kromozom biyolojisi 11toksisite testleri
TRANSCRIPT
Kromozomlara dayalı toksisite testleri
• = Mutagenik aktivite
• = Genotoksisite (genotoksik aktivite)
• Mutagenik (genotoksik) bileşik
• Mutagenler potansiyel karsinogenlerdir.
Mutagenlerin metabolik aktivasyonu
PROMUTAGENAKTİF
MUTAGEN
DNA da değişim
MUTASYON
enzimler
akti
vasy
on
TUMOR
karaciğer
Genotoksisite testleri
• Moleküler
• Gen
• Kromozom düzeyinde olabilir.
Comet assay
• Elektroforezle nukleustan çıkan DNA parçalarını gözleme• İsole nukleuslar gele konur • DNA fragmenti varsa “comet tail” görülür.
– +
Comet assay
comet assay
Normal
DNA fragmentli nukleus
Comet assay değerlendirmesi
Comet assay – computer analizi
Ames test (Gen düzeyinde)
Bruce Ames (born 1928)
Ames test
His–
bacteri
Normal besiyerinde
ölürler
Histidinİçeren
besiyeri
Normalbesiyeri
His+
bacteriReverse mutasyon
Mutagen
Ames test
COMPOUND
CONFIRMED
MUTAGENIC
COMPOUND
0 Negative kontrol
Positive kontrol
TEST BİLEŞİĞİ
GENOTOKSİSİTE
TAYİNİ
SPONTAN
REVERTANTS
TEST CONTROLU
Ames test sonucu
Ames test – otomatik değerlendirme
Kromozomal testler• Mikronukleus testi
– Mikronukleus – asentrik ve delesyon parçaları
• Kromozom anormallik frekansı– Lab. Hayvanları, lökosit kültürü, soğan kökü vb.
• SCE – sister kromatid değişimi
Mikronukleus testi
Kromozom analizi
Kromozom anormalikleri Sonuç
% 2’den az Normal
% 2 – 4 Sınır değerler
% 4’den fazla Mutagenik
Sister Kromatid Değişimi
Normal kromozom SCE
Yüksek SCE frekansı – yüksek mutagenik activite.
TUNEL
Apoptotik hücrelerde TUNEL
TUNEL
Kanser
mutagen mutagen
apoptosis
tamir
İlk mutasyon
İkinci mutasyon
Bölünen tümör
hücresi
normal hücre
normal hücre
sınır
Karsinogenite testleri
• Laboratuar testleri
– Hayvanlarda
– Kültür hücrelerinde in vitro transformasyon
– Epidemiyolojik çalışmalar
IARC database • International Agency
for Research of Cancer
• Direct connection to „Monographs“:
http://monographs.iarc.fr/index.php
IARC sınıflaması
• Grup 1: Karsinogenik
• Grup 2A: Olası karsinogenik
• Grup 2B: Olası karsinogenik
• Grup 3: Karsinogenite kesinleşmemiş
• Grup 4:Olası karsinogenik değil