ion bactec & low en stein jensen

8/3/2019 ion Bactec & Low en Stein Jensen

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JOURNAL O F C L I N I C A L M I C R O B I O L O G Y , J u n e 1 9 9 0 , p . 1 2 8 8 - 1 2 9 10 0 9 5 - 1 1 3 7 / 9 0 / 0 6 1 2 8 8 - 0 4 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t 1 9 9 0 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

C o m p a r i s o n o f I m p r o v e d BACTEC a n d L o w e n s t e i n - J e n s e n M e d i af o r C u l t u r e o f M y c o b a c t e r i a f r o m C l i n i c a l S p e c i m e n sPETER ANARGYROS,t* DAVID S . J . ASTILL, AND IRENE S . L . LIMD i v i s i o n o f C l i n i c a l M i c r o b i o l o g y , I n s t i t u t e o f M e d i c a l a n d V e t e r i n a r y S c i e n c e , A d e l a i d e , S o u t h A u st r al i a 5 0 0 0 , A u st r al i a

R e c e i v e d 2 5 O c t o b e r 1 9 8 9 / A c c e p t e d 1 3 M a r c h 1 9 9 0A 4 - m o n t h t r i a l i n v o l v i n g 2 , 5 6 3 r o u t i n e c l i n i c a l s p e c i m e n s was c o n d u c t e d t o compare t h e i m p r o v e d BACTECTB s y s t e m ( 1 2 B m e d i u m ) w i t h t h e c o n v e n t i o n a l L o w e n s t e i n - J e n s e n ( L J ) m e d i a f o r t h e i s o l a t i o n , i d e n t i f i c a t i o n ,a n d s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f m y c o b a c t e r i a . One h u n d r e d s i x t y - t w o m y c o b a c t e r i a l i s o l a t e s were r e c o v e r e d , 1 4 7( 9 1 % ) w i t h BACTEC a n d 1 1 8 ( 7 3 % ) w i t h LJ m e d i a . O f t h e s e , 6 2 were M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s c o m p l e xs t r a i n s , 5 9 ( 9 5 % ) o f w h i c h were i s o l a t e d w i t h BACTEC a n d 5 4 ( 8 7 % ) o f w h i c h were i s o l a t e d w i t h LJ m e d i a .O f t h e r e m a i n i n g 1 0 0 i s o l a t e s , w h i c h were m y c o b a c t e r i a o t h e r t h a n t u b e r c u l o s i s (MOTT), BACTEC a n d LJm e d i a d e t e c t e d 8 8 a n d 64%, r e s p e c t i v e l y . T h e c o n t a m i n a t i o n r a t e was s i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n BACTEC ( 5 % )t h a n i n LJ m e d i a ( 3 . 3 % ) . T h e mean i s o l a t i o n t i m e f o r M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x w i t h BACTEC was 1 5 . 5 d ay s,c o m p a r e d w i t h 2 5 . 6 d a y s w i t h LJ. F o r MOTT, t h e mean i s o l a t i o n t i m e s were 5 . 8 a n d 2 1 . 4 d a y s , r e s p e c t i v e l y .I d e n t i f i c a t i o n o f 3 2 M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s a n d 3 8 i s o l a t e s o f MOTT b y t h e BACTEC N A P ( p - n i t r o -

a - a c e t y l a m i n o - , - h y d r o x y p r o p i o p h e n o n e ) i n h i b i t i o n t e s t gave 100% a g r e e m e n t w i t h c o n v e n t i o n a l b i o c h e m i c a li d e n t i f i c a t i o n s . T h e r e s u l t s o f s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f 1 8 M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s w i t h BACTEC a g r e e dc o m p l e t e l y w i t h t h o s e o b t a i n e d b y t h e r e s i s t a n c e r a t i o m e t h o d .The r a d i o m e t r i c BACTEC TB s y s t e m ( J o h n s t o n L a b o r a -t o r i e s , I n c . , T o w s o n , M d . ) was d e v e l o p e d f o r t h e r a p i dd e t e c t i o n o f m y c o b a c t e r i a b y u s i n g M i d d l e b r o o k 7H12 me-d i u m c o n t ai n i n g C ' 4 - l ab e l e d p a l m i t i c a c i d s ub s tr a te ( 6 ) . T h i ss y s t e m can r a p i d l y d i f f e r e n t i a t e members o f t h e M y c o b a c t e -

rium t u b e r c u l o s i s c o m p l e x f r o m m y c o b a c t e r i a o t h e r t h a nt u b e r c u l o s i s (MOTT) b y t e s t i n g f o r i n h i b i t i o n o f g r o w t h i nt h e presence o f p - n i t r o - o a - a c e t y l a m i n o - , - h y d r o x y p r o p i o p h e -none ( N A P ) ( 4 , 1 1 ) a n d ca n b e u s e d t o d e t e r m i n e d r u gs u s c e p t i b i l i t i e s o f M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s ( 1 2 ) .Th e us e o f BACTEC i n e a r l y i n v e s t i g a t i o n s d e m o n s t r a t e de q u i v a l e n t or i m p r o v e d i s o l a t i o n r a t e s as w e l l as e a r l i e rd e t e c t i o n t i m e s f o r M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x a n d MOTTi s o l a t e s , c o m p a r e d w i t h c o n v e n t i o n a l c u l t u r e m e d i a ( 2 , 8-1 0 ) . T h e s e s t u d i e s i n v o l v e d t h e i n o c u l a t i o n o f 0 . 1 m l o fs p e c i m e n c o n c e n t r a t e s i n t o 2 m l o f BACTEC 12A mediums u p p l e m e n t e d w i t h PACT, an a n t i m i c r o b i a l m i x t u r e c o n t a i n -i n g p o l y m y x i n B , a m p h o t e r i c i n , c a r b e n i c i l l i n , a n d t r i m e t h o -p r i m d e s i g n e d t o suppress t h e m i c r o b i a l f l o r a p r e s e n t i nr e s p i r a t o r y s p e c i m e n s ( 7 ) . I m p r o v e d i s o l a t i o n r a t e s werea l s o r e p o r t e d b y Morgan e t a l . ( M . A . M o r g a n , D . R .D e Y o u n g , a n d G . D . R o b e r t s , A b s t r . A n n u . M e e t . A m . S o c .M i c r o b i o l . 1 9 8 3 , C 2 2 2 , p . 3 4 8 ) and L i b o n a t i e t a l . ( J . P .L i b o n a t i , M. E . C a r t e r , N . M. H o p p e r , J . F . B a k e r , a n dS . H . S i d d i q i , A b s t r . A n n u . M e e t . A m . S o c . M i c r o b i o l .1 9 8 3 , C 2 2 3 , p . 3 4 8 ) , wh o u s e d a l a r g e r i n o c u l u m , 0 . 5 m l , a n da l a r g e r medium v o l u m e , 4 m l , i n t h e i r s t u d i e s . T h e s em o d i f i c a t i o n s r e s u l t e d i n h i g h e r c o n t am i n at i o n r a t e s ; co nse-q u e n t l y , a new a n t i m i c r o b i a l s u p p l e m e n t , PANTA, c o n t a i n -i n g p o l y m y x i n B , a m p h o t e r i c i n , n a l i d i x i c a c i d , t r i m e t h o -p r i m , a n d a z l o c i l l i n , was f o r m u l a t e d t o overcome t h i sp r o b l e m . PANTA was s u b s e q u e n t l y r e p o r t e d b y S t a g e r a n dD a v i s ( C . E . S t a g e r a n d J . R . D a v i s , A b s t r . A n n u . M e e t .A m . S o c . M i c r o b i o l . 1 9 8 6 , U - 3 6 , p . 1 2 5 ) t o s up pre s s co n -t a m i n a t i o n s i g n i f i c a n t l y b e t t e r t h a n PACT d i d . R e c e n t l y , a

