INTEGRANTES :MSc. MARIA EVELYN SANCHEZ DE RAMOS, COORDINADORA PROYECTO, FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA.DR. SALVADOR CASTILLO (INVESTIGADOR CUBANO)MSc CORALIA GONZALEZ DE DIAZ, FAC. QUIMICA Y FARMACIA Dra. ABIGAIL GUTIERREZ, Dr. SALVADOR LOPEZ, HOSPITAL ZACAMIL. LIC ELVA HERNANDEZ. LIC AMY MORAN(CENSALUD)

AISLAMIENTO Y SUCEPTIBILIDAD DE ANTIMICROBIANOS EN Helicobacter pylori

OBTENIDO DE PACIENTES CON TRASTORNOS DISPEPTICOS.

INTRODUCCION INTRODUCCION

Helicobacter pylori (HP) un patógeno duodenal humano, cuyo hábitat es la mucosa gástrica , se considera uno de los factores etiológicos fundamentales en trastornos dispépticos Se incluye entre los agentes carcinogénicos tipo I, constituyéndose en una de las especies bacterianas de mayor interés en Patología humana .Hoy sabemos que la infección por Helicobacter pylori es la enfermedad bacteriana crónica más extendida del mundo. Afecta a mas de la mitad de la población mundial, con una distribución vinculada con el grado de desarrollo económico de cada país.Sabemos que la infección por Helicobacter pylori es la causa directa de las gastritis crónicas, es un importante cofactor en la etiología de las úlceras pépticas y esta fuertemente asociado a la patogenia del cáncer gástrico y del linfoma gástrico.

En esta investigación se realizaron entrevistas a pacientes que asisten a la unidad de Gastroenterología del Hospital Zacamil en San Salvador para toma de biopsia, que se les ha diagnosticado algún tipo de dispepsia. El objetivo de la entrevista es: conocer factores medio ambientales, edad del paciente, síntomas, diagnostico y otros factores que influyen en la epidemiología de esta enfermedad. Se aislo la bacteria Helicobacter pylori HP a partir de biopsias tanto de antro pilórico como de cuerpo del estómago.El traslado de la biopsia se realizó en Solución salina 0.9 %.al laboratorio de Microbiología. CENSALUD. La identificación de cepas por: observación macroscópica de colonias , microscópicamente, pruebas de identificacion y cortes histológicos .Determinar la relación entre la presencia de la bacteria y la Gastritis crónica.Se ha iniciado el ensayo in-vitro de las diversas terapias triples con combinación de antibióticos e inhibidores de la bomba de protones debido a que la infección por Helicobacter pylori resulta de difícil tratamiento, para luego realizar un monitoreo post-tratamiento para comprobar la efectividad .

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OBJETIVO GENERALOBJETIVO GENERAL

Determinar cual terapia triple con antimicrobianos es efectiva en Helicobacter pylori

OBJETIVOS ESPECIFICOSOBJETIVOS ESPECIFICOS

1. Identificar los factores medio ambientales que influyen en la epidemiología de la enfermedad, mediante entrevistas a pacientes y determinar el mecanismo de transmisión del Helicobacter pylori en nuestro país.

2. Realizar pruebas de identificación de (Hp) proveniente de la sala de gastroenterología del Hospital Nacional Zacamil.

3. Aislar el microorganismo (Hp) de muestras que dieron positiva a la Ureasa,de biopsia de pacientes con trastornos dispépticos.

4. Realizar un estudio comparativo de la actividad antimicrobiana con los fármacos indicados INVITRO.

5. Determinar la Concentración Inhibitoria Mínima CMI para cada cepa con un extracto vegetal a ensayar. (Juanislama)

6. Realizar un monitoreo Post- tratamiento para verificar su efectividad.

DISEÑO METODOLDISEÑO METODOLOOGICOGICO

Universo de la muestra:

El universo serán los pacientes que den positivo la prueba de ureasa. 1-Entrevista a pacientes 2-Aislamiento de la bacteria Helicobacter pylori (HP )

3-Traslado de biopsia.

4-Cultivo bacteriano.

5- Identificación de cepas.

6 Antibiograma.

7-Monitoreo postratamiento.

