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PRÁCTICA 01
Equipos, instrumentos e insumos del Laboratorio de Microbiología Ambiental
I. OBJETIVOS
Identificar y demostrar los equipos principales correctamente.
Conocer los la utilidad de los principales equipos del laboratorio para
su buen uso.
Conocer los estándares técnicos y de seguridad propios de un
laboratorio.
Conocer las medidas y volúmenes de cada material.
Conocer las temperaturas establecidas de los equipos de laboratorio
para su mejor control.
II. INTRODUCCIÓN
Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y
estudiar microorganismos, que se encuentran en muestras de agua, suelo,
aire y alimentos además de muestras clínicas; para su buen uso es
necesario conocer el fundamento y manera correcta de uso de los
principales equipos del laboratorio así como de los instrumentos, insumos y
demás; para comprender así mejor los distintos análisis microbiológicos.
III. Equipos, instrumentos e insumos (ver anexo 1)
Microscopio binocular Lámina portaobjetos
LAMINILLAS CUBREOBJETOS CAMARA DE NEUBAUER
ACEITE DE INMERSION CENTRIFUGA
MEDIDOR DE PH BALANZA
AUTOCLAVE ESTUFA
BAÑO MARIA MEDIOS DE CULTIVO
BOTELLA CON TAPA PLACA PETRI
ASA DE SIEMBRA ESPATULA DRIGLASKY
TUBOS DE ENSAYO AUXILIAR DE PIPETEADO
PROBETA DESINFECTANTE
INDICADOR DE ESTERLIZACION –CALOR HUMEDO
INDICADOR DE ESTERLIZACION-CALOR SECO
IV. PROCEDIMIENTO
Observar con cuidado en el microscopio evitando
manipular con los dedos los lentes de los objetivos y del
ocular.
Colocar los tubos de ensayo en la
centrifugadora diametralmente opuesto uno al otro para un mejor equilibrio y no abrir hasta
que termine sus respectivas
La balanza analítica te da una mayor precisión de masa, antes de medir la
cantidad de masa de cualquier material cerrar la
puerta herméticamente.
En la balanza de precisión se tiene que
evitar colocar algún objeto y/o sustancia cerca que
altere la cantidad de masa que se va a medir.
La autoclave utilizada para esterilizar a calor
húmedo debe ser herméticamente cerrada
luego de colocar el material a esterilizar y al
finalizar el tiempo se debe esperar a que la presión esté en 1 para abrirlo.
V. ACTIVIDADES
La estufa u horno se utiliza como esterilizador
Baño maría o termostático utilizado
para desarrollar microorganismos en un
cultivo.
Placa Petri, material en la cual se colocan los medios de cultivos.
Los tubos de ensayo, materiales de vidrio en los
cuales se colocan sustancias determinada que pueden ser medios de cultivos líquidos. En caso se requiera calentar se puede utilizar el sujetador
de bureta.
a. Realice un mapa conceptual considerando los equipos de laboratorio
explicados en clase, indicar el principio y su importancia en el desarrollo
de las actividades prácticas.
b. Indicar los cuidados que se deben tener al manipular el microscopio.
c. ¿Qué equipos y/o instrumentos son necesarios para la cuantificación de
microorganismos?
EQUIPOS DE LABORATORIO
b. Indicar los cuidados que se deben tener al manipular el microscopio.
MICROSCOPIO
ÓPTICO
CENTRÍFUGA
MEDIDOR DE PH
BALANZA
AUTOCLAVE
ESTUFA
BAÑO MARÍA
PRINCIPIO: El objetivo de estas lentes es el de reducir la aberración cromática y la aberración esférica.
IMPORTANCIA: Se utiliza Para observar objetos muy pequeños y no captables a la vista humana.
PRINCIPIO: El centrifugado es una sedimentación acelerada, ya que la aceleración de la gravedad se sustituye por la aceleración centrífuga.
IMPORTANCIA: aplicación típica consiste en acelerar el proceso de sedimentación, dividiendo el plasma sanguíneo y el suero sanguíneo en un proceso de análisis de sangre.
PRINCIPIO: Cuando este electrodo se pone en contacto con una sustancia, esta acción genera una corriente eléctrica suave.
IMPORTANCIA: dispositivo para medir un rango potencial de "comportamientos" de una sustancia.
