insamantari artificiale noi
TRANSCRIPT
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
1/40
INSAMANTARILEINSAMANTARILE
ARTIFICIALEARTIFICIALE
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
2/40
Biotehnologie de generaia IBiotehnologie de generaia I--a, ce permitea, ce permite
multiplicarea descendenei unui masculmultiplicarea descendenei unui masculvaloros, dincolo de limitele biologice alevaloros, dincolo de limitele biologice aleacestuiaacestuia
Aplicat pe scar larg la bovine i ovine i,Aplicat pe scar larg la bovine i ovine i,ntrntr--o msur mai mic, la celelalte speciio msur mai mic, la celelalte specii(cabaline, suine, canide)(cabaline, suine, canide)
Ofer avantaje de ordinOfer avantaje de ordin ::
EconomicEconomic
ZootehnicZootehnic ameliorarea raselorameliorarea raselor
MedicalMedical
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
3/40
Indicaiile de ordin clinic Deficiena anatomic la unul dintre parteneri ce nu permite
monta natural (angustia vulvei sau a vaginului, diferenamare de greutate sau talie, etc.);
Masculul refuz monta deoarece actul montei i provoacdurere;
Sunt cazuri n care masculul i femela nu se accept reciprocdin pur antipatie, n timp ce cu ali parteneri ar fi dispui sse monteze;
Caracterul dominant puternic al femelei ce atrage dup sineinhibarea masculului;
Lipsa de experien a unuia dintre parteneri poate faceimposibil monta natural.
Momentul nepotrivit
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
4/40
Avantaje economice
Elimin costurile, riscurile si timpul legate de
transportul femelei.
D.p.d.v. al proprietarului masculului, dac acesta are un
an expozitional foarte bun, inseminarea artificialpermite recoltarea spermei si nsmntarea femelelor
fr ntreruperea activittilor curente.
Materialul seminal congelat permite reproducerea unui
mascul de mare valoare o lung perioad de timp dupmoartea sa
Riscul transmiterii bolilor venerice este minimalizat
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
5/40
Cuprinde patru etape principale :Cuprinde patru etape principale :
Recoltarea spermeiRecoltarea spermei Examenul materialului seminalExamenul materialului seminal
Ex. MacroscopicEx. Macroscopic
Ex. MicroscopicEx. Microscopic
Ex. complementareEx. complementare
Diluarea si conservarea materialului seminalDiluarea si conservarea materialului seminal
RefrigerareaRefrigerarea
CongelareaCongelarea In gheata carbonicaIn gheata carbonica
In azot lichidIn azot lichid
Inocularea materialului seminalInocularea materialului seminal
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
6/40
Reuita I.A. depinde de trei puncte cruciale:
Calitatea spermei;
Alegerea momentului optim de I.A.;
Alegerea metodei adecvate de inseminare.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
7/40
A. Recoltarea spermeiA. Recoltarea spermei
Indiferent de metoda de recoltare utilizata, aceastatrebuie sa fie precedata de examenul general almasculului, inclusiv al aparatului genital, cu efectuareade teste specifice (ex.: examen serologic pentrubruceloza).
Recoltarea se poate face in prezenta unei femele aflatein estru sau cu ajutorul feromonilor artificiali (vier,caine)
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
8/40
Examenul reproducatorului mascul
Anamneza
regimul de mont;
comportamentul n timpul montei;
rezultatele montelor anterioare;
afeciuni recente, ndeosebi ale sferei genitale;
eventualele tratamente efectuate i rezultatul lor;
regimul de utilizare la munc, sport sau antrenament,
performanele individuale
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
9/40
Examenul reproducatorului mascul
Inspectia Generala
Locala
Reflexele sexuale Apropierea
Erectia Saltul
Intromisiunea
Ejacularea
Palpatia
Ecografia testiculara si prostatica Examene serologice pt bolile veneriene (bruceloza,
herpesviroza etc.)
