l plantarum biotin

8/3/2019 l Plantarum Biotin

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J O U R N A L O F B A C T E R I O L O G Y , D e c . 1 9 9 3 , p . 7 7 0 2 - 7 7 0 4 V o l . 1 7 5 , N o . 2 30 0 2 1 - 9 1 9 3 / 9 3 / 2 3 7 7 0 2 - 0 3 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t 1 9 9 3 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

B i o s y n t h e s i s o f B i o t i n f r o m D e t h i o b i o t i n b y t h e B i o t i nA u x o t r o p h L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u mWILLIAM C . BOWMAN AN D EDWARD DEMOLL*D e p a r t m e n t o f M i c r o b i o l o g y a n d I m m u n o l o g y , U n i v e r s i t y o f K e n t u c k y ,L e x i n g t o n , K e n t u c k y 4 0 5 3 6 - 0 0 8 4

R e c e i v e d 1 3 J u l y 1 9 9 3 / A c c e p t e d 1 8 S e p t e m b e r 1 9 9 3L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m r e q u i r e s b i o t i n f o r g r o w t h . We s h o w t h a t i n t h e p r e s e n c e o f h i g h l e v e l s o f t h e b i o t i nb i o s y n t h e t i c p r e c u r s o r , d e t h i o b i o t i n , L . p l a n t a r u m s y n t h e s i z e s b i o t i n a n d g r o w s i n medium w i t h d e t h i o b i o t i nb u t w i t h o u t b i o t i n . L a c t o b a c i U l u s c a s e i a l s o g r e w u n d e r s i m i l a r c o n d i t i o n s .

