o -

t e c t i v e a g e n t ( + ) - C y a n i d a n o l - 3 .

B i o l C e l l

6 3 : 3 2 7 - 3 3 3 ( 1 9 8 8 ) .

2 3 7 .

H i k i n o

H , K i s o

Y ,

T a g u c h i

H ,

I k e y a Y .

A n t i h e p a t o t o x i c

a c t i o n s

o f l i g n o i d s

f r o m

S c h i z a n d r a

c h i n e s i s f r u i t s . P l a n t a

M ed

5 0 : 2 1 3 - 2 1 8 ( 1 9 8 4 ) .

2 3 8 . C l e m e n t

B , D u m o n t J M , R a t a n a s a v a n h

D ,

L a t i n i e r M F ,

B r i s s o t

P , G u i l l o u z o A .

E f f e c t s o f m a l o t i l a t e

o n

h u m a n

a n d r a t

h e p a t o -

c y t e s

i n s h o r t - t e r m a n d

l o n g - t e r m

p r i m a r y

c u l t u r e .

I n :

L i v e r C e l l s

a n d D r u g s . V o l 1 6 4

( G u i l l o u z o A , e d ) .


INSERM

a n d J o h n L i b b e y

E u r o t e x t , 1 9 8 8 ; 4 1 7 - 4 2 1 .

2 3 9 .

E u r o p e a n

M u l t i c e n t r e

S t u d y G r o u p . T h e r e s u l t s o f

a r a n d o m i z e d

d o u b l e

b l i n d

c o n t r o l l e d

t r i a l

e v a l u a t i n g

m a l o t i l a t e

i n p r i m a r y

b i l -

i a r y

c i r r h o s i s . J H e p a t o l

1 7 : 2 7 7 - 2 3 5 ( 1 9 9 3 ) .

2 4 0 .

L a n g o u e t

S ,

C o l e s B , M o r e l

F , B e c q u e m o n t

L ,

B e a u n e

P ,

G u e n g e r i c h P ,

K e t t e r e r B , G u i l l o u z o A . I n h i b i t i o n o f

C Y P l A 2

a n d

C Y P 3 A 4 b y

o l t i p r a z

r e s u l t s

i n r e d u c t i o n o f

a f l a t o x i n

B 1

m e t a b o l i s m

i n

h u m a n


i n

p r i m a r y

c u l t u r e .

C a n c e r R e s

5 5 : 5 5 7 4 - 5 5 7 9

( 1 9 9 5 ) .

2 4 1 . M a h e o

K , M o r e l F ,

L a n g o u e t S ,

K r a m er H , L e F e r r e c

E ,

K e t t e r e r


A . I n h i b i t i o n o f c y t o c h r o m e s P - 4 5 0 a n d i n d u c t i o n

o f g l u t a t h i o n e S t r a n s f e r a s e s b y s u l f o r a p h a n e

i n

p r i m a r y

h u m a n

a n d

r a t


C a n c e r R e s

5 7 : 3 6 4 9 - 3 6 5 2

( 1 9 9 7 ) .

2 4 2 . D e b o y s e r

D , K r a c k G ,

R o b e r f r o i d

M .

I n v e s t i g a t i o n i n t o t h e

m e c h a n i s m

o f

t e t r a c y c l i n e - i n d u c e d

s t e a t o s i s .

S t u d y

i n

i s o l a t e d

h e p a t o c y t e s . T o x i c o l

A p p I

P h a r m a c o l

9 7 : 4 7 3 - 4 7 9

( 1 9 8 9 ) .

2 4 3 .

D e b o y s e r D , G o e t h a l s F ,

R o b e r f r o i d

M .


e f f e c t s o n

m e t h o t h r e x a t e

i n


i n r e l a t i o n

t o

i t s s t e a t o g e n i c

a c t i v i t y .


6 : 1 2 9 - 1 3 2 ( 1 9 9 2 ) .

2 4 4 . G e b h a r d t

R .

U s e o f i s o l a t e d a n d

c u l t u r e d


i n

s t u d i e s

o n b i l e f o r m a t i o n .