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .t P r e s e n t a d d r e s s : C l i n p a t h L a b o r a t o r i e s , 3 2 0 W a k e f i e l d S t r e e t ,A d e l a i d e , S o u t h A u s t r a l i a , A u s t r a l i a .

g r o w t h - p r o m o t i n g s u b s t a n c e , p o l y o x y e t h y l e n e s t e a r a t e , h a sb e e n shown t o e n h a n c e t h e v i a b i l i t y o f p o o r l y g r o w i n gs t r a i n s o f M . t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e d f r o m t r e a t e dp a t i e n t s w i t h c h r o n i c i n f e c t i o n ( J . P . L i b o n a t i , M . E . C a r t e r ,N . M. H o o p e r , J . F . B a k e r , a n d S . H . S i d d i q i , A b s t r . A n n u .M e e t . A m . S o c . M i c r o b i o l . 1 9 8 5 , U 4 5 , p . 1 0 5 ) .The purpose o f t h i s s t u d y was t o e v a l u a t e t h e BACTECTB s y s t e m f o r r o u t i n e us e i n a c l i n i c a l l a b o r a t o r y b y com-p a r i n g i s o l a t i o n r a t e s a n d t i m e s o f i s o l a t i o n o f m y c o b a c t e r i af r o m c l i n i c a l s p eci m e n s w i t h t h e i m p r o v e d BACTEC s y s t e ma n d L o w e n s t e i n - J e n s e n ( L J ) m e d i a . Th e u s e f u l n es s o f t h eBACTEC NAP t e s t as a r a p i d m e t h o d o f d i f f e r e n t i a t i n g M .t u b e r c u l o s i s c o m p l e x f r o m MOTT was e v a l u a t e d , a n d ac o m p a r i s o n was made b e t w e e n t h e d r u g s u s c e p t i b i l i t y r e -s u l t s o b t a i n e d b y BACTEC a n d t h e r e s i s t a n c e r a t i o m e t h o d .M ATER I A L S AND METHODS

S p e c i m e n s a n d p r o c e s s i n g m e t h o d s . A l l s p e c i m e n s r e c e i v e db y t h e M y c o b a c t e r i a l R e f e r e n c e L a b o r a t o r y a t t h e I n s t i t u t eo f M e d i c a l a n d V e t e r i n a r y S c i e n c e , A d e l a i d e , A u s t r a l i a ,b e t w e e n 1 8 J u l y 1 9 8 8 a n d 4 November 1 9 8 8 were i n c l u d e d i nt h e s t u d y . T h e s e c o n s i s t e d o f sputum a n d o t h e r r e s p i r a t o r ys e c r e t i o n s , g a s t r i c s a va ge s p e c i me n s, u r i n e , o t h e r b o d yf l u i d s , pus, a n d t i s s u e b i o p s y s p ec i me n s. A l l r e s p i r a t o r ys p e c i m e n s were d e c o n t a m i n a t e d b y t h e N - a c e t y l - L - c y s t e i n e2 % NaOH method ( 3 , 1 3 ) f o r 3 0 min a n d n e u t r a l i z e d w i t h 3%p h o s p h o r i c a c i d . U r i n e s a m p l e s were c o n c e n t r a t e d b y cen-t r i f u g a t i o n a t 2 , 8 0 0 x g f o r 2 0 min a n d d e c o n t a m i n a t e d w i t h4 % H2SO4 f o r 3 0 min ( 1 4 ) . T i s s u e a n d b o d y f l u i d s f r o mn o r m a l l y s t e r i l e s i t e s were p r o c e s s e d a n d c u l t u r e d w i t h o u tp r i o r d e c o n t a m i n a t i o n . S m e a r s were made f r o m s p e c i m e nc o n c e n t r a t e s a f t e r n e u t r a l i z a t i o n a n d s t a i n e d w i t h a u r a m i n e -O - p h e n o l ( 3 , 1 3 ) f o r t h e presence o f a c i d - f a s t b a c i l l i ( A F B ) .Media a n d c u l t u r i n g m e t h o d s . ( i ) S a m p l e s ( 0 . 2 5 m l ) o f e a c hs p e c i m e n were i n o c u l a t e d o n t o e a c h o f two s l a n t s o f g l y c e r -o l - f r e e LJ medium s u p p l e m e n t e d w i t h s o d i u m p y r u v a t e( L J - P ; MEDVET S c i e n c e C o . L t d . , A d e l a i d e , A u s t r a l i a ) a n done s l a n t o f LJ medium c o n t a i n i n g n a l i d i x i c a c i d ( 3 5 m g/l i t e r ) , v a n c o m y c i n ( 2 0 m g / l i t e r ) , p o l y m y x i n B ( 1 , 6 0 0 U / m l ) ,