PRINCIPIO: Todo el conjunto dispone de un sistema de aseguramiento o bloqueo que permite a la palanca principal reposar de forma estable cuando no es utilizada.
IMPORTANCIA: Permite pesar las masas de manera más exacta, ya que esta posee 4 decimales. De esta manera es más exacta.
PRINCIPIO: Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida.
IMPORTANCIA: usada para esterilizar material de laboratorio.
PRINCIPIO: estufas de secado constan, por lo general, de dos cámaras: una interna y una externa.
IMPORTANCIA: La estufa de secado se emplea para esterilizar o secar el material de vidrio y metal.
PRINCIPIO: El baño de María o baño serológico para laboratorio es un equipo que se utiliza en laboratorios de química.
IMPORTANCIA: utiliza para el calentamiento indirecto, por convección térmica del medio y de sustancia.
Al ser el microscopio un aparato de precisión y, por lo tanto, delicado, es
muy conveniente asegurar un buen funcionamiento atendiendo siempre a las
siguientes normas:
1. Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos,
sujetándolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la
otra.
2. Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que
finalice la práctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe
mover él y no el microscopio.
3. Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
4. Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si se
ensucian dichas lentes se limpiarán con un paño suave de algodón, sin
utilizar ningún disolvente.
5. No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser
sustituidos, en cuyo caso la operación debe realizarse lo más
rápidamente posible, para evitar la entrada de polvo.
6. Asegurarse de que el portaobjetos está bien seco cuando va a ser
colocado sobre la platina.
7. Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que
evitar que el extremo del objetivo choque con la preparación. Para ello
acercaremos el objetivo a la preparación mirando lateralmente y luego,
mirando ya a través del ocular, enfocamos alejando el objetivo.
c. ¿Qué equipos y/o instrumentos son necesarios para la cuantificación de microorganismos?
Pinzas de pato
Manguera para vacío
Membrana Millipore estéril de 5 cm de diámetro y 0.45 µm de poro
Placa Petri de ENDO
Vaso de precipitado de 250 mL
Pinzas Millipore
Equipo Millipore para filtración (matraz, filtro, embudo) estéril
Mecheros
Gradillas
Etanol (96°) para flamear pinzas
Microscopio electrónico
Balanza analítica
Autoclave
Estufa
Cámara de neubauer
Aceite de inmersión
Láminas porta objetos
Láminas cubreobjetos
Baño maría
Centrífuga
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
a. Grainger, J., J. Hurts y D. Burdass. 2001. Basic Practical Microbiology: A
Manual. The Society gor General Microbiology. United Kingdom.
b. Aquiahuatl, M., M. Pérez. 2004. Manual de Prácticas del Laboratorio de
Microbiología General. Primera edición. Universidad Metropolitana,
Unidad Iztapalapa. México.
c. Bautista W. 2002. Manual de prácticas: Métodos Instrumentales de
Análisis. Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal.
Universidad Nacional de Trujillo.
d. Instituto Nacional de Salud. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS DE
ENSAYO, BIOMÉDICOS Y CLÍNICOS. Perú. Comité de Bioseguridad.
2005.
ANEXOSNOMBRE ASPECTOS DE IMPOPRTANCIA
FUNDAMENT USOS PRECAUCIONES TIPOS
O
MICROSCOPIO OPTICO
Observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista
Sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto
Nunca hay que tocar las lentes con las manos.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio
Compuesto de campó claro
Campo oscuro Microscopio
de fluorescencias
LAMINAS PORTAOBJETOS
Aparato donde se ponen muestras para ser analizadas
Para realizar las observaciones al microscopio.
Evitar tocar con los dedos la lámina portaobjetos
LAMINILLAS CUBREOBJETOS
Es una fina hoja transparente que se coloca sobre el porta objeto para una muestra
Para realizar las observaciones al microscopio.
Evitar tocar con los dedos la laminilla
CAMARA DE NEUBAUER
Es un instrumento utilizado para el conteo de células
realizar el recuento de esporas y células en un medio liquido
ACEITE DE INMERSION
Sirve para enfocar los rayos a la lámina
Observación de objetos muy, como las bacterias individuales y aplicaciones de alta resolución, como el Tirf y las aplicaciones de fluorescencia confocal.