I n :

I s o l a t e d

a n d C u l t u r e d


( G u i l l o u z o

A ,



INSERM

a n d

J o h n L i b b e y

E u r o t e x t , 1 9 8 6 ; 3 5 3 - 3 7 6 .

2 4 5 .

B o y e r

J L .

I s o l a t e d

h e p a t o c y t e c o u p l e t s

a n d

b i l e

d u c t

u n i t s .

N o v e l

p r e p a r a t i o n s f o r

t h e

i n

v i t r o

s t u d y

o f

b i l e s e c r e t o r y

f u n c t i o n . C e l l

B i o l

T o x i c o l 1 3 : 2 8 9 - 3 0 0 ( 1 9 9 7 ) .

2 4 6 .

T h i b a u l t

N .

S c a n n i n g

l a s e r

c y t o m e t r y :

a l t e r a t i o n s i n d u c e d

b y


a g e n t s

i n

i s o l a t e d

r a t

h e p a t o c y t e c o u p l e t s .

C e l l

B i o l

T o x i c o l 1 0 : 3 2 3 - 3 2 8

( 1 9 9 4 ) .

2 4 7 .

B o y e r J L .

M e c h a n i s m s

o f

b i l e

f o r m a t i o n

a n d

c h o l e s t a s i s .

S c a n d

J

G a s t r o e n t e r o l

1 8 : 5 1 - 5 6

( 1 9 7 8 ) .

2 4 8 .

J u n g W ,

G e b h a r d t

R ,

R o b e n e k

H .

P r i m a r y

c u l t u r e o f r a t

h e p a t o -

c y t e s

a s a

m o d e l

s y s t e m

o f c a n a l i c u l a r

d e v e l o p m e n t , b i l a r y

s e c r e -

t i o n

a n d b i l e c a n a l i c u l a r

u l t r a s t r u c t u r e

i n d u c e d

b y

c h l o r p r o m a z i n e .

V i r c h o w s

A r c h

C e l l P a t h o l ) 4 9 : 3 4 9 - 3 6 3

( 1 9 8 5 ) .

2 4 9 .

K i t a n i

K ,

K a n a i

S T a u r o u r s o d e o x y c h o l a t e p r e v e n t s

t a u r o c h o l a t e -

i n d u c e d c h o l e s t a s i s .

L i f e

S c i

3 0 : 5 1 5 - 5 2 3 ( 1 9 8 2 ) .

2 5 0 .

T h i b a u l t

N ,

B a l l e t

F .

E f f e c t

o f

b i l e

a c i d s

o n i n t r a c e l l u l a r

c a l c i u m

i n i s o l a t e d

r a t

h e p a t o c y t e

c o u p l e t s .


4 5 : 2 8 9 - 2 9 3

( 1 9 9 3 ) .

2 5 1 .

Y a p

S H ,

R i j n t j e s

P J M ,

M o s h a g e

H J .

A m i o d a r o n e - i n d u c e d

l y s o -

s o m a l

i n c l u s i o n s

i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

h u m a n


G a s t r o e n t e r o l o g y 9 2 : 2 7 2 - 2 7 3

( 1 9 8 7 ) .

2 5 2 .

S o m a n i

P ,

B a n d y o p a d h y a y S , K l a u n i g J E ,

G r o s s S A .

A m i o d a r o n e - a n d

d e s e t h y l a m i o d a r o n e - i n d u c e d

m y e l i n o i d

i n c l u -

s i o n b o d i e s

a n d

t o x i c i t y

i n



H e p a t o l o g y

1 1 : 8 1 - 9 2 ( 1 9 9 0 ) .

2 5 3 .

U l r i c h

R ,

C o x J W .

A c u t e

h e p a t o c e l l u l a r

c h a n g e s

e l i c i t e d

b y

v a r i -

o u s

a n t i b i o t i c s

i n t h e

p e r f u s e d

l i v e r a n d

c u l t u r e d


f r o m

t h e r a t .

I n :

L i v e r C e f i s a n d

D r u g s .

V o l 1 6 4

( G u i l l o u z o

A ,

e d ) .