L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m ( f o r m e r l y L a c t o b a c i l l u s a r a b i n o s u s )h a s l o n g b e e n u s e d a s a n a s s a y o r g a n i s m f o r b i o t i n ( 1 0 ) , s i n c ei t r e q u i r e s b i o t i n f o r g r o w t h . H o w e v e r , d e t h i o b i o t i n ( d e s t h i o -b i o t i n ) , t h e b i o s y n t h e t i c p r e c u r s o r o f b i o t i n , c a n p r o m o t eg r o w t h o f L . p l a n t a r u m i n t h e p r e s e n c e o f b i o t i n ( 2 , 6 ) . H e r ewe s h o w t h a t s o m e l a c t o b a c i l l i g r o w w i t h o u t b i o t i n i f t h em e d i u m c o n t a i n s a t l e a s t 1 , u M d e t h i o b i o t i n a n d t h a t g r o w t h i sd u e t o s y n t h e s i s o f b i o t i n f r o m d e t h i o b i o t i n ( F i g . 1 ) .M a t e r i a l s a n d m e t h o d s . L . p l a n t a r u m w a s o b t a i n e d f r o m t h eA m e r i c a n T y p e C u l t u r e C o l l e c t i o n , a n d L a c t o b a c i l l u s c a s e i7 4 6 9 w a s f r o m K a r l D a w s o n . B i o t i n a s s a y m e d i u m w a s f r o mD i f c o o r f o r m u l a t e d f r o m l a b o r a t o r y c h e m i c a l s . D - b i o t i n a n dD L - d e t h i o b i o t i n w e r e f r o m S i g m a C h e m i c a l C o r p .I n o c u l a w e r e p r e p a r e d f r o m c u l t u r e s g r o w n a t 3 0 C f o ra p p r o x i m a t e l y 2 4 h i n b i o t i n a s s a y m e d i u m ( 1 0 m l ) w i t h b i o t i n( 5 n M ) e x c e p t w h e r e i n d i c a t e d . C e l l s w e r e h a r v e s t e d b yc e n t r i f u g a t i o n , w a s h e d t h r e e t i m e s w i t h 0 . 9 % N a C l , a n d t h e nd i l u t e d 1 / 1 0 0 , t h u s p r o d u c i n g t h e i n o c u l u m ( 2 0 , u l ) . G r o w t ht e s t s w e r e p e r f o r m e d i n c a p p e d t u b e s c o n t a i n i n g b i o t i n a s s a ym e d i u m ( 1 0 m l ) a n d b i o t i n o r d e t h i o b i o t i n . C e l l g r o w t h w a sc a r r i e d o u t a t 3 0 o r 3 7 C a n d w a s m o n i t o r e d b y A 6 6 .B i o t i n , b i o t i n s u l f o x i d e , a n d d e t h i o b i o t i n w e r e s e p a r a t e d o na c o l u m n ( 1 . 5 b y 1 6 c m ) o f Dowex 1 - X 8 ( f o r m a t e f o r m ) b ye l u t i o n w i t h a f o r m i c a c i d g r a d i e n t f r o m 0 t o 0 . 2 4 M f o l l o w e db y 1 0 0 m l o f 0 . 5 M f o r m i c a c i d ( F i g . 2 ) . F r a c t i o n s w e r ea n a l y z e d b y t h e s t a n d a r d b i o a s s a y ( 1 0 ) . B i o t i n s u l f o x i d e ,d e t h i o b i o t i n , a n d b i o t i n e l u t e d a s s e e n p r e v i o u s l y ( 7 ) . F r a c t i o n sc o n t a i n i n g d e t h i o b i o t i n b u t l a c k i n g b i o t i n a n d b i o t i n s u l f o x i d ew e r e p o o l e d , c o n c e n t r a t e d , a n d t h e n r e c h r o m a t o g r a p h e d t oa s s u r e p u r i t y . Some p r e p a r a t i o n s e m p l o y e d a l a r g e r c o l u m nw i t h a n a l o g o u s c o n d i t i o n s .F o r r e c o v e r y o f b i o t i n f r o m c e l l p r o t e i n , 1 0 l i t e r s o f b i o t i na s s a y m e d i u m s u p p l e m e n t e d w i t h p u r i f i e d d e t h i o b i o t i n ( 1 0, u M ) a n d a s e c o n d 1 0 l i t e r s o f t h i s m e d i u m , n o t s u p p l e m e n t e dw i t h d e t h i o b i o t i n , w e r e p r e p a r e d . B o t h m e d i a w e r e i n o c u l a t e dw i t h 1 5 m l o f L . p l a n t a r u m c u l t u r e a n d w e r e i n cu b a t ed a t 3 0 Cf o r 7 2 h . C e l l s w e r e h a r v e s t e d , w a s h e d t h r e e t i m e s i n 0 . 9 %N a C l , r e s u s p e n d e d i n w a t e r , a n d b o i l e d f o r 1 5 m i n . P r e c i p i -t a t e d p r o t e i n w a s c o l l e c t e d b y c e n t r i f u g a t i o n . B o u n d b i o t i n w a sr e l e a s e d b y r e s u s p e n d i n g t h e p r e c i p i t a t e i n 6 N H 2 S O 4 a n da u t o c l a v i n g f o r 1 h . T h e s o l u t i o n s w e r e n e u t r a l i z e d w i t h 6 NNaOH, f i l t e r e d , a n d t h e n a s s a y e d f o r b i o t i n .T h e p u r i t y o f L . p l a n t a r u m c u l t u r e s w a s c o n f i r me d b e f o r ea n d a f t e r a l l e x p e r i m e n t s .R e s u l t s . F i g u r e 2 s h o w s a t y p i c a l c h r o m a t o g r a m o f t h e

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .

p u r i f i c a t i o n o f c o m m e r c i a l l y o b t a i n e d d e t h i o b i o t i n s u p e r i m -p o s e d o n a c h r o m a t o g r a m o f t h e p u r i f i c a t i o n o f c o m m e r c i a l l yo b t a i n e d b i o t i n . A l l c o m m e r c i a l p r e p a r at i o n s o f d e t h i o b i o t i nt e s t e d c o n t a i n e d b i o t i n a n d b i o t i n s u l f o x i d e . F i g u r e 2 s h o w st h a t d e t h i o b i o t i n a l o n e c a n p r o m o t e t h e g r o w t h o f b i o t i n . N o t ea l s o t h a t t h e e f f e c t o f d e t h i o b i o t i n o n g r o w t h i s s l i g h t a t 2 4 hb u t p r o n o u n c e d a t 9 6 h .I n o t h e r e x p e r i m e n t s ( n o t s h o w n ) , d e t h i o b i o t i n p r o v e d t oh a v e i n h i b i t i n g a n d s t i m u l a t i n g e f f e c t s o n t h e g r o w t h o f L .p l a n t a r u m . A t c o n c e n t r a t i o n s g r e a t e r t h a n 5 , u M , a t 1 7 a n d 3 6h , d e t h i o b i o t i n w a s i n h i b i t o r y , w h e r e a s t h e g r o w t h - p r o m o t i n ge f f e c t o f d e t h i o b i o t i n w a s n o t s e e n u n t i l a p p r o x i m a t e l y 3 6 h .D e t h i o b i o t i n i s s i m i l a r l y i n h i b i t o r y t o g r o w t h o f L . c a s e i ( 3 ) . A t7 2 h , g r o w t h o v e r t h e b a s a l l e v e l w a s s e e n e v e n i n c u l t u r e sg r o w n w i t h d e t h i o b i o t i n b u t w i t h o u t b i o t i n . A l s o , a l l c u l t u r e sw i t h d e t h i o b i o t i n g r e a t e r t h a n 4 . 0 , u M , w h a t e v e r t h e b i o t i nl e v e l , e x h i b i t e d m a x i m a l g r o w t h .An a d d i t i o n a l e x p e r i m e n t ( n o t s h o w n ) d e m o n s t r a t e d t h a tt h e g r o w t h - p r o m o t i n g e f f e c t o f d e t h i o b i o t i n w a s n o t d u e t oe i t h e r b i o t i n o r s o m e u n k n o w n f a c t o r . L . p l a n t a r u m w a s g r o w ni n b i o t i n a s s a y medium w i t h 1 , u M d e t h i o b i o t i n . T h i s a m o u n t o fd e t h i o b i o t i n i s g r o w t h l i m i t i n g , s o a n y b i o t i n - l i k e n u t r i e n t u s e di n t r a c e a m o u n t s w o u l d b e d e p l e t e d i n t h e m e d i u m f o l l o w i n gc e s s a t i o n o f g r o w t h . A f t e r 7 2 h o f g r o w t h , t h e d e t h i o b i o t i n i nt h e m e d i u m w a s r e c o v e r e d a s d e s c r i b e d p r e v i o u s l y f o r b i o t i n( 1 ) a n d u s e d t o s u p p l e m e n t t h e m e d i u m o f a d d i t i o n a l c u l t u r e so f L . p l a n t a r u m . T h e g r o w t h r e s p o n s e t o d e t h i o b i o t i n d e p l e t e do f p o s s i b l e t r a c e n u t r i e n t s w a s i d e n t i c a l t o t h a t s e e n b e f o r ed e p l e t i o n .A n o t h e r s e t o f e x p e r i m e n t s c o n f i r m e d t h a t s i g n i f i c a n t b i o t i nw a s n o t b e i n g c a r r i e d o v e r i n t o s u c c e s s i v e c u l t u r e s f r o m t h ei n i t i a l i n o c u l u m . T h e i n o c u l u m w a s g r o w n w i t h 5 0 0 pM b i o t i np r e p a r e d a s d e s c r i b e d i n " M a t e r i a l s a n d m e t h o d s " a b o v e a n di n o c u l a t e d i n t o a s e c o n d c u l t u r e , w h i c h c o n t a i n e d o n l y p u r i f i e dd e t h i o b i o t i n ( 5 , u M ) a s s u p p l e m e n t . T h e c u l t u r e w a s g r o w n ,h a r v e s t e d , w a s h e d , a n d u s e d a s a n i n o c u l u m , w h i c h w a sp r e p a r e d a n d g r o w n a s j u s t d e s c r i b e d , f o r t h r e e s e t s o f c u l t u r ec o n d i t i o n s . One s e t o f t ub e s c on t a i n e d 4 0 0 pM b i o t i n , t h es e c o n d s e t o f t u b e s c o n t a i n e d 2 , u M p u r i f i e d d e t h i o b i o t i n , a n dt h e t h i r d s e t o f t u b e s c o n t a i n e d 2 , u M p u r i f i e d d e t h i o b i o t i n a n d2 0 pM b i o t i n . T h e t u b e s w e r e i n o c u l a t e d a n d t h e n i n c u b a t e d a t3 0 C . P e r i o d i c a l l y , t u b e s w e r e a n a l y z e d f o r g r o w t h ( F i g . 3 ) . I tmay b e s e e n t h a t t h e s l o w e r g r o w t h o f t h e d e t h i o b i o t i n -c o n t a i n i n g c u l t u r e s ( F i g . 2 ) w a s d u e t o a l o n g e r l a g p e r i o d .A f t e r t h e l a g , c e l l s g r e w a t a p p r o x i m a t e l y t h e s a m e r a t e a s i nb i o t i n - c o n t a i n i n g c u l t u r e s . T h i s r e s u l t w a s s e e n o n l y w h e n t h ei n o c u l u m w a s f r o m a c u l t u r e t h a t h a d e n t e r e d s t a t i o n a r y p h a s e .When t h e i n o c u l a t i o n w a s p r e p a r e d w i t h c e l l s i n e x p o n e n t i a l

