laporan praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri
TRANSCRIPT
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 1/16
LAPORAN PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI PANGAN
“Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri”
Nama M! "asan #adili
#tam$%k &'(' ') *++
Kelas Teknologi Pangan B
PROGRAM #TU&I T,KNOLOGI PANGAN
-URU#AN ILMU &AN T,KNOLOGI PANGAN
FAKULTA# T,KNOLOGI &AN IN&U#TRI P,RTANIAN
UNI.,R#ITA# "ALU OL,O
/*'0
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 2/16
I. PENDAHULUAN
I.1.Latar Belakang
Bakteri adalah organisme mikro dan tidak dapat dilihat
dengan matatelanjang. Keberadaan bakteri umumnya bersifat
merugikan organisme lainnya yang dikenal dengan istilah
patogen, seperti: Escherichia coli, Vibrio sp, Shalmonella sp dan
sebagainya. Bakteri ini banyak ditemukan hampir diseluruh
media/tempat seperti: tanah, udara, air, di tubuh makhluk hidup
dan sebagainya.
Karakterisasi dan klasikasi sebagian besar mikrobia seperti
bakteri berdasarkan pada reaksi en!imatik ataupun biokimia.
"ikroba dapat tumbuh pada beberapa tipe media, memproduksi
tipe metabolit tertentu yang dideteksi dengan interaksi mikrobia
dengan reagen test yang menghasilkan #arna reagen. $eaksi%
reaksi dalam sel akan teridentikasi dengan melakukan
pengujian%pengujian tertentu. Sel akan memberikan respon
sesuai dengan kemampuan yang dimilikinya, misalnya
menghasilkan en!im katalase, en!im gelatinase atau
kemampuan untuk menghidrolisis lemak.
Bakteri di alam memiliki karakteristik sifat yang berbeda%
beda. Bakteri ada yang bersifat motil, bereaksi dengan en!im
katalase, bersifat oksidatif maupun fermentatif dan lain
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 3/16
sebagainya. &iap bakteri juga memiliki sifat kimia#i
berbeda. Berdasar dari hal tersebut diatas, maka diadakanlah
praktikum '(ji Biokimia#i Bakteri) ini guna memberikan
pemahaman kepada kita tentang hal%hal yang berkaitan dengan
sifat%sifat biokimia#i bakteri serta menambah pengetahuan dan
keterampilan kita dalam mengenal karakter berbagai jenis
bakteri.
(ji siologis bakteri dilakukan untuk mengidentikasi bakteri
berdasarkan akti*itas selnya. Bakteri yang dapat menghidrolisis
pati mempunyai akti*itas amilolitik, yaitu menghasilkan en!im
amilase yang dapat mengubah pati menjadi molekul%molekul
gula sederhana +monosakarida untuk kebutuhan metabolisme
sel. -kti*itas tersebut ditandai dengan adanya !ona bening di
sekeliling koloni pada uji hidrolisis pati.
(ji biokimia#i bakteri adalah salah satu uji yang dilakukan
untuk mengidentikasi jenis bakteri. al ini karena setiap jenis
bakteri memiliki sifat biokimia yang berbeda. Secara morfologis,
biakan maupun sel bakteri yang berbeda dapat tampak serupa.
Karena itu ciri siologis atau biokimia#i merupakan kriteria yang
amat penting di dalam identikasi spesimen yang tidak dikenal.
&anpa hasil pengamatan siologis yang memadai mengenai
organisme yang diperiksa maka penentuan spesiesnya tidaklah
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 4/16
mungkin dilakukan. "anusia tidak dapat melihat dan
mengidentikasi bakteri tanpa diadakan percobaan.
I.2.Tujuan
Tujuan dari praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri adalah untuk
mengetahui sifat fisiologi dan biokimia bakteri.
II. TINJAUAN PUSTAKA
"etabolisme pada bakteri pada dasarnya tidak akan lepas
dari peranan en!im%en!im yang mengatur metabolisme,
misalnya protease atau en!im hidrolase. En!im pada bakteri
terbagi menjadi dua macam, yaitu endoen!im dan ekoen!im.