I N S E R M

a n d

J o h n

L i b b e y

E u r o t e x t ,

1 9 8 8 ; 3 9 1 - 3 9 6 .

2 5 4 .

G r a y T J B ,

L a k e

B G ,

B e a m a n d

J A ,

F o s t e r

J R , G a n g o l l i

S D .

P e r o x i s o m e


i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f r a t


T o x i c o l A p p I P h a r m a c o l 6 7 : 1 5 - 2 5

( 1 9 8 3 ) .



* V o l 1 0 6 , S u p p l e m e n t

2

*

A p r i l

1 9 9 8

5 3 1



G U IL L O U Z O

2 5 5 . B i e r i F , B e n t l e y P ,

W a e c h t e r

F ,

S t a u b l i

W.

U s e

o f

p r i m a r y

c u l -

t u r e s o f a d u l t

r a t

h e p a t o c y t e s t o i n v e s t i g a t e m e c h a n i s m s o f a c t i o n s

o f n a f e n o p i n , a h e p a t o c a r c i n o g e n i c p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r .

C a r c i n o g e n e s i s

5 : 1 0 3 3 - 1 0 3 9

( 1 9 8 4 ) .

2 5 6 .

B l a a u b o e r

B J , V a n

H o l s t e i j n C W M ,

B l e u m i n k

R ,

M e n n e s

WC,

V a n P e l t

FN A M ,

Y a p

S H , V a n

P e l t

J F ,

V a n

I e r s e l

A A J ,

T i m m e r m a n A , S c h m i d

B P . T h e e f f e c t o f b e c l o b r i c a c i d a n d

d o r i b r i c a c i d

o n

p e r o x i s o m a l , B o x i d a t i o n

a n d

p e r o x i s o m e p r o l i f -

e r a t i o n i n

p r i m a r y

c u l t u r e s

o f

r a t ,

m o n k e y

a n d

h u m a n

h e p a t o -

c y t e s .


4 0 : 5 2 1 - 5 2 8 ( 1 9 9 0 ) .

2 5 7 . F e l l o u s R , C o u l a u d D ,

A b e d

I E ,

R o q u e s

B P ,

L e

P e c q J B ,

D e l a i n

E ,

G o u y e t t e

A . C y t o p l a s m i c


o f d i t e r c a l i n i u m

i n r a t


a n d i n d u c t i o n o f


d a m a g e .

C a n c e r

R e s

4 8 : 6 5 4 2 - 6 5 4 9

( 1 9 8 8 ) .

2 5 8 . D a h l i n

D C ,

M i w a

G J ,

L u

A Y H ,

N e l s o n S D .

N - a c e t y l - p - b e n z o -

q u i n o n e

i m i n e :

a

c y t o c h r o m e

P - 4 5 0

p r o d u c t

o f

a c e t a m i n o p h e n .

P r o c

N a d A c a d

S c i

USA

8 1 : 1 3 2 7 - 1 3 3 1 ( 1 9 8 4 ) .

2 5 9 .

B o o b i s A R , T ee

L B G ,

H a m y d e n

C E ,

D a v i e s

D S .

F r e s h l y

i s o l a t e d


a s a m o d e l f o r

s t u d y i n g

t h e

t o x i c i t y

o f

p a r a c e t a m o l .

F o o d

C h e m T o x i c o l 2 4 : 7 3 1 - 7 3 6 ( 1 9 8 6 ) .

2 6 0 .

B a r t o l o m e

J B , B i r g e

R B ,

S p a r k s

K ,

C o h e n

S D ,

K h a i r a l l a

E A .

I m m u n o c h e m i c a l a n a l y s i s

o f

a c e t a m i n o p h e n

c o v a l e n t b i n d i n g t o

p r o t e i n s . P a r t i a l c h a r a c t e r i z a t i o n

o f

t h e

m a j o r

a c e t a m i n o p e n

b i n d i n g l i v e r p r o t e i n s . B i o c h e m

P h a r m a c o l

3 7 : 4 7 6 3 - 4 7 7 4

( 1 9 8 8 ) .

