INESTABILIDAD DE MICROSATELITES EN EL

CARCINOMA COLORRECTAL.

A. Payá

HGU ALICANTE

Vías Oncogénicas

• Supresora– 85%

– APC, K-ras, p53

– Inestabilidad cromosómica (aneuploides)

– Poliposis Colónica Familiar

• Mutadora– 15%

– MLH1, MSH2, MSH6, PMS2,

PMS1

– Inestabilidad microsatélites (diploides)

– Carcinoma Colorrectal Hereditario no Polipósico (CCHNP ó Sdre.de Lynch)

VIA MUTADORA

Terminología

- Alteracion del Sistema de Reparación de Errores de Replicación (RER) del ADN

RER+

- Inestabilidad de Microsatélites

IMS+

- Fenotipo Mutador

INACTIVACION GENES REPARADORES

MLH1, MSH2, MSH6

INESTABILIDAD MICROSATELITES

AUSENCIA DE PROTEINA

ACUMULACION DE ERRORES

Utilidad de identificación de Fenotipo Mutador

• Identificación de CCHNP (Sdre. de Lynch)

• Pronóstico

• Valor predictivo respuesta a tto?– IMS+ Mejor respuesta a QT (5-FU)

Metodos de Detección Fenotipo Mutador

• ANALISIS DE MICROSATÉLITES

• INMUNOHISTOQUÍMICA– MLH1– MSH2– MSH6

Microsatélites

• Secuencias repetitivas cortas presentes en regiones codificantes y no codificantes– (A)n, (CA)n, (CAG)n, (CAGT)n ...

Inestabilidad Microsatélites

• Mutaciones en microsatélites

• Debidos a apareamiento incorrecto por deslizamiento– Mononucleótidos

• Deleciones

– Di-, tri-, tetras-

• Deleciones o Inserciones

Mecanismo de correción errores por apareamiento incorrecto

•Complejo primario

•MSH2/MSH6 90%

•MSH2/MSH3

•Complejo secundario

•MLH1/PMS2

•MLH1/MLH3

Análisis de microsatélites

• Microsatélites consenso– BAT25, BAT26, D2S123, D5S346, D17S250

• BAT26 – detecta 98% IMS– Cuasi-monomórfico (0.8% polimorfismos)

• Puede utilizarse sólo, sin necesidad de comparar con ADN no tumoral

BAT26

Inmunohistoquímica

• Proteína no expresada = gen inactivado • MLH1, MSH2, MSH6 (optativo)

• Tinción nuclear

• Controles internos positivos (linfocitos, estroma, base criptas)

• Alta sensibilidad (80-100%) y especificidad (92-100 %)

• Opción válida para detección de fenotipo mutador

MLH1

MLH1

MSH2

MSH2

Inmunohistoquímica II

• La ausencia de MLH1 no implica mutación germinal (85% esporádicos)

• La ausencia de MSH2 siempre se asocia con mutación germinal

• La ausencia de MSH2 se asocia (86%) a ausencia de MSH6

Carcinoma de Colon Hereditario no Polipósico (Sdre. de Lynch)

• Sdre. de cáncer hereditario

– Mutaciones germinales • MLH1(3p22-23), MSH2 (2p16), MSH6 (2p16), PMS1, PMS2

– Herencia autosómica dominante

– alta penetrancia (85%)

– Tumores IMS

• 2% CCR. Tumor hereditario más frecuente

• Dx.clínico: Criterios de Amsterdam

Criterios de Amsterdam

• 3 familiares de 1º grado con CCR o tumores asociados a CCHNP (endometrio, intestino delgado, estómago, ureter/pelvis renal)

• 2 o + generaciones sucesivas

• Un afectado <50 años

Criterios de AmsterdamFrecuencia mutaciones

• 98% IMS+

• Mutaciones Germinales 70%

»MLH1 30-40%»MSH2 50-60%»MSH6 5-10%

Criterios de Bethesda pacientes con criterios de Amsterdam individuos con 2 tumores de la esfera CCHNP individuos con CCR y un familiar de 1º grado con

CCR o tumor de la esfera CCHNP (<45 años) o adenoma colorrectal < 40 años

individuos con CCR o cáncer de endometrio <45 años.

individuos con CCR en hemicolon derecho con patrón indiferenciado <45 años.

individuos con CCR tipo células “en anillo de sello” <45 años.

individuos con adenoma colorrectal diagnosticado <40 años

Criterios de BethesdaFrecuencia de mutaciones

• 30% IMS +

• 15% Mutaciones Germinales

CCR

Criterios de Bethesda/Amsterdam

IMS+

NO expresión MLH1/MSH2

IMS-

Expresión MLH1/MSH2

Análisis genético MLH1/MSH2

Análisis genético a familiares

No análisis genético

Screening a familiares y caso índice

PositivoNegativo

CARACTERISTICAS PATOLOGICAS

• Esporádicos y familiares indistinguibles

• Colon dcho

• Tipo medular, mucinoso

• Linfocitosis intraepitelial

• Crecimiento expansivo

• Infiltrado inflamatorio tipo Crohn

MLH1

MSH2

• 1.106 CCR

• 5.8% IMS+– 96% no expresión

MLH1/MSH2

• 1.260 CCR

• 5.8% no expresión– 58 MLH1 (78%)

– 16 MSH2 (22%)

IMS INMUNOHISTOQUÍMICA