Kedua jenis en!im ini sangat berperan dalam metabolisme suatu
bakteri, baik yang didalam sel ataupun diluar sel. dentikasi
Bakteri dapat dilakukan dengan beberapa uji antara lain uji
dalam melakukan fermentasi +aerob/anaerob, produksi katalase,
uji motilase dan uji oksidase +0unke, 1223.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 5/16
Perlakuan aseptik dilakukan bertujuan agar terbebas dari mikroorganisme
yang tidak diinginkan (kontaminan). Aseptik diimbangi dengan sterilisasi yang
merupakan upaya untuk menghilangkan mikroorganisme kontaminan yang
menempel pada alat atau bahan yang akan dipergunakan untuk analisis
selanjutnya (Dwijoseputro, 2!, dan "ati, 2#).
Karakterisasi dan klasikasi sebagian besar mikrobia
seperti bakteri berdasarkan pada reaksi en!imatik ataupun
biokimia. "ikroba dapat tumbuh pada beberapa tipe media,
memproduksi tipe metabolit tertentu yang dideteksi dengan
interaksi mikrobia dengan reagen test yang menghasilkan #arna
reagen. $eaksi%reaksi dalam sel akan teridentikasi dengan
melakukan pengujian%pengujian tertentu. Sel akan memberikan
respon sesuai dengan kemampuan yang dimilikinya, misalnya
menghasilkan en!im katalase, en!im gelatinase atau
kemampuan untuk menghidrolisis lemak +4elc!ar, 1225.
6iri siologi ataupun biokimia merupakan kriteria yang
amat penting di dalam identikasi spesimen bakteri yang tak
dikenal karena secara morfologis biakan atau pun sel bakteri
yang berbeda dapat tampak serupa, tanpa hasil pengamatan
siologis yang memadai mengenai organik yang diperiksa maka
penentuan spesiesnya tidak mungkin dilakukan. Karakteristik dan
klasikasi sebagian mikroba seperti bakteri berdasarkan pada
reaksi en!imatik ataupun biokimia. "ikroba dapat tumbuh pada
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 6/16
beberapa tipe media memproduksi tipe metabolit tentunya yang
dideteksi dengan interaksi mikroba dengan reagen test yang
mana menghasilkan perubahan #arna reagen +"urray, 1227.
Sifat metabolisme bakteri dalam uji biokimia biasanya
dilihat dari interaksi metabolit % metabolit yang dihasilkan
dengan reagen % reagen kimia. Kemampuan bakteri
menggunakan senya#a tertentu sebagai sumber karbon dan
sumber energi yang dapat digunakan untuk
identikasi +Backmann, 1228.
9ekomposisi protein lebih sulit dibandingkan pemecahan
karbohidrat. 4roduk akhir dari dekomposisi protein pun lebih
ber*ariasi, hal ini disebabkan
struktur protein yang lebih kompleks.
"ikroorganisme dengan sistem en!im yang kompleks, memecah
protein menjadi senya#a%senya#a yang lebih sederhana. Bakteri
proteolitik adalah bakteri yang memproduksi en!im protease
ekstraselular, en!im protease ini diproduksi di dalam sel
kemudian dilepaskan kemediumnya. Bakteri mempunyai en!im
protease di dalam sel, namun tidak semuaen!im protease
tersebut dilepaskan ke mediumnya +4uspitasari, et al., 122.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 7/16
III. METODE PRAKTIKUM
III.1. Te!at "an #aktu
Praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri dilaksanakan bertempat di
$aboratorium Agroteknologi %nit &ioteknologi, 'akultas Pertanian %niersitas
alu *leo, +endari, pada hari +amis, -ei 2/ pukul 0120 3TA.
$.2 Alat "an Ba%an
Alat yang digunakan dalam praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri
adalah0 tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet mikro, gelas ukur, lampu bunsen,
laminar air flow dan jarum ose.
&ahan yang digunakan dalam praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri
adalah0 &romothymol blue, larutan glukosa, parafin, a4uadest, media 5A6Skim
milk /7, media 5A6Strach /7, alkohol #7, aluminium foil dan plasti8 wrep.
$.$ Pr&'e"ur Prakt(ku
Prosedur kerja yang dilakukan pada praktikum uji fisiologi dan biokimia
bakteri adalah sebagai berikut.
a. %ji Pertumbuhan Aerob9Anaerob
. -en8ampurkan semua bahan media anaerob dan tetapkan pnya menjadi
#, memasukan dalam tabung reaksi, dan sterilissi pada suhu 2 o : selama
2 menit.