7 7 0 2


2/3

V O L . 1 7 5 , 1 9 9 3H 2 N N H 2

H 3 C C H 2 ( C H 2 ) 4 C O O H7 , 8 - d l a m i n o p e l a r g o n i c a c i d

b i o D

0HN 2KNH b i o B

H 3 C C H 2 ( C H 2 ) 4 C O O Hd e t h l o b l o t i n

2 . 5

2

H 2 N N H 2

s ( C H 2 ) 4 C O O Hd i a m i n o b l o t i n

b i o D

0c o: C

1 . 5

I0 . 5

00 20 40 60

t i m e ( h )80 100

F I G . 3 . L . p l a n t a r u m c u l t u r e s s u p p l e m e n t e d w i t h e i t h e r b i o t i n ( 0 . 4n M ) ( 0 ) , d e t h i o b i o t i n ( 2 , u M ) ( A ) , o r b i o t i n ( 2 0 p M ) a n d d e t h i o b i o t i n( 2 j i M ) ( C ] ) .b l o t i n

F I G . 1 . F i n a l s t e p s i n t h e b i o s y n t h e s i s o f b i o t i n . S y n t h e s i s o f b i o t i nf r o m d i a m i n o b i o t i n , a l t h o u g h n o n p h y s i o l o g i c a l , i s c a t a l y z e d b y t h eb i o D g e n e p r o d u c t ( 5 , 8 ) .

g r o w t h , t h e r e w a s n o l a g . A d d i t i o n o f b i o t i n ( 2 0 pM) t oc u l t u r e s a l s o c o n t a i n i n g 2 , u M p u r i f i e d d e t h i o b i o t i n s h o r t e n e dt h e l a g , t h u s p r o v i n g t h a t t h e l a g i s d u e t o a n i n a b i l i t y t os y n t h e s i z e b i o t i n f r o m d e t h i o b i o t i n e f f i c i e n t l y . C e l l s f r o m ad e t h i o b i o t i n - c o n t a i n i n g c u l t u r e w e r e h a r v e s t e d a t 9 0 h a n du s e d a s a n i n o c u l u m f o r a n a d d i t i o n a l s e t o f g r o w t h e x p e r i -m e n t s i d e n t i c a l t o t h o s e s h o w n i n F i g . 3 , a n d t h e r e s u l t s w e r et h e s a m e a s t h o s e s h o w n i n F i g . 3 . E v e n i f o n e a s s u m e d t h a t a l lo f t h e b i o t i n i n t h e m e d i u m o f t h e i n o c u l u m w e r e i n t e r n a l i z e db e c a u s e o f t h e 1 / 2 0 0 , 0 0 0 d i l u t i o n d u r i n g p r e p a r a t i o n o f t h e

