INMUNOFLUORESCENCIACHICO MARTINEZ EDINSON DARIO

MANJARRES OLIVEROS CLAUDIA MARCELA

DOCENTE:

ROLDAN MENCO CONSUELO

INMUNOFLUORESCENCIA

es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula y se aplica en diagnósticos de patologías cutáneas, renales e investigación.

TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA

PRIMARIA O (IFD) : permite la detección de antígenos en un paso. Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato de fluoresceína. La reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.

SECUNDARIA O (IFI): consta de dos etapas y permite la detección de anticuerpos circulantes.

ETAPAS DE LA IFI:

PRIMERA: se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato conocido específico (células que contiene virus, T. gondii, T. pallidum, etc.) sobre él se coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es positiva se dará formación de complejo antígeno-anticuerpo no visible ya que el anticuerpo no estaba marcado

SEGUNDA: se agrega una anti-inmunoglobulina humana marcada, que reaccionará con el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.

INMUFLUORESCENCIA IFD - IFI

LIMITACIONES

Al igual que la mayoría de las técnicas de fluorescencia, un problema muy significativo con la inmunofluorescencia es el fotoblanqueo. Es decir la pérdida de la actividad fluorescente causada por la exposición a la luz. Esta pérdida de actividad puede ser controlada reduciendo la intensidad o el tiempo de exposición a la luz, incrementando la concentración de fluoróforo, o empleando fluoróforos mas robustos que sean menos propensos al fotoblanqueo.

MICROSCOPIO DE IFfuente de luz (lámpara de mercurio o

halógena)

La cual

debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta

conforma

Filtro de excitación Filtro de selección Filtro de barrera

es el de calor y está ubicado entre la fuente

de luz y el filtro de excitación en los

microscopios de luz transmitida y entre la

fuente de luz y el espejo dicrómico en los

microscopios de luz incidente

colocado antes del ocular para prevenir

daños retinianos que podrían ser

causados por rayos ultravioleta que

escapan el espejo dicrómico

tiene por objeto permitir el paso de ondas de luz con longitud que caiga en el rango azul con el fin que el preparado sea alcanzado exclusivamente por la luz azul y produzca emisión de luz fluorescente.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Ventajas:

• Se pueden obtener resultados rápidos.

• No es necesario realizar cultivos.

• Se puede identificar microorganismos específicos en un grupo mixto.

• Determina la identidad de un organismo muerto. Es sensible.

DESVENTAJAS

• Costos en reactivo y equipo

• Debe ser realizado por personal muy especializado.

• Los resultados no son 100% específicos

APLICACIONES

• Técnicas analíticas (cuali-y cuantitativas) en Química y Bioquímica.

• Métodos inmunológicos de diagnóstico médico.

• Procedimientos microscópicos en Microbiología, Genética, Histología, Histoquímica, Biología Celular, Biología Molecular, Biología del Desarrollo, Patología (sondas vitales, ensayos de viabilidad, indicadores,inmunofluorescencia, FISH).

• Análisis poblacional de células (citofluorimetría de flujo).

APLICACIONES

Treponema Pallidum agente etiológico de la Sífilis. Determinación por inmunofluorescencia donde se observa la forma de espiroqueta

Anticuerpos anti Toxoplasma gondii, agente etiológico de la toxoplasmosis. El sustrato antigénico utilizado es una suspensión de Toxoplasma gondii. Detecta antígenos de membrana .

Virus respiratorios Virus Influenza B (IFD detección de antígeno)

GRACIAS