2. -enyiapkan larutan glukosa 7 dan saring dengan filter sterilisasi.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 8/16
!. -enambahkan ml larutan glukosa 7 dalam media anaerob sebelum
media membeku.
;. <etelah media membeku, inokulasi bakteri uji (umur ;= jam) dengan
menggunakan jarum ose ke dalam media. <atu isolat bakteri diinokulasi
pada dua tabung, satu tabung ditutup dengan aselin atau parafin 8air steril.
/. 3nkubasi selama 2 hari, dan mengamati perubahan warna pada media.
Perubahan warna dari biru menjadi kuning pada media yang ditutup dengan
parafin menunjukkan bahwa isolat tersebut positiif mampu hidup se8ara
anaerob
b. %ji Proteolitik
. -enyiapkan 8awan petri berisi media 5A 6 Skim Milk /7.
2. <etelah media membeku, inokulai bakteri uji (umur ;= jam) dengan
menggunakan jarum ose kedalam media dengan membentuk pola
lingkaran.
!. 3nkubsi selama ;= jam. <elanjutnya mengamati >ona bening yang
terbentuk. "ika terbentu >ona bening berarti bakteri uji positif
menghasilkan en>im proteinase.
!. %ji Amilolitik
. -enyiapkan 8awan petri bersi media 5A 6 Starch /7.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 9/16
2. <etelah media membeku, inokulasi bakteri uji (umur ;= jam) dengan
menggunakan jarum ose kedalam media dengan membentuk pola
lingkaran.
!. 3nkubasi selama ;= jam. <elanjutnya mengamati >ona bening yang
terbentuk. "ika terbentuk >ona bening berarti bakteri uji positif
menghasilkan en>im amilase.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 10/16
I). HASIL DAN PEMBAHASAN
*.1. Ha'(l
asil pengamatan pada praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri adalah
sebagai berikut.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 11/16
+eterangan 0 (A) %ji pertumbuhan aerob9anaerob, (&) %ji proteolitik, (:) %ji
amilolitik.
Tabel . asil pengamatan uji fisiologi dan biokimia bakteri
5
o<ampel
+ode
isolat
%ji fisiologis *ksidatif9fermentati
f Protease Amilase
+ue
6 1 Anaerob fakultatif
2 6 1 Anaerob fakultatif
! 6 1 Anaerob fakultatif
; 6 1 Anaerob fakultatif
2 3kan 6 1 Anaerob fakultatif
2 6 1 Anaerob fakultatif
! 6 1 Anaerob fakultatif
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 12/16
; 6 1 Anaerob fakultatif
! "us
6 1 Anaerob fakultatif
2 6 1 Anaerob fakultatif ! 6 1 Anaerob fakultatif
; ?ougurt 6 1 Anaerob fakultatif
*.2. Pe+a%a'an
(ji siologis bakteri dilakukan untuk mengidentikasi bakteri
berdasarkan akti*itas selnya. Bakteri yang dapat menghidrolisis
pati mempunyai akti*itas amilolitik, yaitu menghasilkan en!im
amilase yang dapat mengubah pati menjadi molekul%molekul
gula sederhana +monosakarida untuk kebutuhan metabolisme
sel. -kti*itas tersebut ditandai dengan adanya !ona bening di
sekeliling koloni pada uji hidrolisis pati.
(ji biokimia#i bakteri adalah salah satu uji yang dilakukan
untuk mengidentikasi jenis bakteri. al ini karena setiap jenis
bakteri memiliki sifat biokimia yang berbeda. Secara morfologis,
biakan maupun sel bakteri yang berbeda dapat tampak serupa.
Karena itu ciri siologis atau biokimia#i merupakan kriteria yang
amat penting di dalam identikasi spesimen yang tidak dikenal.