1 . 6 d e t h i o b i o t i n

1 . 2 b i o t i n b i o t i n

0 . 80 . 4

00 20 40 60 80 10 0f r a c t i o n

F I G . 2 . G r o w t h r e s p o n s e ( A 6 6 0 ) o f L . p l a n t a r u m t o b i o t i n s u l f o x i d e( p e a k r e s p o n s e a t f r a c t i o n 1 9 ) , d e t h i o b i o t i n ( p e a k r e s p o n s e a t f r a c t i o n5 2 ) , a n d b i o t i n ( p e a k r e s p o n s e a t f r a c t i o n 8 6 ) , s e p a r a t e d b y c h r o m a -t o g r a p h y o n a c o l u m n o f Dowex 1 - X 8 a s d e s c r i b e d i n " M a t e r i a l s a n dm e t h o d s . " F o r p u r i f i c a t i o n o f c o m m e r c i a l D L - d e t h i o b i o t i n , w h i c hc o n t a i n s s m a l l a m o u n t s o f b i o t i n s u l f o x i d e a n d b i o t i n , g r o w t h w a sm e a s u r e d a f t e r 4 8 ( 0 ) a n d 9 6 ( A ) h a f t e r i n c u b a t i o n . F o r p u r i f i c a t i o no f c o m m e r c i a l b i o t i n , w h i c h c o n t a i n s some b i o t i n s u l f o x i d e , g r o w t h w a sm e a s u r e d a f t e r 2 4 h o f i n c u b a t i o n ( l ) . I n e a c h o f t h e s e c h r o m a t o -g r a m s , a p o r t i o n o f e a c h e v e n - n u m b e r e d f r a c t i o n w a s a s s a y e d a t t h ei n d i c a t e d t i m e s f o r i t s a b i l i t y t o p r o m o t e t h e g r o w t h o f L . p l a n t a r u m .

