İnsan primer bronş epitel ve akciğer hücre dizi kültürlerinin in vitro ortamda elde...
DESCRIPTION
İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*. Hasan Bayram 1,2 , Bülent Göğebakan 2 , Öner Dikensoy 1 , Erhan Ekinci 1 . Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, Göğüs Hastalıkları AD 1 , - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/1.jpg)
İnsan Primer Bronş Epitel ve İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In In
VitroVitro Ortamda Elde Edilmesi* Ortamda Elde Edilmesi*
Hasan Bayram1,2, Bülent Göğebakan2, Öner Dikensoy1, Erhan Ekinci1.
Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, Göğüs Hastalıkları AD1,
Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, Hücre Kültürü Laboratuarı2.
*Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi tarafından desteklenmiştir.
![Page 2: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/2.jpg)
Giriş-1Giriş-1• Hücre dizileri ve primer hücre kültürleri
hücrenin morfolojik, fizyolojik ve biyokimyasal özelliklerinin anlaşılmasında
• Hastalıkların patogenezlerinin araştırılması, terapötik girişimlerin etkilerinin değerlendirilmesinde yararlı bir model oluşturmaktadırlar
![Page 3: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/3.jpg)
Giriş-2Giriş-2
• Hücre dizileri ve primer hücre kültürleri deneysel çalışmalarda dünyada yaygın olarak kullanılmaktadır
• Türkiye’de hücre kültürlerinin üretimi ve araştırmalarda kullanımı sınırlıdır
![Page 4: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/4.jpg)
Giriş-3Giriş-3
• Akciğer hücre dizilerinin (A549) kültürü sadece birkaç merkezde yapılabilmektedir
• Akciğerin primer hücre kültürleri ülkemizde henüz yapılmamaktadır.
![Page 5: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/5.jpg)
AmaçAmaç• Çeşitli nedenler ile pnömonektomi veya
lobektomi yapılan hastaların akciğer eksplantlarından veya bronş biyopsilerinden primer bronş epitel hücre kültürü elde etmek.
• Alveoler epitel hücre dizi (A549) kültürleri elde etmek.
![Page 6: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/6.jpg)
MetMetodod• İnsan primer bronş epitel hücre kültürlerinin
kütür kaplarında üretilmesinde Devalia ve ark.’nın metodu ve bu yöntemin biyopsiler için uyarlanmış şekli kullanıldı.(Devalia JL et al, Respir Med 1990)(Bayram H et al, J Allergy Clin Immunol 1998)
• A549 hücre dizilerinin ‘flask’ ve 12 kuyucuklu kültür ‘plate’ lerinde üretiminde daha önce uyguladığımız metod kullanıldı(Bayram H et al, Eur Respir J 2006)
![Page 7: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/7.jpg)
Primer Bronş EpitelPrimer Bronş EpitelHücre KültürleriHücre Kültürleri
![Page 8: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/8.jpg)
Kültür Kap ve ‘Plate’ leriKültür Kap ve ‘Plate’ leri
Hücre Kültür Kapları(BD Primaria™)
24-kuyucuklu ‘plate’(BD Primaria™)
![Page 9: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/9.jpg)
Kültür VasatıKültür Vasatı• ‘Medium 199’
– Foetal bovine serum/Nu Serum4 (2.5ml)
– (2.5ml)/1ml bovine pancreatic insulin (2.5 g/ml)
– 1ml human transferrin (2.5 g/ml)
– 1ml epidermal growth factor (20g/ml)
– 1ml hydrocortisone (0.36 g/ml)– 1ml L-glutamine (0.02mg/ml)– 1ml antibiyotik/antimikotik
solüsyon• 100ml tamamlanır ve 0.2m por
çap filtreden geçirilir
![Page 10: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/10.jpg)
Doku Diseksiyon Materyalinin YıkanmasıDoku Diseksiyon Materyalinin Yıkanması
![Page 11: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/11.jpg)
Bronş Biyopsi/Eksplantlarının Bronş Biyopsi/Eksplantlarının DiseksiyonuDiseksiyonu
![Page 12: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/12.jpg)
Eksplantların kültür kaplarına transferi
![Page 13: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/13.jpg)
Eksplantlar kültür kaplarında
![Page 14: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/14.jpg)
Kültür ortamında 3. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x100)
![Page 15: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/15.jpg)
Kültür ortamında 8. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x200)
![Page 16: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/16.jpg)
Kültür ortamında 22. gün (eksplant alınmış)(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x200)
![Page 17: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/18.jpg)
24-kuyucuklu Plate’e Transfer24-kuyucuklu Plate’e Transfer
![Page 19: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/19.jpg)
Alveol Epitel Hücre Dizileri Alveol Epitel Hücre Dizileri (A549)(A549)
![Page 20: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/20.jpg)
Kültür Flask ve ‘Plate’ leriKültür Flask ve ‘Plate’ leri
Hücre Kültür Flask ve 12-Kuyucuklu ‘plate’ (Sigma, Corning™)
![Page 21: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/21.jpg)
Kültür VasatıKültür Vasatı
• DMEM – %10 Foetal bovine
serum– L-Glutamine
![Page 22: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/22.jpg)
A549- Flask içindeA549- Flask içinde
![Page 23: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/23.jpg)
A549-1.günA549-1.gün
A549 Kültür ortamında 1. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x300)
![Page 24: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/24.jpg)
A549 Kültür ortamında 5. gün(Hoffman Modulation Contrast Işık Mikroskopu, x300)
![Page 25: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/25.jpg)
12-Kuyucuklu ‘Plate’e Transfer12-Kuyucuklu ‘Plate’e Transfer
![Page 26: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/26.jpg)
ÖzetÖzet• Primer bronş epitel hücre kültürleri Türkiye’de
ilk kez biyopsi eksplantı ve akciğer rezeksiyon materyalinden üretildiler
• Bu kültür modelinde primer hücreler ilk kez 24-kuyucuklu ‘plate’e transfer edilip üretildiler
• Alveol epitel hücre dizi (A549) kültürleri ülkemizde bir göğüs hastalıkları laboratuarında ilk kez yapıldı
![Page 27: İnsan Primer Bronş Epitel ve Akciğer Hücre Dizi Kültürlerinin In Vitro Ortamda Elde Edilmesi*](https://reader030.vdocuments.site/reader030/viewer/2022033015/568153a1550346895dc1a541/html5/thumbnails/27.jpg)
Sabrınız İçin Teşekkür EderimSabrınız İçin Teşekkür Ederim