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8/9/2019 INFORME 9 ANALISIS.docx

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INTRODUCCION

Las reacciones de aglutinacin y de precipitacin son la base de la mayor parte de

las tcnicas inmunolgicas. Su principio se basa en la reaccin antgeno-anticuerpo.

Para comprender lo anterior es necesario definir qu es un antgeno y unanticuerpo. Antgeno es una sustancia de alto peso molecular, con cierta rigidezestructural y que tiene la particularidad de ser parcialmente metabolizado! porclulas especializadas llamadas macrfagos, por lo tanto es capaz de generar una

respuesta inmune en un organismo que la detecte como un agente e"tra#o.

$ientras que un anticuerpo es una glicoprotena, producida por linfocitos %acti&ados, llamados clulas plasm'ticas, como respuesta a la presencia de unantgeno en el organismo, a su &ez los anticuerpos pueden ser producidos por lneas

celulares in &itro, como es el caso de la produccin de anticuerpos monoclonales.(ic)os anticuerpos llamados tambin inmunoglobulinas, se presentan en cincoclases principales, *g+, *g$, *gA, *g( e *g, que se diferencian entre s por suscaractersticas fsicas, qumicas y biolgicas.

La capacidad inmunognica de distintas partculas, es en orden decreciente la

siguiente protenas, glicoprotenas, polisac'ridos, lpidos y azcares. Las

reacciones de precipitacin son medibles en cantidad y son f'ciles de e/ecutar. Lastcnicas de aglutinacin son slo semicuantitati&as y algo m's difciles. Laaglutinacin de los antgenos nati&os insolubles o de las partculas recubiertas por

el antgeno puede e&aluarse a simple &ista con o sin la ayuda del microscopio. ntrelas &enta/as de las reacciones de aglutinacin est'n su alto grado de sensibilidad y

la enorme &ariedad de substancias identificables a tra&s del uso de partculas queest'n recubiertas por antgeno o por anticuerpo.

Segn 0oombs e"isten 1 requerimientos principales

en las pruebas de aglutinacin

2. (isponibilidad de una suspensin estable de clulas o de partculas.3. Presencia de uno o m's antgenos cercanos a la Superficie.

1. 0onocimiento de que los anticuerpos 4incompletos4 o no aglutinables no sonlocalizables sin modificacin 56eacciones antiglobulina7.


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IX. PRACTICA No 9: PRUEBAS SEROLGICAS: DETERMINACIN DEFIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS

AGLUTINACIONES

Marco terco

Mcro!o"o#a $e "a Sa"%o&e""a t'()La Salmonella typ)i es un bacilo gram negati&o,

E*tr+ct+ra a&t#&ca $e "a Sa"%o&e""a t'()l gnero Salmonella tiene una estructura antignica similar al resto deenterobacterias, con tres tipos de antgenos 5figura 37

2. Antgeno som'tico 587

3. Antgeno flagelar 597 o 5d71. Antgeno capsular o de en&oltura 5:i7 o 5;7 5especfico para Salmonella typ)i,

dublin, y paratyp)i 07

E*tr+ct+ra a&t#&ca $e "a Sa"%o&e""a

l antgeno som'tico 8, nombrado as del alem'n o)ne )auc), que significa sinmo&imiento, esta conformado por una cadena repetida de polisac'ridos, que )ace

parte del lipopolisacarido 5LPS7 de la pared celular< por lo general, el antgeno 8 noes nico51,=7, sino que esta constituido por di&ersos factores antignicos, algunos

de los cuales pueden ser comunes con otros serotipos y permiten di&idir las

Salmonellas en grupos 8, por e/emplo, 8> y 823 5figura 175?7. n cuanto a ladistribucin del antgeno 8 en los diferentes serogrupos de Salmonella, es deanotar que en el grupo (, la totalidad de sus @ serotipos consta de antgeno 8>,

sin embargo => de estos, adicionalmente e"presan 823< a diferencia de losserogrupos A y % en los cuales todos sus serotipos presentan 823, esto e"plica las

mltiples reacciones cruzadas en el test de Bidal con Salmonellas no typ)i lantgeno flagelar 9 deri&a su nombre igualmente del alem'n )auc), por el )alo

producido en un medio de culti&o a raz del mo&imiento, es una protena ter- mol'bila diferencia del antgeno 8< segn este, las Salmonellas pueden ser monof'sicas,

cuando contienen siempre el mismo antgeno flagelar, generalmente especfico 5S.

typ)i, S. paratyp)i A7, o dif'sicas, cuando el antgeno flagelar puede presentarsealternati&amente en fase especfica o menos especfica, que puede ser comn conotras Salmonellas 5fase * y fase **7517.