2 6 1 . L o n g R M , M o o r e

L .


e v a l u a t i o n

o f

r a t

h e p a t o c y t e

p r i m a r y

c u l t u r e s a s a

m o d e l

f o r c a r b o n

t e t r a c h l o r i d e

h e p a t o t o x i c -

i t y : c o m p a r a t i v e s t u d i e s

i n v i v o

a n d i n

v i t r o . T o x i c o l

A p p l

P h a r m a c o l 9 2 : 2 9 5 - 3 0 6 ( 1 9 8 8 ) .

2 6 2 . P o l i G , C h i a r p o t t o E ,

A l b a n o

E ,

C o t t a l a s s o

D ,

N a n n i

G ,

M a r i n a r i

UM ,

B a s s i

A M ,

D i a n z a n i

M U. C a r b o n t e t r a c h l o r i d e

i n d u c e d

i n h i b i t i o n

o f

h e p a t o c y t e l i p o p r o t e i n

s e c r e t i o n : f u n c t i o n a l

i m p a i r m e n t

o f

G o l g i a p p a r a t u s

i n

t h e

e a r l y p h a s e s

o f s u c h

i n j u r y .

L i f e

S c i

3 6 : 5 3 3 - 5 3 9 ( 1 9 8 4 ) .

2 6 3 . S t a c e y N H ,

O t t e n w a l d e r

H , K a p p u s

H .

C C l - i n d u c e d

l i p i d

p e r -

o x i d a t i o n

i n i s o l a t e d r a t


w i t h

d i f f e r e n t

o x y g e n

c o n -

c e n t r a t i o n s .

T o x i c o l

A p p l

P h a r m a c o l

6 2 : 4 2 1 - 4 2 7 ( 1 9 8 2 ) .

2 6 4 . J e r n i g a n

J D , P o u n d s

J G ,

H a r b i s o n R D . P o t e n t i a t i o n o f c h l o r i -

n a t e d

h y d r o c a r b o n t o x i c i t y b y

2 , 5 - h e x a n e d i o n e

i n p r i m a r y

c u l -

t u r e s

o f

a d u l t r a t

h e p a t o c y t e s . F u n d a m A p p l T o x i c o l 3 : 2 2 - 2 6

1 9 8 3 ) .

2 6 5 .

G l e n d e

E A ,

L e e P Y .

I s o p r o p a n o l

a n d

c h l o r d e c o n e

p o t e n t i a t i o n

o f

c a r b o n t e t r a c h l o r i d e l i v e r

i n j u r y :

r e t e n t i o n

o f

p o t e n t i a t i n g a c t i o n

i n

h e p a t o c y t e


p r e p a r e d

f r o m

r a t s

g i v e n i s o p r o p a n o l

o r

c h l o r d e c o n e .

E x p

M o l P a t h o l

4 2 : 1 6 7 - 1 7 4 ( 1 9 8 5 ) .

2 6 6 . R u c h R J ,

K l a u n i g

J E , S c h u l t z

N E ,

A s k a r i A B , L a c h e r

D A , P e r e i r a

M A , G o l d b l a t t P J . M e c h a n i s m s

o f

c h l o r o f o r m a n d c a r b o n

t e t r a -

c h l o r i d e

t o x i c i t y

i n

p r i m a r y

c u l t u r e d m o u s e


E n v i r o n

H e a l t h P e r s p e c t 6 9 : 3 0 1 - 3 0 5

( 1 9 8 6 ) .

2 6 7 . B e r g e r MD, B h a t t H , C o m b e s B , E s t a b r o o k

RW.

C C L 4 - i n d u c e d

t o x i c i t y

i n

i s o l a t e d


T h e

i m p o r t a n c e

o f

d i r e c t s o l v e n t

i n j u r y .

H e p a t o l o g y 3 6 - 4 5 ( 1 9 8 6 ) .

2 6 8 .

S c h i e b l e

TM, C o s t a

A K ,

H e f f e l

D F ,

T r u d e l l

J R . C o m p a r a t i v e

t o x i c i t y

o f

h a l o t h a n e ,

i s o f l u r a n e , h y p o x i a

a n d

p h e n o a r b i t a l

i n d u c t i o n

i n

m o n o l a y e r

c u l t u r e s

o f



6 8 : 4 8 5 - 4 9 4

( 1 9 8 8 ) .