1 2 8 8

V o l . 2 8 , N o . 6


2/4

MYCOBACTERIAL ISOLATION WITH BACTEC AND L J MEDIAa n d p i m a f u c i n ( 1 0 0 m g / l i t e r ) ( L J - N V P P ; MEDVET S c i e n c eC o . ; P . A n a r g y r o s , A b s t r . A n n u . M e e t . A u s t . S o c . M i c r o -b i o l . 1 9 8 6 , a b s t r . n o . P 1 6 4 , p . 1 9 4 ) . ( i i ) S a m p l e s ( 0 . 5 m l ) o fd e c o n t a m i n a t e d s p e c i m e n s w e r e a l s o i n o c u l a t e d i n t o M i d -d l e b r o o k 7 H 1 2 b r o t h (BACTEC 1 2 B m e d i u m ; J o h n s t o nL a b o r a t o r i e s ) s u p p l e m e n t e d w i t h PA NTA ( p o l y m y x i n [ 5 0U / m l ] , a m p h o t e r i c i n [ 5 m g / l i t e r ] , n a l i d i x i c a c i d [ 2 0 m g / l i t e r ] ,t r i m e t h o p r i m [ 5 m g / l i t e r ] , a z l o c i l l i n [ 1 0 m g / l i t e r ] ) a n d p o l y -o x y e t h y l e n e s t e a r a t e . S p e c i m e n s f r o m s t e r i l e b o d y s i t e sw e r e i n o c u l a t e d i n t o a n t i b i o t i c - f r e e BACTEC 1 2 B mediums u p p l e m e n t e d w i t h p o l y o x y e t h y l e n e s t e a r a t e .BACTEC v i a l s w e r e r o u t i n e l y p r i m e d b e f o r e i n o c u l a t i o nt o e s t a b l i s h a n a t m o s p h e r e o f 4 t o 5% C0 2 a n d w e r e u s e dw i t h i n 1 w e e k . A l l m e d i a w e r e i n c u b a t e d a t 3 6 C . D u p l i c a t ec u l t u r e s o f s p e c i m e n s t a k e n f r o m s k i n a n d wound s i t e s w e r ei n c u b a t e d a t 3 0 C .C o n v e n t i o n a l L J m e d i a w e r e e x a m i n e d f o r g r o w t h t w i c ew e e k l y f o r t h e f i r s t 2 w e e k s a n d o n ce w e e k l y t h e r e a f t e r u n t i l8 w e e k s ; s m e a r - p o s i t i v e a n d t i s s u e s p e c i m e n s w e r e i n c u -b a t e d f o r 1 2 w e e k s . BACTEC v i a l s w e r e r e a d w i t h t h eT B 4 6 0 s y s t e m t w i c e w e e k l y f o r t h e f i r s t 2 w e e k s a n d w e e k l yt h e r e a f t e r u n t i l 6 w e e k s . G r o w t h w a s e x p r e s s e d a s a g r o w t hi n d e x v a l u e w h i c h w a s d i r e c t l y p r o p o r t i o n a l t o t h e a m o u n t o f1 4 C O 2 l i b e r a t e d i n t h e v i a l a s a r e s u l t o f m y c o b a c t e r i a lg r o w t h . T h e t h r e s h o l d f o r a p o s i t i v e g r o w t h i n de x r e a di n gw a s s e t a t a g r o w t h i n d e x o f 1 0 . V i a l s e x c e e d i n g t h et h r e s h o l d w e r e r e a d d a i l y u n t i l a g r o w t h i n d e x 2 1 0 0 w a sr e a c h e d , a t w h i c h t i m e s m e a r s w e r e m a d e a n d e x a m i n e d f o rt h e p r e s e n c e o f AFB. T h e BACTEC i s o l a t i o n t i m e , e x -p r e s s e d i n d a y s , w a s t h e t i m e a t w h i c h A F B w e r e f o u n d i ns m e a r s made f r o m p o s i t i v e v i a l s .I d e n t i f i c a t i o n o f m y c o b a c t e r i a l i s o l a t e s . A l l p r i m a r y i s o l a t e sw e r e d i f f e r e n t i a t e d a s M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x o r M O T T b yt h e BACTEC NAP i n h i b i t i o n t e s t ( 1 0 ) a n d i d e n t i f i e d b yc o n v e n t i o n a l b i o c h e m i s t r y ( 3 , 1 3 ) . A f u r t h e r 1 2 M. t u b e r c u -l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s f r o m a n A u s t r a l i a - w i d e Q u a l i t y C o n -t r o l A s s u r a n c e P r o g r a m m e w e r e i n c l u d e d a s r e f e r e n c es t r a i n s .S u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f m y c o b a c t e r i a l i s o l a t e s . A l l p r i m a r yM. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s w e r e t e s t e d w i t h BACTECb y u s i n g t h e 1 % p r o p o r t i o n m e t h o d ( 1 2 ) t o d e t e r m i n e t h e i rs u s c e p t i b i l i t i e s t o c r i t i c a l c o n ce n t r at i o n s o f t h e f o l l o w i n ga g e n t s : s t r e p t o m y c i n ( 6 . 0 m g / l i t e r ) , i s o n i a z i d ( C i b a - G e i g y ;0 . 2 m g / l i t e r ) , r i f a m p i n ( 2 . 0 m g / l i t e r ) , a n d e t h a m b u t o l ( 7 . 5m g / l i t e r ) . I s o l a t e s w e r e a l s o t e s t e d b y t h e r e s i s t a n c e r a t i om e t h o d ( 1 ) f o r s u s c e p t i b i l i t y t o o n l y t h r e e d r u g s , a s s t r e p t o -m y c i n w a s u n a v a i l a b l e d u r i n g t h e t r i a l . I s o n i a z i d ( 0 . 0 5 t o 1 . 6m g / l i t e r ) a n d e t h a m b u t o l ( 1 t o 1 6 m g / l i t e r ) w e r e t e s t e d w i t hL J m e d i a , w h e r e a s r i f a m p i n ( 0 . 5 t o 8 m g / l i t e r ) w a s t e s t e dw i t h M i d d l e b r o o k 7 H 1 0 a g a r .S t a t i s t i c a l a n a l y s i s . F i s h e r ' s e x a c t t e s t w a s u s e d t o d e t e r -m i n e t h e s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e o f d i f f e r e n c e s i n i s o l a t i o n a n dc o n t a m i n a t i o n r a t e s b e t w e e n t h e BACTEC a n d L J s y s t e m s .T h e s t a t i s t i c a l d i f f e r e n c e s i n i s o l a t i o n t i m e s o f M. t u b e r c u -l o s i s c o m p l e x a n d MOTT b y b o t h m e t h o d s w e r e d e t e r m i n e db y S t u d e n t ' s t t e s t .