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
10/40
A. Recoltarea spermeiA. Recoltarea spermei
1. Vaginul artificial1. Vaginul artificial Imita conditiile de temperatura, presiune siImita conditiile de temperatura, presiune si
lubrifiere din vaginul femelei in estrulubrifiere din vaginul femelei in estru
Alcatuit din : carcasa cu robinet, camasa dinAlcatuit din : carcasa cu robinet, camasa dinlatex + inele de cauciuc, pahar colector +latex + inele de cauciuc, pahar colector +
protectieprotectie
Recoltarea se poate face pe o femela in calduriRecoltarea se poate face pe o femela in calduri
spontane sau induse hormonal, pe manechinspontane sau induse hormonal, pe manechinsau pe un alt masculsau pe un alt mascul
Folosit la taur, armasar, berbec, vier, caineFolosit la taur, armasar, berbec, vier, caine
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
11/40
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
12/40
2. Electroejacularea2. Electroejacularea
Stimularea centrilor nervoStimularea centrilor nervoi ai ereci ai erecieiiei i ejaculi ejaculrii dinrii din
mmduva lomboduva lombo--sacralsacral, cu ajutorul unui curent electric de, cu ajutorul unui curent electric dejoasjoas tensiunetensiune
Se practicSe practic la taur (electrod endorectal bipolar), berbecla taur (electrod endorectal bipolar), berbec
(electrod endorectal monopolar(electrod endorectal monopolar i electrod lombari electrod lombar
monopolar)monopolar) i motani motan
Avantaj :Avantaj : poate fi folositpoate fi folosit la masculii cu impotenla masculii cu impoten dedecopulacopulaie (impotentia coeundi)ie (impotentia coeundi)
Dezavantaje :Dezavantaje : ejaculatul este inferior d.p.d.v. cantitativ siejaculatul este inferior d.p.d.v. cantitativ si
calitativ celui obtinut cu vaginul artificial ; uneori se poatecalitativ celui obtinut cu vaginul artificial ; uneori se poate
produce ejacularea in furouproduce ejacularea in furou
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
13/40
3. Metoda prezervativului (condomului)3. Metoda prezervativului (condomului) Se practica uneori la armasarSe practica uneori la armasar
Pe post de prezervativ, se poate utiliza o manusaPe post de prezervativ, se poate utiliza o manusaobstetricala pentru ETRobstetricala pentru ETR
4. Metoda manuala (masturbarea)4. Metoda manuala (masturbarea) Se practica la vier si la caineSe practica la vier si la caine
La vierLa vier elementul esential este presiuneaelementul esential este presiuneaexercitata de operator cu degetele la nivelulexercitata de operator cu degetele la nivelul
portiunii spiralate a penisului, analog papilelorportiunii spiralate a penisului, analog papilelorcervicale ale scroafeicervicale ale scroafei
La caineLa caine presiunea trebuie exercitata la nivelulpresiunea trebuie exercitata la nivelulbulbilor glandului, iar penisul se orienteazabulbilor glandului, iar penisul se orienteaza
posterior atunci cand masculul paseste peste manaposterior atunci cand masculul paseste peste manaoperatoruluioperatorului
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
14/40
5. Masajul transrectal al veziculelor seminale5. Masajul transrectal al veziculelor seminalei al ampulelor canalelor deferentei al ampulelor canalelor deferente
Este o metod practicat uneori la taur, n cazulEste o metod practicat uneori la taur, n cazulimpotenei de copulaieimpotenei de copulaie
Prezint dezavantajul c ejacularea se produce frPrezint dezavantajul c ejacularea se produce frerecie, n furou, iar n cazul masajului preaerecie, n furou, iar n cazul masajului preaenergic al gtului vezici urinare exist risculenergic al gtului vezici urinare exist risculamestecului spermei cu urina.amestecului spermei cu urina.
Avantajul principal const n simplitatea metodei,Avantajul principal const n simplitatea metodei,care nu necesita nici un fel de materialecare nu necesita nici un fel de materialesuplimentaresuplimentare
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
15/40
B. Examinarea materialului seminalB. Examinarea materialului seminal
EsteEste precedatprecedat ii corelatcorelatntotdeaunantotdeauna cucu examenulexamenul fizicfizicgeneralgeneral alal reproducreproductoruluitoruluimasculmascul..