2 6 9 . V a n I e r s e l A A J , d e

B o e r

A J ,

V a n

H o l s t e i j n C W M ,

B l a a u b o e r

B J .

T h e


o f

h a l o t h a n e

i n

i s o l a t e d


e v i d e n c e

f o r

t w o

d i f f e r e n t

m e c h a n i s m s .

T o x i c o l

I n

V i t r o

2 : 7 5 - 8 1

( 1 9 8 8 ) .

2 7 0 . Wodey E , F a u t r e l A , R i s s e l M , T a n g u y M ,

G u i l l o u z o

A ,

M a l l d a n t

Y .

H a l o t h a n e - i n d u c e d


t o

r a t

c e n t r i o b u l a r


i n

p r i m a r y c u l t u r e

i s n o t

i n c r e a s e d

u n d e r l o w o x y g e n



7 9 : 1 2 9 6 - 1 3 0 3 ( 1 9 9 3 ) .

2 7 1 .

P o h l

L P ,

K e n n a

J G , S a t o h H , C h r i s t D .

N e o a n t i g e n s a s s o c i a t e d

w i t h

h a l o t h a n e

h e p a t i t i s . D r u g M e t a b o l R e v

2 0 : 2 0 3 - 2 1 7

( 1 9 8 9 ) .

2 7 2 .

K e n n a

J G , N e u b e r g e r J , W i l l i a m s R . C h a r a c t e r i z a t i o n

o f

h a l o t h a n e - i n d u c e d

a n t i g e n s b y i m m u n o b l o t t i n g . B i o c h e m S o c

T r a n s

1 3 : 9 1 0 - 9 1 1

( 1 9 8 5 ) .

2 7 3 . I l y i n G P ,

R i s s e l M ,

M a l l e d a n t Y ,

T a ng u y M ,


Human


e x p r e s s t r i f l u o r o a c e t y T a t e d

n e o a n t i g e n s a f t e r

i n v i t r o

e x p o s u r e

t o h a l o t h a n e .

B i o c h e m P h a r m a c o l 4 8 : 5 6 1 - 5 6 7

( 1 9 9 4 ) .

2 7 4 . E l i a s s o n

E ,

K e n n a

J G . C y t o c h r o m e

P - 4 5 0

2 E 1

i s

a

c e l l

s u r f a c e

a n t o a n t i g e n

i n h a l o t h a n e

h e p a t i t i s .

M o l P h a r m a c o l

5 0 : 5 7 3 - 5 8 2

( 1 9 9 6 ) .

2 7 5 .

S i p r o u d h i s

L , B e a u g r a n d M , M a l l e d a n t

Y ,

B r i s s o t

P , G u g u e n -

G u i l l o u z o

C ,

G u i l l o u z o

A . U s e

o f

a d u l t h u m a n


i n

p r i m a r y

c u l t u r e

f o r

t h e

s t u d y

o f d o m e t a c i n - i n d u c e d

i m m u n o a l -

l e r g i c

h e p a t i t i s .

T o x i c o l I n V i t r o

5 : 5 2 9 - 5 3 4

( 1 9 9 1 ) .

2 7 6 .

K l a a s s e n

C D , S t a c e y

NH.

M e t a l s ,


a n d

t o x i c o l o g y .

I n :

T h e

I s o l a t e d

H e p a t o c y t e :

U s e

i n

T o x i c o l o g y

a n d

X e n o b i o t i c

B i o t r a n s f o r m a t i o n s ( R a u c k m a n

E J ,

P a d i l l a

GM ,

e d s ) .

N e w

Y o r k : A c a d e m i c P r e s s ,

1 9 8 7 ; 1 5 9 - 1 8 7 .

2 7 7 . S t a c e y N H ,

K l a a s s e n C D .

C o m p a r i s o n

o f t h e

e f f e c t s o f

m e t a l s o n

c e l l u l a r i n j u r y

a n d


i n

i s o l a t e d

r a t


J

T o x i c o l

E n v i r o n

H e a l t h

7 : 1 3 9 - 1 4 7

( 1 9 8 1 ) .