RESULTSA t o t a l o f 1 6 2 ( 6 . 4 %) m y c o b a ct e r i a l i s o l a t e s w e r e o b t a i n e df r o m 2 , 5 6 3 s p e c i m e n s c u l t u r e d b y b o t h m e t h o d s d u r i n g t h et r i a l p e r i o d . O f t h e s e , 6 2 w e r e M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x a n d8 0 w e r e M y c o b a c t e r i u m a v i u m - M . i n t r a c e l l u l a r e c o m p l e x ,a c c o u n t i n g f o r 8 7 . 6 % o f t h e t o t a l ( T a b l e 1 ) . T h e h i g h e s ti s o l a t i o n r a t e w a s o b t a i n e d w i t h BACTEC, w i t h 1 4 7 ( 9 1 % )i s o l a t i o n s , c o m p a r e d w i t h 8 5 ( 5 2 % ) o n L J - P a n d 9 7 ( 6 0 % ) o n

TABLE 1 . D i s t r i b u t i o n o f 1 6 2 M y c o b a c t e r i u m s p p . i s o l a t e sr e c o v e r e d f r o m 2 , 5 6 3 s p e c i m e n sS p e c i e s N o . o f i s o l a t e s

M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 2 aM . a v i u m - M . i n t r a c e l l u l a r e c o m p l e x . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 0M . c h e l o n a e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3M. f o r t u i t u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2M . m a r i n u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2M . g o r d o n a e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1M . t e r r a e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1M. n o n c h r o m o g e n i c u m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1a I n c l u d e s o n e M. b o v i s i s o l a t e a n d o n e M. b o v i s BC G i s o l a t e .

LJ-NVPP ( T a b l e 2 ) . T h e c o m b i n e d y i e l d f r o m L J m e d i a w a s7 3 % , s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t o b t a i n e d b y BACTEC ( P= 0 . 0 0 0 0 3 ) . A s i g n i f i c a n t l y h i g h e r n u m b e r o f c o n t a m i n a t e dc u l t u r e s w a s o b t a i n e d w i t h BACTEC: 1 2 9 ( 5 . 0 % ) c o m p a r e dw i t h 8 4 ( 3 . 3 % ) o n t h e c o m b i n e d L J m e d i a ( P = 0 . 0 0 1 ) .T h e r e w a s n o s t a t i s t i c a l d i f f e r e n c e i n t h e i s o l a t i o n r a t e s o fM. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x o b t a i n e d w i t h BACTEC a n d w i t hL J m e d i a ( P = 0 . 0 8 ) . BACTEC d e t e c t e d 98% o f M . t u b e r -c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s f r o m 4 6 s m e a r - p o s i t i v e s p e c i m e n sa n d 88% f r o m 1 6 s m e a r - n e g a t i v e s p e c i m e n s ( T a b l e 2 ) . T h ec o m b i n e d L J m e d i a d e t e c t e d 9 1 a n d 75% o f t h e s e , r e s p e c -t i v e l y . BACTEC, h o w e v e r , w a s s i g n i f i c a n t l y b e t t e r a t i s o -l a t i n g MOTT, r e c o v e r i n g 1 0 0 % o f t h e s e i s o l a t e s f r o m 3 5s m e a r - p o s i t i v e s p e c i m e n s a n d 80% f r o m 6 5 s m e a r - n e g a t i v es p e c i m e n s ( T a b l e 2 ) . T h e c o m b i n e d L J m e d i a d e t e c t e d o n l y8 3 a n d 54 % o f t h e s e , r e s p e c t i v e l y ( P = 0 . 0 0 1 ) . B o t h s y s t e m st o g e t h e r i s o l a t e d m o r e o r g a n i s m s t h a n e i t h e r a l o n e . BAC-TEC f a i l e d t o i s o l a t e 3 M. t u b e r c u l o s i s a n d 1 2 MOTTi s o l a t e s t h a t g r e w o n L J m e d i a . L J m e d i a d i d n o t g r o w 8M. t u b e r c u l o s i s a n d 3 6 MOTT i s o l a t e s t h a t g r e w i n t h eBACTEC s y s t e m . M o s t o f t h e s e w e r e f r o m p a t i e n t s f r o mwhom t h e o r g a n i s m h a d b e e n i s o l a t e d b e f o r e . O n l y a f e w( t w o M. t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s a n d o n e MOTT i s o l a t e i nBACTEC; t h r e e M. t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s a n d e i g h t MOTTi s o l a t e s o n L J m e d i a ) w e r e s i g n i f i c a n t o r g a n i s m s t h a t w e r ei s o l a t e d f o r t h e f i r s t t i m e .A c o m p a r i s o n o f t h e i s o l a t i o n t i m e s f o r 1 0 3 m y c o b a c t e r i ar e c o v e r e d b y b o t h t y p e s o f m e d i a f r o m t h e s a m e s p e c i m e n ss h o w e d t h a t BACTEC d e t e c t e d g r o w t h s i g n i f i c a n t l y e a r l i e rt h a n L J m e d i a d i d ( T a b l e 3 ) . T h e mean d e t e c t i o n t i m e f o r M.t u b e r c u l o s i s c o m p l e x w a s 1 5 . 5 d a y s w i t h BACTEC c o m -p a r e d w i t h 2 5 . 6 d a y s w i t h L J m e d i a ( P = 0 . 0 0 1 ) . T h e meand e t e c t i o n t i m e f o r M O T T w a s 5 . 8 d a y s f o r BACTEC a n d2 1 . 4 d a y s f o r L J m e d i a ( P = 0 . 0 0 1 ) . BACTEC c o n s i s t e n t l yd e t e c t e d g r o w t h e a r l i e r t h a n L J m e d i a , r e g a r d l e s s o f t h es p e c i m e n t y p e a n d s m e a r p o s i t i v i t y ( T a b l e s 4 a n d 5 ) .T h e BACTEC NAP i n h i b i t i o n t e s t g a v e 1 0 0 % a g r e e m e n tw i t h c o n v e n t i o n a l b i o c h e m i s t r y i n d i f f e r e n t i a t i n g 3 2 s t r a i n so f M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x a n d 3 8 MOTT i s o l a t e s . O n es t r a i n o f M. marinum c o u l d h a v e b e e n m i s i d e n t i f i e d a s M .t u b e r c u l o s i s c o m p l e x b y BACTEC. As t h e i s o l a t e waso b t a i n e d f r o m a c u t a n e o u s s p e c i m e n , NAP t e s t i n g w a s a l s op e r f o r m e d a t 3 0 C a n d i d e n t i f i e d i t a s a MOT]. Th e a v e r a g er e p o r t i n g t i m e o f i d e n t i f y i n g MOTT w i t h BACTEC was 2 . 6d a y s . S u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f 1 8 M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e xi s o l a t e s b y t h e BACTEC s y s t e m g a v e 1 0 0 % c o r r e l a t i o n w i t ht h e r e s i s t a n c e r a t i o m e t h o d f o r s u s c e p t i b i l i t y t o i s o n i a z i d ,r i f a m p i n , a n d e t h a m b u t o l . As s t r e p t o m y c i n was t e s t e d f o ro n l y b y t h e BACTEC s y s t e m , s u c h a c o m p a r i s o n was n o tp o s s i b l e f o r t h a t d r u g . T h e a v e r a g e r e p o r t i n g t i m e o f s u s c e p -t i b i l i t i e s w i t h BACTEC was 6 . 1 d a y s , c o m p a r e d w i t h 2 1 d a y sb y t h e r e s i s t a n c e r a t i o m e t h o d .

