PowerPoint Presentation

Jumlah sterol diekstraksi dari bahan lyophilised. Sterol yang diderivatisasi dengan MSTFA dan dianalisis dengan GC-MS. The sterol (stigmasterol-1TMS, campesterol-1TMS dan b-sitosterol-1TMS) terdeteksi dan dihitung terhadap sterol campuran standar (Matreya LLC) pada konsentrasi antara 0,66 dan 1215 ng / l menggunakan asam nonadecanoic sebagai standar internal

Lyophilised sampel akar rambut (21 d tua; 12-20 mg) adalah tanah sampai menjadi bubuk halus dalam cairan N2 menggunakan ulekan. 500 l sitrat fosfat-buffer pH 5,4 ditambahkan ke setiap sampel dan setelah lebih lanjut dihancurkan hingga jadi bubur dipindahkan ke botol kaca. Sampel dikenakan sonication dalam bak air selama 15 menit dan kemudian 200 l viscozyme L ditambahkan ke setiap vial untuk deglycosylation (Van Herpen et al., 2010). Setelah vortexing selama 30 s, 500 l heptana berlapis untuk ekstrak air dan botol diinkubasi pada 37 C selama 18 jam. Setelah pengobatan ini, sampel vortexed keras selama 1 menit dan kemudian disentrifugasi pada 2500g selama 5 menit pada suhu kamar. Dari lapisan atas, 175 l ekstrak heptana cepat dipindahkan ke botol GC-MS ditempatkan di dalam botol reaksi 1,5 ml dan ditutup. Lubang berukuran jarum dibuat di tutup botol reaksi dan ekstrak heptana terkonsentrasi menggunakan kecepatan vaksin selama 30-45 s. Hal ini mengakibatkan sekitar 30-40 ll ekstrak terkonsentrasi di setiap botol yang ditutup oleh topi halangan dan dikenakan GC-MS dengan menyuntikkan 1 l. Secara paralel, kurva standar (47-727 ng / l) dan percobaan pemulihan dilakukan dari saham segar geraniol komersial (Sigma-Aldrich, Gillingham, UK) dilarutkan dalam heptana (1 mg / ml). Pemulihan adalah sekitar 95,31 3,90%. Skala yang tepat diterapkan untuk mendapatkan total geraniol di masing-masing sampel. Kromatogram gas dari standar dan sampel menetapkan bahwa geraniol dielusi pada 13.51 min dengan intensitas sinyal utama pada m / z 69, 93, 111, 123, 139 dan 154