&anpa hasil pengamatan siologis yang memadai mengenai
organisme yang diperiksa maka penentuan spesiesnya tidaklah
mungkin dilakukan. "anusia tidak dapat melihat dan
mengidentikasi bakteri tanpa diadakan percobaan.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 13/16
Praktikum uji fisiologi dan biokimia bakteri dilakukan tiga pengujian, yaitu
yang pertama adalah uji pertumbuhan aerob9anaerob, yang dilakukan pertama
pada per8obaan ini yaitu men8ampurkan semua bahan media anaerob dan
menetapkan pnya menjadi #,, memasukan dalam tabung reaksi, dan sterilissi
pada suhu 2o : selama 2 menit, kemudian menambahkan ; ml larutan
glukosa ;2< yang telah disaring menggunakan lter sterilisasi
dalam media anaerob sebelum media membeku. "edia yang
telah membeku, kemudian inokulasi bakteri uji +umur 35 jam
dengan menggunakan jarum ose ke dalam media. Satu isolat
bakteri diinokulasi pada dua tabung, satu tabung ditutup dengan
*aselin atau paran cair steril. 4aran berfungsi untuk
menghalangi masuknya udara kedalam isolat, agar kondisi tetap
anaerob. Setelah diinkubasi selama 1 hari terjadi perubahan
#arna pada media. 4erubahan #arna dari biru menjadi kuning
pada media yang ditutup dengan paran dan yang tidak ditutup
dengan paran menunjukkan bah#a isolat tersebut positiif
mampu hidup secara anaerob fakultatif.
4ercobaan selanjutnya yaitu uji proteolitik dan uji amilolitik,
pada uji proteolitik hampir sama dengan uji amilolitik, yang
membedakan adalah media untuk pertumbuhan bakteri. (ji
proteolitik menggunakan media =- > skim milk ;? <, sedangkan
pada uji amilolitik menggunakan media =- > starch ;? <. "edia
yang telah membeku, dilanjutkan inokulasi bakteri uji +umur 35
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 14/16
jam dengan menggunakan jarum ose kedalam media dengan
membentuk pola lingkaran. solat yang telaah diinokulasi diberi
kode isolat pada setiap sampel yang kemudian diinkubasi selama
35 jam +1 hari. Setelah 35 jam +1 hari dapat dilihat bah#a pada
uji proteolitik semua isolat positif membentuk !ona bening yang
berarti sifat bakteri tersebut anaerob fakultatif dan dapat
menghasilkan en!im protease, sedangkan pada uji amilolitik
semua isolat tidak terdapat +negatif !ona bening yang berarti
bakteri tersebut tidak bisa menghasilkan en!im amilase.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 15/16
). PENUTUP
,.1. Ke'(!ulan
&erdasakan praktikum yang telah di lakukan, maka dapat disimpulkan bahwa
pada uji pertumbuhan aerob9anaerob terjadi perubahan #arna pada
media. 4erubahan #arna dari biru menjadi kuning pada media
yang ditutup dengan paran dan yang tidak ditutup dengan
paran menunjukkan bah#a isolat tersebut positiif mampu hidup
secara anaerob fakultatif.
4ercobaan pada uji proteolitik semua isolat positif
membentuk !ona bening yang berarti sifat bakteri tersebut
anaerob fakultatif dan dapat menghasilkan en!im protease,
sedangkan pada uji amilolitik semua isolat tidak terdapat
+negatif !ona bening yang berarti bakteri tersebut tidak bisa
menghasilkan en!im amilase.
,.2. Saran
&erdasarkan praktikum yang dilaksanakan, yang perlu diperhatikan antara
lain agar lebih berhati1hati dan teliti dalam menggunakan alat1alat laboratorium
agar hasil per8obaan sesuai dengan apa yang diharapkan oleh praktikan.
8/17/2019 LAPORAN PRAKTIKUM Uji Fisiologi dan Biokimia Bakteri
http://slidepdf.com/reader/full/laporan-praktikum-uji-fisiologi-dan-biokimia-bakteri 16/16
DA-TAR PUSTAKA
Backmann, -. 1228. Carbohydrate Metabolism in Bacteria-use of Dierence in Carbohidrate Metabolism for IdentifyingBactaria. (S- : 6aister -cademic 4ress.
Dwijoseputro. 2!. Dasar-Dasar Mikrobiologi. "akarta 0 Djambatan.
0unke, B.$, &ortora, @.A, 6ase, 6. . 1223. Microbiology: anintroduction +5th ed, ed.. Benjamin : 6ummings. San0rancisco.
"ati, . 2#. Biologi Interaktif . "akarta 0 @ane8a Ba8t.
-urray, C.+. 2!. Biokimia Klinik. disi ;. "akarta 0 @:.
4elc!ar, ".A. dan E.6.S. 6han. 1225. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Aakarta : ( 4ress.
4uspitasari, .", $ini, dan Sri, -.0.K. 122.Pencarian bakteri tanah enghasil en!im rotease dari"unung "ede Cian#ur . Bandung : 0akultas 0armasi
(ni*ersitas 4adjadjaran.