V O L . 2 8 , 1 9 9 0 1 2 8 9


3/4

1 2 9 0 ANARGYROS ET AL.TABLE 2 . I s o l a t i o n o f M. t u b e r c u l o s i s c o mp l e x a n d M O T T b y BACTEC a n d L J m e d i a

S m e a r N o . ( % ) o f N o . ( % ) o f i s o l a t e s r e c o v e r e d o n :Speciese s u l t s p e c i m e n s BACTEC m e d i u m L J - P LJ-NVPP C o m b i n e d L J m e d i aM . t u b e r c u l o s i s c o m p l e x P o s i t i v e 4 6 4 5 ( 9 8 ) 3 1 ( 6 7 ) 3 7 ( 8 1 ) 4 2 ( 9 1 )N e g a t i v e 1 6 1 4 ( 8 8 ) 6 ( 3 8 ) 1 1 ( 6 9 ) 1 2 ( 7 5 )MOTT P o s i t i v e 3 5 3 5 ( 1 0 0 ) 2 2 ( 6 3 ) 2 5 ( 7 1 ) 2 9 ( 8 3 )N e g a t i v e 6 5 5 3 ( 8 0 ) 2 6 ( 4 0 ) 2 4 ( 3 7 ) 3 5 ( 5 4 )T o t a l 1 6 2 ( 1 0 0 ) 1 4 7 ( 9 1 ) 8 5 ( 5 2 ) 9 7 ( 6 0 ) 1 1 8 ( 7 3 )

DISCUSSIONT h e i m p r o v e d BACTEC 1 2 B m e d i u m w i t h PANT A sup-p l e m e n t p r o v e d t o b e s i g n i f i c a n t l y b e t t e r t h a n L J m e d i a f o rt h e i s o l a t i o n o f m y c o b a c t e r i a f r o m c l i n i c a l s p e c i m e n s . I s o -l a t i o n r a t e s , a l t h o u g h c o m p a r a b l e t o t h o s e r e p o r t e d b yS t a g e r a n d D a v i s ( A b s t r . A n n u . M e e t . A m. S o c . M i c r o b i o l .1 9 8 6 ) , f a i l e d t o d e m o n s t r a t e any s t a t i s t i c a l d i f f e r e n c e s i n t h ei s o l a t i o n o f M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x b y b o t h s y s t e m s .

BACTEC i s o l a t e d 5 9 o f 6 2 M . t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i s o l a t e s ,c o m p a r e d w i t h 5 4 o b t a i n e d on L J m e d i a . T h e s e r e s u l t s weren o t u n e x p e c t e d , as M i d d l e b r o o k b r o t h a n d L J m e d i a wered e s i g n e d p r i m a r i l y f o r t h e g r o w t h o f M. t u b e r c u l o s i s f r o mc l i n i c a l s p e c i m e n s .I s o l a t i o n o f MOTT, h o w e v e r , was s i g n i f i c a n t l y b e t t e rw i t h 1 2 B m e d i u m . O f t h e 1 0 0 M O T T i s o l a t e s r e c o v e r e d ,BACTEC i s o l a t e d 8 8 , c o m p a r e d w i t h 6 4 i s o l a t e d w i t h L Jm ed i a . T h i s d i f f e r e n c e was most m a r k e d w i t h smear-nega-t i v e s p e c i m e n s a n d c o n t r as t e d w i t h t h e w o r k o f K i r i h a r a e ta l . ( 2 ) a n d M o r g a n e t a l . ( 8 ) , wh o c o u l d n o t d e m o n s t r a t e an yi n c r e a s e i n MOTT i s o l a t i o n s w i t h 1 2 A m e d i u m w i t h PACTs u p p l e m e n t . T h e us e o f a l a r g e r i n o cu l u m a n d mediumv o l u m e i n our s t u d y may a c c o u n t f o r t h i s d i f f e r e n c e . F u r -t h e r m o r e , S i d d i q i a n d Hwangbo ( S . H . S i d d i q i a n d C . C .H w a n g b o , A b s t r . A n n u . M e e t . Am. S o c . M i c r o b i o l . 1 9 8 6 ,U - 3 5 , p . 1 2 5 ) r e p o r t e d t h a t PANT A u s e d i n t h e i r s t u d y wasl e s s i n h i b i t o r y t o MOTT t h a n PACT was. T h e i m p r o v e di s o l a t i o n o f MOTT b y t h e BACTEC s y s t e m i s c l i n i c a l l yi m p o r t a n t , as t h e i n c i d en ce o f m y c o ba ct e r i a l i n f e c t i o n i si n c r e a s i n g , e s p e c i a l l y i n i m m u n o s u p p r e s s e d p a t i e n t s ( 1 5 ) .T h e m a i n a d v a n t a g e o f t h e BACTEC s y s t e m i s e a r l i e ri s o l a t i o n t i m e s t h a n t h o s e o b t a i n a b l e w i t h o t h e r s y s t e m s .T h e i s o l a t i o n o f M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x b y BACTEC f r o ms m e a r - p o s i t i v e a n d s m e a r - n e g a t i v e s p e c i m e n s o c c u r r e d 9 . 8a n d 1 1 . 5 d a y s e a r l i e r , r e s p e c t i v e l y , t h a n i s o l a t i o n w i t h L Jm e d i a . T h e s e f i g u r e s were s i m i l a r t o t h o s e r e p o r t e d b yM o r g a n e t a l . ( 8 ) a n d R o b e r t s e t a l . ( 1 0 ) , wh o a l s o u s e d 12Amedium a n d PACT s u p p l e m e n t . T h e e a r l i e r i s o l a t i o n t i m e sw i t h BACTEC were o b s e r v e d f o r a l l s p e c i m e n t y p e s . F a c -t o r s s u c h as i n o c u l u m v o l u m e a n d d e g r e e o f s m e a r p o s i t i v i t ymay a f f e c t i s o l a t i o n t i m e s . We f o u n d t h a t an average o f o n l y5 . 3 d a y s was r e q u i r e d t o i s o l a t e M . t u b e r c u l o s i s c o m p l e x