11..ExEx.. macroscopicmacroscopic::
VolumVolum se apreciazse apreciaz imediatimediatdupdup recoltare prin citire directarecoltare prin citire directa
n paharul de recoltaren paharul de recoltare
CuloareCuloare-- se apreciazse apreciaz subiectivsubiectivimediat dupimediat dup recoltarerecoltare i variazi variazn funcn funcie de specie, concentraie de specie, concentraiaian spermatozoizi sau prezenn spermatozoizi sau prezenaasubstansubstanelor strelor strineine n ejaculatn ejaculat(s(snge, puroi, urinnge, puroi, urin, etc)., etc).
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
16/40
pHpH apreciat cu ajutorul pHapreciat cu ajutorul pH--metrelor saumetrelor sau
cu hcu hrtie indicatoare specialrtie indicatoare special; exist; exist oocorelacorelaie directie direct ntre calitatea spermeintre calitatea spermei ii
pHpH--ul acesteia (cu cul acesteia (cu ct proba de spermt proba de sperm esteeste
mai bunmai bun cu atcu att estet este mai acidmai acid)) MirosMiros -- sperma normalsperma normal este inodoreste inodor;;
prezenaprezena urinurineiei,, aa puroiulpuroiuluiui,, aa ssngelngeluiui sausau aaununoror medicamentemedicamente n ejaculatn ejaculat modificmodific
mirosulmirosul acestuiaacestuia
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
17/40
2. Ex.2. Ex. mmicroscopic:icroscopic:
ConcentraConcentraia materialului seminalia materialului seminal
--tehnicatehnica hemocitometrichemocitometric:: adaptatadaptat dupdup tehnicatehnica dedenumnumrarerare aa globulelorglobulelor roroiiii..
-- metodametoda electronicelectronic (SQA)(SQA):: multmult maimai rapidrapid ii maimai exactexact..PePe bazabaza densitiidensitii opticeoptice determindetermin concentraia,concentraia,mobilitateamobilitatea ii procentulprocentul dede spermatozoizispermatozoizi frfr anomaliianomalii..
-- sistemelesistemele computerizatecomputerizate dede analizanaliz aa spermeispermei (CASA)(CASA)::softulsoftul esteeste proiectatproiectat pentrupentru aa determinadetermina concentraconcentraia,ia,viabilitatea,viabilitatea, morfologiamorfologia ii mobilitateamobilitatea spermatozoizilorspermatozoizilor..EsteEste foartefoarte rapidrapid ii precisprecis..
Azoospermia=
absen=
absena spermatozoizilora spermatozoizilor n ejaculatn ejaculat Oligozoospermia = un num= un numr scr sczut de spermatozoizizut de spermatozoizi nnejaculat (raportat la specie)ejaculat (raportat la specie)
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
18/40
Mobilitatea spermatozoizilorMobilitatea spermatozoizilor- Mobilitatea generalaa spermei se apreciaza cat mai repede dupa
recoltare prin examenul in picatura suspendata (o picaturade sperma nediluata se depune pe o lama); miscarea in val(taur, tap) se noteaza cu 5, iar lipsa de miscare cu 0
- Mobilitatea individualase apreciaza prin examinarea uneipicaturi de sperma proaspata diluata depusa intre lama silamela; se vor aprecia miscarea de inaintare, traiectoria
liniara si viteza de inaintare (velocitatea). Mobilitateaindividuala se noteaza pe o scara de la 0-5, sperma normalaregasindu-se in intervalul 2,5-5.
Astenozoospermia defineste o mobilitate foarte scazuta aspermatozoizilor.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
19/40
Morfologia spermatozoizilor Se apreciaz imediatdup recoltare prin examen microscopic (100x cu
imersie) i colorare (albastru de metilen, violet degeniana, tu de China, opal-bleu, albastru-tripan-Giemsa, eozin-negrozin, Spermac etc). Oferposibilitatea de a pune n eviden spermatozoizii
imaturi, cu anomalii (majore sau minore) sau mori.