Tipo de Vivienda

Urbana 25 %

Rural 75 %

Urbana25%

Rural75%

Procedencia del Agua

No Potable 71.8 %

Pozo 20.5 %

Otros 7.7 %

71,8 %

20,5 %

7,7 %

0

20

40

60

80

Potable Pozo Otras aguas

Alimentos de su Dieta

Verduras y Hortalizas

90.0 %

Carne y Pollo 10.0 %

90 %

10 %

0102030405060708090

Verduras yHortalizas

Carne y Pollo

Consume alimentos preparados en la Calle

SISI 53.85 %

NONO 46.15 %

53,85 %

46,15 %

42

44

46

48

50

52

54

SI come NO come

Síntomas presentados

Ardor 20.0 %

Dolor 21.0 %

Acidez 10.0 %

Reflujo 5.0 %

Vómitos con sangre

5.0 %

Otros 39.0 % 20 21

10

5 5

39

0

5

10

15

20

25

30

35

40

Ard

or

Dol

or

Aci

dez

Vom

itos

co

n sa

ngre

Ref

lujo

Otr

os

Tiempo de presentar síntomas

1-5 años 51.2 %

Mayor de 5 años 15.4 %

Mayor de 10 años 28.0 %

51,2 %

15,4 %28 %

0102030405060

1 - 5 años mayor de 5años

mayor de 10años

Pacientes tomando antibióticos

No tomaba 85.0 %

Otros Medicamentos 15.0 %

85 %

15 %0

20

40

60

80

100

NO tomabaantibióticos

Otrosmedicamentos

Pacientes que FUMAN 43.59 %

Pacientes que BEBEN 33.83 %

43,59%33,83%

0

10

20

30

40

50

Pacientes quefuman

Pacientes quebeben

Enfermedades Diagnosticadas

Gastritis crónica 48.72 %

Metaplasia intestinal

12.82 %

48,72

12,82

0

10

20

30

40

50

Po

rce

nta

je

Gastritis crónica Metaplasiaintestinal

En la 2ª Etapa

2.1-Aislamiento 3.1 Traslado de biopsia a laboratorio de Microbiología de CENSALUD.4.1 Cultivo de cepas.5.1 Identificación de cepas.Se han procesado un total de 68 muestras de antro pilórico y cuerpo, obtenidas de pacientes adultos de las cuales 42 son positivas a HP y de este total un 76.19% corresponden a muestras de antro y un 57.14% al cuerpo. Las cepas positivas son preservadas en caldo BHI infusión Cerebro Corazón,con 20 % glicerina , almacenadas a – 70 º C para posteriores ensayos.Según el Análisis Histopatológico en mucosa gástrica corporal y pilórica se presenta: metaplasia intestinal en 40 % casos lo que indica la evolución crónica de la infección, con displasia en 11.76 % de casos y de leve intensidad. Ningún caso de cáncer, un 35.29 % casos de atrofia gástrica y 11.76 % de pólipos hiperplásicos.Las biopsias han presentado discreto a moderado infiltrado linfocitario, acompañado de eosinofilia.

Se encontró gastritis crónica folicular con aparecimiento de linfonodos.

Cultivo de Cultivo de H.pylorIH.pylorIMEDIO AGAR CAMPYLOBACTERMEDIO AGAR CAMPYLOBACTER

Jarra anaeróbica. Jarra anaeróbica. Incubación COIncubación CO22 al 10% al 10%

Microscopía H. PyloriMicroscopía H. Pylori

Microscopía Microscopía H.pyloriH.pylori

Corte Histológico (Corte Histológico (H.pylori)H.pylori)

Ulcera Duodenal (Ulcera Duodenal (H.pylori)H.pylori)

En la 3ª etapaEn la 3ª etapa

Ensayo de Antibiosis con los siguientes antibióticos Amoxicilina,Tetraciclina , Metronidazole,Ranitidina, Rifampicina, Trimetroprin,Vancomicina, Furazolidona.Se ensayarán otros medicamentos como: Lansoprazol, Omeprazole, Claritromicina. En la En la 4ª etapa4ª etapaMonitoreo a pacientes post –Tratamiento.Continuidad del proyecto: Tipificación de las Cepas.

Ensayo de AntibiosisEnsayo de Antibiosis

DISCUSION DE RESULTADOS.

1.El Helicobacter pylori en sexo femenino esta presente en un 78% y 22% en el sexo Masculino. 2.La edad entre 50 - 70 años es determinante en la incidencia de (H.p) en nuestro estudio, que es cuando se manifiestan la patología.3.Existen diferencias significativas entre el área urbana y el área rural,hay mayor prevalencia en el área rural,relacionado con consumo de hortalizas y el agua posiblemente no potable.4.El consumo de alimentos preparados en la calle esta en relación con pacientes Hp positivo.Por lo que la presencia de la bacteria esta vinculado con el grado de desarrollo económico del país y que los factores medio ambientales influyen en la epidemiología de la enfermedad.

 

5.Existe clara correlación entre la infección por H.P. y la patología gastroduodenal: gastritis crónica en un 48.72 % úlcera gástrica, ulcera duodenal.

La gastritis crónica es precursor del Cáncer Gástrico, la infección precede al desarrollo del cáncer.

6. Los pacientes presentan síntomas como ardor , dolor, acidez estomacal,con un tiempo de 1-5 años.

7. Ningún paciente tomaba antibióticos lo cual no influyó en los resultados del estudio .

8. Un alto porcentaje de pacientes son adictos a fumar y beber 9. La infección existe desde la infancia, pero las lesiones se

van desarrollando con el paso del tiempo a partir de las micro erosiones glandulares y con la concurrencia de factores ambientales, individuales, hábitos alimenticios, etc., que facilitan el desarrollo de la patología.