w i t h BACTEC f r o m s p e c i m e n s c o n t a i n i n g numerous A F Bo n smears c o m p a r e d w i t h 1 7 . 2 d a y s f o r s p e c i m e n s c o n t a i n -i n g f e w AFB. T h e more r a p i d i s o l a t i o n o f M. t u b e r c u l o s i s b yBACTEC f r o m s m e a r - n e g a t i v e d e c o n t a m i n a t e d s p e c i m e n si n t h i s s t u d y c o n t r a s t s w i t h t h e f i n d i n g s o f K i r i h a r a e t a l . ( 2 ) .S i n c e s i m i l a r d e c o n t a m i n a t i o n p r o c e d u r e s were u s e d , i t i smost l i k e l y t h a t t h e l a r g e r i n o c u l u m a n d l a r g e r v o l u m e o f 1 2 Bmedium u s e d i n our p r o t o c o l a c c o u n t e d f o r t h i s d i f f e r e n c e .F o r MOTT i s o l a t e s , g r e a t e r d i f f e r e n c e s i n i s o l a t i o n t i m e swere o b s e r v e d . BACTEC i s o l a t e d t h e s e 1 5 . 9 a n d 1 5 . 1 d a y se a r l i e r t h a n L J m e d i a f r o m s m e a r - p o s i t i v e a n d smear-nega-t i v e s p e c i m e n s , r e s p e c t i v e l y . T h e s e f i g u r e s c o r r e l a t e d w e llw i t h t h o s e r e p o r t e d b y M o r g a n e t a l . ( 8 ) . A n ar g y r o s a n d Lim( P . A n a r g y r o s a n d I. S . L . L i m , A b s t r . A u s t r a l a s . S o c .I n f e c t . D i s . 1 9 8 9 , p . 2 8 ) r e p o r t e d t h a t i t r e q u i r e d 7 w e e k s f o rL J m e d i a t o i s o l a t e 97% o f a l l m y c o b a c t e r i a f r o m smear-n e g a t i v e s p e c i m e n s . P a t i e n t s s u s p e c t e d o f h a v i n g m y c o b a c -t e r i a l d i s e a s e a n d w h o s e i n i t i a l smears f o r A F B were nega-t i v e were u s u a l l y commenced on a n t i t u b e r c u l o s i s t h e r a p y ors u b j e c t e d t o i n v a s i v e p r o c e d u r e s t o o b t a i n a d i a g n o s i s . T h ee a r l i e r i s o l a t i o n t i m e s a c h i e v e d w i t h BACTEC s h o u l d h e l pt o r e d u c e t h e f r e q u e n c y o f o c c as i o n s when t h e s e p r o c e d u r e sb e c o m e necessary.T h e r a p i d a n d r e l i a b l e d i f f e r e n t i a t i o n o f MOTT f r o m M .t u b e r c u l o s i s c o m p l e x i n o n l y 2 . 6 d a y s i s u s e f u l . P a t i e n t s w i t hs u s p e c t e d t u b e r c u l o s i s w h o s e smears are p o s i t i v e are h o s p i -t a l i z e d a n d commenced on t h e r a p y . I f t h e i n f e c t i o n i ss u b s e q u e n t l y s h o w n t o b e c au s e d b y MOTT, t r e a t m e n t i sc o n t i n u e d on an o u t p a t i e n t b a s i s . Th e r a p i d i s o l a t i o n a n di d e n t i f i c a t i o n o f t h e s e i s o l a t e s ca n s i g n i f i c a n t l y r e d u c e h e a l t hcare c o s t s . T h e r a p i d i d e n t i f i c a t i o n o f MOTT i s a l s o u s e f u lf o r d i s c a r d i n g n o n s i g n i f i c a n t i s o l a t e s ; h o w e v e r , NAP t e s t i n gmay g i v e erroneous r e s u l t s . S e v e r a l s t r a i n s o f M . t u b e r c u -l o s i s r e q u i r e d r e p e a t e d t e s t i n g t o d e m o n s t r a t e r e l i a b l e i n h i -b i t i o n . Th e m a n u f a c t u r e r s recommend t h a t an o r g a n i s m b et e s t e d f o r NAP i n h i b i t i o n a t t h e o p t i m a l g r o w t h t e m p e r a t u r ef o r t h a t o r g a n i s m . I t i s i m p o r t a n t t o t e s t i s o l a t e s f r o m l y m p hn o d e s a n d s k i n a t 3 5 a n d 3 0 C . W i t h t h e a d d i t i o n o f 6 0 p . Mh e m i n t o t h e 1 2 B medium a n d t e s t i n g a t 3 0 C , we werer e c e n t l y a b l e t o d e m o n s t r a t e NAP r e s i s t a n c e i n M. h a e m o -p h i l u m i s o l a t e d f r o m a h a n d u l c e r . L a s z l o a n d S i d d i q i ( 5 )

TAB LE 3 . C o m p a r i s o n o f i s o l a t i o n t i m e s o f 1 0 3 m y c o b a c t e r i a l s p e c i m e n sI s o l a t i o n t i m e i n d ay s ( m e a n + S D ) f o r :

S p e c i m e n s M. t u b e r c u l o s i s c o m p l e x ( n = 5 1 ) MOTT ( n = 5 2 )BACTEC L J m e d i a BACTEC L J m e d i a

A l l 1 5 . 5 1 1 . 3 2 5 . 6 1 0 . 2 5 . 8 + 3 . 2 2 1 . 4 + 1 0 . 5S m e a r p o s i t i v e 1 4 . 1 + 1 1 . 7 2 3 . 9 1 0 4 . 3 + 2 . 1 2 0 . 2 8 . 4S m e a r n e g a t i v e 2 1 . 0 6 . 4 3 2 . 5 + 7 . 6 7 . 7 3 . 4 2 2 . 8 + 1 2 . 6

J . C L I N . M I C R O B I O L .