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l antgeno capsular :i, denominado as por ser el determinante en la &irulencia deesta bacteria, ya que confiere resistencia contra la respuesta

E*tr+ct+ra a&t#&ca $e "a Sa"%o&e""a

Ba*e* &%+&o"#ca* $e "a reacc& $e -$a"

La reaccin de Bidal demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes

5aglutininas7 contra los antgenos 9 5flagelar7 u 8 5som'tico7 de la Salmonellatyp)ien el suero de los pacientes con fiebre tifoidea.

Los anticuerpos contra el antgeno 8 aparecen luego de C a das de iniciada laenfermedad y desaparecen posteriormente entre 1 y C meses.

Los anticuerpos contra el antgeno 9 aparecen a los a 23 das, alcanzando ttulosmas ele&ados con respecto a los anti-8 y pueden persistir por m's de 2 a#o.

Los anticuerpos contra el antgeno :i aparecen mas tardamente, a la tercerasemana, sin embargo lo )acen en ttulos ba/os 22D-23D con respecto a lospre&ios517 5tabla 37.


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L%taco&e* $e "a reacc& $e -$a"

La importancia de la aglutinacin de Bidal radica en ser un mtodo serolgico,

r'pido, barato, y ampliamente conocido para el diagnstico de la fiebre tifoidea


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Proce$%e&to

Eomar muestra de sangre &enosa y luego centrifugar para la obtencin del suero,

del cual traba/aremos.

Las determinaciones comprenden dos etapas:

2. Prueba presunti&a

0on una pipeta serolgica o una micropipeta depositar una gota de sueroproblema en cada cuadrado.

A cada gota de suero se le a#ade una gota de cada antgeno pre&ia agitacin.


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$ezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el trmino

de uno a tres minutos.

Lectura La reaccin es positi&a cuando aparece aglutinacin en uno de los =cuadrados, de lo cual se proseguir' a la titulacin.

Prueba de titulacin

Se preparan = cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el&olumen de suero ya agregar 2 gota de reacti&o y mezclar.

:alores de referencia

Etulos 2F?D 2FD sospec)osos de enfermedad.

Etulos G 2FD considerados probatorios de enfermedad.

80 ul de suero titulo 1/20






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RESULTADOS:

n la prueba presunti&a no )ubo presencia de aglutinacin, por lo cual no seprocedi a realizar la prueba de cuantificacin.

CONCLUSIONES:

Se concluye que el paciente no presenta anticuerpos especficos para tifoidea,

de lo cual se afirma que es negati&o para esa enfermedad.


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C+e*to&aro

./C+0" e* "a %(orta&ca c"1&ca $e "a $eter%&ac& $e "a*a#"+t&aco&e*2

Las Salmonellas se consideran patgenos entricos obligados. Los alimentos y elagua contaminados son los mecanismos de transmisin. La enfermedad puede

presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en di&ersos rganos ofiebre tifoidea.

La %rucelosis se presenta en la mayora de los casos con anore"ia, fiebre,decaimiento y escalofros, pudiendo aparecer luego complicaciones importantescomo son las seas y neuropsquicas. A pesar de que el mtodo definiti&o para

establecer la etiologa de estas enfermedades es a tra&s del aislamiento del

agente patgeno, esto resulta difcil debido a que la in&estigacin se realizafrecuentemente en perodos tardos de la enfermedad y luego de una terapiaantibitica. Por este moti&o es de gran importancia diagnstica la deteccin de losanticuerpos especficos producidos en el curso de cada una de estas patologas.Hna prueba aislada es de escaso &alor, siendo necesarias 3 o m's pruebas seriadas

a fin de poner en e&idencia cambios en el ttulo de anticuerpos.