i n o c u l u m , o n l y 2 . 5 x 1 0 - 1 7 m o l o f b i o t i n w o u l d b e t r a n s f e r r e dt o t h e s e c o n d i n o c u l u m , a n d 1 . 2 5 x 1 0 - 2 2 m o l o f b i o t i n , w h i c hi s a f a c t o r o f 4 x 1 0 1 0 l e s s t h a n t h a t r e q u i r e d f o r g r o w t h , w o u l dh a v e b e e n c a r r i e d o v e r i n t o t h e t h i r d s e t o f c u l t u r e s ( F i g . 3 ) .A f i n a l s e t o f e x p e r i m e n t s d e m o n s t r a t e d how d e t h i o b i o t i ne l i c i t s i t s e f f e c t s on L . p l a n t a r u m . Two p o s s i b i l i t i e s a r e e n v i -s i o n e d . I n one h y p o t h e t i c a l c a s e , d e t h i o b i o t i n w o u l d b e c o n -v e r t e d t o b i o t i n b y t h e k n o w n r e a c t i o n c a r r i e d o u t b y mostm i c r o o r g a n i s m s ( F i g . 1 ) . T h e h i g h l e v e l o f d e t h i o b i o t i n w o u l db e r e q u i r e d e i t h e r t o i n d u c e b i o t i n s y n t h e s i s o r t o f a c i l i t a t ed e t h i o b i o t i n u p t a k e b y t h e c e l l s . I n t h e s e c o n d c a s e , d e t h i o b i -o t i n w o u l d r e p l a c e b i o t i n a s a c o e n z y m e o n b i o t i n e n z y m e s , s oh i g h l e v e l s o f d e t h i o b i o t i n m i g h t b e n e e d e d t o o v e r c o m e t h es p e c i f i c i t y o f t he h o l o e n z y m e s y n t h e t a s e f o r b i o t i n .L . p l a n t a r u m g r o w n i n 1 0 l i t e r s o f medium w i t h o r w i t h o u td e t h i o b i o t i n w a s r e c o v e r e d i n a m o u n t s o f 1 0 . 0 a n d 0 . 9 g ,r e s p e c t i v e l y . C o v a l e n t l y b o u n d b i o t i n w a s r e l e a s e d f r o m c e l lp r o t e i n a s d e s c r i b e d i n " M a t e r i a l s a n d m e t h o d s " a b o v e . B i o t i na s s a y s d e t e r m i n e d t h a t t h e a m o u n t s o f b o u n d b i o t i n r e l e a s e df r o m c e l l s g r o w n w i t h a n d w i t h o u t d e t h i o b i o t i n w e r e 7 0 0 a n d1 3 p m o l , r e s p e c t i v e l y . T h e more t h a n 5 0 - f o l d i n c r e a s e i n b i o t i nr e c o v e r e d f r o m c e l l s g r o w n w i t h d e t h i o b i o t i n o v e r t h a t f r o mt h e c o n t r o l c u l t u r e s c a n b e a t t r i b u t e d t o b i o t i n s y n t h e s i s b y L .p l a n t a r u m f r o m a d d e d d e t h i o b i o t i n , w h i c h a l l o w e d m o r e e x -t e n s i v e g r o w t h . D e t h i o b i o t i n w a s n o t r e p l a c i n g b i o t i n o n b i o t i ne n z y m e s , s i n c e o n l y 1 0 p m o l o f d e t h i o b i o t i n c o u l d h a v e b e e nr e c o v e r e d f r o m 1 0 g o f L . p l a n t a r u m ( 4 , 9 ; o u r u n p u b l i s h e dr e s u l t s ) . T h e c o n d i t i o n s o f o u r a s s a y w o u l d h a v e d e t e c t e dd e t h i o b i o t i n o n l y i f i t w e r e p r e s e n t i n a n a m o u n t a p p r o x i m a t e l y1 , 0 0 0 t i m e s h i g h e r . T h e g r o w t h c h a r a c t e r i s t i c s o f L . p l a n t a r u mi n t h e b i o a s s a y o f t h e h y d r o l y s a t e ( n o t s h o w n ) a re t h os e o f ab i o t i n - s u p p l e m e n t e d c u l t u r e a n d n o t t h o s e o f a d e t h i o b i o t i n -s u p p l e m e n t e d o n e , w h e r e m o s t o f t h e g r o w t h o c c u r s a f t e r 3 6 h .T h e r e f o r e , g r o w t h o f L . p l a n t a r u m w i t h d e t h i o b i o t i n o c c u r sb e c a u s e t h e o r g a n i s m i s s y n t h e s i z i n g b i o t i n f r o m d e t h i o b i o t i n .L . c a s e i a n d L . p l a n t a r u m c a n u s e d i a m i n o b i o t i n ( F i g . 1 ) a sa b i o t i n s u b s t i t u t e ( 8 ) . T h e e x p l a n a t i o n f o r t h i s , made 2 5 y e a r sl a t e r , w a s t h a t t h e g e n e t h a t e n c o d e s d e t h i o b i o t i n s y n t h e t a s e( F i g . 1 ) i s t r a n s c r i b e d a n d t h a t a f u n c t i o n a l p r o t e i n i s p r o d u c e d( 5 ) . D e t h i o b i o t i n s y n t h e t a s e a c t s o n d i a m i n o b i o t i n , p r o d u c i n gb i o t i n , s i m i l a r l y t o t h e u s u a l mode o f a c t i o n o f t h e e n z y m e ,w h i c h p r o d u c e s d e t h i o b i o t i n f r o m 7 , 8 - d i a m i n o p e l a r g o n i c a c i d( 5 ) . We f o u n d t h a t L . c a s e i a l s o g r e w i n t h e a b s e n c e o f b i o t i nb u t i n t h e p r e s e n c e o f d e t h i o b i o t i n , a s d i d L . p l a n t a r u m .

