jornadas biocontrol - elena lópez

Elena López AcedoCáceres 7 de Septiembre 2012

Uso de Bacteriófagos como Antimicrobianos en la Producción Quesera

AISLADAS DE PRODUCTOS LÁCTEOS:

•>40 estirpes (serie RT) INTAEX

BACTERIAS: E. coli FAGOS:

LABORATORIO:

•K12•B•W•C•B/r

COLECCIÓN ESPAÑOLA DE CULTIVOS TIPO

Nuestra propia colección. UEX. GENÉTICA

LABORATORIO:

•8 estirpes. NATIONAL BIORESOURCE PROJET: E. coli, JAPAN

•6 estirpes. Laboratorio de MIGUEL VICENTE

•Nuestra propia colección. UEX. GENÉTICA

AISLADAS DE PRODUCTOS LÁCTEOS:

•>40 estirpes obtenidas en nuestro laboratorio.

Mutantes claros y virulentos de fagos atemperados.

CICLO DE UN FAGO

ATEMPERADO

λ+ λvir λcI857 λc60 λi434cIh P1 T4D T6 Phi80 Phi80cI Phi80cIΔ4

MG1655 + + + + + + + + + + +K12 (W3110) + + + + + - - - + - -B - - + - - + + + - + +B/r - - + - - + + - - + +Bi - - - - - - - - - - -C + + + + + + - + + + +W - - - - - - - - - - -WP2 - - + - - + + + - + +Serie RT - - - - - - - - - - -

ADSORCIÓN

INYECCIÓN DEL DNA

+ simboliza la existencia de lisis

ADSORCIÓN:∗Fermentación de azúcares∗Eficiencia de adsorción (Gabig 2002)∗Efecto dilución (sustancia difusible)∗Correlación con factores del ciclo

DESTINO DEL DNA-fágico:∗Seguimiento del DNA (Hershey & Chase 1952)∗Fagos con DNA modificado



EMB-mal: Eosin Methylene Blue + maltosa (como fuente de C).

CONTROLES: MG1655 – ROJA (control +) mal+BW6164 – BLANCA (control -) mal-

mal+

ADSORCIÓN:∗Fermentación de azúcares∗Eficiencia de adsorción (Gabig 2002)

T0 T5 T10 T15 T20 T30

Time (min)

ADSORCIÓN:∗Fermentación de azúcares∗Eficiencia de adsorción (Gabig 2002)∗Efecto dilución (sustancia difusible)

MG1655

Sobrenadante RT

no diluido

Cepa E. coli muestra

láctea (RT)

Sobrenadante RT

ND

50%

10%

1%

Mg++

Ca++

Mg++

Ca++

Mg++

Ca++

Mg++

Ca++

Mg++

Ca++

-5

-6

-5

-5

-5

-6

-6

-6

-6

-5

-6

-5

-5

-5

-6

-6

-6

-5

-6

FAGO



ND 50% 10% 1% TAMPÓN



*

* = 3H-TdR

**

*

*

*

*

*



*

Fagos(sobrenadante)

Bacterias(pellet)

T4/λ



Bacteria m+/r+

Bacteria m+/r-

metiltransferasas

restrictasas

Bacteriofago Fagos con DNA modificado

OBTENCIÓN DE FAGOS CAPACES DE LISAR A LAS E.COLI AISLADAS DE QUESERIAS:•Co-evolución•Obtención de derivados virulentos de los fagos aislados de E.coli de queserias.

CONTINUAR EL TRABAJO CON FAGOS CUYA DIANA SEAN OTRAS BACTERIAS ALTERANTES DEL QUESO

Técnicas previstas para la identificación, cuantificación y caracterización de bacterias y bacteriofagos presentes en muestras de

leche y queso:

•PCR-múltiple , q-PCR y Rep-PCR•PFGE

•Microscopía Óptica•TEM•RFLP

•Medida de la cantidad de DNA sintetizado• Medida de cfu relacionada con la D.O

• Clonación y Secuenciación de fragmentos de DNA fágico

M 1 2 3 4 M

Corte con EcoRI: 1: P1 (1ul), 2: aRT1 (10ul);3: 6RT144 (1ul); 4: 6RT144 (10ul)

Líneas 2-4: RT-colis (3, 12, 59); 5: Klebsiella oxytoca (30); 6: Enterobacter intermedious (38);7: Hafnia alvey (7)

M 1 2 3 4 5 6 7

Elena López AcedoCáceres 7 de Septiembre 2012

Uso de Bacteriófagos como Antimicrobianos en la Producción Quesera

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