4/4

MYCOBACTERIAL ISOLATION WI TH B A CT EC AND L J MEDIATABLE 4 . C o m p a r i s o n o f i s o l a t i o n t i m e s f o r 5 1 M . t u b e r c u l o s i si s o l a t e s a c c o r d i n g t o s p e c i m e n t y p e

Mean i s o l a t i o n t i m e ( d a y s ) f o r i n d i c a t e d s m e a r r e s u l ta n d s p e c i m e n s o u r c eP o s i t i v e N e g a t i v eMedium R e s p i r a t o r y T i s s u e s a n d R e s p i r a t o r y T i s s u e s a n ds y s t e m a n d b o d y f l u i d s s y s t e m a n d b o d y f l u i d su r i n e n2) u r i n e n2( n = 3 9 ) ( n =2 ) ( n = 8 ) (n=2)

BACTEC 1 2 B 1 4 . 1 1 3 . 5 2 0 . 5 2 3 . 0C o m b i n e d L J 2 4 . 0 2 1 . 0 3 1 . 5 4 1 . 5

h a v e h i g h l i g h t e d p r o b l e m s a s s o c i a t e d w i t h N A P t e s t i n g w i t hm i x e d c u l t u r e s o f M. t u b e r c u l o s i s a n d MOTT. T h e r o u t i n eu s e o f M i d d l e b r o o k a g a r t o s c r e e n f o r m i x e d p o p u l a -t i o n s w o u l d h e l p i n t h i s r e g a r d . S u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g b y t h eBACTEC m e t h o d c o r r e l a t e d w e l l w i t h t h e r e s u l t s o b t a i n e db y t h e r e s i s t a n c e r a t i o m e t h o d . R e s u l t s w e r e e a s i e r t oi n t e r p r e t a n d w e r e a v a i l a b l e s i g n i f i c a n t l y e a r l i e r .T h e i m p r o v e d BACTEC TB s y s t e m i s a r a p i d , s e n s i -t i v e , a n d e f f i c i e n t m e t h o d f o r t h e i s o l a t i o n , d i f f e r e n t i a t i o n ,a n d s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f m y c o b a c t e r i a i n a c l i n i c a l l a b o -r a t o r y . T h e h i g h e s t i s o l a t i o n r a t e s w e r e o b t a i n e d whenBACTEC a n d L J m e d i a w e r e u s e d t o g e t h e r . H o w e v e r , t h er o u t i n e u s e o f b o t h m e d i a w o u l d b e t i m e c o n s u m i n g a n dl a b o r i n t e n s i v e a n d may n o t b e c o s t e f f e c t i v e . S i n c e o n l y af e w s i g n i f i c a n t c u l t u r e s f a i l e d t o g r o w i n BACTEC, t h i sm e d i u m c a n b e u s e d a s t h e s o l e i s o l a t i o n m e d i u m f o rr e s p i r a t o r y a n d u r i n e s p e c i m e n s . F o r s p e c i m e n s w h i c h a r ed i f f i c u l t t o o b t a i n , s u c h a s t i s s u e b i o p s i e s a n d b o d y f l u i d s , t h eu s e o f L J m e d i a a n d BACTEC may b e j u s t i f i e d t o m a x i m i z ei s o l a t i o n o f m y c o b a c t e r i a .

ACKNOWLEDGMENTSWe t h a n k R o s e m a r y P e r r i e f o r h e r e x c e l l e n t t e c h n i c a l a s s i s t a n c e ,F a y E d w a r d s f o r t h e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s o f o u r d a t a , a n d M a r g a r e tP r i e d e f o r t h e t y p i n g o f t h e m a n u s c r i p t . We a l s o t h a n k B e c t o n a n dD i c k i n s o n , A u s t r a l i a , f o r s u p p l y o f BACTEC e q u i p m e n t , r e a g e n t s ,a n d t e c h n i c a l a s s i s t a n c e .

TABLE 5 . C o m p a r i s o n o f i s o l a t i o n t i m e s f o r 5 2 MOTT i s o l a t e sa c c o r d i n g t o s p e c i m e n t y p eMean i s o l a t i o n t i m e ( d a y s ) f o r i n d i c a t e d s m e a r r e s u l ta n d s p e c i m e n s o u r c e

P o s i t i v e N e g a t i v eMediumR e s p i r a t o r y T i s s u e s a n d R e s p i r a t o r y T i s s u e s a n ds y s t e m a n d b o d y f l u i d s s y s t e m a n d b o d y f l u i d su r i n e ( n = 1 ) u r n e = 2 0 ) 3( n = 2 8 ) (nne ( n = 3 )

BACTEC 1 2 B 4 . 2 6 . 0 7 . 0 1 1 . 0C o m b i n e d L J 2 0 . 5 1 4 . 0 2 1 . 3 3 4 . 0