2 7 8 .

M o f f a t t

P ,

M i c h e l

M ,

D e n i z e a u

F .

C a d m i u m - 2 - a c e t y l a m i n o f l u o -

r e n e

i n t e r a c t i o n i n



C e l l B i o l

T o x i c o l

8 : 2 7 7 - 2 9 0

( 1 9 9 2 ) .

2 7 9 . S t a c e y

N H ,

K l a a s s e n C D . I n t e r a c t i o n s o f

m e t a l

i o n s w i t h

c a d -

m i u m - i n d u c e d

c e l l u l a r

t o x i c i t y .

J T o x i c o l E n v i r o n H e a lt h

7 : 1 4 9 - 1 5 8

( 1 9 8 1 ) .

2 8 0 .

S t a c e y

N H , K a p p u s

H .

C o m p a r i s o n

o f m e t h o d s o f a s s e s s m e n t o f

m e t a l - i n d u c e d

l i p i d

p e r o x i d a t i o n i n

i s o l a t e d

r a t


J

T o x i c o l

E n v i r o n Heth 9 : 2 7 7 - 2 8 5

( 1 9 8 5 ) .

2 8 1 .

M o r e l

I ,

L e s c o a t

G ,

C i l l a r d

J , P a s d e l o u p

N ,

B r i s s o t

P ,

C i l l a r d

P .

K i n e t i c e v a l u a t i o n

o f

f r e e

m a l o n d i a l d e h y d e

a n d e n z y m e

l e a k a g e

a s

i n d i c e s

o f i r o n

d a m a g e

i n

r a t

h e p a t o c y t e c u l t u r e s :

i n v o l v e m e n t

o f

f r e e

r a d i c a l s .


3 9 : 1 6 4 7 - 1 6 5 5 ( 1 9 9 0 ) .

2 8 2 .

P o r t e r

J B , G y p a r a k i

M ,

B u r k e

L C ,

H u e h n s E R ,

S a r p o n g P ,

S a e z

V , H i d e r

R C . I r o n

m o b i l i z a t i o n

f r o m

h e p a t o c y t e m o n o l a y e r c u l -

t u r e s b y

c h e l a t o r s :

t h e

i m p o r t a n c e

o f

m e m b r a n e p e r m e a b i l i t y

a n d

t h e

i r o n - b i n d i n g

c o n s t a n t . B l o o d

7 2 : 1 4 9 7 - 1 5 0 3 ( 1 9 8 8 ) .

2 8 3 .

S h a r m a

B K ,

B a c o n

B R ,

B r i t t o n

R S ,

P a r k

C H ,

M a g i e r a C J ,

O ' N e i l

R ,

D a l t o n

N ,

S m a n i k

P , S p e r o f f T .

P r e v e n t i o n o f

h e p a t o -

c y t e i n j u r y

a n d


b y

i r o n

c h e l a t o r s

a n d

a t o c o -

p h e r o l

i n

i s o l a t e d i r o n - l o a d e d r a t


H e p a t o l o g y

1 2 : 3 1 - 3 9 ( 1 9 9 0 ) .

2 8 4 .

J e g o

P ,

H u b e r t

N , M o r e l

I , P a s d e l o u p

N , O c a k t a n

A ,

A b d a l l a h

M ,

B r i s s o t

P ,

L e s c o a t

G . I n h i b i t i o n

o f

i r o n o v e r l o a d

t o x i c i t y

i n r a t

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

b y

p y o v e r d i n P f ,

t h e

s i d e r o p h o r e

o f

P s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s .

B i o c h e m

P h a r m a c o l

4 3 : 1 2 7 5 - 1 2 8 0

( 1 9 9 2 ) .

2 8 5 .

V i c k e r s

AEM.


i n

v i t r o

m o d e l s

t o

e v a l u a t e

h e p a t o -

t o x i c i t y .