NOTES 7 7 0 3


3/3

7 7 0 4 NOTESD i s c u s s i o n . L a c t o b a c i l l i c o l o n i z e n u t r i t i o n a l l y r i c h e n v i r o n -

m e n t s , w h e r e t h e r e i s no s e l e c t i v e pressure t o m a i n t a i n t h em et a b o l i c p a t h w a y s r e s p o n s i b l e f o r t h e s y n t h e s i s o f t ho s en u t r i e n t s f o u n d i n a d e q u a t e a m o u n t s . C o n s e q u e n t l y , over t i m emany o f t h o s e m e t a b o l i c p a t h w a y s h a v e b e c o m e n o n f u n c t i o n a l .T h i s h a s a p p a r e n t l y h a p p e n e d w i t h b i o t i n b i o s y n t h e s i s i nl a c t o b a c i l l i . H o w e v e r , a l t h o u g h t h e y are e v i d e n t l y u n a b l e t os y n t h e s i z e one o r more o f t h e e a r l y precursors o f b i o t i n a n d s oc a n n o t s y n t h e s i z e b i o t i n u n d e r n o r m a l e n v i r o n m e n t a l c o n d i -t i o n s , a t l e a s t two o f t h e l a t e r m e t a b o l i c s t e p s are s t i l l f u n c -t i o n a l .

REFERENCES1 . D e M o l l , E . , a n d W. S h i v e . 1 9 8 3 . T h e o r i g i n o f s u l f u r i n b i o t i n .B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 1 1 0 : 2 4 3 - 2 4 9 .2 . D e M o l l , E . , a n d W. S h i v e . 1 9 8 6 . A s s a y f o r b i o t i n i n t h e presence o fd e t h i o b i o t i n . A n a l . B i o c h e m . 1 5 8 : 5 5 - 5 8 .3 . D i t t m e r , K . , D . B . M e l v i l l e , a n d V . d u V i g n e a u d . 1 9 4 4 . T h e

p o s s i b l e s y n t h e s i s o f b i o t i n f r o m d e s t h i o b i o t i n b y y e a s t a n d t h ea n t i - b i o t i n e f f e c t o f d e s t h i o b i o t i n f o r L . c a s e i . S c i e n c e 9 9 : 2 0 3 - 2 0 5 .4 . F e r g u s o n , R . B . , a n d H . C . L i c h s t e i n . 1 9 5 8 . C o m p a r i s o n o fm i c r o o r g a n i s m s f o r t h e assay o f b o u n d b i o t i n . J . B a c t e r i o l . 7 5 : 3 6 6 .5 . K r e l l , K . , a n d M. A . E i s en b e r g . 1 9 7 0 . T h e p u r i f i c a t i o n a n dp r o p e r t i e s o f d e t h i o b i o t i n s y n t h e t a s e . J . B i o l . C h e m . 2 4 5 : 6 5 5 8 -6 5 6 6 .6 . L i l y , V . G . , a n d L . H . L e o n i a n . 1 9 4 4 . T h e a n t i - b i o t i n e f f e c t o fd e s t h i o b i o t i n . S c i e n c e 9 9 : 2 0 5 - 2 0 6 .7 . O g a t a , K . 1 9 7 0 . M i c r o b i a l s y n t h e s i s o f d e t h i o b i o t i n a n d b i o t i n .M e t h o d s E n z y m o l . 1 3 : 3 9 0 - 3 9 4 .8 . S t o k e s , J . L . , a n d M. G u n n e s s . 1 9 4 5 . M i c r o b i o l o g i c a l a c t i v i t y o fs y n t h e t i c b i o t i n , i t s o p t i c a l i s o m e r s , a n d r e l a t e d c o m p o u n d s . J .B i o l . C h e m . 1 5 7 : 1 2 1 - 1 2 6 .9 . W a l l e r , J . R . , a n d H . C . L i c h s t e i n . 1 9 6 5 . B i o t i n t r a n s p o r t a n da c c u m u l a t i o n b y c e l l s o f L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m . J . B a c t e r i o l .9 0 : 8 4 3 - 8 5 2 .1 0 . W r i g h t , L . D . , a n d H . R . S k e g g s . 1 9 4 4 . D e t e r m i n a t i o n o f b i o t i nw i t h L a c t o b a c i l l u s a r a b i n o s u s . P r o c . S o c . E x p . B i o l . M e d . 5 6 : 9 5 - 9 8 .

J . B A C r E R I O L .

l plantarum biotin

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