Las reacciones y reactivos usados y los caducados deben de eliminarse como desechos especiales
Tipo A: baja viscosidad
Tipo B: alta viscosidad
CENTRIFUGA
Muestra para acelerar la
decantación o sedimentación
permite la separación de distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión
Analíticas Preparativas:
de mesa, de alta capacidad, de alta velocidad, ultracentrifugadoras
MEDIDOR DE PH
Mide el ph de una disolución
Mide un rango potencial de comportamientos de sustancias
el electrodo debe mantenerse húmedo siempre para evitar daños al mismo
De contenido de alcohol.
De grados Brix. De polarimetria De peso. Densidad. viscosidad color brillantez dureza
BALANZAdetermina densidades o pesos específicos
mide la masa de un cuerpo o sustancia química ,utilizando como medio de comparación la fuerza de la gravedad que actúa sobre el cuerpo
Balanzas mecánicas
Balanzas electrónicas
AUTOCLAVE
esteriliza medios de cultivo
Sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura.
El tipo olla de presión.
El de desplazamiento por la gravedad.
ESTUFAEsterilizar o secar el material
Se utiliza para secar y esterilizar recipientes de vidrio y metal en el laboratorio
No usar en la estufa materiales o sustancias que sean inflamables o explosivas. Evitar derrames interiores de soluciones acidas o que formen vapores corrosivos
Las que operan mediante convección natural
Las que operan mediante convección forzada
BAÑO MARIA
Da temperatura para el desarrollo de microorganismos.
se utiliza para el calentamiento indirecto, por convección térmica del medio y de sustancia
Al calentar solventes inflamables en pequeña cantidad, utilice un baño maría con el mechero apagado.
Baja temperatura
Alta temperatura
isotérmicos
NOMBREASPECTOS DE IMPORTANCIA
FUNDAMENTO USOS PRECAUCION
ES TIPOSMEDIOS DE CULTIVO
Crecimientos de bacterias
Permite seleccionar el crecimiento de un microorganismo
Esterilizar los materiales con los que se va a trabajar para realizar medios de
sólidos líquidos
cultivo
PLACA PETRI
recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos
Utilizado para poder observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas como químicas.Para el cultivo de bacterias y otras especies relacionadas
Utilizar implemento de protección antes de trabajar con organismos biológicos.
De cristal o de plástico desechables
ASA DE SIEMBRA
Para tomar una porción del cultivo y llevarlo a una placa petri
Se emplea para transportar o arrastrar o transvasar inóculos.realización de frotis
Asa de siembra estéril
Asa de siembra por radiación
Asa de siembra metálica
ESPATULA DRIGLASKY
Para la distribución uniforme en suspensiones bacteriológicas
Se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.
Espátula de Drigalski, cabezal recto
Espátula de Drigalski, cabezal curvo
TUBOS DE ENSAYO
permite preparación de soluciones
se utiliza para contener pequeñas muestras liquidas ,y prepara soluciones.
Tubos de vidrio borosilicatado (Pyrex)
Tubos de ensayo de material plástico,
AUXILIAR DE PIPETEADO
succionar un liquido
Succionar sustancias en pequeñas cantidades
las que son de goma blanda en toda su composición
las que son de plástico más duro
PROBETAInstrumento volumétrico de vidrio
instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes superiores y más rápidamente que las pipetas ,aunque con menos precisión
Probeta clase A : se usan mucho en validación de métodos analíticos
Probeta clase B: mediciones en las que no se requiere tanta
precisión. Mayormente son de plástico, su precio es bajo respecto a las probetas clase A.
INDICADOR DE ESTERLIZACION-CALOR SECO
Es un sistema apto para material termoressistente de acción germicida
Esteriliza metales y vidrios
Durante el ciclo esterilización no debería de abrirse la puerta de la estufa
INDICADOR DE ESTERLIZACION –CALOR HUMEDO
Sirve para esterilizar vidrio.acero y plásticos
Retirar el recipiente esterilizado cuando la presión sea uno
DESINFECTANTE
Se usa para destruir a los microrganismos ya que estos tienen propiedades toxicas
nunca debe llenarse un envase semivacío a partir de otro deben almacenarse en áreas secas,ventiladas y protegidas de la luz