3./C+0" e* "a &ter(retac& c"1&ca $e "o* 4a"ore* TO ' T5 e"e4a$o*2

6ALORES DE REFERENCIA

+eneralmente ttulos de 2?D 2D son sospec)osos de enfermedad.

Slo ttulos mayores de 2D pueden considerarse probatorios de

diagnstico de enfermedad cuando estn acompa#ados de la sintomatologa

clnica.

Etulos mayores de 213D, son concluyentes.


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B. DIAGNSTICO DE SIFLIS

Marco terco

La sfilis es una enfermedad infecciosa cuyo agente causal es el Ereponema

pallidum, perteneciente, /unto con otros treponemas 5borrelias y leptospiras7 a lafamilia Ereponemataceae. l mecanismo de transmisin es por contacto directo conlas lesiones, por paso a tra&s de la placenta o por transfusiones de sangrecontaminada, aunque actualmente este ltimo mecanismo es muy raro que ocurra.

Eras un periodo de incubacin de 23 a >D das, aparece en el lugar de la inoculacin

una lesin primaria, rica en treponemas, que desaparece en algunas semanas.(urante esta etapa, llamada sfilis primaria, el E. pallidum se multiplica en losganglios y se distribuye por la sangre a todos los rganos del indi&iduo 5infeccinsistmica7. n el segundo estadio, la manifestacin m's frecuente es el e"antema,que puede afectar a cualquier superficie del cuerpo acompa#ado de sntomas

generales< las lesiones abiertas son muy contagiosas. Eras la primera desaparicinespont'nea de la misma y durante el primer y segundo a#o, pueden aparecer brotes

similares cada &ez de menor intensidad 5fase de latencia precoz7 )asta quedesaparecen todos los sntomas y signos 5fase de latencia tarda7. n la e&olucinde los casos no tratados, se puede presentar un periodo terciario con posibilidad

de alteraciones mucocut'neas y de los sistemasseo, cardio&ascular y ner&ioso 5neurosfilis7. La identificacin del E. pallidummediante el e"amen directo del e"udado de la lesin 5campo oscuro yFo

fluorescencia directa7 es una prueba definiti&a para asegurar el diagnstico,aunque un resultado negati&o del mismo no descarta la posibilidad de la

enfermedad, ya que la presencia de treponemas puede ser escasa dependiendo delos das de e&olucin y de tratamientos pre&ios. (ebido a las dificultades que puedepresentar la realizacin del diagnstico directo, la e"periencia indica que eldiagnstico indirecto 5serolgico7 se )a con&ertido en el procedimiento de uso m's

frecuente .Actualmente e"isten diferentes tcnicas para el diagnstico serolgico de sfilis

las no treponmicas 5reagnicas7 no determinan anticuerpos especficos frente aEreponema pallidumy se basan en antgenos compuestos de soluciones alco)licascon cantidades determinadas de cardiolipina, colesterol y lecitina. $idenanticuerpos frente a estas sustancias que son producidas por los te/idos da#ados

por el E. pallidum. stas pruebas son 6DRL 5:enereal 6esearc) (iseaseLaboratory7, RPR 56apid Plasma 6eagin7, TRUST 5Eoluidine 6ed Hn)eated SerumEest7, USR 5Hn)eated Serum 6eagin7 y ELISA 5nzimoinmunoensayo7. Son de ba/ocosto, f'ciles de efectuar, se utilizan como pruebas de inicio en la deteccin de

sfilis y para e&aluar la respuesta al tratamiento. La des&enta/a que presentan esque, debido a su inespecificidad, pueden arro/ar falsos resultados positi&os.


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FUNDAMENTOS DEL METODO

n la prueba r'pida para reaginas plasm'ticas 56P67, las 4reaginas4 presentes en el

suero de indi&iduos infectados con Ereponema pallidum, se detectan por accin delas mismas con antgeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobrepartculas de carbn.