I n :

I n

V i t r o

M e t h o d s

i n

P h a r m a c e u t i c a l R e s e a r c h

C a s t e l l

J V ,


M J , e d s ) . S a n

D i e g o , C A : A c a d e m i c P r e s s ,

1 9 9 7 ; 1 0 3 - 1 2 7 .

2 8 6 . G u i l l o u z o

A .

H e p a t o t o x i c i t e

i n v i t r o . I n :

T o x i c o l o g i e

C e l l u l a i r e

i n

v i t r o

( A d o l p h e

M ,

G u i l l o u z o

A ,

M a r a n o

F ,

e d s ) . P a r i s : L e s

E d i t i o n s

I N S E R M ,

1 9 9 5 ; 6 9 - 1 2 0 .

2 8 7 . C a s t e l l

J V ,


M J ,

P o n s o d a

X , B o r t R I n v i t r o i n v e s -

t i g a t i o n

o f t h e m o l e c u l a r

m e c h a n i s m s o f


I n :

I n

V i t r o

M e t h o d s

i n


R e s e a r c h ( C a s t e l l

J V ,

G o m e z -

L e c h o n

M J , e d s ) .

S a n

D i e g o ,

C A A c a d e m i c

P r e s s ,

1 9 9 7 ; 3 7 6 - 4 1 0 .

2 8 8 .

B l a a u b o e r B J ,

B o o b i s

A E , C a s t e l l

J V ,

C o e c k e S ,

G r o o t h u i s

G M M , G u i l l o u z o

A ,

H a l l

T J , H a w k s w o r t h

GM ,

L o re nz o n G ,

M i l t e n b u r g e r HG

e t a l . T h e

p r a c t i c a l a p p l i c a b i l i t y

o f

h e p a t o c y t e

c u l t u r e s

i n

r o u t i n e

t e s t i n g .

ATLA

2 2 : 2 3 1 - 2 4 1 ( 1 9 9 4 ) .

2 8 9 .

P f e i f e r

AMA,

C o l e

K E , S m o o t

D T , W e s t o n

A ,

G r o o p m a n

J D ,

S h i e l d s

P G ,

V i g n a u d

J M ,

J u i l l e r a t

M ,

L i p s k y

M M , T r u m p

B F

e t

a l . S i m i a n

v i r u s

4 0

l a r g e

t u m o r

a n t i g e n - i m m o r t a l i z e d

n o r m a l

h u m a n

l i v e r

e p i t h e l i a l

c e l l s

e x p r e s s

h e p a t o c y t e

c h a r a c t e r i s t i c s

a n d

m e t a b o l i z e

c h e m i c a l

c a r c i n o g e n s . P r o c N a t I A c a d S c i U S A

9 0 : 5 1 2 3 - 5 1 2 7

( 1 9 9 3 ) .

2 9 0 .

P a u l

D , H o h n e M ,

P i n k e r t

C ,

P i a s e c k i

A ,

Ummelmann

E ,

B r i n s t e r

R .


d i f f e r e n t i a t e d h e p a t o c y t e

l i n e s d e r i v e d

f r o m

t r a n s g e n i c

m i c e

h a r b o r i n g

S V 4 0

T - a n t i g e n g e n e s . E x p C e l l

R e s

1 7 5 : 3 5 4 - 3 6 2

( 1 9 8 8 ) .

2 9 1 . C l o t h i e r R H ,

B a l l s

M .

V a l i d a t i o n o f a l t e r n a t i v e

t o x i c i t y

t e s t s :

p r i n c i p l e s ,

p r a c t i c e s

a n d c a s e s . T o x i c o l

I n V i t r o 4 : 6 9 2 - 6 9 3

( 1 9 9 0 ) .

2 9 2 .

G e b h a r d t

R , W e g n e r H ,

A l b e r J . P e r i f u s i o n

o f c o - c u l t u r e d h e p a -

t o c y t e s : o p t i m i z a t i o n

o f s t u d i e s o n d r u g m e t a b o l i s m a n d

c y t o t o x i -

c i t y i n v i t r o

C e l l

B i o l

T o x i c o l 1 2 : 5 7 - 6 8

( 1 9 9 6 ) .

liver + invitro toxicology

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