LITERATURE CITED1 . C a n e t t i , G . , S . F r o m a n , J . G r o s s e t , P . H a u d u r o y , M. L a n g e r o v a ,H . T . M a h l e r , G . M e i s s n e r , D . A . M i t c h i s o n , a n d L . S u l a . 1 9 6 3 .M y c o b a c t e r i a : l a b o r a t o r y m e t h o d s f o r t e s t i n g d r u g s e n s i t i v i t ya n d r e s i s t a n c e . B u l l . W.H.O. 2 9 : 5 6 5 - 5 7 8 .2 . K i r i h a r a , J . M . , S . L . H i l l i e r , a n d M . B . C o y l e . 1 9 8 5 . I m p r o v e dd e t e c t i o n t i m e s f o r M y c o b a c t e r i u m a v i u m c o m p l e x a n d M y c o -

b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s w i t h t h e BACTEC r a d i o m e t r i c s y s t e m .J . C l i n . M ic r ob i o l. 2 2 : 84 1 -8 4 5 .3 . K l e e b e r g , H . H . , H . J . K o o r n h o f , a n d H . P a l m h e r t . 1 9 8 0 .L a b o r a t o r y m a n u a l o f t u b e r c u l o s i s m e t h o d s , 2 n d e d . T u b e r c u -l o s i s R e s e a r c h I n s t i t u t e , P r e t o r i a , S o u t h A f r i c a .4 . L a s z l o , A . , a n d L . E i d u s. 1 9 7 8 . T e s t f o r d i f f e r e n t i a t i o n o f M.t u b e r c u l o s i s a n d M. b o v i s f r o m o t h e r m y c o b a c t e r i a . C a n . J .M i c r o b i o l . 2 4 : 7 5 4 - 7 5 6 .5 . L a s z l o , A . , a n d S . H . S i d d i q i . 1 9 8 4 . E v a l u a t i o n o f a r a p i dr a d i o m e t r i c d i f f e r e n t i a t i o n t e s t f o r t h e M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u -l o s i s c o mp l e x b y s e l e c t i v e i n h i b i t i o n w i t h p - n i t r o - a - a c e t y l -a m i n o - , B - h y d r o x y p r o p i o p h e n o n e . J . C l i n . M i c r o b i o l . 1 9 : 6 9 4 -6 9 8 .6 . M i d d l e b r o o k , G . , Z . R e g g i a r d o , a n d W. D . T i g e r t t . 1 9 7 7 . A u -t o m a t a b l e r a d i o m e t r i c d e t e c t i o n o f g r o w t h o f M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s i n s e l e c t i v e m e d i a . A m. R e v . R e s p i r . D i s . 1 1 5 :1 0 6 6 - 1 0 6 9 .7 . M i t c h i s o n , D . A . , B . W. A l l e n , L . C a r r o l , J . M . D i c k i n s o n , a n dV . R . A b e r . 1 9 7 2 . A s e l e c t i v e o l e i c a c i d a l b u m i n a g a r m e d i u mf o r t u b e r c u l e b a c i l l i . J . M e d . M i c r o b i o l . 5 : 1 6 5 - 1 7 5 .8 . M o r g a n , M. A . , C . D . H o r s t m e i e r , D . R . D e Y o u n g , a n d G . D .R o b e r t s . 1 9 8 3 . C o m p a r i s o n o f a r a d i o m e t r i c m e t h o d ( B A C T E C )a n d c o n v e n t i o n a l c u l t u r e m e d i a f o r t h e r e c o v e r y o f m y c o b a c -t e r i a f r o m s m e a r - n e g a t i v e s p e c i m e n s . J . C l i n . M i c r o b i o l . 1 8 :3 8 4 - 3 8 8 .9 . P a r k , C . H . , D . L . H i x o n , C . B . F e r g u s o n , S . L . H a l l , C . C .R i s h e i m , a n d C . B . C o o k . 1 9 8 4 . R a p i d r e c o v e r y o f m y c o b a c t e r i af r o m c l i n i c a l s p e c i m e n s u s i n g a u t o m a t e d r a d i o m e t r i c t e c h n i q u e .Am. J . C l i n . P a t h o l . 8 1 : 3 4 1 - 3 4 5 .1 0 . R o b e r t s , G . D . , N . L . G o o d m a n , L . H e i f e t s , H . W. L a r s h , T . H .L i n d n e r , J . K . M c C l a t c h y , M. R . M c G i n n i s , S . H . S i d d i q i , a n d P .W r i g h t . 1 9 8 3 . E v a l u a t i o n o f t h e BACTEC r a d i o m e t r i c m e t h o df o r r e c o v e r y o f m y c o b a c t e r i a a n d d r u g s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o fM y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s f r o m a c i d - f a s t s m e a r - p o s i t i v es p e c i m e n s . J . C l i n . M i c r o b i o l . 1 8 : 6 8 9 - 6 9 6 .1 1 . S i d d i q i , S . H . , C . C . H w a n g b o , V . S i l c o x , R . C . G o o d , D . E .S n i d e r , J r . , a n d G . M i d d l e b r o o k . 1 9 8 4 . R a p i d r a d i o m e t r i c m e t h -o d s t o d e t e c t a n d d i f f e r e n t i a t e M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s / M .b o v i s f r o m o t h e r m y c o b a c t e r i a l s p e c i e s . Am. R e v . R e s p i r . D i s .1 3 0 : 6 3 4 - 6 4 0 .1 2 . S i d d i q i , S . H . , J . P . L i b o n a t i , a n d G . M i d d l e b r o o k . 1 9 8 1 .E v al u a t i o n o f a r a p i d r a d i o m e t r i c m e t h o d f o r d r u g s u s c e p t i b i l i t yt e s t i n g o f M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s . J . C l i n . M i c r o b i o l . 1 3 :9 0 8 - 9 1 2 .1 3 . V e s t a l , A . L . 1 9 8 1 . P r o c e d u r e s f o r t h e i s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a -t i o n o f m y c o b a c t e r i a . U . S . D e p a r t m e n t o f H e a l t h a n d HumanS e r v i c e s p u b l i c a t i o n n o . ( C D C ) 8 1 - 8 2 3 0 . C e n t e r s f o r D i s e a s eC o n t r o l , A t l a n t a .1 4 . W a r r e n , N . G . , a n d F . W. L a m b e r t , J r . 1 9 7 4 . A n e v a l u a t i o n o fa n i m p r o v e d t e c h n i q u e f o r c u l t u r i n g M. t u b e r c u l o s i s f r o m u r i n es p e c i m e n s . C o n f . P u b l i c H e a l t h L a b . D i r . J . 3 2 ( P a r t 1 ) : 8 - 1 0 .1 5 . W o o d s , G . L . , a n d J . A . W a s h i n g t o n . 1 9 8 7 . M y c o b a c t e r i a o t h e rt h a n M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s : r e vi e w o f m i c r o b i o l o g i c a n dc l i n i c a l a s p e c t s . R e v . I n f e c t . D i s . 9 : 2 7 5 - 2 9 4 .

V O L . 2 8 1 9 9 0 1 2 9 1

ion bactec & low en stein jensen

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