Teratozoospermia = exces de forme teratologice ale
spermatozoizilor dintr-un ejaculat. ntr-un ejaculatnormal procentul spermatozoiziloranormali, imaturisau mori = max 20%.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
20/40
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
21/40
Principalele anomalii morfologice ale spermatozoizilor:majore i minore
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
22/40
ViabilitateaViabilitatea
Tehnici de colorare intravitale (eozinaTehnici de colorare intravitale (eozina--negrozina, albastrunegrozina, albastrutripantripan--Giemsa etc.) sau tehnici de colorare fluorescenta,Giemsa etc.) sau tehnici de colorare fluorescenta,urmate de examinare microscopica simpla sau specialaurmate de examinare microscopica simpla sau speciala(microscop cu lumina polarizata, microscop cu contrast de faza(microscop cu lumina polarizata, microscop cu contrast de fazasau cu lumina fluorescenta)sau cu lumina fluorescenta)
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
23/40
3. Ex. complementare:3. Ex. complementare:
Testul hipoosmotic permite aprecieri privind integritatea
membranei spermatozoidului. n mediul hipoosmotic,spermatozoizii normali prezint gonflri ale membranei dinzona piesei intermediare i/sau a celei din regiunea cozii.
Proba redox urmrete aprecierea metabolismului celulelorspermatice prin intermediul unei substante colorate peprincipiul masurarii capacitatii de reducere a (albastru demetilen); cu cat decolorarea amestecului este mai rapida cuatat proba de sperma este mai buna.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
24/40
Coloraia Spermac - Permite identificareastatusului membranelor acrozomului
Analiza structurii cromatineispermatozoizilor(SCSA) pune n eviden
modul n care are loc fragmentarea ADN. Ex. bacteriologic
- presupune recoltarea separat a fraciunilorejaculatului i realizarea de nsmnri pe medii
pentru germeni aerobi, anaerobi, micoplasme ifungi; n mod normal, n sperm se gsescaproximativ 10.000 celule bacteriene/ml.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
25/40
Ex. imunologic
- urmrete detectarea anticorpilor antispermatici care araltera capacitatea fecundant a spermatozoizilor. Ruperea
barierei hemato-testiculare (n traumatisme, infecii)
permite contactul spermatozoizilor cu sngele circulant=> sinteza de ctre propriul sistem imun a anticorpilorantispermatici
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
26/40
C. DiluareaC. Diluarea i conservarea materialului seminali conservarea materialului seminal
DiluareaDiluarea materialuluimaterialului seminalseminal se realizeaz n scopulfracionrii ejaculatului =mai multe doze de inseminare.
Mediile de diluie trebuie s conin:
- substane energetice (glucide);- substane crioprotectoare (glicerina, lecitina din glbenuulde ou);- substane tampon - menin constant pH-ul spermei n timpuldilurii i conservrii (citrai, fosfai, tartrai, etc);
- substane care s activeze mobilitatea spermatozoizilor ncile genitale femele (mucinaza);- substane care s mpiedice dezvoltarea florei microbiene(antibiotice, sulfamide)
Diluantul trebuie s fie izoton i izoterm cu sperma, s aib
acelai pH cu aceasta, s se prepare uor, s fie economic, s-imen in ro riet ile un tim ndelun at.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
27/40
Conservarea materialului seminal urmrete
meninerea mobilitii i capacitii fecundante aspermatozoizilor un timp ct mai ndelungat, nafara cilor genitale femele.
Principiul care st la baza crioconservriimaterialului seminal = reducerea temperaturiispermei determin o scdere a activitiimetabolice a spermatozoizilor permind stocarea
lor.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
28/40
Conservarea materialului seminal se poate realizaprin:
-refrigerare (pstrare la 2-8 grade Celsius)
-congelare (pstrare n azot lichid la -196 gradeCelsius).
Procedee de congelare a materialului seminal:- congelarea n paiete (mari, mijlocii i mici);
- congelarea n fiole;
- congelarea n pilule n ghea carbonic la 79 grade Celsius abandonat la ora actual
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
29/40
Etapele congelrii
Centrifugarea pt. A ndeprta excesul defluid prostatic
Diluarea
Echilibrarea termic pt a evita ocul termicsperma este refrigerat (1-4 ore) nainte deplonjarea n azotul lichid
Ambalarea se prefer paietele: volum mic,congelare uniform, se pot marca ptidentificarea animalului i data recoltrii
Congelarea propriu-zis
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
30/40
Decongelarea materialului seminal
Exista o corelatie intre ratele de racire si cele de decongelare se respecta instructiunile furnizate de firma/persoana care afacut congelarea
Decongelarea n baie de ap caldPt. paietele de 0,5 ml: 8 secunde la 70C sau 30-60 secunde la35C
In apa cu gheata timp de 3 minute
Decongelare in buzunar
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
31/40
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
32/40
D. Inocularea materialului seminalD. Inocularea materialului seminal =depunerea materialului seminal n cile genitale
femele.