La reaccin produce una aglutinacin &isible macroscpicamente, fa&orecida por las

partculas de carbn. Las reacciones inespecficas se e&itan con el empleo deantgeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no esnecesario inacti&ar la muestra.


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Proce$%e&to

M7TODO DE RPRs una prueba serolgica plasm'tica de floculacin macroscpica

6P6 0HAL*EAE*:8 I PLAS$A2. 0olocar D.D=ml de suero a e&aluar o una gota utilizando el aplicadordel Jit no ol&idar colocar los sueros control.

3. 0on ayuda del aplicador e"tender la muestra dentro del crculo sinsalir del margen.


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1. Agregar D.D2@ml del antgeno con micropipeta o una gota con elgotero del Jit sobre la muestra a e&aluar.

?. 0olocar la tar/eta con las muestras sobre el rotador, por min a 2DD6P$, o )acerlo manualmente.

=. Luego de los oc)o minutos )acer la lectura con ayuda de la l'mpara

de luz.

M+e*tra $e" (ace&te Co&tro" (o*t4o

:AL86S 6K6I0*ALS

6eacti&o.-567 +rumos grandes medianos, o peque#os pero definidos

Io reacti&o 5I67 Sin grumos si se obser&a grumos definidos opeque#os debe realizarse la prueba cuantitati&a.


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RESULTADOS:

La muestra de suero no se obser&o floculacin de cual se afirma como no I8

6A0E*:8.

CONCLUSIONES

Se concluye que el 6P6 es una prueba indirecta para la determinacin de sfilis,de lo cual indica la presencia de anticuerpos en el organismo del paciente.


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C+e*to&aro

. /E& 8+e *e $9ere&ca& "a* (r+e!a* $e 6DRL ' RPR2

6DRL

Esta prueba se puede realizar en lmina y ser observada al microscopio como unprecipitado de partculas finas (floculacin), o se puede realizar en un tubo deensayo y ser leda macroscpicamente.

Los resultados de VDL en lmina son comunicados como no reactivos (no !ayfloculacin, d"bilmente reactivos (li#era floculacin, y reactivos floculacin

definitiva. $odos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada dilucin sele realiza la prueba de VDL y se re#istra el titulo m%imo obtenido. ara vez setiene un paciente con ttulo elevado en las diluciones y con VDL no reactivo enla muestra sin diluir (fenmeno de prozona), si ocurriera es ms frecuente en lasfilis secundaria&,&'.

e obtiene falsos ne#ativos en ciertas condiciones, tales como fenmeno deprozona, bao ttulo de anticuerpos, presencia de sustancias in!ibidoras en elsuero del paciente, V*+, la temperatura ambiental fuera del ran#o de -/0 1 oerror t"cnico.RPR

l 6P6 es una prueba dise#ada para detectar reagina en el suero de manerar'pida, no requiere inacti&acin por calor La muestra se mezcla con una

suspensin que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partculas decarbn. Si la muestra es positi&a se obser&a peque#os grumos negros

5floculacin7. l resultado se reporta como reacti&o o no reacti&o< todosaquellos reacti&os deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulacin,

y se reporta la dilucin m's alta que e")ibe reaccin.

Los falsos negati&os se pueden producir por errores tcnicos y los falsos

positi&os son los mismos que para la prueba de :(6L.


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3./C+0"e* *o& "a* (r+e!a* co&9r%atora* $e +& 6DRL (o*t4o2

Las pruebas treponmicas, en cambio, detectan especficamente los anticuerpos de

Ereponema pallidumy su utilidad en el laboratorio est' orientada a confirmar losresultados arro/ados por las pruebas no treponmicas. Las pruebas treponmicas

m's conocidas son FTAA!* 5*nmunofluorescencia indirecta con absorcin delsuero7, FTAA!* 3;;DS 5*nmunofluorescencia indirecta con absorcin y dobletincin7, TP5A5$icro )emaglutinacin7, Ca(ta *'()"* M 5L*SA de captura anticadena pesada7, ELISA I#G, y -ESTERN BLOT, las cuales tienen muy ba/o ndicede falsos resultados, tanto positi&os como negati&os.


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REFERENCIAS DE INTERNET

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