Principii
- n momentul optimpentru fiecare specie;
- la locul de elecie caracteristic fiecrei specii;
- instrumentarul folosit la inseminare s fiesterili
nclzitla 38 C;- s se evite traumatizarea mucoasei vestibulo-vaginale, cervicale sau uterine n timpul inoculrii.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
33/40
PentruPentru spermasperma refrigeratrefrigerat:: -- flaconulflaconul cucu materialmaterial seminalseminal
sese laslas lala temperaturatemperatura camereicamerei 55 minuteminute;; sese utilizeazutilizeaz
spermasperma carecare conconineine celcel pupuinin 6060%% spermatozoizispermatozoizi cucu
mimiccriri vioaievioaie dede naintarenaintare..
PentruPentru spermasperma congelatcongelat:: -- sese inoculeazinoculeaz dupdup
decongelaredecongelare;; sese admiteadmite inoculareainocularea spermeispermei carecare conconineine
minimumminimum 3535--4040%% spermatozoizispermatozoizi cucu mimiccriri vioaievioaie dedenaintarenaintare..
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
34/40
Inocularea spermei laInocularea spermei la vaca::
-- se inoculeaz o singur doz de material seminal la
12 ore de la depistarea estrului--nn canalul cervicalcanalul cervicalsausau nn cavitatea uterinacavitatea uterina;;
-- metoda rectometoda recto--vaginalvaginal/bimanual/bimanual (cel mai frecvent)(cel mai frecvent)sausau metoda cu speculum vaginal.metoda cu speculum vaginal.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
35/40
Inocularea spermei la iap:
-- depistareadepistarea momentuluimomentului optimoptim pentrupentru II..AA.. sese realizeazrealizeaz
prinprin ultrasonografieultrasonografie // ETRETR inin dinamicadinamica (evoluia(evoluia mrimiimrimiiii formeiformei folicululuifoliculului ovarianovarian,preovulator,preovulator 3535--4040 mmmm))
-- cucu 1212 oreore nainteanaintea ovulatieiovulatiei;;
-- nn cavitateacavitatea uterinuterin..
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
36/40
LaLa oaieoaie::--imediatimediat cece esteeste depistatadepistata inin calduricalduri (berbecul(berbecul incercator)incercator) sisi seserepetarepeta dupadupa 1212--1818 oreore;;
-- cucu unun speculumspeculum vaginalvaginal sisi seringaseringa dede inoculareinoculare sese inoculeazainoculeaza00,,11 mlml spermasperma lala nivelulnivelul canaluluicanalului cervicalcervical..
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
37/40
La scroafa:
- Depistarea: cu vier ncerctor / apariia imobilizrii la
ngrijitor- se folosesc catetere cu oliva sau spiralate asemanator
portiunii libere a penisului la vier (cateterul Melrose);
- varful pipetei se angreneaza in cervix, iar materialulseminal se depune in corpul uterin.
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
38/40
La catea:
Progesteron(ng/ml)
Momentul montei
0 1 n 36 48 ore
1 3 n 36 48 ore
3 6 n 24 36 ore
6 12 n 9 24 ore
> 12 n 12 ore ( < 24ore)
- detectarea momentuluioptim pentru I.A.:ex. citovaginal (celuleSchollen) i prin dozareaprogesteronului plasmatic
(peste 8 ng/ml) sau a LH-ului;- se mai pot utiliza
vaginoscopia si examenulecografic al ovarelor
- intravaginal, intracervicalsau intrauterin
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
39/40
Examenul citovaginal hormonal - estrus
celule superficiale
cheratinizate, anucleate,
grupate n ciorchine
Eritrocitele sunt rare sauchiar absente
Fondul frotiului este
curat lipsit de mucus i
detritusuri celulare
-
8/6/2019 insamantari artificiale noi
40/40
Ceaua se va menine cu trenul post. ridicat 15 min pentru afacilita pasajul spermatozoizilor n uter, timp n care se va masaclitorisul (stimuleaz contraciile vaginale i uterine
antiperistaltice)